一種具有抗腫瘤活性的齊墩果酸化學(xué)修飾物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物齊墩果酸的結(jié)構(gòu)改造方法，特別是涉及一種具有抗腫瘤 活性的齊墩果酸化學(xué)修飾物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 齊墩果酸（OleanolicAcid，0A)，又名慶四素，為五環(huán)三萜類化合物，以游離或結(jié) 合成苷的形式廣泛存在于白花蛇舌草、山楂、丁香、大棗、女貞子、枇杷葉、木及夏枯草等植 物中?；瘜W(xué)名為（30)-3-Hydroxyolean-12-en-28_oicacid，純品為白色結(jié)晶性粉末，無(wú) 臭、無(wú)味。分子式為：C3QH4S03,分子量：456. 71。熔點(diǎn)：308°C~310°C，[a]20D+68° ~+78° (C=0. 15,氯仿)。不溶于水，可溶于乙醇、氯仿、丙酮。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸具有廣泛 的生物活性，包括降糖降脂作用，抗腫瘤，抗病毒及微生物，抗衰老，抗?jié)?，消炎，?duì)免疫系 統(tǒng)的影響，保肝護(hù)肝等。
[0003] 齊墩果酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式：
近年來(lái)，齊墩果酸對(duì)腫瘤的抑制和殺傷效應(yīng)日益受到重視。齊墩果酸能夠抑制腫瘤的 形成，阻礙腫瘤誘發(fā)和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，且能有效地抑制血管發(fā)生腫瘤細(xì)胞的侵害和轉(zhuǎn) 移。對(duì)腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，如人肺纖維原細(xì)胞WI-38、人肝癌細(xì)胞株Η印G2、結(jié) 腸癌HCT15細(xì)胞株、卵巢癌Η0-8910細(xì)胞株、乳腺癌MCF-7細(xì)胞株等。對(duì)惡性血液病細(xì)胞株 Κ562、ΗΙ，60、Jurkat等的增殖活性也同樣具有抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤活性的齊墩果酸化學(xué)修飾物及其制備方 法，該方法以齊墩果酸為先導(dǎo)化合物，設(shè)計(jì)出一系列齊墩果酸化學(xué)修飾物，該類化合物對(duì)人 體宮頸癌Hela細(xì)胞，人肝癌Η印G2細(xì)胞和胃癌BGC-823細(xì)胞具有較好的抑制活性。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種具有抗腫瘤活性的齊墩果酸化學(xué)修飾物，主要對(duì)齊墩果酸Α環(huán)，C環(huán)的結(jié)構(gòu)改造， 以及對(duì)C-3位和C-28位的化學(xué)修飾，得到齊墩果酸酯類或酰胺類化合物。所述齊墩果酸化 學(xué)修飾物包括以下三類： (1)在齊墩果酸結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進(jìn)行修飾，在C-3位引入氫，烷氧基，C-12, 13位引入雙羥 基或烷氧基，C-28位用烷氧基，羥基，胺基取代，得到一系列化合物。化合物結(jié)構(gòu)如下表所 示：

在齊墩果酸結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進(jìn)行修飾，將A環(huán)C-3位修飾為3-肟基或3-肉桂酰氧亞氨基，同 時(shí)在C-28位引入酯基或酰胺基，得到一系列化合物，化合物結(jié)構(gòu)如下表所示：
在齊墩果酸結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進(jìn)行修飾，將A環(huán)擴(kuò)環(huán)為七元內(nèi)酰胺環(huán)，C-28位羧基引入不同的 烷氧基。得到一系列化合物，化合物結(jié)構(gòu)如下表所示：
一種具有抗腫瘤活性的齊墩果酸化學(xué)修飾物制備方法，所述方法包括以下步驟： (1)齊墩果酸C-12位雙鍵被間氯過(guò)氧苯甲酸氧化，生成環(huán)氧化合物，在酸性條件下開(kāi) 環(huán)得到二羥基化合物。最終制得3β，12α，13β-二羥基-齊域果燒型_28_駿酸（0A_1)。 [0006] (2)0Α_1再與相應(yīng)的鹵代烷和碳酸鉀溶解于DMF中，反應(yīng)生成3β，12α，13β-三 羥基-齊墩果烷型-28-羧酸酯類化合物Ii~I2。
