一種含蠟樣芽孢桿菌的微生物有機(jī)肥料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明具體涉及一種含蠟樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，包含蠟樣芽孢桿菌菌液1％～5％、煙渣35％～40％、泥碳35％～45％、油枯8％～10％、花渣9％～12％，將以上原料經(jīng)混合均勻后，加入總體積10％的水，堆捂發(fā)酵。每隔5天進(jìn)行一次翻堆，發(fā)酵40天后，制得該生物有機(jī)肥料，該菌肥有效活性菌(蠟樣芽孢桿菌)≥0.5億/g(cfu)。將該生物有機(jī)肥作為底肥施用，同時(shí)將蠟樣芽孢桿菌發(fā)酵菌液按照5000倍稀釋，移栽后澆灌煙株根部或者噴施于頁(yè)面，能夠有效防控?zé)煵莺诿劜?，減少化學(xué)藥劑使用造成的環(huán)境污染。
【專利說(shuō)明】一種含蠟樣芽孢桿菌的微生物有機(jī)肥料

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，具體 地說(shuō)就是將蠟樣芽孢桿菌生產(chǎn)的微生物菌肥結(jié)合該菌發(fā)酵液共同聯(lián)合抑制煙草黑脛病的 發(fā)生。

【背景技術(shù)】
[0002] 煙草黑胚?。≒hytophthora parasitica var. nicotiane)是煙草的毀滅性病害， 同時(shí)也是世界煙草生產(chǎn)中危害最嚴(yán)重的病害之一，該病在我國(guó)各產(chǎn)煙省均有不同程度的發(fā) 生，且危害較為普遍和嚴(yán)重。近年來(lái)由于連作煙田面積擴(kuò)大以及連作年限的增長(zhǎng)，不少地方 煙草黑脛病有加重流行的趨勢(shì)。多年來(lái)人們?yōu)榱藴p輕該病造成的損失，曾試用農(nóng)業(yè)防治、化 學(xué)防治、抗病育種等多種方法控制煙草黑脛病，但由于該病菌的游動(dòng)孢子形成速度快且數(shù) 量大，侵染煙株后潛育期短、發(fā)病快，在一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)可以發(fā)生多次再侵染，同時(shí)該病有時(shí) 還與其它病害混合發(fā)生，從而導(dǎo)致一些抗黑脛病品種抗性的喪失；而且，抗病品種的大面積 連年連片單一種植，布局不合理，易使優(yōu)良品種的抗性喪失，縮短抗病品種的使用年限，而 且一旦病害流行則難以控制。目前，生產(chǎn)上用來(lái)防治煙草黑脛病的化學(xué)藥劑多為苯基酰胺 類及乙磷鋁等同一種或作用機(jī)制相同的幾種內(nèi)吸性殺菌劑，很容易產(chǎn)生耐藥性，從而引起 藥效下降，藥劑用量增加。煙草是葉用經(jīng)濟(jì)作物，對(duì)煙葉的外觀和內(nèi)在質(zhì)量有特殊的要求， 農(nóng)藥殘留、病原菌耐藥性以及對(duì)卷煙衛(wèi)生的影響大大限制了農(nóng)藥的大規(guī)模利用。在煙草及 煙草制品逐漸向無(wú)公害方向發(fā)展的趨勢(shì)下，生物防治作為一種安全、有效的方法而越來(lái)越 受到重視。
[0003] 煙草黑胚病菌的拮抗細(xì)菌有假單胞桿菌（Pseudomonas spp.)和芽孢桿菌 (Ba-cillus spp.)，它主要通過(guò)產(chǎn)生抗菌素而使煙草黑脛病菌菌絲溶解；通過(guò)在田間土壤 中加入拮抗細(xì)菌發(fā)現(xiàn)能顯著降低煙草黑脛病菌的侵染機(jī)會(huì)，從而減少發(fā)病率。目前采用的 主要方法就是將拮抗菌制成濃縮液體制劑、純孢子粉劑或者復(fù)合固體粉劑，然后在煙苗移 栽前施用。這些方法較為單一，由于生防菌株受到復(fù)雜土壤生態(tài)因子的影響，生防菌劑防 效的穩(wěn)定性得不到保證，防效不明顯。而本項(xiàng)專利所采用的是"聯(lián)合用藥"的方法，先通過(guò) 底肥施用，后在通過(guò)多次噴施使生防菌能夠在土壤中定植并最終形成優(yōu)勢(shì)菌群，從而對(duì)煙 草黑脛病起到較好的防效。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有采用單一拮抗菌劑（液）防治煙草黑脛病技術(shù)的不 足。旨在提供一種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，將該抗菌肥與拮抗菌劑聯(lián)合防控病害 的新技術(shù)，通過(guò)聯(lián)合作用能夠提高拮抗菌在土壤中的定植能力，有效提高其對(duì)該病害的抗 性。對(duì)改善煙田微環(huán)境，促進(jìn)生物防治技術(shù)的發(fā)展具有重要意義。
