本公開(kāi)涉及分離的核酸分子(例如質(zhì)?；蜉d體)，其編碼雙順?lè)醋踊蚨囗樂(lè)醋觢amp(溶酶體相關(guān)膜蛋白)構(gòu)建體，所述構(gòu)建體包含lamp融合蛋白，和第二任選分泌的蛋白質(zhì)例如來(lái)自免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因(ireg)的蛋白質(zhì)，以及它們?cè)谥委熁加懈腥拘约膊?、糖尿病、過(guò)敏、過(guò)度增殖性病癥和/或癌癥，特別是covid-19的受試者中的用途。此外，本文描述的雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體可用于在非人脊椎動(dòng)物中產(chǎn)生抗體，優(yōu)選地其中所述非人脊椎動(dòng)物的基因組至少包含部分人免疫球蛋白區(qū)域和/或人源化免疫球蛋白區(qū)域。

背景技術(shù)：

1、在下面的討論中，出于背景和介紹的目的，將描述某些文章和方法。本文包含的任何內(nèi)容均不應(yīng)被解釋為對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的“承認(rèn)”。申請(qǐng)人明確保留在適當(dāng)情況下證明本文引用的文章和方法不構(gòu)成適用法律規(guī)定下的現(xiàn)有技術(shù)的權(quán)利。

2、疫苗是開(kāi)發(fā)預(yù)防性和治療性疫苗的新的、有前景的候選者。它們被證明是安全的，并且如果需要重復(fù)的疫苗接種周期來(lái)實(shí)現(xiàn)臨床益處，那么對(duì)載體骨架缺乏免疫應(yīng)答可能是一個(gè)決定性的優(yōu)勢(shì)。然而，傳統(tǒng)疫苗的一個(gè)明顯缺點(diǎn)是它們?cè)谌祟?lèi)中的免疫原性低。基于表位的疫苗的免疫原性中的一個(gè)關(guān)鍵限制步驟可能是表位進(jìn)入t細(xì)胞的ii類(lèi)主要組織相容性(mhc)呈遞途徑的過(guò)程，這在沒(méi)有靶向技術(shù)的疫苗的情況下可能是一個(gè)隨機(jī)過(guò)程。

3、各種設(shè)計(jì)的lamp-抗原構(gòu)建體以前已被描述在例如美國(guó)專利第11,203,629號(hào)中(參見(jiàn)其中的圖1)。美國(guó)專利第11,203,629號(hào)中描述的一種被命名為ilc-4的構(gòu)建體(描繪在本文的圖1中)包含融合在lamp蛋白的第一同源結(jié)構(gòu)域和lamp蛋白的第二同源結(jié)構(gòu)域之間(或至少在兩個(gè)半胱氨酸保守片段之間)的至少一種感興趣的抗原，例如，所述至少一種感興趣的抗原可以被放置在lamp鉸鏈區(qū)中。在一些實(shí)施方式中，該構(gòu)建體還包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域和/或lamp蛋白的胞質(zhì)尾區(qū)。所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域可以源自例如lamp-1、lamp-2、lamp-3或endolyn蛋白?；蛘撸梢允褂脕?lái)自兩種不同lamp蛋白的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域。發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，改進(jìn)的lamp構(gòu)建體例如ilc-4可以例如引發(fā)針對(duì)所述感興趣的抗原的強(qiáng)烈t細(xì)胞和抗體應(yīng)答，使其成為用作疫苗的可行候選者。

4、盡管如此，還需要設(shè)計(jì)新的和進(jìn)一步改進(jìn)的lamp構(gòu)建體以及編碼它們的核酸分子，其可以用作疫苗來(lái)有效地治療例如過(guò)敏、感染性疾病、糖尿病、過(guò)度增殖性病癥和/或癌癥，和/或用于產(chǎn)生有用的抗體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、正如本文中進(jìn)一步描述的，發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，可以設(shè)計(jì)分離的核酸分子，其不僅表達(dá)lamp構(gòu)建體(例如在本文圖1中所描述的)，而且表達(dá)特定類(lèi)型的第二多肽，通常是分泌多肽，其編碼已被發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)增強(qiáng)針對(duì)腫瘤或感染性疾病的免疫應(yīng)答的基因例如cd40l、cd80、ox40、il-12、il-21、il-15或flt3l等；并且從所述分離的核酸分子表達(dá)這兩種多肽，不僅與較早的lamp構(gòu)建體相比，而且與包含某些分泌抗原例如第二疾病抗原的雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體相比，都出人意料地增強(qiáng)了免疫應(yīng)答。

