本發(fā)明涉及一種雙氫青蒿素二倍體衍生物、其藥物組合物及其在藥學(xué)中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

寄生蟲(chóng)病是寄生蟲(chóng)侵入人體而引起的疾病。因蟲(chóng)種和寄生部位不同，引起的病理變化和臨床表現(xiàn)各異。本類(lèi)疾病分布廣泛，世界各地均可見(jiàn)到，以貧窮落后、衛(wèi)生條件差的地區(qū)多見(jiàn)，熱帶和亞熱帶地區(qū)更多，感染的人群主要是接觸疫源較多的勞動(dòng)人民及免疫力較低的兒童。

瘧疾是熱帶地區(qū)最重要的寄生蟲(chóng)疾病，也是瘧原蟲(chóng)寄生于人體所引起的一種傳染病?；颊呓?jīng)瘧蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲(chóng)者的血液而感染，不同的瘧原蟲(chóng)分別引起間日瘧、三日瘧、惡性瘧及卵圓瘧。瘧疾主要表現(xiàn)為周期性規(guī)律發(fā)作，全身發(fā)冷、發(fā)熱、多汗、長(zhǎng)期多次發(fā)作后，可引起貧血和脾腫大。在嚴(yán)重的病例中會(huì)引起黃疸、癲癇發(fā)作、昏迷或死亡。

瘧疾流行于102個(gè)國(guó)家和地區(qū)，據(jù)世界衛(wèi)生組織(who)估計(jì)，有二十億人口居住在流行區(qū)。熱帶及亞熱帶地區(qū)，位于赤道周?chē)膶挻髱顓^(qū)域，特別是在非洲、東南亞和中、南美洲的一些國(guó)家，惡性瘧死亡率極高，以非洲疫情最甚，那里的任何居民從出生到死亡，每年感染這種疾病多次。據(jù)who統(tǒng)計(jì)，2013年全世界的瘧疾病例共有1.98億例，造成約800,000人死亡，90％發(fā)生在非洲。

奎寧最早用于治療瘧疾，氯喹也是非常有效的抗瘧疾藥物。20世紀(jì)中期以后出現(xiàn)了一些新的藥物，中國(guó)科學(xué)家研制的青蒿素、雙氫青蒿素等有很好的抗瘧疾效果，但是青蒿素、雙氫青蒿素、青蒿琥酯的水溶性均非常差。

目前瘧疾逐漸對(duì)于幾種藥物發(fā)展出抗藥性，例如：具有氯喹抗藥性的惡性瘧已經(jīng)遍及世界各地。對(duì)兩種藥物磺胺多辛/乙胺嘧啶聯(lián)合使用的抗藥性在南亞和南美用氯喹難治的地帶也已經(jīng)擴(kuò)散。另外，青蒿素的抗藥性問(wèn)題在部分東南亞地區(qū)日益嚴(yán)重。近年來(lái)，柬埔寨西部和北部地區(qū)、泰國(guó)、越南和緬甸東部地區(qū)，瘧原蟲(chóng)已普遍發(fā)展出對(duì)最有效的抗瘧藥物青蒿素的抗藥性；在緬甸中部地區(qū)、老撾南部地區(qū)和柬埔寨東北部地區(qū)，瘧原蟲(chóng)也開(kāi)始出現(xiàn)對(duì)青蒿素的抗藥性?，F(xiàn)今出現(xiàn)的對(duì)現(xiàn)有多種抗瘧疾藥物的抗藥性是非常可怕的。瘧疾的建議治療是并用青蒿素及另一種抗瘧疾藥物，包括甲氟喹、苯芴醇或磺胺多辛/乙胺嘧啶。因此，有必要發(fā)明一種有效的抗瘧疾藥物，克服抗藥性，提高水溶性，提高藥效。

自身免疫性疾病是機(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)而導(dǎo)致自身組織損害所引起的疾病。主要有慢性淋巴性甲狀腺炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、胰島素依賴型糖尿病、重癥肌無(wú)力、慢性潰瘍性結(jié)腸炎、惡性貧血伴慢性萎縮性胃炎、肺出血腎炎綜合征、尋常天皰瘡、類(lèi)天皰瘡、原發(fā)性膽汁性肝硬變、多發(fā)性腦脊髓硬化癥、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎等。還有系統(tǒng)性自身免疫病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、口眼干燥綜合征、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、硬皮病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、wegener肉芽腫病等。