[0005] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，以質(zhì)量百分比計(jì)，包含蠟樣芽孢桿菌菌液 1 %?5%、煙渣35%?40%、泥碳35%?45%、油枯8%?10%、花渣9%?12%，優(yōu)選為 蠟樣芽孢桿菌菌液1 %、煙渣40%、泥碳40%、油枯10%、花渣9%。
[0007] 所述的蠟樣芽孢桿菌采用液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，該培養(yǎng)基成分為：葡萄糖 2. Og/L ?2. 8g/L、麥芽提取物 2. Og/L ?2. 5g/L、蛋白胨 1. Og/L ?1. 2g/L、NaCll. Omg/L ? 1. 5mg/L、（NH4)2S041. Omg/L ?1. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. lmg/L ?0· 5mg/L、ZnS04 · 7Η200· lmg/ L ?0· 5mg/L、FeCl3 · 6Η200· Olmg/L ?0· 05mg/L、ρΗ6· 5 ?7. 2。優(yōu)選的，培養(yǎng)基成分為： 葡萄糖 2. 0g/L、麥芽提取物 2. 0g/L、蛋白胨 1. 0g/L、NaCll. 2mg/L、（NH4)2S041. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、H201000ml。
[0008] 所述的液體培養(yǎng)基通過(guò)以下方法制備：分別稱取上述組分并溶于1L蒸餾水中， 待溶解后用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH至6. 8,將上述溶液裝于三角瓶中放在滅菌鍋中于121°C滅菌20 分鐘，待培養(yǎng)基冷卻后用接種環(huán)沾取lml蠟樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到該培養(yǎng)基中，于37°C搖床 lOOrprn振蕩培養(yǎng)48hr。
[0009] 所述的葡萄糖還可以為蔗糖；
[0010] 所述的蛋白胨還可以為玉米漿或者胰蛋白胨替代。
[0011] 所述的蠟樣芽孢桿菌在LB固體培養(yǎng)基上菌落突起，邊緣光滑細(xì)膩，呈乳白色，直 徑 1. 1mm ?1. 8mm η
[0012] 所述的微生物有機(jī)肥料通過(guò)以下方法制備：將蠟樣芽孢桿菌菌液分別與泥碳、油 枯、花渣以及碳氨水均勻混合，加入總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，每隔5天進(jìn)行一次翻堆， 發(fā)酵40天后，制得該生物有機(jī)肥料。
[0013] 所述的微生物有機(jī)肥料用于聯(lián)合抑制煙草黑脛病的用途，其使用方法為：首先將 該生物有機(jī)肥作為底肥施用，每塘施用80g?100g，每畝施用90kg?110kg。同時(shí)將錯(cuò)樣芽 孢桿菌發(fā)酵菌液按照4000?5500倍稀釋，移栽后澆灌煙株根部，每畝用量為9kg?12kg。 在煙株生長(zhǎng)幼苗期，比較稀疏時(shí)采用澆灌，待煙株生長(zhǎng)后期，煙葉茂密時(shí)采用噴灌。使用噴 灌系統(tǒng)噴施在煙株葉面上，葉部以及根部每次噴施均要浸透，每15天噴施1次，每個(gè)月噴施 2次。
[0014] 本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明微生物有機(jī)肥料對(duì)于煙草的促生長(zhǎng)作用有著積極的意 義，同時(shí)結(jié)合該生物菌的菌液聯(lián)合施用可有效防止煙草黑脛病，達(dá)到不施用化學(xué)農(nóng)藥且能 有效抑制煙草黑脛病的發(fā)生或者降低危害程度，本項(xiàng)技術(shù)符合當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)向綠色、環(huán)保 和可持續(xù)發(fā)展轉(zhuǎn)變的要求，并且對(duì)提高煙草及煙草制品的安全性、減少吸煙對(duì)健康帶來(lái)的 危害方面也具有重要的意義。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù) 本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，均落在本發(fā)明的 保護(hù)范圍內(nèi)。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 一種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，由蠟樣芽孢桿菌菌液1kg、煙渣35kg、泥碳 45kg、油枯8kg、花漁9kg組成。
