两个人的电影免费视频_国产精品久久久久久久久成人_97视频在线观看播放_久久这里只有精品777_亚洲熟女少妇二三区_4438x8成人网亚洲av_内谢国产内射夫妻免费视频_人妻精品久久久久中国字幕

一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法

文檔序號(hào):8407593閱讀:488來(lái)源:國(guó)知局
一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,屬于微生物育種技術(shù)領(lǐng)域,特指一種將啤酒酵母細(xì)胞經(jīng)超高壓處理誘變后,再利用含鋅選擇性培養(yǎng)基對(duì)突變株篩選、馴化,提高啤酒酵母對(duì)鋅的富集能力的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鋅作為人體必需的微量元素之一越來(lái)越受到人們的關(guān)注。鋅在人體內(nèi)部主要是以有機(jī)態(tài)的形式被吸收、代謝,無(wú)機(jī)態(tài)的鋅不但不能被人體消化吸收,且具有一定的毒性。利用微生物的方法富集人和動(dòng)物必需的微量元素,制造成本低廉且安全的功能性食品,也日益受到人們的青睞。酵母菌對(duì)鋅有一定的富集能力,可以將無(wú)機(jī)鋅轉(zhuǎn)化為有機(jī)鋅。常見(jiàn)的紫外線和化學(xué)誘變劑等誘變方法由于具有輻射性或毒性,在很大程度上限制了它們的應(yīng)用。隨著高壓理論和技術(shù)的發(fā)展,高壓生物學(xué)的研宄已經(jīng)深入到生物學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域,超高壓誘變技術(shù)在工業(yè)微生物育種方面有了新的進(jìn)展,但是利用超高壓技術(shù)來(lái)進(jìn)行富鋅酵母選育的研宄較少。利用超高壓技術(shù)對(duì)啤酒酵母菌株進(jìn)行誘變處理,可以獲取富鋅性能顯著性提高的正突變菌株,因其簡(jiǎn)單實(shí)用、效果明顯。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)目前篩選高效富鋅微生物技術(shù)中存在的問(wèn)題,本發(fā)明提供了一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,從而獲得高產(chǎn)鋅的啤酒酵母以應(yīng)用于食品、藥品等行業(yè)。
[0004]本發(fā)明的一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,其包括以下步驟: ⑴將斜面保存的啤酒酵母菌進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),接種于YH)液體培養(yǎng)基上,經(jīng)28°C、150rpm
搖瓶培養(yǎng)1h達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,取培養(yǎng)菌液于4°C、4000rpm離心lOmin,以無(wú)菌生理鹽水制備細(xì)胞濃度為16?10 7個(gè)/mL的菌體懸液。
[0005](2)將所制備的啤酒酵母菌懸液轉(zhuǎn)入滅菌的聚丙烯塑料包裝袋內(nèi)并封口,置于超高壓處理機(jī)內(nèi)在250MPa條件下高壓處理20min,進(jìn)行超高壓誘變。
[0006](3)將誘變后的突變菌株涂布在啤酒酵母最大耐受鋅濃度(0.8mmol/L)的Zn-YPD選擇性培養(yǎng)基平板上,在28°C恒溫箱中倒置培養(yǎng)72h。觀察培養(yǎng)皿上長(zhǎng)菌情況,挑取生長(zhǎng)快、菌落較大的單菌落菌株。
[0007]⑷將初篩出的菌株接種于倍增的最大耐受鋅濃度的Zn-YPD選擇性培養(yǎng)基平板上,28°C恒溫培養(yǎng)72h,連續(xù)馴化傳代,得到穩(wěn)定的抗性突變株,其對(duì)鋅的耐受濃度為3.2mmol/Lo
[0008]本發(fā)明通過(guò)超高壓誘變、初篩和馴化,得到對(duì)高濃度鋅充分耐受且富鋅能力較高的啤酒酵母突變菌株,其對(duì)鋅的耐受濃度達(dá)到3.2mmol/L,含鋅量達(dá)到2.75mg/g,比啤酒酵母出發(fā)菌含鋅量高出6.55倍。通過(guò)本方法大大地提高了啤酒酵母對(duì)鋅的耐受性及富鋅能力,相比較紫外線、化學(xué)誘變劑誘變更安全、操作簡(jiǎn)單、效果更明顯。
【具體實(shí)施方式】
[0009]誘變流程:
啤酒酵母出發(fā)菌株活化一菌懸液超高壓誘變一含鋅選擇性培養(yǎng)基初篩一耐鋅性馴化—獲得高富鋅菌株。