自身免疫性疾病是免疫系統(tǒng)先天發(fā)育不全或后天受損導(dǎo)致的免疫功能降低或缺失所引起的。原發(fā)性免疫缺陷病是由于遺傳因素或先天因素使免疫系統(tǒng)在發(fā)育過(guò)程中受損導(dǎo)致的免疫缺陷病。原發(fā)性免疫缺陷病包括b細(xì)胞缺陷病、t細(xì)胞缺陷病、t和b細(xì)胞聯(lián)合缺陷性疾病、吞噬細(xì)胞缺陷病以及補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷病。繼發(fā)性免疫缺陷病，系后天諸因素造成的免疫系統(tǒng)功能障礙所引起免疫缺陷病?？梢岳^發(fā)于腫瘤、免疫抑制劑的使用或感染性疾病等。大部分自身免疫性疾病沒(méi)有很好的治療藥物。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種涉及許多系統(tǒng)和臟器的自身免疫性疾病，由于細(xì)胞和體液免疫功能障礙，產(chǎn)生多種自身抗體?？衫奂捌つw、漿膜、關(guān)節(jié)、腎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，并以自身免疫為特征，患者體內(nèi)存在多種自身抗體，不僅影響體液免疫，亦影響細(xì)胞免疫，補(bǔ)體系統(tǒng)亦有變化。發(fā)病機(jī)理主要是由于免疫復(fù)合物形成。確切病因不明。病情呈反復(fù)發(fā)作與緩解交替過(guò)程。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎也是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性自身免疫性疾病。其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對(duì)稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類(lèi)風(fēng)濕因子陽(yáng)性，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失。這種炎癥會(huì)造成關(guān)節(jié)變形直至殘廢，并會(huì)因關(guān)節(jié)痛楚及磨損而失去部份的活動(dòng)能力。這種病癥亦會(huì)有系統(tǒng)地影響其他關(guān)節(jié)外的組織，包括皮膚、血管、心臟、肺部及肌肉等。

前人的研究工作中發(fā)現(xiàn)，青蒿素對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等有一定療效，但效果不是很理想。因此，有必要發(fā)明一種更有效的抗自身免疫性疾病的藥物，提高藥效。

青蒿素二倍體是將兩個(gè)分子的青蒿素通過(guò)連接基團(tuán)結(jié)合在一起，可以一定提高抗瘧疾藥效。但是至今沒(méi)有青蒿素二倍體兩親性分子的報(bào)道，也沒(méi)有將青蒿素二倍體兩親性分子組裝成納米粒子的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

技術(shù)問(wèn)題：本發(fā)明提供一種過(guò)氧化物水溶性優(yōu)異，具有自組裝和共組裝能力，提高藥物包裹的效率，低毒性，易于被細(xì)胞吞噬，且具有靶向作用的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物，能夠發(fā)揮治療或預(yù)防寄生蟲(chóng)病、自身免疫性疾病、白血病、腫瘤的作用。本發(fā)明同時(shí)提供一種該雙氫青蒿素二倍體衍生物的藥物組合物及其在抗寄生蟲(chóng)病藥物、自身免疫性疾病藥物、白血病藥物和抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)方案：本發(fā)明的一種雙氫青蒿素二倍體衍生物，是具有下列通式(1)的化合物或所述通式(1)的化合物在藥學(xué)上可接受的鹽：

式(1)中，雙氫青蒿素的羥基與l的羰基相連，l是具有如下結(jié)構(gòu)的取代基：

其中，x是如下基團(tuán)：

ch2、ch2-ch2、ch2-ch2-ch2、ch2-ch2-ch2-ch2、ch2-s-s-ch2、ch2-ch2-s-s-ch2-ch2、ch2-o-ch2、o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ss-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、nh-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、o-ch2-ch2-s-s-ch2-ch2-o或nh-ch2-ch2-s-s-ch2-ch2-nh；

