2)nCOOH； 其中，n=2-12。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種多西紫杉醇-維瑞肽偶合物，其特征在于:所述偶合物的 制備方法為：先合成中間體DTX-Linker，再與連接在固相合成樹脂上的維瑞肽相連，合成 DTX-1-維瑞肽偶合物、DTX-5-維瑞肽偶合物、（DTX)2-維瑞肽偶合物，最后再將合成的目標(biāo) 產(chǎn)物從樹脂上解離下來，最終得到純凈的目標(biāo)產(chǎn)物多西紫杉醇維瑞肽偶合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的中間體DTX-Linker，其特征在于:其制備方法為： 1) 將多西紫杉醇溶于無水二氯甲烷，加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，丁二酸酐，在一定 條件下反應(yīng)一段時間后加入乙酸乙酯，并用鹽酸調(diào)pH值至3-4,依次用水萃取3次、飽和食鹽 水萃取1次，最后用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓回收乙酸乙酯； 2) 所得殘余物用丙酮-乙醚重結(jié)晶，得中間體DTX-Linker; 進(jìn)一步，所述的無水二氯甲烷溶劑與4-二甲基氨基吡啶（DMAP)的體積比范圍為（11: 1)-(15:1)，其中無水二氯甲烷與DMAP的最佳體積比是12:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的DTX-1-維瑞肽偶合物，其特征在于:其制備方法為： 1) 向側(cè)鏈氨基受保護(hù)的維瑞肽樹脂中加入特定的脫除劑，選擇性脫除N-端Fmoc氨基保 護(hù)基，得到Lys5-側(cè)鏈氨基受保護(hù)、N端側(cè)鏈氨基酸游離的維瑞肽樹脂，并將其置于固相合成 反應(yīng)器中，用無水二氯甲烷浸洗后抽取溶劑并通入干燥氮?dú)猓? 2) 將多西紫杉醇_2'_ 丁二酸酯(DTX-Linker)溶于無水二氯甲烷，并加入特定的高效偶 合試劑，低速攪拌一段時間后，滴入上述通有氮?dú)獾墓滔嗪铣煞磻?yīng)器中，在一定條件下反應(yīng) 一段時間； 3) 將反應(yīng)物減壓濃縮，除去溶劑后，依次用二甲基甲酰胺洗滌6次，用二氯甲烷洗滌5 次，用乙醚、石油醚、環(huán)己烷、正己烷中的一種或任意比例的混合溶劑洗滌3次，將洗滌后的 反應(yīng)物抽干即得到DTX-Linker-NH-維瑞肽-固相合成樹脂； 4) 目標(biāo)產(chǎn)物從固相合成樹脂上解離的步驟為:將干燥的樹脂加入一定的溶劑中，攪拌1 小時后過濾； 5) 目標(biāo)產(chǎn)物分純化的步驟如下：過濾物用無水二氯甲烷洗滌過濾，濾液合并后減壓抽 干，殘余物用溶劑萃取，抽濾收集溶劑不溶的固體，干燥后得到純凈的目標(biāo)產(chǎn)物DTX-1-維瑞 肽偶合物； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述的反應(yīng)步驟1)中的特定脫除劑為P比啶的N，N-二甲基甲酰溶液，其中吡啶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%-35%，以20%為最佳； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述的步驟2)中溶解DTX-Linker的二氯甲烷可 用無水二氯乙烷替換，其中無水二氯乙烷與無水二氯甲烷的替換摩爾比為：（1:1)-(3:1); 所述的步驟2 )中特定的高效偶合試劑為HOCt(1 -羥基-1Η-1，2，3-三唑-4-羧酸乙酯）、DMC (碳酸二甲酯）、DIC(N，N-二異丙基碳二亞胺）、DIEA(N，N-二異丙基乙胺)按一定比例混合的 混合溶劑，其中Vdmc:Vmet=(5:1)-(10:1)，VDiC:VDiea=(3:1)-(8:1); 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述步驟2)中反應(yīng)條件如下:反應(yīng)溫度為：（20- 35)°C，攪拌速度為：（200-800)r/min，攪拌時間為：（5-30)min，其中最佳反應(yīng)條件為:反應(yīng) 溫度為25°C，攪拌速度為540r/min，攪拌時間為lOmin; 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述步驟4)中解離溶劑為2%-10%三氟乙酸的二 氯甲烷溶液，其中最佳質(zhì)量比為5%;所述步驟4)中解離反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度為：（20-25) °C，攪拌速度為：（300-800)r/min，攪拌時間為：（0.8-1.5)h，其中最佳反應(yīng)條件為:反應(yīng)溫 度23°C，攪拌速度為:450r/min，攪拌時間為：1.0h。