本發(fā)明涉及一株防治甜瓜根腐病的蠟樣芽孢桿菌及培養(yǎng)方法與應(yīng)用，屬于植物病害生物防治技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

根腐病是甜瓜的常見病，以分苗或定植后緩苗前較為常見，危害嚴(yán)重。其病原菌主要為瓜類腐皮鐮孢菌(Fusariumsolani)，病菌以厚垣孢子、菌絲體或菌核在土壤中及病殘?bào)w上越冬，厚垣孢子可在土壤中存活5-10年。厚垣孢子為引起發(fā)病的主要侵染源，病菌從根部傷口侵入，發(fā)病后在病部產(chǎn)生分生孢子，借雨水或澆水傳播蔓延，進(jìn)行重復(fù)侵染，一旦發(fā)生很難治愈。長(zhǎng)期以來，該病害的田間防治主要依賴化學(xué)殺菌劑，隨著咯菌腈、苯并咪唑類化學(xué)藥劑的大量使用，腐皮鐮孢菌已經(jīng)對(duì)該類殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性，使得防效下降。病原菌的潛伏侵染會(huì)造成甜瓜反復(fù)染病，這些都影響農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)及危害人和動(dòng)物的健康，制約高產(chǎn)高效農(nóng)業(yè)的發(fā)展。隨著人們對(duì)環(huán)境保護(hù)和食品安全越來越重視，研發(fā)更加安全、環(huán)保的根腐病防治新技術(shù)，如生物防治，顯得更加迫切。

蠟樣芽孢桿菌是一種芽孢桿菌，在其自身生長(zhǎng)繁殖過程中可以產(chǎn)生一系列具有抗菌活性的代謝產(chǎn)物，能夠抑制有害微生物的繁殖，抑制鐮刀菌、立枯絲核菌等病原真菌。代謝過程中產(chǎn)生蛋白酶等多種活性酶類，能夠降解土壤中的營養(yǎng)成分，改善生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)作物生長(zhǎng)。蠟樣芽孢桿菌的芽孢具有較強(qiáng)的耐熱、耐鹽等抗逆性，在發(fā)酵工藝、劑型加工、貯存、定殖、繁殖等方面與其他芽孢桿菌相比具有無可比擬優(yōu)勢(shì)。

目前國內(nèi)外對(duì)芽孢桿菌的研究比較多，市場(chǎng)上的芽孢桿菌菌劑有粉劑、顆粒、液體，體菌劑產(chǎn)品大都達(dá)不到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，尤其是國內(nèi)的液體菌劑產(chǎn)品良莠不齊，菌株功能較差甚至根本沒有功效，退化嚴(yán)重或活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期達(dá)不到要求。固體劑型雖然解決了產(chǎn)品貨架期問題，但是固體菌劑的加工工藝使得菌體的多數(shù)代謝產(chǎn)物加工過程中失活或被丟棄，造成了環(huán)境污染和資源浪費(fèi)，且增加了生產(chǎn)成本。

中國專利文獻(xiàn)CN101357857 A(申請(qǐng)?zhí)?00810013122.9)公開了一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖水稻田的生物有機(jī)肥料及其生產(chǎn)方法。肥料包含下列重量份的原料加工制成：?；撬?.3～0.5份，吸水鏈霉菌2～3份，金產(chǎn)色鏈霉菌2～3份，蠟樣芽孢桿菌2～4份，球形芽孢桿菌2～4份，膠凍樣芽孢桿菌9～13份，褐球固氮菌2～3份，細(xì)黃鏈霉菌2～3份，水果廢渣降解物10份，基質(zhì)10份，土壤46.5～57份。

中國專利文獻(xiàn)CN104988098A(申請(qǐng)?zhí)?01510455413.3)公開了一株防治甜菜根腐病并且促進(jìn)甜菜生長(zhǎng)的芽孢桿菌菌株。該發(fā)明所提供的防治甜菜根腐病并且促進(jìn)甜菜生長(zhǎng)的芽孢桿菌菌株是蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)LHTYBA，其在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為CGMCC No.7566。田間實(shí)驗(yàn)證明，蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)LHTYBA對(duì)甜菜根腐病的防治效果可達(dá)86.7％，可使甜菜增產(chǎn)46.00％。但是該發(fā)明所指甜菜根腐病主要是立枯絲核菌和尖刀鐮孢菌，對(duì)瓜類腐皮鐮孢菌沒有防治作用。