式(1)中，y與l的側(cè)基相連，y是具有如下結(jié)構(gòu)的取代基：

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物，上述通式(1)的化合物由二個(gè)雙氫青蒿素分子通過(guò)含有陽(yáng)離子、陰離子或同時(shí)含有陽(yáng)離子和陰離子的連接體通過(guò)化學(xué)鍵連接而成。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物的藥物組合物，包括雙氫青蒿素二倍體衍生物或所述的雙氫青蒿素二倍體衍生物與藥效學(xué)上可接受的載體，或所述的雙氫青蒿素二倍體衍生物與增效劑。

本發(fā)明的藥物組合物是液體制劑、固體制劑、半固體制劑、膠囊劑、顆粒劑、凝膠劑、注射劑、緩釋制劑或控釋制劑。

本發(fā)明的藥物組合物為粒徑10-1000納米的納米顆粒。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物在制備抗寄生蟲(chóng)病藥物、抗自身免疫性疾病藥物、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，該應(yīng)用是將所述雙氫青蒿素二倍體衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽或所述的雙氫青蒿素二倍體衍生物與增效劑，與藥學(xué)上可以接受的載體制成藥物組合物。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于制備治療或預(yù)防寄生蟲(chóng)病藥物、自身免疫性疾病藥物、腫瘤藥物、白血病藥物、皮膚病藥物，該應(yīng)用是將所述雙氫青蒿素二倍體衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽，或所述的雙氫青蒿素二倍體衍生物與增效劑，與藥學(xué)上可以接受的載體制成藥物組合物。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于制備治療或預(yù)防瘧疾、血吸蟲(chóng)病、弓形蟲(chóng)病、利什曼病、絲蟲(chóng)病或鉤蟲(chóng)病的藥物。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、天皰瘡、混合性結(jié)締組織病、自身免疫性溶血性貧血、甲狀腺自身免疫病或潰瘍性結(jié)腸炎的藥物。

用于治療或預(yù)防由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物、治療自身免疫性疾病的藥物和抗腫瘤藥物是含有上述雙氫青蒿素二倍體衍生物和藥學(xué)上可以接受的載體制成的藥物組合物。

用于治療或預(yù)防由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾藥物、治療自身免疫性疾病藥物和抗腫瘤藥物含有上述雙氫青蒿素二倍體衍生物和藥學(xué)上可以接受的載體制成的藥物組合物制成藥劑。

用于治療或預(yù)防由寄生蟲(chóng)引起的寄生蟲(chóng)病藥物、治療自身免疫性疾病藥物、白血病藥物和抗腫瘤藥物含有上述雙氫青蒿素二倍體衍生物、增效劑和藥學(xué)上可以接受的載體制成的藥物組合物制成藥劑。

本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選方案中，藥物組合物為粒徑10-1000納米的脂質(zhì)體納米顆粒，該藥物組合物中還包括助劑。助劑優(yōu)選磷脂、膽甾醇。

本發(fā)明雙氫青蒿素二倍體衍生物可以異構(gòu)體的形式存在，包括所有可能的立體異構(gòu)體以及兩種或多種異構(gòu)體的混合物。

本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?/p>

本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。

本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥，包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類(lèi)、膠體類(lèi)、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。

本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了制成各種劑型，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。

將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、磷脂等。

由本發(fā)明化合物制成納米顆粒，顆粒粒徑10-1000納米。

由本發(fā)明化合物制成脂質(zhì)體納米顆粒，顆粒粒徑10-1000納米。由本發(fā)明化合物和助劑制成脂質(zhì)體納米顆粒，粒徑10-1000納米，使用的助劑是磷脂。助劑還含有一種靶向基團(tuán)葉酸、半乳糖、抗體、生物素或多肽。由本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物和助劑制成脂質(zhì)體納米顆粒，脂質(zhì)體納米顆粒中負(fù)載增效劑，粒徑10-1000納米。

本發(fā)明的藥物組合物脂質(zhì)體納米顆粒，是液體制劑、固體制劑、半固體制劑、膠囊劑、顆粒劑、凝膠劑、注射劑、緩釋制劑或控釋制劑。

從活性篩選來(lái)看，本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)良好的殺滅寄生蟲(chóng)作用。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為抗寄生蟲(chóng)病藥物用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。

