中培養(yǎng)24?48h，得活化菌種；
2、巴西固氮螺菌R種子液的制備:挑取一環(huán)活化菌種接種于LB液體培養(yǎng)基中，置300C 180 r/min搖床培養(yǎng)24?48 h，制得巴西固氮螺菌R種子液；
3、接種發(fā)酵培養(yǎng):按接種量為I?5%接種巴西固氮螺菌R種子液于高產(chǎn)吲哚乙酸的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30?40°C的條件下，160?200 r/min搖床培養(yǎng)2?6d，即可得到含吲哚乙酸363.6?649.84mg/L的發(fā)酵液。
[0015]將本發(fā)明培養(yǎng)基按應(yīng)用方法經(jīng)反復(fù)多次試驗(yàn)，均取得了相同或相近似的結(jié)果，表明培養(yǎng)基使用效果穩(wěn)定可靠，其發(fā)酵液吲哚乙酸產(chǎn)量可高達(dá)363.6?649.84mg/L，而且發(fā)酵培養(yǎng)基易生產(chǎn)制備，成本低，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，易操作，與現(xiàn)有技術(shù)相比，成本降低50%以上，并且產(chǎn)吲哚乙酸量高出500%以上(即提高5倍以上)，并且無(wú)環(huán)境污染，高效、節(jié)能，為發(fā)酵罐批量發(fā)酵生產(chǎn)提供了技術(shù)支持，易于工業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量百分比計(jì)的:果糖 0.1 ?1%、氮源 0.5 ?2%、NaCL 0.1 ?1.0%、CuSO4 0.01 ?0.05%、色氨酸 0.01 ?0.15%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解，121°C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0?10.0 ; 所述的巴西固氮螺菌R，分類命名為巴西固氮螺菌iAzospirillum brasilense), 2012年4月23日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為:CGMCC NO6029，地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的氮源為豆柏粉或大豆粉，豆柏粉為大豆榨油后的一級(jí)壓榨豆柏粉，大豆粉為黃豆粉。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的水為蒸餾水或純凈水。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量百分比計(jì)的:果糖0.3?0.7%、氮源0.9?1.2%,NaCL 0.3?0.7%,CuSO4 0.02?0.03%、色氨酸0.06?0.11%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解，121 °C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0 ?1-O05.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量百分比計(jì)的:果糖0.55%、豆柏1.25%、NaCL 0.55%、CuSO4 0.03%、色氨酸0.08%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆柏、NaCL和CuSO4用水溶解，121°C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量百分比計(jì)的:果糖0.2%、豆粉1.9%,NaCL 0.2%,CuSO4 0.04%、色氨酸0.02%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解，121°C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為9.0。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量百分比計(jì)的:果糖0.9%、豆粉0.6%,NaCL 0.9%,CuSO4 0.02%、色氨酸0.14%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解，121°C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)10.0o8.權(quán)利要求1或4-7任一項(xiàng)所述的巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基在高產(chǎn)吲哚乙酸中的應(yīng)用，方法是: (1)、菌種的活化:挑取巴西固氮螺菌R斜面菌種，在LB培養(yǎng)基平板上三區(qū)劃線，置30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?48h，得活化菌種； (2)、巴西固氮螺菌R種子液的制備:挑取一環(huán)活化菌種接種于LB液體培養(yǎng)基中，置300C 180 r/min搖床培養(yǎng)24?48 h，制得巴西固氮螺菌R種子液； (3)、接種發(fā)酵培養(yǎng):按接種量為I?5%接種巴西固氮螺菌R種子液于高產(chǎn)吲哚乙酸的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30?40°C的條件下，160?200 r/min搖床培養(yǎng)2?6d，即可得到含吲哚乙酸363.6?649.84mg/L的發(fā)酵液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用，可有效解決高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，提高吲哚乙酸產(chǎn)出的問(wèn)題，方法是，由以下重量百分比計(jì)的：果糖0.1～1%、氮源0.5～2%、NaCL 0.1～1.0%、CuSO4 0.01～0.05%、色氨酸0.01～0.15%和余量為水制成，先將色氨酸用0.01M NaOH溶液溶解，0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解，121℃滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0～10.0；本發(fā)明提供發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，操作方便，生產(chǎn)成本低，吲哚乙酸產(chǎn)量高，易于工業(yè)化生產(chǎn)，節(jié)能環(huán)保，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。CGMCC NO. 602920120423
【IPC分類】C12P17/10, C12R1/01
【公開(kāi)號(hào)】CN104911227
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510383651
【發(fā)明人】王繼雯, 岳丹丹, 劉莉, 趙俊杰, 李冠杰, 陳國(guó)參, 慕琦, 胡宜亮, 鞏濤, 楊文玲, 甄靜
【申請(qǐng)人】河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年7月3日