[0018] 該生物有機(jī)肥料通過(guò)以下方法制備：
[0019] 1)分別稱取葡萄糖2.0g/L、麥芽提取物2.0g/L、蛋白胨1.2g/L、NaC11.0mg/L、 (NH4) 2S041. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. 3mg/L、ZnS04 · 7Η200· 5mg/L、FeCl3 · 6Η200· 01mg/L、pH6. 9 ;
[0020] 2)將上述組分并溶于1L蒸餾水中，待溶解后用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH至6. 8 ;
[0021] 3)將上述溶液裝于三角瓶中放在滅菌鍋中于121°C滅菌20分鐘，待培養(yǎng)基冷卻后 用接種環(huán)沾取lml蠟樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到該培養(yǎng)基中，于37°C搖床lOOrpm振蕩培養(yǎng)48hr。
[0022] 4)將制備的蠟樣芽孢桿菌菌液分別與泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均勻混合，加入 總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，每隔5天進(jìn)行一次翻堆，發(fā)酵40天后，制得該生物有機(jī)肥料， 該菌肥有效活性菌（蠟樣芽孢桿菌）>〇. 5億/g(cfu)。
[0023] 實(shí)施例2
[0024] -種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，由蠟樣芽孢桿菌菌液4kg、煙渣39kg、泥碳 35kg、油枯10kg、花漁12kg組成。
[0025] 該生物有機(jī)肥料通過(guò)以下方法制備：
[0026] 1)分別稱取葡萄糖2. 3g/L、麥芽提取物2. 4g/L、蛋白胨1. Og/L、NaCll. 3mg/L、 (NH4)2S041. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· lmg/L、FeCl3 · 6Η200· 03mg/L、ρΗ7· 0、 H201000ml ；
[0027] 2)將上述組分并溶于1L蒸餾水中，待溶解后用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH至6. 8 ;
[0028] 3)將上述溶液裝于三角瓶中放在滅菌鍋中于121°C滅菌20分鐘，待培養(yǎng)基冷卻后 用接種環(huán)沾取lml蠟樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到該培養(yǎng)基中，于37°C搖床lOOrpm振蕩培養(yǎng)48hr。
[0029] 4)將制備的蠟樣芽孢桿菌菌液分別與泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均勻混合，加入 總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，每隔5天進(jìn)行一次翻堆，發(fā)酵40天后，制得該生物有機(jī)肥料， 該菌肥有效活性菌（蠟樣芽孢桿菌）>〇. 5億/g(cfu)。
[0030] 實(shí)施例3
[0031] 一種含蠟樣芽孢桿菌的生物有機(jī)肥料，由蠟樣芽孢桿菌菌液1kg、煙渣40kg、泥碳 40kg、油枯10kg、花漁9kg組成。
[0032] 該生物有機(jī)肥料通過(guò)以下方法制備：
[0033] 1)分別稱取葡萄糖2. 0g/L、麥芽提取物2. 0g/L、蛋白胨1. 0g/L、NaCll. 2mg/L、 (NH4)2S041. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、 H201000ml ；
[0034] 2)將上述組分并溶于1L蒸餾水中，待溶解后用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH至6. 8 ;
[0035] 3)將上述溶液裝于三角瓶中放在滅菌鍋中于121°C滅菌20分鐘，待培養(yǎng)基冷卻后 用接種環(huán)沾取lml蠟樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到該培養(yǎng)基中，于37°C搖床lOOrpm振蕩培養(yǎng)48hr。