2、提供該
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
是為了以簡(jiǎn)化形式介紹一系列概念，這些概念將在下面的具體實(shí)施方式中進(jìn)一步描述。該發(fā)明內(nèi)容無(wú)意鑒定所要求保護(hù)的主題內(nèi)容的關(guān)鍵或必要特征，也無(wú)意用于限制所要求保護(hù)的主題內(nèi)容的范圍。從下面的書(shū)面具體實(shí)施方式(包括在附圖中說(shuō)明的和在權(quán)利要求書(shū)中定義的那些方面)，所要求保護(hù)的主題內(nèi)容的其他特征、細(xì)節(jié)、實(shí)用性和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見(jiàn)。

3、本公開(kāi)的一個(gè)目的是提供新的核酸分子，其編碼構(gòu)建體(“雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體”)，所述構(gòu)建體包含將感興趣的抗原有效呈遞給免疫系統(tǒng)以產(chǎn)生增強(qiáng)的免疫應(yīng)答的lamp結(jié)構(gòu)域的特定片段和/或變體。這些雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體有效地將所述抗原引導(dǎo)到溶酶體/內(nèi)體區(qū)室，在那里它們被加工并呈遞給ii類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體(mhc)分子，以便優(yōu)先刺激輔助t細(xì)胞和/或產(chǎn)生抗體，同時(shí)具有增強(qiáng)免疫應(yīng)答的能力。

4、本文描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子和方法可以在受試者中引發(fā)免疫應(yīng)答。所述免疫應(yīng)答可以是針對(duì)所述雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體(例如疫苗)中編碼的抗原的表位的免疫應(yīng)答。疫苗武裝受試者的免疫系統(tǒng)，使免疫系統(tǒng)可以檢測(cè)并破壞所述受試者中含有所述疫苗的抗原的物質(zhì)。本文描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子和方法可以在所述受試者中引發(fā)th1免疫應(yīng)答。th1免疫應(yīng)答可以包括由免疫細(xì)胞的亞群(例如抗原特異性t細(xì)胞)分泌炎性細(xì)胞因子(例如ifnγ、tnfa)。在某些情況下，所述炎性細(xì)胞因子激活另一種亞型的免疫細(xì)胞(例如細(xì)胞毒性t細(xì)胞)，其可以破壞所述受試者中含有所述抗原的物質(zhì)。

5、在某些情況下，在本文描述的雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體和方法中使用的抗原可以被受試者的免疫系統(tǒng)識(shí)別，從而引發(fā)th1免疫應(yīng)答并釋放i型細(xì)胞因子。所述th1應(yīng)答可以由所述表位與t細(xì)胞(更具體而言是由所述t細(xì)胞表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合體(mhc))之間的相互作用引發(fā)。例如，表位與mhc受體的高親和力結(jié)合可以刺激th1應(yīng)答。mhc受體可以是多種類(lèi)型的mhc受體中的至少一種。接合在t細(xì)胞上的mhc受體可能因群體中的個(gè)體而異。

6、在某些情況下，所述免疫應(yīng)答是1型免疫應(yīng)答。在某些情況下，所述免疫應(yīng)答的特征在于i型細(xì)胞因子產(chǎn)生與ii型細(xì)胞因子產(chǎn)生的比率大于1。在某些情況下，所述免疫應(yīng)答的特征在于i型細(xì)胞因子產(chǎn)生與ii型細(xì)胞因子產(chǎn)生的比率小于1。在某些情況下，所述免疫應(yīng)答的特征在于ifnγ產(chǎn)生與il-10產(chǎn)生的比率大于1。在某些情況下，所述免疫應(yīng)答的特征在于ifnγ產(chǎn)生與il-10產(chǎn)生的比率小于1。

