關(guān)于水解纖維蛋白溶酶原多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及水解纖維蛋白溶酶原多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有促進纖維蛋白溶酶 原水解成血管抑素，治療惡性腫瘤的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 1971年Folkman提出腫瘤生長和轉(zhuǎn)移依賴新生血管生成。并認為實體瘤形成后， 其發(fā)展可分為無血管期和血管期兩個階段。無血管期，微小腫瘤的存在依靠周圍間質(zhì)彌散 供血，生長速度呈線性，腫瘤限制在Imm~2mm之內(nèi)，瘤細胞數(shù)少于IO 5~10 6個，迫使腫瘤 處于"休眠狀態(tài)";進入血管期后，腫瘤組織為灌注性供血，瘤體呈指數(shù)性生長，2周后可增大 1. 6萬倍。新生血管不僅提供腫瘤所需要的營養(yǎng)和氧氣，排除代謝產(chǎn)物，而且是遠處轉(zhuǎn)移的 途徑。因此，阻斷腫瘤新生血管形成就可能阻止腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，抗新生血管療法也成為腫 瘤治療的手段之一。
[0003] 血管抑素是纖維蛋白溶酶原的水解產(chǎn)物，有較強的血管生成抑制活性。大量研宄 證實血管抑素在體外能抑制內(nèi)皮細胞的生長和迀移，在體內(nèi)試驗中可抑制新生血管形成， 從而誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤生長，使腫瘤處于"休眠狀態(tài)"。
[0004] 因此，促進纖維蛋白溶酶原水解，形成血管抑素，可以有效抑制體內(nèi)血管內(nèi)皮細胞 增殖，抑制腫瘤的生長。從而，達到治療腫瘤的效果。
[0005] 目前，沒有成熟開發(fā)的水解纖維蛋白溶酶原多肽問世，用于治療惡性腫瘤。
[0006] 本專利中的水解纖維蛋白溶酶原多肽已證明在治療子宮癌中有效，具有在其他腫 瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明目的
[0008] 本發(fā)明提供全新的序列，該序列為水解纖維蛋白溶酶原多肽，對惡性腫瘤具有很 好的療效。
[0009] 技術(shù)方案
[0010] 水解纖維蛋白溶酶原多肽，其特征在于其序列為QDYLKSQDDIQKLGAH。
[0011] 水解纖維蛋白溶酶原多肽在治療惡性腫瘤，如子宮癌藥物中的應(yīng)用。
[0012] 有益效果
[0013] 利用固相合成法化學(xué)合成水解纖維蛋白溶酶原多肽，該多肽具有全新的序列，該 多肽可體外促進纖維蛋白溶酶原水解，治療惡性腫瘤，如子宮癌。我們發(fā)現(xiàn)的水解纖維蛋白 溶酶原多肽可以同時抑制血管內(nèi)皮細胞增殖活力，并在體內(nèi)試驗中提高荷瘤小鼠生存率， 具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1
[0015] 水解纖維蛋白溶酶原多肽對體外水解纖維蛋白溶酶原的活性。
[0016] 采用ELISA法檢測纖維蛋白溶酶原水解產(chǎn)物--血管抑素。將Iml的lmg/ml的 纖維蛋白溶酶為底物，分別在底物溶液中加入2、4、8 μ g的水解纖維蛋白溶酶原多肽（上海 生工合成）和陽性對照藥金屬蛋白酶6 μ g，在37°C，反應(yīng)5min后，離心，取上清，用ELISA 法反應(yīng)后溶液中血管抑素的含量，結(jié)果顯示，2、4、8 μ g的水解纖維蛋白溶酶原多肽和金屬 蛋白酶產(chǎn)生的血管抑素分別為9. 76、23. 98、41. 98nM。
[0017] 實施例2
[0018] 水解纖維蛋白溶酶原多肽對體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細胞的生長和存活I(lǐng)C50。
[0019] 采用MTT比色法。將對數(shù)生長的人血管內(nèi)皮細胞HUVEC，以1.0 X IO5加入96孔培 養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物水解纖維蛋白溶 酶原多肽（上海生工合成）和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè) 五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在Oh、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加 入DMSO,孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式HUVEC生長抑制率=(1-實 驗組吸光值/對照組吸光值）X 100%。計算出實驗藥物的IC50為24. 76 μ M。
[0020] 實施例3
[0021] 用腫瘤模型檢測水解纖維蛋白溶酶原多肽的體內(nèi)活力。
[0022] 建立子宮癌腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實驗組 多肽（上海生工合成）設(shè)3個劑量：0. 75、1.5、3yM/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計算 存活率。結(jié)果顯示，水解纖維蛋白溶酶原多肽可有效地保護小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存 率，生存率達到56.4%。
[0023] 實施例4
[0024] 水解纖維蛋白溶酶原多肽對人宮頸癌細胞HeLa裸鼠異種移植腫瘤生長抑制試驗
[0025] 取對數(shù)生長期的人宮頸癌細胞HeLa細胞株，在無菌條件下制備成5 X 106/ml細胞 懸液，以0.1 ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至 100-200_3后動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫 瘤直徑的測量次數(shù)為每2天1次，每次測量同時還需稱量鼠重。給藥方式均采用尾靜脈注 射。陰性對照組注射等量生理鹽水，每天1次；順鉑組l〇mg/kg，每周給藥1次；每天給藥1 次；多肽以20mg/kg每天給藥1次。腫瘤體積計算公式：
[0026] TV = 0.52 XaXb2
[0027] 其中a、b分別表示長寬。根據(jù)測量的結(jié)果計算出相對腫瘤體積?？鼓[瘤活性的評 價指標為相對腫瘤增殖率T/C(% )，計算公式如下：
[0028] T/C(% ) = Tetv/CetvX100%
[0029] Τκτν:治療組RTV ;C κτν:陰性對照組RTV
[0030] 表1.多肽對人宮頸癌細胞HeLa裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制作用
[0031]
【主權(quán)項】
1. 水解纖維蛋白溶酶原多肽，其特征在于其序列為QDYLKSQDDIQKLGAH。
2. 如權(quán)利要求1所述的水解纖維蛋白溶酶原多肽在治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求2所述的水解纖維蛋白溶酶原多肽在治療子宮癌藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有促進纖維蛋白溶酶原水解成血管抑素，治療惡性腫瘤的多肽。其序列為THELGHLSQKLYGKRSN是全新的序列，它們可以在體外促進纖維蛋白溶酶原水解，抑制血管內(nèi)皮細胞增殖，并在體內(nèi)試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【IPC分類】A61K38-48, A61P35-00, C12N9-68
【公開號】CN104726438
【申請?zhí)枴緾N201510157703
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年4月6日