[0010]從保藏試管的斜面里挑取啤酒酵母出發(fā)菌兩環(huán),至盛有50mL YPD液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,在28°C、150rpm搖瓶培養(yǎng)10h,達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。取培養(yǎng)后的啤酒酵母菌液10mL,4°C、4000rpm離心1min后,以無(wú)菌生理鹽水洗滌三次制得菌體懸液。使用前在搖床內(nèi)輕微振蕩30min,讓菌體分散均勻。將制備好的菌懸液適當(dāng)稀釋?zhuān)捎醚蛴?jì)數(shù)板調(diào)整細(xì)胞濃度為16個(gè)/mL,備用。
[0011]無(wú)菌操作條件下取啤酒酵母菌懸液5mL,轉(zhuǎn)入經(jīng)121°C、20min條件下滅菌的聚丙烯塑料包裝袋內(nèi)并封口,置于超高壓處理機(jī)內(nèi)在250MPa條件下高壓處理20min,進(jìn)行超高壓誘變。
[0012]將誘變后的突變菌株涂布在0.8mmol/L (最大耐受鋅濃度)的Zn-YPD選擇性培養(yǎng)基平板上,在28°C恒溫箱中倒置培養(yǎng)72h。挑取生長(zhǎng)快、菌落較大的單菌落,依次涂布在兩至四倍最大耐受鋅濃度的Zn-YPD選擇性培養(yǎng)基平板上馴化傳代。在該平板上生長(zhǎng)良好且穩(wěn)定的菌落即為高效富鋅突變菌株。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,其特征在于依次包括以下步驟: ⑴將斜面保存的啤酒酵母菌進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),接種于Yro液體培養(yǎng)基上,經(jīng)28°C、150rpm搖瓶培養(yǎng)1h達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,取培養(yǎng)菌液于4°C、4000rpm離心lOmin,以無(wú)菌生理鹽水制備細(xì)胞濃度為16?10 7個(gè)/mL的菌體懸液; ⑵將所制備的啤酒酵母菌懸液轉(zhuǎn)入滅菌的聚丙烯塑料包裝袋內(nèi)并封口,置于超高壓處理機(jī)內(nèi)在250MPa條件下高壓處理20min,進(jìn)行超高壓誘變; ⑶將誘變后的突變菌株涂布在啤酒酵母最大耐受鋅濃度(0.8mmol/L)的Zn-YPD選擇性培養(yǎng)基平板上,在28°C恒溫箱中倒置培養(yǎng)72h ; 觀察培養(yǎng)皿上長(zhǎng)菌情況,挑取生長(zhǎng)快、菌落較大的單菌落菌株; ⑷將初篩出的菌株接種于倍增的最大耐受鋅濃度的Zn-YH)選擇性培養(yǎng)基平板上,28°C恒溫培養(yǎng)72h,連續(xù)馴化傳代,得到穩(wěn)定的抗性突變株,其對(duì)鋅的耐受濃度達(dá)到3.2mmol/Lo
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,其特征在于:步驟⑵的在250MPa條件下高壓處理20min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,其特征在于:步驟⑶的啤酒酵母最大耐受鋅濃度0.8mmol/Lo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,其特征在于:步驟⑷的啤酒酵母突變株對(duì)鋅的耐受濃度為3.2mmol/Lo
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種通過(guò)超高壓誘變提高啤酒酵母富鋅能力的方法,屬于微生物育種技術(shù)領(lǐng)域。將啤酒酵母出發(fā)菌株經(jīng)活化、菌懸液細(xì)胞超高壓誘變處理、利用含鋅選擇性培養(yǎng)基對(duì)突變菌株篩選、馴化而提高啤酒酵母對(duì)鋅的富集能力。采用超高壓誘變獲得高富鋅啤酒酵母突變株,該方法相比較紫外線、化學(xué)誘變劑誘變更安全、操作簡(jiǎn)單、效果更明顯。啤酒酵母突變菌株對(duì)鋅的耐受濃度達(dá)到3.2mmol/L,含鋅量達(dá)到2.75mg/g,比啤酒酵母出發(fā)菌含鋅量高出6.55倍。
【IPC分類(lèi)】C12R1-865, C12N15-01
【公開(kāi)號(hào)】CN104726446
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510085777
【發(fā)明人】馬龍, 許秀勤
【申請(qǐng)人】馬龍
【公開(kāi)日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年2月18日
網(wǎng)友詢(xún)問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1
漳平市| 资溪县| 佛坪县| 鹿泉市| 卢氏县| 汉阴县| 白河县| 孝义市| 肥西县| 开原市| 天台县| 丰顺县| 宜宾市| 兴宁市| 桂东县| 元江| 江城| 柘城县| 安西县| 应用必备| 昭觉县| 梅州市| 若尔盖县| 库车县| 克拉玛依市| 兴化市| 湘潭市| 桐城市| 灵台县| 西乌珠穆沁旗| 绥化市| 女性| 巴林左旗| 满城县| 通州区| 钟山县| 葵青区| 金秀| 九龙县| 灌阳县| 庐江县|