7、本文描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子也可以以提供免疫調(diào)控元件(ire)或免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因(ireg)的表達(dá)，從而在受試者中引發(fā)增強(qiáng)的免疫應(yīng)答(例如包含顯著更高的抗體滴度的免疫應(yīng)答)的方式使用。例如，核酸分子(例如質(zhì)粒或載體)可以提供包含lamp-抗原多肽的雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的表達(dá)，所述多肽被加工并呈遞給ii類(lèi)mhc分子，從而優(yōu)先刺激輔助t細(xì)胞，啟動(dòng)記憶細(xì)胞和/或產(chǎn)生抗體；并且提供另一種ireg或ire多肽的表達(dá)，所述多肽可以被分泌到所述受試者的循環(huán)中，并且可以例如進(jìn)一步增強(qiáng)針對(duì)所述lamp抗原的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。

8、在一個(gè)方面，所述編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子是適合于對(duì)受試者進(jìn)行疫苗接種的疫苗載體。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了一種遞送媒介，其用于促進(jìn)將所述編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子(其包含編碼表位和/或抗原的多核苷酸)引入到細(xì)胞中。所述遞送媒介可以是基于脂質(zhì)的(例如脂質(zhì)體制劑)、基于病毒的(例如包含包封所述核酸分子的病毒蛋白)或基于細(xì)胞的。

9、在一些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了一種可注射組合物，其包含本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子，用于在受試者中引發(fā)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答(例如抗體的產(chǎn)生)。在一些實(shí)施方式中，這種疫苗產(chǎn)生相對(duì)于th2應(yīng)答優(yōu)先的th1應(yīng)答。

10、本公開(kāi)還提供了一種細(xì)胞，其包含本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子，可用于產(chǎn)生免疫應(yīng)答。在一個(gè)方面，所述細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞。所述抗原呈遞細(xì)胞可以是專業(yè)抗原呈遞細(xì)胞(例如樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、b細(xì)胞等)或工程化抗原呈遞細(xì)胞(例如被工程化改造以表達(dá)抗原呈遞所需的分子例如ii類(lèi)mhc分子的非專業(yè)抗原呈遞細(xì)胞)。所述抗原呈遞所需的分子可以源自其他細(xì)胞，例如是天然存在的，或者它們本身可以被工程化改造(例如突變或修飾以表現(xiàn)出所需的特性，例如對(duì)抗原表位更高或更低的親和力)。

11、本公開(kāi)還提供了一種試劑盒，其包含多種細(xì)胞，所述細(xì)胞包含本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子。至少兩種所述細(xì)胞可以表達(dá)不同的ii類(lèi)mhc分子，并且每種細(xì)胞可以包含相同的lamp構(gòu)建體。在一個(gè)方面，提供了一種試劑盒，其包含編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的病毒載體。

12、本公開(kāi)還提供了一種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其包含至少一種所述細(xì)胞和/或至少一種本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子。本公開(kāi)還提供了一種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其包含至少一種本文描述的細(xì)胞。

13、本公開(kāi)還提供了一種用于在受試者(例如人或非人脊椎動(dòng)物)中產(chǎn)生針對(duì)抗原的增強(qiáng)的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者施用如上所述的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞在所述受試者中表達(dá)或可以被誘導(dǎo)以表達(dá)所述雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體。在一個(gè)方面，所述細(xì)胞包含與所述受試者的mhc蛋白相容的ii類(lèi)mhc分子，使得所述受試者不產(chǎn)生針對(duì)所述ii類(lèi)mhc分子的免疫應(yīng)答。

14、在另一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了一種引發(fā)針對(duì)抗原的增強(qiáng)的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向受試者例如人或非人脊椎動(dòng)物施用本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子。優(yōu)選地，所述核酸分子對(duì)所述受試者的細(xì)胞具有感染性。例如，所述編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子可以是病毒載體，例如痘苗病毒載體。

15、本公開(kāi)還包括在非人脊椎動(dòng)物中產(chǎn)生抗體的方法，其中用本文所描述的編碼雙順?lè)醋觢amp構(gòu)建體的核酸分子注射所述非人脊椎動(dòng)物。產(chǎn)生的抗體可以從所述脊椎動(dòng)物的血液中分離出來(lái)(作為多克隆)，然后使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)一步分離以產(chǎn)生單克隆抗體。

16、本文描述的方法可用于生產(chǎn)和/或優(yōu)化抗體，包括全人抗體、人源化抗體、嵌合抗體，用于診斷和治療用途。產(chǎn)生此類(lèi)抗體的雜交瘤也是本公開(kāi)的另一個(gè)目的。