從活性篩選來(lái)看，本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)良好的殺滅瘧原蟲(chóng)作用。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為抗瘧疾藥物用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)良好的抗腫瘤作用。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為抗治療藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療自身免疫性疾病。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療自身免疫性疾病藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物用于人。

本發(fā)明的過(guò)氧化物脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法，是由本發(fā)明化合物過(guò)氧化物或本發(fā)明化合物與助劑的混合物，通過(guò)薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法、噴霧干燥法、膜擠壓法、或高壓均質(zhì)法等方法制備。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物，含有兩個(gè)過(guò)氧基團(tuán)，含有陰離子、陽(yáng)離子或兩性離子基團(tuán)，親水性好，水溶性好；本發(fā)明將過(guò)氧化物制備成納米顆粒，具有脂質(zhì)體的特性，具有可形成液體制劑、固體制劑、半固體制劑、滅菌制劑和無(wú)菌制劑的特性；本發(fā)明的的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物用于抗瘧疾藥物、治療自身免疫性疾病藥物、治療腫瘤藥物；本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物具有抗耐藥性，無(wú)明顯毒副作用。

有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明涉及一種雙氫青蒿素二倍體衍生物，有兩個(gè)過(guò)氧橋，本發(fā)明涉及該化合物在制備預(yù)防和治療瘧疾藥物、自身免疫性疾病藥物和抗腫瘤藥物中的用途屬于首次公開(kāi)。本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物，是由二個(gè)雙氫青蒿素分子通過(guò)含有陽(yáng)離子、陰離子、或同時(shí)含有陽(yáng)離子和陰離子的連接體通過(guò)化學(xué)鍵連接而成的具有下列通式(1)的化合物或所述通式(1)的化合物在藥學(xué)上可接受的鹽：

式(1)中，雙氫青蒿素的羥基與l的羰基相連，l是具有如下結(jié)構(gòu)的取代基：

x的具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)技術(shù)方案；y與l的側(cè)基相連，y是含有陽(yáng)離子、陰離子、或同時(shí)含有陽(yáng)離子和陰離子結(jié)構(gòu)的親水性取代基，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)技術(shù)方案。式(1)結(jié)構(gòu)中含有親水頭部分y，使過(guò)氧化物水溶性優(yōu)異，具有自組裝和共組裝能力；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物的兩個(gè)雙氧鍵(oo)在體內(nèi)環(huán)境下，直接釋放過(guò)氧自由基，發(fā)揮治療或預(yù)防寄生蟲(chóng)病、自身免疫性疾病、腫瘤、白血病、皮膚病的作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物的兩個(gè)雙氧鍵(oo)在體內(nèi)環(huán)境下，直接釋放過(guò)氧自由基，發(fā)揮治療或預(yù)防瘧疾、弓形蟲(chóng)病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、白血病的作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物在體內(nèi)控制釋放青蒿琥酯或雙氫青蒿素；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物具有抗耐藥性；本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物具有抗瘧原蟲(chóng)耐藥性；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物，具有治療寄生蟲(chóng)病、腫瘤、白血病、自身免疫性疾病、皮膚病的作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物，具有治療瘧疾、弓形蟲(chóng)病、腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物含有陽(yáng)離子、陰離子、或同時(shí)含有陽(yáng)離子和陰離子結(jié)構(gòu)的親水性取代基，具有雙親性，可以自組裝或與磷脂共組裝成穩(wěn)定的納米顆粒，克服了通用納米顆粒包裹藥物時(shí)藥物易于泄漏的缺點(diǎn)，同時(shí)提高藥物包裹的效率；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或組合物組裝成的脂質(zhì)體或納米顆粒，延長(zhǎng)雙氫青蒿素二倍體衍生物的釋放和作用時(shí)間，同時(shí)通過(guò)脂質(zhì)體或納米顆粒形式易于進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，發(fā)揮藥效；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或組合物組裝成的脂質(zhì)體納米顆粒具有抗耐藥性；本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或組合物組裝成的脂質(zhì)體納米顆粒具有抗瘧原蟲(chóng)耐藥性；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或組合物可以采用薄膜法等非常容易地自組裝成脂質(zhì)體或納米顆粒，粒徑10-1000納米；本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或組合物組裝成的脂質(zhì)體或納米顆粒可以負(fù)載增效劑，提高藥效；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物脂質(zhì)體納米顆粒的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)具有相似性，易于被細(xì)胞吞噬，并釋放活性藥物分子，具有抗寄生蟲(chóng)病、抗腫瘤、抗自身免疫性疾病作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物脂質(zhì)體納米顆粒的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)具有相似性，易于被細(xì)胞吞噬，且具有被動(dòng)靶向作用；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物或本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物和常規(guī)藥物載體的藥物組合物，具有低毒性；