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的DTX-5-維瑞肽偶合物，其特征在于:所述的制備方法為： 1) 將烯丙甲酯基(AllylO-CO)保護(hù)Lys5側(cè)鏈氨基的維瑞肽樹脂，加入特定的脫除劑選擇 性脫除烯丙甲酯基，得到N-端氨基受保護(hù)、Lys5-側(cè)鏈氨基游離的維瑞肽樹脂，將其置于固 相合成反應(yīng)器中，用無水二氯甲烷浸洗后抽取溶劑并通入干燥氮?dú)猓? 2) 將多西紫杉醇_2'_ 丁二酸酯(DTX-Linker)溶于無水二氯甲烷，加入ByBop(六氟磷酸 苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷），DIEA，在一定的轉(zhuǎn)速下攪拌反應(yīng)，滴入上述通有氮?dú)?的固相合成反應(yīng)器中； 3) 1小時后將溶劑抽干，反應(yīng)物依次用二甲基甲酰胺洗滌6次，二氯甲烷洗滌5次，乙醚、 石油醚、環(huán)己烷及正己烷中的一種或幾種任意比例的混合溶劑洗滌3次后抽干，即得到維瑞 肽-Lys5(DTX-Linker-NH)-固相合成樹脂； 4) 目標(biāo)產(chǎn)物從固相合成樹脂上解離步驟如下：將合成的上述樹脂加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%-10%三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，攪拌反應(yīng)1小時； 5) 目標(biāo)產(chǎn)物分離提純的步驟如下:過濾反應(yīng)液，將過濾物用無水二氯甲烷洗滌過濾，合 并濾液后減壓濃縮，除去多余溶劑，殘余物用乙醚、石油醚、環(huán)己烷、正己烷中的一種或幾種 任意比例的混合溶劑進(jìn)行萃取3次，抽濾收集溶劑不溶的固體，干燥后得到純凈的目標(biāo)產(chǎn)物 即DTX-5-維瑞肽偶合物； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述步驟1)中脫除催化劑為：Pd[P(C6H5)3]4、C6H5SiH3中的一種或兩種任意比例混合物，其中摩爾比1:1為最佳； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述步驟2)中的二氯甲烷可用無水二氯乙烷替 換，其中無水二氯乙烷與無水二氯甲烷的替換摩爾比為：（1:1)-(3:l);ByBop可以用六氟異 丙醇替換，其中六氟異丙醇與ByBoy的替換摩爾比為：（1:1)-(3:1);反應(yīng)體系溶劑DIEA可用 N，N-二甲基甲酰胺替換，其中N，N-二甲基甲酰胺與DIEA的替換摩爾比為：（1:1)-(3:1); 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述的步驟2)中反應(yīng)條件如下：反應(yīng)溫度為： (20-35)°C，攪拌速度為：（200-800)r/min，攪拌時間為：（5-30)min，其中最佳反應(yīng)條件為： 反應(yīng)溫度為:25°C，攪拌速度為:540r/min，攪拌時間為：1Omin。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的(DTX)2-維瑞肽偶合物，其特征在于:其液相合成方法為： 1) 將DTX-5-維瑞肽偶合物加入到特定溶劑中，在室溫下滴入高效偶合試劑，低速攪拌， 滴加中間體DTX-linker進(jìn)行反應(yīng)，在特定條件下反應(yīng)一段時間； 2) 將反應(yīng)后溶液進(jìn)行減壓蒸餾，除去多余的溶劑，將殘余物滴入冰水中，抽濾收集水中 析出的固體并用蒸餾水洗滌3次，所得固體用甲醇、乙酸乙酯的一種或兩種任意比例的混合 溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，得到目標(biāo)產(chǎn)物(DTX)2-維瑞肽偶合物； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述反應(yīng)步驟1)中特定溶劑是指N，N-二甲基甲 