本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，涉及抗人cd70抗體或其抗原結(jié)合片段及其應(yīng)用，更具體地，涉及抗人cd70抗體或其抗原結(jié)合片段、編碼該抗體的核酸，表達(dá)該抗體的載體和細(xì)胞，制備該抗體的方法，含有該抗體的藥物組合物、以及該抗體在制備藥物中的用途。

背景技術(shù)：

1、納米抗體是目前最小的抗體分子，其分子量是普通抗體的1/10。納米抗體除具備單克隆抗體的抗原反應(yīng)性外，還擁有一些獨(dú)特的功能特性，如分子質(zhì)量小，穩(wěn)定性強(qiáng)、可溶性好、易表達(dá)、靶向性強(qiáng)、人源化簡單等，尤其是適合抗體和car-t/m/nk等療法的開發(fā)。

2、癌癥是目前造成人類死亡率最高的疾病之一。抗癌抗體的最新臨床和商業(yè)成功引起了對基于抗體的療法的極大興趣。由此，治療癌癥的抗癌抗體有待進(jìn)一步研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出抗人cd70抗體及其制備方法和應(yīng)用。

2、研究發(fā)現(xiàn)，cd70-axl信號通路在促進(jìn)腫瘤生長及轉(zhuǎn)移、腫瘤免疫逃逸與藥物耐受中起關(guān)鍵作用，二者的表達(dá)水平及相互作用與患者的臨床不良預(yù)后緊密相關(guān)。同時(shí)在cd70異位和原位同源小鼠腫瘤模型研究中，與野生型小鼠相比，cd70缺陷小鼠的腫瘤生長及轉(zhuǎn)移擴(kuò)散均受到阻礙。因此阻斷該通路已被認(rèn)為是治療癌癥的有效策略。

3、cd70在多種腫瘤中高表達(dá)。如在腎透明細(xì)胞癌呈100％高表達(dá)，肝細(xì)胞癌約30％表達(dá)，在nsclc的表達(dá)率為16.3％，cd70在子宮平滑肌肉瘤中的過表達(dá)率為90％，針對cd70的抗體已經(jīng)在血液腫瘤中取得了療效，盡管有多個(gè)靶向cd70的候選藥物在不同的研究階段(表1)，但迄今為止，尚沒有靶向cd70的藥物批準(zhǔn)在臨床上使用。

4、根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種抗人cd70抗體。據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該抗人cd70抗體包括：

5、至少一個(gè)結(jié)合人cd70的免疫球蛋白單一可變結(jié)構(gòu)域(isvd)，所述isvd具有三個(gè)分別為cdr1、cdr2及cdr3的互補(bǔ)決定區(qū)，其中，所述cdr1具有dx2cma所示的氨基酸序列，所述cdr2具有g(shù)ivx3gx4x5x6x7sgatgptx8x9tx10svkg所示的氨基酸序列，所述cdr3具有dhx11x12x13x14x15ctslatfrx16x1fgy所示的氨基酸序列，其中，x1為d或h；x2為g、a或h；x3為i或h；x4為g或h；x5為g或h；x6為t或h；x7為h或t；x8為y或h；x9為y或h；x10為d或h；x11為w或y；x12為a或h；x13為s或t；x14為t或h；x15為g或s；x16為g或h。

6、根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的抗人cd70抗體能高親和力結(jié)合重組人cd70抗原，阻斷cd70和其受體cd27的結(jié)合，并能通過結(jié)合在細(xì)胞表面的cd70誘導(dǎo)抗原抗體復(fù)合物內(nèi)化，并激活淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。

7、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3具有如下所示的氨基酸序列之一：

8、(1)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：25、22和23所示；

9、(2)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、22和23所示；

10、(3)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、22和35所示；

11、(4)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、22和36所示；

12、(5)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：25、22和38所示；

13、(6)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：25、22和39所示；

14、(7)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：25、22和40所示；

15、(8)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：25、22和41所示；

16、(9)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、22和37所示；

17、(10)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、27和23所示；

18、(11)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、28和23所示；

19、(12)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、29和23所示；

20、(13)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、30和23所示；

21、(14)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、31和23所示；

22、(15)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、32和23所示；

23、(16)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、33和23所示；

24、(17)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：42、34和23所示；

25、(18)所述cdr1、所述cdr2和所述cdr3的氨基酸序列分別如sed?id?no：26、22和23所示。

26、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述至少一個(gè)結(jié)合人cd70的免疫球蛋白isvd為人源化的駱駝科vhh。

27、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該抗體包括至少一個(gè)與選自seq?id?no：3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21所示的氨基酸序列具有80％一致性的vhh。

28、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種融合蛋白。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該融合蛋白包括：第一結(jié)構(gòu)域，所述第一結(jié)構(gòu)域具有前述的抗人cd70抗體；以及第二結(jié)構(gòu)域，所述第二結(jié)構(gòu)域包括用于延長體內(nèi)半衰期和/或?qū)π?yīng)細(xì)胞具有結(jié)合作用的多肽。

29、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第二結(jié)構(gòu)域包括血清白蛋白片段、聚乙二醇片段和結(jié)合hsa的納米抗體中的一種或多種的組合。

30、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種分離的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述核酸編碼前述的抗人cd70抗體或編碼前述的融合蛋白。

31、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種載體。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該載體包括前述的核酸。

32、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種分離的細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該細(xì)胞包括前述的載體。

33、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種制備前述的抗人cd70抗體或其抗原結(jié)合片段的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：

34、(1)在合適的條件下，培養(yǎng)前述的細(xì)胞；以及

35、(2)分離回收前述的抗人cd70抗體。

36、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該藥物組合物包括：前述的抗人cd70抗體或前述的融合蛋白；以及藥學(xué)上可接受的載體。

37、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了前述的抗人cd70抗體或前述的融合蛋白在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥。

38、根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述癌癥血液瘤，腎癌，胰腺癌，咽喉癌。

39、本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。