因此分離制備對(duì)瓜類腐皮鐮孢菌具有特定生防功能的蠟樣芽孢桿菌菌株并研究其液體菌劑配方工藝，用于研制甜瓜根腐病專用型液體菌劑，快速降低土壤中根腐病原菌數(shù)量。對(duì)于生產(chǎn)高活性、長(zhǎng)貨架期的液體生防菌劑產(chǎn)品，降低菌劑生產(chǎn)成本、資源的高效綜合利用以及有效控制甜瓜根腐病的危害具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一株防治甜瓜根腐病的蠟樣芽孢桿菌及培養(yǎng)方法與應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一株防治甜瓜根腐病的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3，2016年1月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號(hào)CGMCC NO.11962。

上述蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3的培養(yǎng)方法，步驟如下：

(1)將蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3在LB平板培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，制得活化菌株；

(2)將步驟(1)制得的活化菌株轉(zhuǎn)接至LB液體培養(yǎng)基中經(jīng)種子培養(yǎng)，制得種子液；

(3)將步驟(2)制得的種子液按體積比0.5％～3.0％的比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)，制得蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(1)中的LB平板培養(yǎng)基，每升組分如下：

胰蛋白胨8～12g，酵母提取物為4～6g，氯化鈉4～6g，瓊脂粉15～20g，水定容至1000mL，pH值為7.2.

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(1)中的活化培養(yǎng)，溫度為35～38℃，時(shí)間為18～24h。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中的LB液體培養(yǎng)基，每升組分如下：

胰蛋白胨8～12g，酵母提取物為4～6g，氯化鈉4～6g，水定容至1000mL，pH值為7.2。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中種子培養(yǎng)，溫度為32～37℃，時(shí)間為16～24h。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基，每升組分如下：

葡萄糖20～30g，玉米漿干粉11～18g，黃豆粉15～40g，酵母浸膏1～2g，磷酸二氫鉀0.1～0.3g，氯化鈉0.1～0.2g，硫酸鎂0.1～0.2g，水定容至1000mL，pH值為7.3。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)，溫度為32～37℃，搖床轉(zhuǎn)速為170～210rpm，時(shí)間為30～42h。

一種防治甜瓜根腐病的微生物菌劑，組分如下，均為重量百分比：

蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液10～30％，生化黃腐酸鉀3.0～10.0％，甘油5.0～10.0％，硝酸鉀6.0～12.0％，尿素2.0～6.0％，蔗糖1.0～3.5％，海藻酸鈉0.05～0.01％，硼酸0.5～1.5％，半乳糖0.2～1.2％，無菌水余量。

上述防治甜瓜根腐病的微生物菌劑的制備方法，步驟如下：

按比例將蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液與無菌水混合，然后加入生化黃腐酸鉀、甘油、硝酸鉀、尿素、蔗糖、海藻酸鈉、硼酸、半乳糖，混合均勻，即得。

上述防治甜瓜根腐病的微生物菌劑的施用方法，步驟如下：

定苗后12～15天時(shí)開始沖施防治甜瓜根腐病的微生物菌劑，每畝用量3～5L/次，每隔18～22天沖施一次，在初花期至拉秧期施用3～5次，即可。

有益效果

1、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3在低濃度下能夠有效抑制腐皮鐮孢菌的生長(zhǎng)，且殺菌應(yīng)用范圍廣，對(duì)黃瓜根腐病、番茄根腐病等均具有防治效果；

2.本發(fā)明的液體農(nóng)用微生物菌劑用于防治由病原真菌引起的甜瓜根腐病，病原真菌為瓜類腐皮鐮孢菌，該液體農(nóng)用微生物菌劑抗瓜類腐皮鐮孢菌專一性強(qiáng)、功效穩(wěn)定，具有較長(zhǎng)貨架期、高活性菌株、活菌量達(dá)到1×10⁹CFU/ml；

3.本發(fā)明的蠟樣芽孢桿菌生防液體菌劑對(duì)作物具有明顯促生作用，并使甜瓜發(fā)病率和嚴(yán)重度分別下降了69％～73％和91％～95％。

附圖說明

圖1-A為本發(fā)明實(shí)施例1的蠟樣芽孢桿菌NY3的菌落形態(tài)照片；

圖1-B為本發(fā)明實(shí)施例1的蠟樣芽孢桿菌NY3的芽孢形態(tài)照片；

圖1-C為根據(jù)16S rDNA序列獲得的蠟樣芽孢桿菌NY3菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹圖；

圖2-A為本發(fā)明實(shí)施例3的蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)腐皮鐮孢菌的抑菌作用結(jié)果照片；

