人nlk基因相關(guān)的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2011年12月23日，申請(qǐng)?zhí)枮?01110440594. 4,發(fā)明名稱為： 《人NLK基因相關(guān)的用途及其相關(guān)藥物》的中國(guó)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及人NLK基因相關(guān)的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0003] Nemo樣激酶（Nemo-like kinase, NLK)定位于細(xì)胞核，是一種屬于脯氨酸介導(dǎo) 的蛋白激酶超家族中保守的絲氨酸-蘇氨酸激酶，最初認(rèn)為與果蠅的眼細(xì)胞的極化及脊 椎動(dòng)物多種發(fā)育過程有關(guān)（Choi KW, Benzer S. Rotation of photoreceptor clusters in the developing Drosophila eye requires the Nemo gene. Cell. 1994 ；78:125-36. Verheyen EMjMirkovic I，MacLean SJ，Langmann C，Andrews BC，MacKinnon C. The tissue polarity gene Nemo carries out multiple roles in patterning during Drosophila development. Mech Dev. 2001 ;101:119-32. )D近年來的研究認(rèn)為NLK可調(diào)節(jié)、磷酸化轉(zhuǎn)錄 因子，并通過多種信號(hào)途徑參與細(xì)胞的凋亡過程（BiOtt BK, Pinsky BAiErikson RLNlk is a murine protein kinase related to Erk/MAP kinases and localized in the nucleus. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 ；95:963-8. Mirkovic IjCharish KjGorski SMjMcKnight KjVerheyen EM. Drosophila Nemo is an essential gene involved in the regulation of programmed cell death. Mech Dev. 2002 ;119:9-20.)〇
[0004] Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路包括：細(xì)胞外因子（Wnt)、跨膜受體（Frizzled，F(xiàn)z)、胞質(zhì)蛋白 (Dsh，β-catenin/APC/Axin復(fù)合體等）及核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子（TCF/LEF)，與多種腫瘤的發(fā)生 發(fā)展密切相關(guān)（Bienz M, Clevers H. Linking colorectal cancer to Wnt signaling. Cell 2000;103:311-20.)。NLK 是 Wnt/0-catenin 信號(hào)通路的負(fù)調(diào)節(jié)因子，可使 TCF/ LEF磷酸化，抑制β-catenin/TCF復(fù)合體的轉(zhuǎn)錄活性。c-myb原癌基因表達(dá)物c-Myb蛋 白作為轉(zhuǎn)錄因子可調(diào)控下游多種基因轉(zhuǎn)錄，影響造血干細(xì)胞的增殖與凋亡。fct-i通過 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活性激酶TAKl誘導(dǎo)NLK直接結(jié)合并磷酸化c-Myb蛋白多個(gè)位點(diǎn)， 后續(xù)發(fā)生遍在蛋白化及蛋白酶依賴的降解，可能造成細(xì)胞周期Gl期的阻滯，然而對(duì)Myb 家族另一成員a-Myb的調(diào)控則主要表現(xiàn)為磷酸化并抑制其與DNA結(jié)合區(qū)結(jié)合而發(fā)揮作 用(Kanei-Ishii C, Ninomiya-Tsuji J,Tanikawa J,Nomura T,Ishitani T,Kishida S, Kokura K, Kurahashi T, Ichikawa-Iwata E, Kim Y, Matsumoto K,Ishii S. ffnt-1 signal induces phosphorylation and degradation of c_Myb protein via TAKl, HIPK2, and NLK. Genes Dev. 2004;18:816-29.)。另外，研宄發(fā)現(xiàn)，TAKl-NLK通路可磷酸化具有影響細(xì) 胞凋亡、應(yīng)激、DNA損傷/修復(fù)、腫瘤發(fā)生的轉(zhuǎn)錄因子F0X01，并促使F0X01從胞核至胞質(zhì)的 移位，而抑制 F0X01 的轉(zhuǎn)錄功能（Kim S, Kim Y, Lee J, Chung J. Regulation of F0X01 by TAKl-Nemo-like kinase pathway. J Biol Chem. 2010 ;285:8122_9·)。進(jìn)一步研宄發(fā)現(xiàn)，NLK 還可通過磷酸化轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP/P300的C-末端區(qū)域而影響轉(zhuǎn)錄因子如NF-kB、AP-1、 Smad等的轉(zhuǎn)錄活性的方式參與細(xì)胞凋亡過程（Yasuda J, Yokoo H, Yamada T, Kitabayashi I, Sekiya T, Ichikawa Η. Nemo-like kinase suppresses a wide range of transcription factors, including nuclear factor-kappaB. Cancer Sci.2004 ；95:52-7. Shi Y, Ye K, Wu H, Sun Y, Shi H, Huo K. Human SMAD4 is phosphorylated at Thr9 and Serl38 by interacting with NLK. Mol Cell Biochem. 2010;333:293-8·)。