17、本公開(kāi)的具體實(shí)施方式包括下述實(shí)施方式：

18、1.一種分離的核酸分子，其包含：

19、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和與所述lamp蛋白異源的抗原結(jié)構(gòu)域的多肽(合稱為“l(fā)amp-抗原構(gòu)建體”)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域之間；和

20、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

21、2.根據(jù)實(shí)施方式1所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

22、3.根據(jù)實(shí)施方式2所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?id?no：1-113中的任一者。

23、4.根據(jù)實(shí)施方式1或2所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?id?no：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

24、5.根據(jù)實(shí)施方式2所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述lamp-抗原構(gòu)建體的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

25、6.根據(jù)實(shí)施方式5所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

26、7.根據(jù)實(shí)施方式5或6所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

27、8.根據(jù)實(shí)施方式1-7中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

28、9.根據(jù)實(shí)施方式8所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

29、10.根據(jù)實(shí)施方式1-9中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

30、11.根據(jù)實(shí)施方式10所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

31、12.根據(jù)實(shí)施方式1-11中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

32、13.根據(jù)實(shí)施方式12所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

33、14.根據(jù)實(shí)施方式1-13中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

34、15.根據(jù)實(shí)施方式14所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

35、16.根據(jù)實(shí)施方式1-15中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

36、17.根據(jù)實(shí)施方式1-16中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

37、18.根據(jù)實(shí)施方式17所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自igkviii(例如seq?id?no：122)、ig-κ(例如seq?id?no：120)、四連接素或il-2，和/或其中所述第二多肽進(jìn)一步包含肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白d(spd)(例如seq?id?no：131)。

38、19.根據(jù)實(shí)施方式18所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

39、20.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式1-18中任一者所述的分離的核酸分子。

40、21.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式1-18中任一者所述的分離的核酸。

41、22.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式20所述的宿主細(xì)胞。

42、23.一種治療患有疾病或病癥的受試者或在患有疾病或病癥或具有發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其中所述方法包括以足以在所述受試者中治療所述疾病或病癥或誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式1-18中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式19所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式20所述的宿主細(xì)胞。

43、24.根據(jù)實(shí)施方式23所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用至少一種第二治療劑。

44、25.一種分離的核酸分子，其包含：

45、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和包含her2胞外結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)構(gòu)域的多肽(合稱為“her2-lamp”)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)lamp同源結(jié)構(gòu)域之間；和

46、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

47、26.根據(jù)實(shí)施方式25所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

48、27.根據(jù)實(shí)施方式26所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?id?no：1-113中的任一者。

49、28.根據(jù)實(shí)施方式25或26所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?idno：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

50、29.根據(jù)實(shí)施方式26所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述her2-lamp的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

51、30.根據(jù)實(shí)施方式29所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

52、31.根據(jù)實(shí)施方式29或30所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或第228-382位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?idno：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

53、32.根據(jù)實(shí)施方式25-31中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述her2-lamp在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

54、33.根據(jù)實(shí)施方式32所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

55、34.根據(jù)實(shí)施方式25-33中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述her2-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

56、35.根據(jù)實(shí)施方式34所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

57、36.根據(jù)實(shí)施方式25-35中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述her2-lamp進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

58、37.根據(jù)實(shí)施方式36所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

59、38.根據(jù)實(shí)施方式25-37中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述her2-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

60、39.根據(jù)實(shí)施方式38所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

61、40.根據(jù)實(shí)施方式25-39中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no：200的氨基酸序列或由seq?id?no：200的氨基酸序列組成。

62、41.根據(jù)實(shí)施方式25-40中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述her2-lamp包含seq?id?no：1的第1-194位殘基或seq?id?no：198的氨基酸序列，隨后是seq?id?no：200的氨基酸序列，隨后是seq?id?no：1的第228-381位殘基或seq?id?no：202的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列組成。

63、42.根據(jù)實(shí)施方式25-41中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、193、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、194、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

64、43.根據(jù)實(shí)施方式25-42中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

65、44.根據(jù)實(shí)施方式43所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自igkviii(例如seq?id?no：122)、ig-κ(例如seq?id?no：120)、四連接素或il-2。