[0036] 4)將制備的蠟樣芽孢桿菌菌液分別與泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均勻混合，加入 總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，每隔5天進(jìn)行一次翻堆，發(fā)酵40天后，制得該生物有機(jī)肥料， 該菌肥有效活性菌（蠟樣芽孢桿菌）>〇. 5億/g(cfu)。
[0037] 實(shí)施例4微生物有機(jī)肥進(jìn)行檢測(cè)和鑒定
[0038] 按照實(shí)施例3配方制備生物肥，在同等條件下將含蠟樣芽孢桿菌生物肥于傳統(tǒng)型 的有機(jī)肥進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩種肥料各組分的含量以及活性。
[0039] 表1含蠟樣芽孢桿菌生物肥和傳統(tǒng)有機(jī)肥檢測(cè)數(shù)據(jù)
[0040]

【權(quán)利要求】
1. 一種含蠟樣芽孢桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：以質(zhì)量百分比計(jì)，包含蠟樣 芽孢桿菌菌液1 %?5%、煙渣35%?40%、泥碳35%?45%、油枯8%?10%、花渣9%? 12%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含蠟樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：以質(zhì) 量百分比計(jì)，包含蠟樣芽孢桿菌菌液1 %、煙渣40 %、泥碳40 %、油枯10 %、花渣9 %。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含蠟樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：所 述的蠟樣芽孢桿菌采用液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，該培養(yǎng)基成分如下：葡萄糖2. Og/L? 2. 8g/L、麥芽提取物 2. Og/L ?2. 5g/L、蛋白胨 1. Og/L ?1. 2g/L、NaCll. Omg/L ?1. 5mg/L、 (NH4)2S041. Omg/L ?1. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. lmg/L ?0· 5mg/L、ZnS04 ·7Η200· lmg/L ?0· 5mg/ L、FeCl3 · 6Η200· Olmg/L ?0· 05mg/L、ρΗ6· 5 ?7· 2。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種含蠟樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于： 所述的培養(yǎng)基包含葡萄糖2.(^/1、麥芽提取物2.(^/1、蛋白胨1.(^/1、似(：11.21^/1、 (NH4) 2S041. 5mg/L、無(wú)水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、 H201000ml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含錯(cuò)樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：該微 生物有機(jī)肥通過(guò)以下方法制備：將蠟樣芽孢桿菌菌液分別與泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均 勻混合，加入總體積10%的水后進(jìn)行堆捂，每隔5天進(jìn)行一次翻堆，發(fā)酵40天后，制得該生 物有機(jī)肥料。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含蠟樣芽胞桿菌的微生物有機(jī)肥料，其特征在于： 所述的微生物有機(jī)肥料用于聯(lián)合抑制煙草黑脛病的用途。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK104230563SQ201410460497
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月11日
【發(fā)明者】徐潔, 王紹坤, 周曉罡, 王耀進(jìn), 王超, 楊應(yīng)明, 羅華元, 朱海濱, 姚春馨, 丁玉梅, 陶南, 戴畢 申請(qǐng)人:紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司, 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所, 云南千州生物有機(jī)肥有限公司