其中：左圖為對(duì)照，右圖為涂布蠟樣芽孢桿菌NY3；

圖2-B為本發(fā)明中實(shí)施例1的蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)尖刀鐮孢菌的抑制作用結(jié)果照片。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面以具體實(shí)施例來進(jìn)一步清楚地解釋本發(fā)明，但是不以任何方式構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中的百分含量，如無特別說明，均為重量百分含量。

下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。

實(shí)施例1、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus.Frankland)NY3的分離及鑒定

1、蠟樣芽孢桿菌NY3的分離

選擇山東省臨沂市大棚甜瓜根際土壤土壤樣本，使用滅菌采樣鏟采集同一區(qū)域內(nèi)生長(zhǎng)情況良好的甜瓜根際范圍5～25cm深土壤，樣品裝于滅菌袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室后放于4℃冰箱保存。分離時(shí)稱取10g土樣放入裝有無菌水和玻璃珠的三角瓶中，充分震蕩30min，待土樣均勻分散后，靜置10min后，形成濃度為0.1g/ml的菌懸液，對(duì)此菌懸液進(jìn)行稀釋，依次得到濃度為10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6，10^-7g/ml的菌懸液。將各梯度稀釋液分別在80℃水浴加熱20min，分別吸取各梯度稀釋的土壤懸液各0.1ml，涂布于殼聚糖選擇性培養(yǎng)平板上，37℃培養(yǎng)2～4d后，挑取單菌落純化，作物待測(cè)菌株。

蠟樣芽孢桿菌的初篩：制備約2.5×10⁵個(gè)/mL的甜瓜根腐病病菌孢子懸浮液，吸取2ml該孢子懸浮液涂布于PDA固體培養(yǎng)基平板中，預(yù)培養(yǎng)10h，用滅菌牙簽均勻點(diǎn)接待測(cè)菌種于PDA固體培養(yǎng)基，并置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)3d，觀察有無抑菌圈。結(jié)合盆栽試驗(yàn)法進(jìn)行篩選，從中篩選出一個(gè)對(duì)甜瓜根腐病具有明顯防治效果的菌株，定名為NY3。

NY3菌株的分類鑒定：

(1)形態(tài)特征鑒定

在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，培養(yǎng)24h，可形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無色素、稍有光澤的白色菌落(似蠟燭樣顏色)，菌落大，直徑5～7mm表面粗糙，扁平，不規(guī)則。在甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂(M.S.P)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更旺盛，菌落直徑達(dá)8～10mm，質(zhì)地更軟，挑起來呈絲狀，培養(yǎng)時(shí)間稍長(zhǎng)，菌落表面呈毛玻璃狀，并產(chǎn)生紅色色素如圖1-A。另取培養(yǎng)24h后的菌落，適當(dāng)稀釋后涂布于載玻片，革蘭氏染色，置于顯微鏡下觀察。革蘭氏染色顯陽性，產(chǎn)生芽孢，芽孢呈橢圓形，位于菌體中部，無莢膜，菌體細(xì)胞桿狀，末端方，成鏈狀，如圖1-B。

(2)分子鑒定

PCR擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3的16S rDNA，引物核苷酸序列如下：

27F：5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3’；

1429R：5’GGTTACCTTGTTACGACTT 3’；

蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，全長(zhǎng)為1449bp。

蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3，2016年01月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號(hào)CGMCC NO.11962。

實(shí)施例2、NY3菌種的擴(kuò)繁

上述蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3的培養(yǎng)方法，步驟如下：

(1)將蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3在LB平板培養(yǎng)基上，溫度為37℃活化培養(yǎng)20h，制得活化菌株；

所述LB平板培養(yǎng)基，每升組分如下：

胰蛋白胨10g，酵母提取物為5g，氯化鈉5g，瓊脂粉18g，水定容至1000mL，pH值為7.2；

(2)將步驟(1)制得的活化菌株轉(zhuǎn)接至LB液體培養(yǎng)基中，溫度為37℃、搖床轉(zhuǎn)速200rpm的條件下種子培養(yǎng)18h，制得種子液；

所述LB液體培養(yǎng)基，每升組分如下：

胰蛋白胨10g，酵母提取物為5g，氯化鈉5g，水定容至1000mL，pH值為7.2；

(3)將步驟(2)制得的種子液按體積比1.0％的比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，溫度為37℃、搖床轉(zhuǎn)速為200rpm發(fā)酵培養(yǎng)32h，制得蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基，每升組分如下：