66、45.根據(jù)實(shí)施方式25-44中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽包括spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15(例如包含與seq?id?no：233、238、242或252具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列，或包含與下述氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列：seq?id?no：131的氨基酸序列，然后是seq?id?no：204、151、145、147、149、193、181、155、159、169、252或253之一的氨基酸序列)，或者其中所述核酸包含編碼spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15的核苷酸序列(例如包含與下述序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的核苷酸序列：seq?id?no：132，然后是seq?id?no：205、152、146、148、150、194、182、156、170或881之一)。

67、46.根據(jù)實(shí)施方式45所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

68、47.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式25-46中任一者所述的分離的核酸分子。

69、48.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式25-46中任一者所述的分離的核酸。

70、49.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式48所述的宿主細(xì)胞。

71、50.一種治療患有癌癥的受試者的方法，其中所述方法包括以足以在所述受試者中治療所述癌癥或誘導(dǎo)針對(duì)所述癌癥的免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式25-46中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式47所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式48所述的宿主細(xì)胞。

72、51.根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用至少一種第二治療劑。

73、52.一種分離的核酸分子，其包含：

74、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和包含冠狀病毒刺突蛋白抗原的抗原結(jié)構(gòu)域的多肽(合稱為“刺突-lamp”)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)lamp同源結(jié)構(gòu)域之間；和

75、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

76、53.根據(jù)實(shí)施方式52所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

77、54.根據(jù)實(shí)施方式53所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?id?no：1-113中的任一者。

78、55.根據(jù)實(shí)施方式52或53所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?idno：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

79、56.根據(jù)實(shí)施方式53所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述刺突-lamp的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

80、57.根據(jù)實(shí)施方式56所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

81、58.根據(jù)實(shí)施方式56或57所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或第228-382位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?idno：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

82、59.根據(jù)實(shí)施方式52-58中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述刺突-lamp在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

83、60.根據(jù)實(shí)施方式59所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

84、61.根據(jù)實(shí)施方式52-60中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述刺突-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

85、62.根據(jù)實(shí)施方式61所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

86、63.根據(jù)實(shí)施方式52-62中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述刺突-lamp進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

87、64.根據(jù)實(shí)施方式63所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

88、65.根據(jù)實(shí)施方式52-64中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述刺突-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

89、66.根據(jù)實(shí)施方式65所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

90、67.根據(jù)實(shí)施方式52-66中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域包含刺突s1和/或s2或包含seq?id?no：118或119的序列的氨基酸序列。

91、68.根據(jù)實(shí)施方式52-67中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述刺突-lamp包含seq?id?no：1的第1-194位殘基或seq?id?no：198的氨基酸序列，然后是seq?id?no：231的氨基酸序列，然后是seq?id?no：1的第228-381位殘基或seq?id?no：202的氨基酸序列，或者由所述氨基酸序列組成。

92、69.根據(jù)實(shí)施方式52-68中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

93、70.根據(jù)實(shí)施方式52-68中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽包含spd-scd40l融合多肽。

94、71.根據(jù)實(shí)施方式52-70中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

95、72.根據(jù)實(shí)施方式71所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自spd。

96、73.根據(jù)實(shí)施方式52-72中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

97、74.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式52-73中任一者所述的分離的核酸分子。

98、75.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式52-73中任一者所述的分離的核酸。

99、76.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式75所述的宿主細(xì)胞。

100、77.一種治療患有冠狀病毒感染(例如來(lái)自covid-19)或具有發(fā)生冠狀病毒感染(例如來(lái)自covid-19)的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法，其中所述方法包括以足以治療所述冠狀病毒感染(例如covid-19)或預(yù)防其發(fā)作或降低其癥狀的嚴(yán)重程度的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式52-73中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式74所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式75所述的宿主細(xì)胞。

101、78.一種在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)冠狀病毒例如sars?co-v2的免疫應(yīng)答的方法，其中所述方法包括以足以在所述受試者中誘導(dǎo)針對(duì)所述冠狀病毒例如sars?co-v2的免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式52-73中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式74所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式75所述的宿主細(xì)胞。

