H-18(1.21，s)，H-19〇). 93,s)，H-20 (1.28,s)，7-0Ac(2.03,s)，14-C00CH3 (3.71，s); 核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5c(卵m，DMSO-de，150MHz) :202. 9 (CH，1-0,170. 2 (C，2-0,51.7((?, 3-C)，41.8(C，4-C)，91. 4 (C，5-C)，77. 3 (CH，6-C)，79. 9 (CH，7-C)，36. 3 (CH，8-C)，35. 0 (CH， 9-C)，52.8(C，10-C)，21. 4(邸2,11-C)，148.6(C，12-C)，112. 3(C，13-C)，43. 7(CH，14-C)，108.I(CH，15-C)，141.6(CH，16-C)，173.8(C，17-C)，26.I(CH3, 18-C)，28. 7 (細3,19-C)， II.I(CH3, 20-C)，170. 4 (C，7-OAC)，21. 7 (CH3, 7-OAC)，52.I(CH3,14-COOCH3);碳原子標記參 見圖1。紅外光譜表明該化合物含有幾基（1742和2852cm1)，包括一個醒基。Ih-NMR譜 顯示了S個甲基信號5冊.93(s，&-19)，1.21(3, &-18)和1.28(s，&-20)，一個乙酷氧基 5 肥.〇3(3H，s)，一個甲氧基 5 冊.71(3H，s，0CH3)，兩個含氧次甲基 5H4. 16(d，J= 7. 3Hz， H-6)和 5. 06(dd，J= 11.6,7. 3Hz，H-7)，W及一個 1，2-雙取代的巧喃環(huán) 5 冊.〇5(d，J= I. 7Hz，H-15)和7. 13化J=I. 7Hz，H-16)。通過低場質(zhì)子信號5H9. 81 (s，H-1)可確定醒 基的存在。此外，"CNMR譜顯示出23個碳信號，包括乙酷幾基碳（5C170. 4)，甲氧幾基碳 (5C173.8)，醒基碳（5C202. 9)，兩個含氧碳（5C77. 3 和 79. 9)，W及巧喃環(huán)（5C108. 1， 112.3，141.6，和148.6)。歷8(：譜中，護14(5冊.39)與幾基碳（5(：173.8)，(：-7(5(：79.9) 和C-12(SC148.6)的遠程相關(guān)性表明幾基位于在C-14位上。H-7(5冊.06)與幾基碳 (5C170. 4)，C-6(SC77. 3)，C-14( 5C43. 7)和C-9( 5C35. 0)之間的相關(guān)性表明該乙酷氧 基與C-7 相連。此外，H-1(5H9. 81)與C-10(SC52. 8)，C-5(5C91.4)和C-20(SC11. 1) 的遠程相關(guān)性表明醒基位于C-IO位上。HMBC譜中，含氧質(zhì)子信號（5H4. 16,H-6)與幾基 碳（5C170. 2，C-2)的相關(guān)性表明該化合物含有一個內(nèi)醋結(jié)構(gòu)。N犯SY譜中，H-14與H-7和 H-9的交叉峰表明運些質(zhì)子為a構(gòu)型。此外，H-6與H-8,Me-20和Me-19的相關(guān)性表明它 們?yōu)?構(gòu)型。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，W及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基 本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致 (圖2)。
[0028] 實施例2:化合物（I)藥理作用試驗
[0029] 一、材料和儀器
[0030] DMEM/F12高糖培養(yǎng)液購于北京Hyclone公司。改良型RPMI-1640培養(yǎng)基購于北 京Hyclone公司。標準胎牛血清購于天津T抓公司。CCK-8細胞活力檢測試劑購于日本株 式會社同仁化學研究所。AnnexinV-門TC/PI調(diào)亡檢測試劑盒購于上海炎彬化工科技有限 公司。JC-I線粒體膜電位探針購于江蘇碧云天生物技術(shù)研究所。二甲基亞抓值MS0)和憐 酸鹽緩沖溶液（PB巧購于Sigma公司產(chǎn)品?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例LHPLC 歸一化純度大于98%。