[0007] (3)0A_1與乙酸酐在吡啶催化下，3, 12位羥基被乙?；?β，12α-二乙酰氧 基-13β-羥基-齊域果燒型_28_駿酸（0Α-2)。
[0008] (4) 0Α-2與草酰氯反應(yīng)后，與相應(yīng)胺反應(yīng)生成3β，12α-二乙酰氧基-13β-羥 基-齊墩果烷型-28-酰胺類目標(biāo)化合物13~14。
[0009] (5 )齊墩果酸和瓊斯試劑反應(yīng)得3-氧代齊墩果酸（0Α-3 )。
[0010] (6) 0Α-3溶于適量吡啶中，與鹽酸羥按反應(yīng)得到3-肟基-齊墩果烷 型-12-烯-28-羧酸（0Α-4)。
[0011] (7)0Α_4與相應(yīng)的鹵代燒按照步驟（2)，得到3_Η虧基-齊域果燒型_12-稀-28_駿 酸酯類目標(biāo)化合物ΙΙΗΙρ
[0012] (8)肉桂酸與草酰氯反應(yīng)得肉桂酰氯。
[0013] (9) 0Α-4與肉桂酰氯溶解于苯中，加入少量DMAP，反應(yīng)得到3-肉桂酰氧亞氨 基-齊墩果烷型-12-烯-28-羧酸（0Α-5 )。再按照（2 )步驟與1，2-二溴乙烷反應(yīng)得到3-肉 桂醜氧亞氛基_齊域果燒型_12-稀 -28_ (2_漠_1_)乙脂113。
[0014] (10) 0Α-5與相應(yīng)的胺按照（4)步驟反應(yīng)得到3-肉桂酰氧亞氨基-齊墩果烷 型-12-稀-28-酰胺類目標(biāo)化合物11 4~117。
[0015] (11) 0Α-4在二氧六環(huán)中與二氯亞砜反應(yīng)，經(jīng)貝克曼重排成七元內(nèi)酰胺衍生物 Α-同環(huán)-4-氮雜-3-氧代齊墩果烷型-12-烯-28-羧酸IIL。
[0016] (12)1?與相應(yīng)的鹵代烷按照步驟（2)，得到A-同環(huán)-4-氮雜-3-氧代齊墩果烷 型-12-烯-28-羧酸酯類目標(biāo)化合物ΙΙΙ2~ΙΙΙ3。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是： 本發(fā)明對(duì)天然產(chǎn)物齊墩果酸進(jìn)行化學(xué)修飾，得到一系列齊墩果酸的結(jié)構(gòu)類似物，經(jīng)過(guò) 藥理實(shí)驗(yàn)證明，它們對(duì)人體宮頸癌Hela細(xì)胞，人肝癌Η印G2細(xì)胞和胃癌BGC-823細(xì)胞具有 較好的抑制作用，且優(yōu)于母體化合物齊墩果酸。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳述。
[0019] 1.女貞子的乙醇提取浸膏以石油醚、1%氫氧化鈉和水洗至洗出液無(wú)色，無(wú)水乙醇 加熱溶解，活性炭脫色，經(jīng)凝析分離、純化精制得白色晶體齊墩果酸（0Α)。
[0020] 2.齊墩果酸的C-12位雙鍵被間氯過(guò)氧苯甲酸氧化，生成環(huán)氧化合物，在酸性條 件下開(kāi)環(huán)，最后得到3β，12α，13β-三羥基-齊墩果烷型-28-羧酸（0Α-1)，在0Α-1合 成線路的基礎(chǔ)上，C-28羧酸與相應(yīng)的鹵代烷在碳酸鉀堿性條件下，溶解于DMF中，得到 3β，12α，13β-三羥基-齊墩果烷型-28-羧酸酯類化合物Ii~I2。
[0021] 其中：r2為 _0〇1(〇13)2和-och2ch(ch3)2。
[0022] 0A-1與乙酸酐在吡啶催化下，3, 12位羥基被乙酰化，得到3β，12α-二乙酰氧 基-13β-羥基-齊域果燒型_28_駿酸（0Α_2)，在0Α_2合成線路的基礎(chǔ)上與草醜氣反應(yīng)得 到酰氯后，再與相應(yīng)胺反應(yīng)得到目標(biāo)化合物13~1 4。
[0024] 肉桂酸與草酰氯反應(yīng)，制得肉桂酰氯。0Α-4與肉桂酰氯溶解于苯中，加入少量 DMAP，反應(yīng)得到3-肉桂酰氧亞氨基-齊墩果烷型-12-烯-28-羧酸（0Α-5)。再與1，2-二 溴乙烷在碳酸鉀堿性條件下，溶解于DMF中，反應(yīng)得到目標(biāo)化合物113。
[0025] 0Α-5與草酰氯反應(yīng)得到酰氯后，再與相應(yīng)胺反應(yīng)得到目標(biāo)化合物114~117。
[0027] 0Α-4在二氧六環(huán)中與二氯亞砜反應(yīng)，經(jīng)貝克曼重排成七元內(nèi)酰胺衍生物Α-同 環(huán)-4-氮雜-3-氧代齊墩果烷型-12-烯-28-羧酸IIIpIIL與相應(yīng)的鹵代烷在碳酸鉀堿 性條件下，溶解于DMF中，反應(yīng)得到目標(biāo)化合物III2~II13。