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其脂質(zhì)體納米顆粒，可用作液體制劑、固體制劑、半固體制劑、滅菌制劑和無(wú)菌制劑，可在水、磷酸緩沖液、檸檬酸緩沖液等水相體系下形成脂質(zhì)體或納米顆粒溶液；

本發(fā)明的過(guò)氧化物脂質(zhì)體結(jié)合含有靶向基團(tuán)的助劑，具有主動(dòng)靶向作用；

本發(fā)明所涉及式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其脂質(zhì)體納米顆粒制備工藝簡(jiǎn)單；

本發(fā)明所涉及式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其脂質(zhì)體納米顆粒也是一種全新的前藥，在體內(nèi)直接發(fā)揮藥效或經(jīng)水解發(fā)揮藥效，能延長(zhǎng)藥物釋放半衰期，并具有較低的毒副作用；

本發(fā)明的通式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物以及這些化合物所形成的藥學(xué)上可接受的含有抗衡離子的鹽，及其組合物，具有抗瘧疾作用，能夠克服一般青蒿素導(dǎo)致瘧原蟲(chóng)出現(xiàn)的抗藥性的缺陷，也就是本發(fā)明的通式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物或藥物組合物應(yīng)用于抗瘧疾藥物，不引起寄生蟲(chóng)出現(xiàn)抗藥性，對(duì)有青蒿素抗性的瘧原蟲(chóng)有很好的殺滅作用。

附圖說(shuō)明

圖1本發(fā)明雙氫青蒿素二倍體衍生物結(jié)構(gòu)通式。

圖2雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿合成路線。

圖3雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿合成路線。

圖4雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿合成路線。

圖5雙氫青蒿素二倍體絲氨醇酯鹽酸鹽合成路線。

圖6雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羥基磺酸甜菜堿合成路線。

圖7雙氫青蒿素二甘醇酸二倍體磷脂酰膽堿合成路線。

圖8雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磺酸甜菜堿合成路線。

圖9雙氫青蒿素二硫代二乙基氨基甲酸酯二倍體磷脂酰膽堿合成路線。

圖10雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體-n,n-二甲胺基鹽酸鹽合成路線。

圖11雙氫青蒿素二硫代二甘醇碳酸酯二倍體絲氨醇鹽酸鹽合成路線。

圖12雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體動(dòng)態(tài)光散射粒徑分析。

圖13雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米顆粒透射電鏡圖。

圖14不同藥物給藥后血液中藥物濃度與時(shí)間的關(guān)系。

圖15雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體體外降解后雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的含量與時(shí)間的關(guān)系。

圖16雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的體外降解后釋放出的青蒿琥酯含量與時(shí)間的關(guān)系。

圖17不同藥物殺滅瘧原蟲(chóng)的半數(shù)抑制濃度ic50值。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的的技術(shù)方案做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物，是由二個(gè)雙氫青蒿素分子通過(guò)含有陽(yáng)離子、陰離子、或同時(shí)含有陽(yáng)離子和陰離子的連接體通過(guò)化學(xué)鍵連接而成的具有下列通式(1)的化合物或所述通式(1)的化合物在藥學(xué)上可接受的鹽：

式(1)中，雙氫青蒿素的羥基與l的羰基相連，l是具有如下結(jié)構(gòu)的取代基：

其中，x是如下基團(tuán)：

ch2、ch2-ch2、ch2-ch2-ch2、ch2-ch2-ch2-ch2、ch2-s-s-ch2、ch2-ch2-s-s-ch2-ch2、ch2-o-ch2、o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o、o-ch2-ch2-ss-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、o-ch2-ch2-o-co-ch2-ch2、nh-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、nh-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-nh、o-ch2-ch2-s-s-ch2-ch2-o或nh-ch2-ch2-s-s-ch2-ch2-nh；