102、79.一種分離的核酸分子，其包含：

103、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和包含ny-eso1或cd161蛋白抗原的抗原結(jié)構(gòu)域的多肽(“ny-eso1-lamp”或“cd161-lamp”lamp-抗原構(gòu)建體)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)lamp同源結(jié)構(gòu)域之間；和

104、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

105、80.根據(jù)實(shí)施方式79所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

106、81.根據(jù)實(shí)施方式80所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?id?no：1-113中的任一者。

107、82.根據(jù)實(shí)施方式79或80所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?idno：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

108、83.根據(jù)實(shí)施方式79所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述ny-eso1-lamp或cd161-lamp的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

109、84.根據(jù)實(shí)施方式83所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

110、85.根據(jù)實(shí)施方式83或84所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或第228-382位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?idno：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

111、86.根據(jù)實(shí)施方式79-85中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

112、87.根據(jù)實(shí)施方式86所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

113、88.根據(jù)實(shí)施方式79-87中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

114、89.根據(jù)實(shí)施方式88所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

115、90.根據(jù)實(shí)施方式79-89中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

116、91.根據(jù)實(shí)施方式90所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

117、92.根據(jù)實(shí)施方式79-91中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

118、93.根據(jù)實(shí)施方式92所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

119、94.根據(jù)實(shí)施方式79-93中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述lamp-抗原構(gòu)建體包含下述氨基酸序列或由下述氨基酸序列組成：seq?id?no：1的第1-194位殘基或seqid?no：198的氨基酸序列，然后是seq?id?no：223的氨基酸序列，然后是seq?id?no：1的第228-381位殘基或seq?id?no：202的氨基酸序列，或seq?id?no：1的第1-194位殘基或seq?idno：198的氨基酸序列，然后是seq?id?no：236的氨基酸序列，然后是seq?id?no：1的第228-381位殘基或seq?id?no：202的氨基酸序列。

120、95.根據(jù)實(shí)施方式79-94中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

121、96.根據(jù)實(shí)施方式79-95中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽包含spd-scd40l融合多肽或il-15多肽(例如seq?id?no：233或169或225)。

122、97.根據(jù)實(shí)施方式79-96中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

123、98.根據(jù)實(shí)施方式97所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自spd或包含seq?id?no：120或122。

124、99.根據(jù)實(shí)施方式79-98中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

125、100.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式79-99中任一者所述的分離的核酸分子。

126、101.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式79-99中任一者所述的分離的核酸。

127、102.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式101所述的宿主細(xì)胞。

128、103.一種在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括以足以在所述受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式79-99中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式100所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式101所述的宿主細(xì)胞。

129、104.一種分離的核酸分子，其包含：

130、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和抗原結(jié)構(gòu)域的多肽，所述抗原結(jié)構(gòu)域包含pp65抗原(例如包含seq?id?no：291、292或293)，并任選地進(jìn)一步包含gb抗原(例如包含seq?id?no：294、295、296或297)和1e1抗原(例如包含seq?id?no：298、299或300)中的一者或兩者，任選地在所述pp65與所述gb和/或1e1抗原序列之間包含接頭肽(合稱為“pp65-lamp”)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)lamp同源結(jié)構(gòu)域之間；和

131、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

132、105.根據(jù)實(shí)施方式104所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

133、106.根據(jù)實(shí)施方式105所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?idno：1-113中的任一者。

134、107.根據(jù)實(shí)施方式104或105所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?idno：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

135、108.根據(jù)實(shí)施方式105所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述her2-lamp的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

136、109.根據(jù)實(shí)施方式108所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

137、110.根據(jù)實(shí)施方式108或109所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或第228-382位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

138、111.根據(jù)實(shí)施方式104-110中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述pp65-lamp在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

139、112.根據(jù)實(shí)施方式111所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

140、113.根據(jù)實(shí)施方式104-112中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述pp65-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

141、114.根據(jù)實(shí)施方式113所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

142、115.根據(jù)實(shí)施方式104-114中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述pp65-lamp進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

143、116.根據(jù)實(shí)施方式115所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

144、117.根據(jù)實(shí)施方式104-116中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述pp65-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

145、118.根據(jù)實(shí)施方式117所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

146、119.根據(jù)實(shí)施方式104-118中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

147、120.根據(jù)實(shí)施方式104-119中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

148、121.根據(jù)實(shí)施方式120所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自igkviii(例如seq?id?no：122)、ig-κ(例如seq?id?no：120)、四連接素或il-2。