[0029] 以吉非替尼和VP-16為陽(yáng)性對(duì)照物，采取MTT法對(duì)齊墩果酸及其所合成的化合物 進(jìn)行初步的體外抗腫瘤活性測(cè)試。研究表明部分化合物對(duì)人體宮頸癌Hela細(xì)胞，人肝癌 HepG2細(xì)胞和胃癌BGC-823細(xì)胞具有較好的抑制活性，且強(qiáng)于齊墩果酸?；衔锝Y(jié)構(gòu)以及體 外測(cè)試結(jié)果如下表所示。
[0030]
注；a.化合物濃度在10 5mol/L時(shí)測(cè)得的抑制率，b.IC5。表示半數(shù)有效抑制濃度。
[0031] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明： 實(shí)施例1 3β，12α，13β-三羥基-齊墩果烷型-28-羧酸異丙酯（1〇的制備： 將起始原料〇A(l. 9mmol，0. 87g)與間氯過(guò)氧苯甲酸（3. 8mmol，0. 65g)溶解在10mL二氯 甲烷中。反應(yīng)混和液室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。加入10mL水，分層后，水層以二氯甲烷萃?。?0mLX2 )。 合并有機(jī)相，以飽和碳酸氫鈉溶液洗至微堿性，再水洗至中性。無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾、濃 縮，得到環(huán)氧化物。然后將環(huán)氧化物（0. 4mmol)溶于lOmL氯仿中，加入適量濃鹽酸調(diào)PH至 中性。反應(yīng)混和液室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入10mL7jC，分層后，水層以氯仿萃?。?0mLX3)。合 并有機(jī)相，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌至微堿性，再水洗至中性。無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮， 真空干燥得到白色無(wú)定形固體0A-1。
[0032] 在25mL的前形瓶中加入化合物0A-1 (0. 100g，0. 20mmol)，無(wú)水碳酸鉀0. 06g， N，N-二甲基甲酰胺4mL，緩慢滴加溴代異丁烷3滴（0. 88mmol)，室溫反應(yīng)，TLC檢測(cè)反應(yīng) 終點(diǎn)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出剩余的鹵代烷，加入適量飽和NaCl溶液2mL，乙酸乙酯萃 ?。?mLX3)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，真空干燥得白色固體。經(jīng)硅膠 柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯=7/l(V/V)，得白色晶狀固體L55.8mg，產(chǎn)率 50.1%。mp207. 2~212.4°C。IR(KBr): 3559,2955,1712,1577,1386cm1。iH-NMR(CDC13， 300MHz)δ: 5.21(brs，1H，12-OH), 4.93 (brs，lH，13-0H), 4.65 (brs，lH，3-0H)， 4.20 (m, 1H, 0CH(CH3) 2), 3.89-3.96 (m, 1H,H-12), 3. 12~3. 24 (m, 1H,H-3), 1.32 (d，/= 8.0Hz, 3H，⑶0CH(CH^)2)， 1.27 (d，/= 8.0Hz，3H，⑶0CH(CH^)2)， 1. 20, 1. 15, 1. 07, 0· 98, 0.90，0.84,0.77 (7s, 21H，CH3X7)。ESI-MS:533.4(M+H)+。
[0033] 實(shí)施例2 3β，12a-二乙酰氧基-13β-羥基-齊域果燒型_28_環(huán)己胺（I3)的制備： 在50mL單口瓶中加入OA-1 (200mg，0. 41mmol)，四氫呋喃20mL，0A-l溶解后于室溫下 加入吡啶lmL、乙酸酐（1. 35g，13. 2mmol)和少量DMAP，室溫下攪拌，以TLC檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn) (展開(kāi)劑：石油醚/乙酸乙酯=3/1，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液)，反應(yīng)完畢，減壓蒸除反應(yīng)溶 劑，以水分散固體，2mol/L鹽酸調(diào)pH至3~4,析出白色固體，抽濾，濾餅水洗至中性，室溫 自然干燥，得3f，12σ-二乙酰氧基-13 羥基-齊墩果烷型-28-羧酸，粗品經(jīng)硅膠柱色 譜分離純化，得白色固體（0Α-2) 189. 7mg，產(chǎn)率84. 5%。