式(1)中，y與l的側(cè)基相連，y是具有如下結(jié)構(gòu)的取代基：

本發(fā)明的一種雙氫青蒿素二倍體衍生物的藥物組合物，該組合物包括雙氫青蒿素二倍體衍生物或所述的雙氫青蒿素二倍體衍生物與藥效學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明的一種雙氫青蒿素二倍體衍生物的藥物組合物，該組合物包括雙氫青蒿素二倍體衍生物和增效劑與藥效學(xué)上可接受的載體。所述增效劑可以是以下物質(zhì)的任一種：苯芴醇、阿莫地喹、甲氟喹、磺胺多辛、乙胺嘧啶、氨酚喹林、氯喹、三哌喹、乙氫去甲奎寧、伯氨喹、常山堿、鹵泛曲林、氯氟菲醇、奎寧、氟克吖啶、氨喹酯、氯胍、氨酚喹、卡馬喹、克瘧喹、磷酸伯氨喹、咯奈啶、磷酸氯喹、磷酸萘酚喹、羥基哌喹、阿替夫林、磷酸羥基哌奎、全反式維甲酸、亞砷酸、烏苯美司、二溴衛(wèi)矛醇、亞砷酸、佐柔比星、依托泊甙、促皮質(zhì)素、卡莫司汀、地塞米松、環(huán)磷酰胺、安吖啶、巰基嘌呤、異煙肼、替尼泊甙、氟達(dá)拉濱、氨基己酸、二丁酰環(huán)磷腺苷、依托泊甙、促皮質(zhì)素、注射用去水衛(wèi)矛醇、環(huán)磷腺苷、甲氨蝶呤、伊達(dá)比星、吡柔比星、多柔吡星、鹽酸安西他濱、尼莫司汀、柔紅霉素、米托蒽醌、表柔比星、阿柔比星、阿糖胞苷、長(zhǎng)春新堿、羥基喜樹(shù)堿、甲潑尼龍、甲磺酸伊馬替尼、噻氯匹定、多柔吡星、硫唑嘌呤、硫酸長(zhǎng)春堿、硫鳥(niǎo)嘌吟、秋水仙酰胺、維a酸、羥基脲、胺苯吖啶、表鬼臼毒比喃葡萄糖甙、足葉乙甙、醋酸可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、長(zhǎng)春堿注射液、阿克拉霉素a、雷佐生、高三尖杉酯堿、紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他賽、代號(hào)為bay59-8862的化合物、代號(hào)為sb-t-11033的化合物、代號(hào)為sb-t-121303的化合物、代號(hào)為sb-t-121304的化合物、代號(hào)為sb-t-1213的化合物、代號(hào)為sb-t-12162的化合物、代號(hào)為bms-184476的化合物、代號(hào)為dj-927的化合物、代號(hào)為bms-275183的化合物、喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、喜樹(shù)堿-10-o-乙基吡唑、伊立替康、拓?fù)涮婵怠?-叔丁基二甲基硅基-10-羥基喜樹(shù)堿、7-(2-三甲基硅乙基)-喜樹(shù)堿、代號(hào)為afeletecan的喜樹(shù)堿衍生物、7-羥甲基喜樹(shù)堿、9-硝基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿、六環(huán)喜樹(shù)堿、代號(hào)為gimatecan的化合物、代號(hào)為belotecan的化合物、二氟替康、代號(hào)為bn80927的化合物、代號(hào)為top-0618的化合物、代號(hào)為exatecan的化合物、代號(hào)為lurtotecan的化合物、代號(hào)為drf-1042的化合物、鬼臼毒素、去甲表鬼臼毒素、替尼泊苷、依托泊苷、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春地辛、足葉乙苷、三尖杉酯堿、異三尖杉酯堿、去氧三尖杉酯堿、假去氧三尖杉酯堿、大花旋覆花內(nèi)酯、考布他汀、秋水仙堿、氟維司群、伏立諾他、伊沙匹隆、艾日布林、辛伐他汀、羅替戈汀、利福噴汀、齊多夫定、溴呋啶、洛布卡韋、甲地孕酮、二溴衛(wèi)矛醇、柳丁氨醇、白藜蘆醇、高喜樹(shù)堿類(lèi)化合物、蘆薈大黃素、姜黃素、羊毛甾醇、曼巴韋、西多福韋、阿克拉霉素、洋紅霉素、脫氧吡咯霉素、佐柔比星、8-氟-伊達(dá)比星、制霉菌素、兩性霉素、米托蒽醌、大黃素、放線菌素d、雷帕霉素、光神霉素、埃坡霉素、絲裂霉素、博來(lái)霉素、煙曲霉醇、甲基潑尼松龍、夫拉平度、燈盞花素、曲貝替定、大戟科植物二萜、2,5-己酮可可堿、苦參堿、伊沙匹隆、風(fēng)車(chē)子抑素a4、烏苯美司、利巴韋林、馬立馬司他、甲羥孕酮、司他夫定、沙奎那韋、去氧腎上腺素、甲氧明、沙丁胺醇、異丙腎上腺素、米索前列醇、拉坦前列素、前列環(huán)素、奎尼丁、普羅帕酮、普納洛爾、地高辛、洋地黃毒苷、多巴酚丁胺、華法林、香豆素類(lèi)化合物、洛伐他丁、氟伐他丁、恩格列凈、地加瑞克、阿巴瑞克、諾雷德、加蘭他敏、放線菌酮、米諾環(huán)素、美洛昔康、泊沙康唑、依維莫司、伏立諾他、瓦他拉尼堿、阿比特龍、雙氫青蒿素、氫化潑尼松、地塞米松、代號(hào)為monomethylauristatine的化合物、比卡魯胺、維甲酰酚胺、安沙霉素、苔蘚抑素、替西羅莫司、普馬司他、替拉那韋、茚地那韋、利托那韋、阿扎那韋、奈非那韋、巴馬司他、槲皮素、黃酮類(lèi)藥物、替格瑞洛、坎格瑞洛、替比夫定、曲氟尿苷、阿達(dá)帕林、洛匹那韋、達(dá)格列凈、利福昔明、氟替卡松、艾沙康唑、雷特格韋、帕比司他、阿維巴坦、左炔諾孕酮、炔雌醇、地瑞拉韋、奧美沙坦、依伐卡托、苔蘚蟲(chóng)素-1、α-半乳糖神經(jīng)酰胺、表沒(méi)食子酸兒茶素沒(méi)食子酸酯、姜黃素、冬凌草甲素、染料木黃酮、雷公藤甲素、棉子酚、水飛薊賓、泰拉萬(wàn)星、依折麥布、偽麻黃堿、替卡格雷、莫米松糠酸酯、去鐵酮、奧昔布寧、羥嗎啡酮、雷特格韋、米拉貝隆、特立氟胺、阿伐那非、坦西莫司、埃替格韋、度魯特韋、卡奇霉素、瑞他莫林、托伐普坦、苯芴醇、他比特啶、加蘭他敏、托瑞賽爾、卡格列凈、拉替拉韋、丁丙諾啡、索氟布韋、曲前列素、丹曲林、糠酸氟替卡松、納洛酮、坎格列凈、索非布韋、n-羥甲基阿立哌唑、羥考酮、司利卡西平、他克莫司、帕潘立酮、n-羥甲基阿立哌唑、拉替拉韋、卡格列凈、地塞米松、貝利司他、代號(hào)為dx-8951f的喜樹(shù)堿衍生物、吉西他濱、c1-c20酰胺基吉西他濱、氟鐵龍、克拉屈濱、氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、雙呋氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