149、122.根據(jù)實(shí)施方式104-121中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽包括spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15(例如包含與seq?id?no：233、238、242或252具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列，或包含與下述氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列：seq?id?no：131的氨基酸序列，然后是seq?id?no：204、151、145、147、149、193、181、155、159、169、252或253之一的氨基酸序列)，或者其中所述核酸包含編碼spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15的核苷酸序列(例如包含與下述序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的核苷酸序列：seq?id?no：132，然后是seq?id?no：205、152、146、148、150、194、182、156、170或881之一)。

150、123.根據(jù)實(shí)施方式122所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

151、124.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式104-123中任一者所述的分離的核酸分子。

152、125.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式104-123中任一者所述的分離的核酸。

153、126.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式125所述的宿主細(xì)胞。

154、127.一種治療患有癌癥的受試者的方法，其中所述方法包括以足以在所述受試者中治療所述癌癥或誘導(dǎo)針對(duì)所述癌癥的免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式104-123中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式124所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式125所述的宿主細(xì)胞。

155、128.根據(jù)實(shí)施方式127所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用至少一種第二治療劑。

156、129.根據(jù)實(shí)施方式127或128所述的方法，其中所述癌癥選自成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸直腸癌和頭頸癌。

157、130.一種分離的核酸分子，其包含：

158、a.第一多核苷酸序列，其編碼包含lamp蛋白的腔內(nèi)結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域和包含大t抗原(例如包含seq?id?no：254、255或256的氨基酸序列)的抗原結(jié)構(gòu)域的多肽(“大t-lamp”)，其中所述抗原結(jié)構(gòu)域被放置在所述兩個(gè)lamp同源結(jié)構(gòu)域之間；和

159、b.第二多肽序列，其編碼至少一種包含免疫應(yīng)答增強(qiáng)基因多肽(ireg)或ireg的包含分泌信號(hào)序列的胞外結(jié)構(gòu)域的第二多肽。

160、131.根據(jù)實(shí)施方式130所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自lamp-1、lamp2、lamp-3、溶酶體整合膜蛋白-2(“l(fā)imp?2”)、macrosailin、endolyn、lamp5或邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白(“l(fā)imbic”)。

161、132.根據(jù)實(shí)施方式131所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白選自seq?idno：1-113中的任一者。

162、133.根據(jù)實(shí)施方式130或131所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白與seq?idno：1-113具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

163、134.根據(jù)實(shí)施方式131所述的分離的核酸分子，其中所述lamp蛋白是lamp-1，并且其中所述her2-lamp的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域包括lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1和lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2。

164、135.根據(jù)實(shí)施方式134所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域1包含seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第29-194位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：198的第29-195位殘基的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：199的核苷酸序列或與seq?id?no：199的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

165、136.根據(jù)實(shí)施方式134或135所述的分離的核酸分子，其中所述人lamp-1同源結(jié)構(gòu)域2包含seq?id?no：1的第228-381位殘基或第228-382位殘基或seq?id?no：1的第228-382位殘基的氨基酸序列，或包含seq?id?no：202的氨基酸序列，或包含與seq?id?no：1的第228-381位殘基的氨基酸序列或seq?id?no：202的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列，或者其中所述核酸分子包含seq?id?no：203的核苷酸序列或與seq?id?no：203的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列(其中如果所述核苷酸序列是rna，則t被u代替)。

166、137.根據(jù)實(shí)施方式130-136中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述大t-lamp在所述兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的至少一者與所述抗原結(jié)構(gòu)域之間包含接頭。

167、138.根據(jù)實(shí)施方式137所述的分離的核酸分子，其中所述接頭包含gpgpg或pmglp的氨基酸序列。

168、139.根據(jù)實(shí)施方式130-138中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述大t-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域。

169、140.根據(jù)實(shí)施方式140所述的分離的核酸分子，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第383-405位殘基。

170、141.根據(jù)實(shí)施方式130-140中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述pp65-lamp進(jìn)一步包含信號(hào)序列。

171、142.根據(jù)實(shí)施方式141所述的分離的核酸分子，其中所述信號(hào)序列源自lamp蛋白。

172、143.根據(jù)實(shí)施方式130-142中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述大t-lamp進(jìn)一步包含lamp蛋白的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