葡萄糖2.0～3.0g，玉米漿干粉1.1～1.8g，黃豆粉1.5～4.0g，酵母浸膏0.1～0.2g，磷酸二氫鉀0.01～0.03g，氯化鈉0.01～0.02g，硫酸鎂0.01～0.02g，水定容至1000mL，pH值為7.3；

經(jīng)鏡檢，計(jì)算芽孢率：芽孢率(％)＝成熟芽孢數(shù)/(成熟芽孢數(shù)+菌體數(shù))×100％；

制得的蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液芽孢率達(dá)到90％以上。

實(shí)施例3、NY3菌株對(duì)甜瓜根腐病菌絲的抑制作用

1、在PDA培養(yǎng)基平板中央接種甜瓜根腐病菌菌塊，在28℃預(yù)培養(yǎng)1d后，在平板中央和距離中央2cm處接種蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)NY3菌株，在28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d，觀察抑菌帶，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。測(cè)量抑菌帶平均寬度達(dá)16mm。

2、取500μL濃度為1.0×10⁷cfu/ml的甜瓜根腐病菌孢子懸浮液，分裝至1.5ml離心管中，再往離心管中加入50μL實(shí)施例2制備的蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液，對(duì)照組加入等量無菌水，分別與甜瓜枯萎病菌孢子懸浮液混勻后置28℃恒溫培養(yǎng)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，統(tǒng)計(jì)蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液在24h和36h對(duì)甜瓜根腐病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率。

抑制率＝(對(duì)照萌發(fā)率-實(shí)驗(yàn)萌發(fā)率)×100％/對(duì)照萌發(fā)率

結(jié)果表明在24h時(shí)，蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液對(duì)甜瓜根腐病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率是82.27％，在36h時(shí)，蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液對(duì)甜瓜根腐病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率是89.21％。

實(shí)施例4、防治甜瓜根腐病的微生物菌劑的制備

防治甜瓜根腐病的微生物菌劑按照如下步驟制備：

(1)將實(shí)施例2制得的蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液進(jìn)行芽孢計(jì)數(shù)，得到發(fā)酵液芽孢數(shù)為50×10⁹CFU/ml，用無菌水稀釋蠟樣芽孢桿菌NY3發(fā)酵液，制得1×10⁹CFU/ml的稀釋后菌液；

(2)用步驟(1)制得的1×10⁹CFU/ml的稀釋后菌液，分別按照重量百分比添加保護(hù)劑：生化黃腐酸鉀8％，海藻酸鈉0.05％，甘油10.0％，蔗糖2.5％，半乳糖0.6％，硝酸鉀8.0％，尿素4.0％，硼酸0.9％，充分溶解，混合均勻，即得到防治甜瓜根腐病的微生物菌劑；

防治甜瓜根腐病的微生物菌劑菌種存活率測(cè)定：將步驟(2)得到的NY3液體菌劑分裝至50ml離心管中，室溫存放；前三個(gè)月每隔15d取樣測(cè)定一次活菌數(shù)，之后每隔30d取樣測(cè)定一次，統(tǒng)計(jì)NY3菌株在菌劑中的存活率；

防治甜瓜根腐病的微生物菌劑中蠟樣芽孢桿菌活菌數(shù)的測(cè)定：制劑中初始的活菌數(shù)通過系列稀釋涂板確定，使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；

制備的防治甜瓜根腐病的微生物菌劑，在整個(gè)測(cè)定周期內(nèi)，蠟樣芽孢桿菌在前1個(gè)月內(nèi)活菌數(shù)較初始呈增加趨勢(shì)，其中放置15d時(shí)活菌較初始增加最多，因蠟樣芽孢桿菌中的部分營養(yǎng)體依舊具有繁殖能力，之后逐步開始衰退，在120d時(shí)仍能保持94％以上的存活率；隨著放置時(shí)間的增加，蠟樣芽孢桿菌NY3的存活率逐漸降低，在放置12個(gè)月時(shí)，蠟樣芽孢桿菌的存活率降至86％。

實(shí)施例5、防治甜瓜根腐病的微生物菌劑的使用方法

防治甜瓜根腐病的微生物菌劑的使用方法為：

選擇寄主對(duì)病原菌比較明顯的定植初期、花期和幼果期，開始使用上述防治甜瓜根腐病的微生物菌劑，先沖施，改善土壤環(huán)境，抑制有害菌群的繁殖，占領(lǐng)生存空間。

從定植后7天開始灌根，每20d沖施一次可以有效減少甜瓜根腐病的發(fā)生率，在定植后至采收期施用4次防治甜瓜根腐病，發(fā)病率和嚴(yán)重度分別下降了69％～78％和91％～96％，另外，可將該液體復(fù)合生防菌劑與稀釋后液體肥、水溶肥配合沖施，提高作物對(duì)養(yǎng)分的利用及抗病效果。

實(shí)施例6、蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)甜瓜根腐病防治效果的對(duì)比試驗(yàn)

(一)試驗(yàn)處理：

(1)微生物菌劑：實(shí)施例4制備的防治甜瓜根腐病的微生物菌劑；用水稀釋100倍。

(2)化學(xué)藥劑：50％多菌靈可濕性粉劑(江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司)；用水稀釋500倍。

(3)空白對(duì)照：清水。

(二)試驗(yàn)方法：本試驗(yàn)在國家緩控釋肥工程技術(shù)研究中心生防菌劑實(shí)驗(yàn)室及智能玻璃溫室內(nèi)進(jìn)行。在50孔育苗盤中育甜瓜苗(新豐甜一號(hào)甜瓜，安徽省豐樂農(nóng)科院選育)，長(zhǎng)出2片復(fù)葉時(shí)移栽到直徑20厘米的花盆中，每盆1棵苗，移栽的同時(shí)接種病原菌菌塊。共設(shè)3個(gè)處理，每個(gè)處理10個(gè)重復(fù)，待植株生長(zhǎng)至5～6片復(fù)葉時(shí)，選擇1個(gè)處理用實(shí)施例4所得的防治甜瓜根腐病的微生物菌劑，用水稀釋后(懸浮液含菌體10⁷cfu/ml)的蠟樣芽孢桿菌進(jìn)行灌根，使菌劑充分到達(dá)根部。同時(shí)以未用菌劑的清水、多菌靈為對(duì)照處理，整個(gè)生長(zhǎng)期內(nèi)沖施2次。待空白對(duì)照充分發(fā)病后調(diào)查根腐病發(fā)病情況，計(jì)算防治效果。計(jì)算發(fā)病率和防效，結(jié)果如表1。

發(fā)病率＝發(fā)病株數(shù)/處理總株數(shù)×100％。

防治效果＝(對(duì)照發(fā)病率-實(shí)驗(yàn)發(fā)病率)/對(duì)照發(fā)病率×100％

表1蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)甜瓜根腐病防效的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果(見表1)盆栽接種結(jié)果表明，本發(fā)明蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)甜瓜根腐病防效為60.7％，化學(xué)藥劑的防效為64.47％，NY3對(duì)甜瓜根腐病的防治與化學(xué)藥劑接近，說明防治甜瓜根腐病的微生物菌劑對(duì)甜瓜根腐病具有很好的防治效果。

實(shí)施例7、蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)甜瓜根腐病防治效果的對(duì)比實(shí)驗(yàn)

(一)試驗(yàn)處理：

(1)微生物菌劑：實(shí)施例4制備的防治甜瓜根腐病的微生物菌劑；用水稀釋100倍。

(2)化學(xué)藥劑：50％多菌靈可濕性粉劑(江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司)；用水稀釋500倍。

(3)空白對(duì)照：清水。

(二)試驗(yàn)方法：2015年2-5月在山東省臨沂市臨沭縣金正大產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)示范園大棚內(nèi)進(jìn)行。開始試驗(yàn)時(shí)整個(gè)大棚甜瓜為第二茬種植，甜瓜根腐病為中度發(fā)生，土壤為常規(guī)施肥。每小區(qū)四行，四次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。移栽后7天對(duì)甜瓜進(jìn)行灌根處理，之后每20天沖施1次，處理組為實(shí)施例四所制備的蠟樣芽孢桿菌NY3液體菌劑(用水稀釋100倍，含活菌數(shù)10⁷cfu/ml)；另設(shè)對(duì)照藥劑和空白對(duì)照。藥劑處理施用方式同菌劑處理，整個(gè)生長(zhǎng)期施用4次。開花前調(diào)查各個(gè)處理小區(qū)的發(fā)病植株數(shù)量，并計(jì)算防效。

結(jié)果(見表2)防治甜瓜根腐病的微生物菌劑處理后，其甜瓜根腐病的發(fā)病植株數(shù)顯著低于空白對(duì)照，略高于化學(xué)藥劑對(duì)照，其防效達(dá)到75.81％，說明防治甜瓜根腐病的微生物菌劑對(duì)甜瓜根腐病有很好的防治效果。

表2蠟樣芽孢桿菌NY3對(duì)甜瓜根腐病防效的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。