1.一種蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,包括以下步驟:
將蠟樣芽孢桿菌菌株經(jīng)種子活化和液體種子培養(yǎng)后,采用固體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),得到發(fā)酵產(chǎn)物;
所述固體培養(yǎng)基的組分包括:40~60重量份蘑菇渣、10~30重量份稻殼、15~35重量份麩皮和2~8重量份玉米漿,pH值為6.5~7.5。
2.按照權(quán)利要求1所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,包括以下步驟:
(a)斜面種子活化:將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng)溫度37±1℃,培養(yǎng)時(shí)間36~48h,得到斜面種子;
(b)液體種子培養(yǎng):將步驟(a)得到的斜面種子接種于液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)溫度37±1℃,培養(yǎng)時(shí)間36~48h,得到液體種子;
(c)固體發(fā)酵培養(yǎng):將步驟(b)得到的液體種子接種于固體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)溫度37±1℃,培養(yǎng)時(shí)間48~72h,得到發(fā)酵產(chǎn)物;
(d)將步驟(c)得到的發(fā)酵產(chǎn)物干燥后,得到干燥的發(fā)酵產(chǎn)物。
3.按照權(quán)利要求2所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(a)中營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化鈉和20g/L瓊脂,pH值為7.0~7.2;
優(yōu)選地,步驟(b)中液體培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化鈉,pH值為7.0~7.2。
4.按照權(quán)利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(c)中液體種子的接種量為8~12%(v/w)。
5.按照權(quán)利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(c)中固體培養(yǎng)基為淺盤濕固體培養(yǎng)基,所述淺盤濕固體培養(yǎng)基為將固體培養(yǎng)基的組分放入淺盤內(nèi)加水得到,淺盤濕固體培養(yǎng)基的水含量為55~65%。
6.按照權(quán)利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(d)中干燥具體包括:將步驟(c)得到的發(fā)酵產(chǎn)物烘干至含水率小于20%。
7.按照權(quán)利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,所述營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基均獨(dú)立地在使用前進(jìn)行滅菌處理,滅菌條件為121℃、0.11MPa滅菌20~60min。
8.按照權(quán)利要求2或3所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法,其特征在于,包括以下步驟:
(a)斜面種子活化:將蠟樣芽孢桿菌菌株在無菌條件下接種于經(jīng)121℃、0.11MPa滅菌20min的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng)溫度37℃,培養(yǎng)時(shí)間36~48h,得到斜面種子;
所述營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化鈉和20g/L瓊脂,pH值為7.0~7.2;
(b)液體種子培養(yǎng):挑取步驟(a)得到的斜面種子兩環(huán)接種于1000L液體發(fā)酵罐中的經(jīng)121℃、0.11MPa滅菌30min的液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)溫度37℃,培養(yǎng)時(shí)間36~48h,得到液體種子;
所述液體培養(yǎng)基的組分包括3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨和5g/L氯化鈉,pH值為7.0~7.2;
(c)固體發(fā)酵培養(yǎng):將經(jīng)121℃、0.11MPa滅菌60min的固體培養(yǎng)基的組分放入淺盤內(nèi),加水得到淺盤濕固體培養(yǎng)基,淺盤濕固體培養(yǎng)基水含量60%;將步驟(b)得到的液體種子以10%(v/w)的接種量接種于淺盤濕固體培養(yǎng)基中,攪拌均勻,培養(yǎng)溫度37℃,培養(yǎng)時(shí)間48~72h,得到發(fā)酵產(chǎn)物;
所述固體培養(yǎng)基的組分包括:50重量份蘑菇渣、20重量份稻殼、25重量份麩皮和5重量份玉米漿,pH值為6.5~7.5;
(d)將步驟(c)得到的發(fā)酵產(chǎn)物置于50~80℃條件下烘干,期間取樣測定水分,當(dāng)含水率低于20%時(shí),烘干結(jié)束,得到干燥的發(fā)酵產(chǎn)物。
9.一種蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵產(chǎn)物,其特征在于,按照權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵方法得到。
10.一種按照權(quán)利要求9所述的蠟樣芽孢桿菌固體發(fā)酵產(chǎn)物在制備農(nóng)業(yè)生物防治制劑和防治植物土傳病害中的應(yīng)用。