[0031] -70°C低溫冰箱（FormaScientificInc.公司，美國），電子天平（島津AEk200 型，日本），超凈工作臺（SW-CJ-IC型，蘇州），恒溫振蕩器燈監(jiān)-C型），高壓蒸汽消毒 鍋（YX-400B型），C〇2細胞培養(yǎng)箱（F'ormaSeriesII，Hiermalelectronco巧.，美國）， 恒溫水浴鍋度冊2-1型，國產(chǎn)），倒置相差顯微鏡（CK40型，Olympus，日本），顯微鏡 (BX51型，Olympus,日本），顯微數(shù)碼采集系統(tǒng)（DP71型，Olympus,日本），多功能酶標儀 (InfiniteM200型，TECAN，瑞± )，臺式室溫高速離屯、機燈化-16G型，北京），臺式低溫高 速離屯、機（2K15型，Sigma公司，美國），化60電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公 司），LD4-40大容量離屯、機（北京京立離屯、機有限公司），2K15高溫低速冷凍離屯、機（sigma 公司），UV765紫外分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），激光共聚焦掃描顯微鏡 (MRC-1024 型，Bio-Rad,英國）。
[0032] 二、試驗方法
[0033] 1、細胞株及培養(yǎng)
[0034] 選用乳腺癌MCF-7細胞（雌激素受體陽性Er,人類表皮生長因子受體-2陰性 肥RZ/neu)、乳腺癌MDA-MB-231細胞巧R，肥RZ/neu)和乳腺癌MDA-MB-453巧R，肥RZ/ neiO細胞株，=種細胞株均來自于中國科學院生物化學與細胞生物學研究所。MCF-7細胞 和104-18-231細胞培養(yǎng)于含10%標準胎牛血清的0161/。12高糖培養(yǎng)液中，104-18-453細 胞培養(yǎng)于含10%標準胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，W上細胞均于37°C、5%C〇2條件下 常規(guī)培養(yǎng)傳代。=種乳腺癌細胞均為貼壁細胞，貼壁細胞的傳代：待細胞貼壁生長2~3d至 80%融合時，棄去舊培養(yǎng)液，用適量的0.Imol/LPBS(抑7. 4)漂洗細胞2次后向瓶內(nèi)加入適 量0.25%的膜酶（pH7. 4)的O.lmol/LPBS配制，過濾除菌。消化，W剛好蓋住細胞培養(yǎng)瓶 底部為宜，光鏡下觀察，待細胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，立即加入新鮮的培養(yǎng)液終止消化， 并用吸管輕輕反復吹打，使細胞脫離瓶底形成細胞懸液；調(diào)整細胞濃度，吸取適量細胞懸液 加入新培養(yǎng)瓶中，加入6mL新鮮培養(yǎng)基，顯微鏡下觀察，放置于細胞培養(yǎng)箱。
[0035] 2、細胞增殖活力檢測
[0036] 利用CCK-8法檢測化合物（I)對S種乳腺癌細胞增殖活力的影響。CCK-8試 劑盒（CellCountingKit-8)是由日本同仁化學研究所開發(fā)的檢測細胞增殖的試劑盒， CCK-8試劑中含有WST-8[2- (2-甲氧基-4-硝基苯基）-3- (4-硝基苯基）-5- (2,4-二橫酸 苯）-2H-四挫單鋼鹽]，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗦硫酸二甲醋（I-MethoxyPM巧 的作用下被細胞線粒體中的脫氨酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臘產(chǎn)物，生成的甲臘物 的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。用酶標儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活 細胞數(shù)量。
[0037] 具體操作為：將對數(shù)生長期的乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453常規(guī)傳 代，細胞計數(shù)，W2. 5XIOVmL細胞濃度接種于96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔200y以培養(yǎng)過夜， 待細胞貼壁且生長良好。實驗分5組，每組作6個平行孔，分別加入不同量的化合物（I)， 使其終濃度分別為200、150、100、50mg/mU對照組加等量蒸饋水，培養(yǎng)2地，棄掉培養(yǎng)液，W PBS洗3次，加入新鮮培養(yǎng)液每孔200yL，然后每孔加入10yLCCK-8,培養(yǎng)4h收獲細胞， W酶標儀檢測450nm處光密度值巧(450)]，W蒸饋水空白調(diào)零，計算不同濃度化合物（I) 作用的增殖抑制率。 陽03引細胞增殖抑制率=[對照D(450)-實驗組D(450)]/對照D(450)X100%
[0039] 3、細胞調(diào)亡的檢測
[0040] 利用AnnexinV/PI雙染流式細胞分析技術(shù)檢測化合物（I)對乳腺癌細胞MCF-7、 MDA-MB-231、MDA-MB-453調(diào)亡的影響。實驗嚴格按照Annex