173、144.根據(jù)實(shí)施方式143所述的分離的核酸分子，其中所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno：1的第406-417位殘基。

174、145.根據(jù)實(shí)施方式130-144中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述ireg包含cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33(或包含與seq?id?no：133、145、147、149、151、155、159、165、169、173、177、181、189、191、204、238、242、243、252或253中的任一者的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列)或其胞外結(jié)構(gòu)域中的一者或多者，任選地其中所述cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23或il-15與免疫球蛋白的fc結(jié)構(gòu)域融合，或者其中所述分離的核酸分子包含編碼任選地與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd40l、cd80、ox40、flt3l、gm-csf、il-12、il-21、il-23、il-15、cd70、cd86、il-7、il-18或il-33的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列與seq?id?no：134、146、148、150、152、160、166、170、174、178、182、190、192、205、239、244或881中的任一者的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性。

175、146.根據(jù)實(shí)施方式130-145中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列與所述ireg異源。

176、147.根據(jù)實(shí)施方式146所述的分離的核酸分子，其中所述分泌信號(hào)序列源自igkviii(例如seq?id?no：122)、ig-κ(例如seq?id?no：120)、四連接素或il-2。

177、148.根據(jù)實(shí)施方式130-147中任一者所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽包括spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15(例如包含與seq?id?no：233、238、242或252具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列，或包含與下述氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的氨基酸序列：seq?id?no：131的氨基酸序列，然后是seq?id?no：204、151、145、147、149、193、181、155、159、169、252或253之一的氨基酸序列)，或者其中所述核酸包含編碼spd和可溶性cd40l(scd40l)的融合體、spd和flt3l的融合體、il-12、il-21、與fc結(jié)構(gòu)域融合的ox40l、與fc結(jié)構(gòu)域融合的cd80、或il-15的核苷酸序列(例如包含與下述序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性或100％同一性的核苷酸序列：seq?id?no：132，然后是seq?id?no：205、152、146、148、150、194、182、156、170或881之一)。

178、149.根據(jù)實(shí)施方式148所述的分離的核酸分子，其中所述第二多肽在ef-1α核心啟動(dòng)子例如seq?id?no：124的啟動(dòng)子的控制下表達(dá)。

179、150.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式130-149中任一者所述的分離的核酸分子。

180、151.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)實(shí)施方式130-149中任一者所述的分離的核酸。

181、152.一種組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方式151所述的宿主細(xì)胞。

182、153.一種治療患有癌癥的受試者的方法，其中所述方法包括以足以在所述受試者中治療所述癌癥或誘導(dǎo)針對(duì)所述癌癥的免疫應(yīng)答的量向所述受試者施用根據(jù)實(shí)施方式130-149中任一者所述的分離的核酸分子、根據(jù)實(shí)施方式150所述的組合物或根據(jù)實(shí)施方式151所述的宿主細(xì)胞。

183、154.根據(jù)實(shí)施方式153所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用至少一種第二治療劑。

184、155.根據(jù)實(shí)施方式153或154所述的方法，其中所述癌癥是皮膚癌，例如梅克爾細(xì)胞癌。

185、156.根據(jù)實(shí)施方式1-19、25-46、52-73、79-99、104-123或130-149中任一者所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸包括dna、mrna或自擴(kuò)增rna。

186、157.一組多肽，其由根據(jù)實(shí)施方式1-19、25-46、52-73或79-99、104-123或130-149中任一者所述的分離的核酸編碼。

187、其他目的和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分闡述，并且將部分從所述描述中理解，或者可以通過(guò)實(shí)踐學(xué)會(huì)。所述目的和優(yōu)點(diǎn)將利用在權(quán)利要求書(shū)中特別指出的要素和組合來(lái)實(shí)現(xiàn)和獲得。

188、應(yīng)當(dāng)理解，上面的一般性描述和下面的詳細(xì)描述僅僅是示例性和解釋性的，并不限制權(quán)利要求書(shū)。

189、并入本說(shuō)明書(shū)并構(gòu)成本說(shuō)明書(shū)一部分的附圖說(shuō)明了一個(gè)(幾個(gè))實(shí)施方式，并與所述描述一起用于解釋本文描述的原理。