酰胺、DIEA、無水二氯甲烷、無水二氯乙烷中一種或兩種的混溶劑，所用的高效偶合試劑為 !10(^、01(：、01(：、0此厶按一定比例混合的混合溶劑，其中￥圖:￥11(^=(5 :1)-(10:1)，￥肌:￥隱八=(3:1)-(8:1)； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述反應(yīng)步驟1)中的反應(yīng)條件如下：反應(yīng)溫度 為：（20-25)°C，攪拌速度為：（300-800)r/min，攪拌時間為（5-25)min，其中反應(yīng)溫度為23 °C、攪拌速度為450r/min、攪拌時間為1Omin為最佳反應(yīng)條件。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的(DTX)2-維瑞肽偶合物，其特征在于:其固相相合成方法為： 1) 按照權(quán)利要求6制備出維瑞肽-Lys5(DTX-Linker-NH)-固相合成樹脂(N-端側(cè)鏈仍受 保護(hù))后，在室溫下加入高效偶合試劑，低速攪拌，滴加中間體DTX-Linker進(jìn)行反應(yīng)，在特定 條件下反應(yīng)一段時間； 2) 將反應(yīng)液進(jìn)行減壓蒸餾，除去多余的溶劑，將殘余物滴入冰水中，抽濾收集水中析出 的固體并用蒸餾水洗滌3次，所得固體用乙醚或乙酸乙酯進(jìn)行重結(jié)晶，即得到目標(biāo)產(chǎn)物 (DTX)2-維瑞肽-固相合成樹脂； 3) 目標(biāo)產(chǎn)物從固相合成樹脂上解離步驟如下:將干燥的樹脂加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%-10%的三 氟乙酸的二氯甲烷溶液中，攪拌反應(yīng)1小時； 4) 目標(biāo)產(chǎn)物純化的步驟如下：將反應(yīng)后的溶液過濾，過濾物再用無水二氯甲烷洗滌過 濾，合并濾液后減壓濃縮，殘余物用溶劑萃取，抽濾收集溶劑不溶的固體，干燥后得到純凈 的目標(biāo)產(chǎn)物(DTX)2-維瑞肽偶合物； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于：所述步驟1)中的高效偶合試劑為HOCt、DMC、DIC、DIEA按一定比例混合的混合溶劑，其中Vdmc:VH〇ct= (5:1)-(10:1)，Vdic:Vdiea= (3 :1)-(8:1)； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于：所述步驟1)中反應(yīng)條件是：反應(yīng)溫度為：（20-25)°C，攪拌速度為：（300-800)r/min，攪拌時間為(5-25)分鐘，其中最佳反應(yīng)條件是:反應(yīng) 溫度為23°C、攪拌速度為450r/min、攪拌時間10分鐘； 進(jìn)一步，所述操作方法中，其特征在于:所述步驟4)中萃取溶劑為乙醚、石油醚、環(huán)己 烷、正己烷中的一種或幾種任意比例的混合溶劑。9. 權(quán)利要求1-8任意一項所述的多西紫杉醇維瑞肽偶合物在制備用于治療腫瘤藥物方 面的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求1-9任意一項所述的多西紫杉醇維瑞肽偶合物。
【專利摘要】本發(fā)明提供了新型靶向抗癌化合物多西紫杉醇維瑞肽偶合物，所述的偶合物是由多西紫杉醇通過不同連接序列與小分子靶向多肽維瑞肽相連合成，所述的偶合物是指DTX-1-維瑞肽偶合物、DTX-5-維瑞肽偶合物、(DTX)2-維瑞肽偶合物。本發(fā)明還公開了所述偶合物的制備方法。本發(fā)明通過可靠的生物學(xué)實驗方法及數(shù)據(jù)證明該類偶合物能具有抗腫瘤活性。本發(fā)明所述的偶合物克服了傳統(tǒng)抗癌化學(xué)藥物選擇性差、毒副作用大、水溶性差的缺點(diǎn)，具有選擇性好、抗癌活性高、毒副作用小、水溶性好等優(yōu)異性能。
【IPC分類】C07K7/06, C07K1/04, C07K1/107, A61K47/48, A61K38/08, A61P35/00
【公開號】CN105418732
【申請?zhí)枴緾N201510869670
【發(fā)明人】高秀巖, 徐文娟
【申請人】煙臺海安藥物研發(fā)有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月2日