[0005] 關(guān)于NLK在腫瘤中的研宄已有在結(jié)直腸癌、前列腺癌和肝癌中的報(bào)道。NLK被認(rèn) 為是結(jié)腸癌Wnt/β -catenin信號(hào)通路的抑癌基因。野生型的NLK在結(jié)直腸癌中被誘導(dǎo)表 達(dá)，通過磷酸化TCF/LEF抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)p53非依賴的細(xì)胞凋亡，但不影響細(xì)胞周期 (Yasuda J, Tsuchiya A, Yamada T, Sakamoto M, Sekiya T, Hirohashi S. Nemo-like kinase induces apoptosis in DLD-1 human colon cancer cells. Biochem Biophys Res Commun 2003 ;308:227-33.)。在前列腺癌中，NKL負(fù)調(diào)節(jié)雄性激素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。NLK過表達(dá)可 顯著誘導(dǎo)雄性激素受體陽(yáng)性表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步的研宄發(fā)現(xiàn)，NLK能 夠通過與雄激素受體形成復(fù)合物的方式抑制雄激素受體對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，且在轉(zhuǎn)錄水 平抑制雄激素受體mRNA 的表達(dá)（Emami KH, Brown LG, Pitts TE, Sun X，Vessella RL, Corey E. Nemo-like kinase induces apoptosis and inhibits androgen receptor signaling in prostate cancer cells. Prostate. 2009;69:1481-92·)。而在人肝癌細(xì)胞系中，敲除 NLK的表達(dá)可以抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，Gl-S期細(xì)胞增加，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin Dl、 ⑶K2的表達(dá)也明顯降低，說明NLK在肝癌形成中可能具有通過作用cyclin D1XDK2而發(fā)揮 促有絲分裂的作用（Jung KH, Kim JK, Noh JH, Eun JW, Bae HJ, Xie HJ, Ahn YM, Park WS, Lee JY, Nam Sff. Targeted disruption of Nemo-like kinase inhibits tumor cell growth by simultaneous suppression of cyclin Dl and CDK2 in human hepatocellular carcinoma.J Cell Biochem. 2010;110:687-96·)。綜上，NLK 在不同腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可 能發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。
[0006] RNA干擾（RNA interference, RNAi)即用核苷酸組成的短的雙鏈RNA(dsRNA)進(jìn) 行轉(zhuǎn)錄后基因沉默。它可高效、特異地阻斷體內(nèi)特定基因的表達(dá)，導(dǎo)致其降解，從而引起 生物體內(nèi)特異基因的沉默，使細(xì)胞表現(xiàn)出某種基因表型的缺失，是近年來新興的一種常用 的研宄基因功能、尋找疾病治療方法的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。研宄表明，長(zhǎng)度為21-23nt的雙鏈 RNA能夠在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平特異性的引起RNAi (Tuschl T, Zamore PD, Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 2000;101:25-33·)。腫瘤患者雖經(jīng)化療、放療和綜合 治療，但五年生存率仍很低，如能對(duì)腫瘤發(fā)病和進(jìn)展有關(guān)的基因進(jìn)行干預(yù)，將能為腫瘤的治 療開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術(shù)可以抑制 原癌基因、突變的抑癌基因、細(xì)胞周期相關(guān)基因、抗凋亡相關(guān)基因等的表達(dá)來抑制腫瘤進(jìn)程 (Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters 2005 ；579