、艾西拉濱、卡培他濱、5’-脫氧-5-氟胞苷、5’-脫氧-5-氟尿苷、2’-脫氧-5-氟尿苷、阿糖胞苷、環(huán)胞苷、曲沙他濱、沙帕他濱、地西他濱、伯舒替尼、他菲替尼、依羅替尼、達(dá)克替尼、來(lái)那替尼、多韋替尼、帕納替尼、巴非替尼、司美替尼、卡扎替尼、魯索替尼、盧佐替尼、艾樂(lè)替尼、卡博替尼、樂(lè)伐替尼、色瑞替尼、阿法替尼、舒尼替尼、拉帕替尼、克唑替尼、阿帕替尼、埃羅替尼、卡奈替尼、阿西替尼、博舒替尼、尼洛替尼、吉非替尼、達(dá)沙替尼、西他列汀、伊馬替尼、6-巰嘌呤、甲氨蝶呤、氨蝶呤、羥基脲、肌苷二醛、腺苷二醛、依魯替尼、曲美替尼、魯索利替尼、阿扎胞苷、氯法拉濱、來(lái)那度胺、奈拉濱、帕唑帕尼、凡德他尼、卡非佐米、恩扎魯胺、達(dá)拉菲尼、瓦他拉尼、替莫唑胺、艾夫他濱、貝他司汀、利拉利汀、氟西汀、阿格列汀、維格列汀、沙格列汀、度洛西汀、阿托伐他汀、卡莫司汀、尼莫司汀、阿卡地新、4’-硫代-β-d-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶、阿德福韋、阿糖腺苷、阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、去甲氧基柔紅霉素、吡柔比星、恩替諾特、西達(dá)苯胺、氨多索韋、拉米夫定、恩替卡韋、匹杉瓊、他克林、來(lái)那度胺、美替沙腙、羥基脲、平陽(yáng)霉素、更昔洛韋、泛昔洛韋、酚妥拉明、酚芐明、哌唑嗪、坦洛新、吲哚拉明、溴莫尼定、肼屈嗪、米諾地爾、美卡拉明、普魯卡因胺、美西律、多巴胺、氨利酮、帕布昔利布、博賽潑維、特拉匹偉、石杉?jí)A甲、美金剛、索拉非尼、瑞格非尼、達(dá)拉非尼、維羅非尼、芬戈莫德、尼達(dá)尼布、三氟胸苷、沃諾拉贊、奧拉帕尼、異環(huán)磷酰胺、艾瑞布林、替匹法尼、洛那法尼、安瑞那韋、擬肽藥物、左乙拉西坦、艾司利卡西平、托吡酯、維拉佐酮、拉鐵尼伯、多沙唑嗪、奧卡西平、恩曲他濱、阿德福韋酯、泰諾福韋、纈更昔洛韋、米那普侖、阿利吉侖、希美加群、依曲韋林、盧非酰胺、咪喹莫特、法莫替丁、拉莫三嗪、伯賽匹韋、依佐加濱、考來(lái)維侖、咪喹莫特、氯噻酮、阿哌沙班、阿巴卡韋、西羅多辛、地加瑞克、特拉萬(wàn)星、芬戈莫德、鞘氨醇、利奧西呱、奧比他韋、西地尼布、莫替沙尼、帕泊昔布、羅拉吡坦、達(dá)比加群酯、去乙?；L(zhǎng)春堿單酰肼、丁氧哌烷、利匹韋林、順鉑、螺鉑、卡鉑、奧沙利鉑、賽特鉑、米鉑、奈達(dá)鉑、庚鉑、洛鉑、環(huán)鉑、草酸鉑、甲啶鉑、大黃酸、9-順式維甲酸、樺木酸、維生素e琥珀酸單酯、雙氯芬酸、卡谷氨酸、奧貝膽酸、脫氧膽酸、氨己烯酸、亮丙瑞林、雨蛙素、普蘭林肽、促腎上腺皮質(zhì)激素、桿菌肽、特立帕肽、戈舍瑞林、艾塞那肽、安替安吉肽、米伐木肽、羅米地辛、酪絲纈肽、西夫韋肽、艾博衛(wèi)泰、酪絲亮肽、多尼培南、阿齊沙坦、后葉催產(chǎn)素、環(huán)孢菌素、普羅瑞林、他替瑞林、那法瑞林、布舍瑞林、組氨瑞林、戈那瑞林、色氨瑞林、生長(zhǎng)抑素、分泌素、奧曲肽、齊考諾肽、恩夫韋肽、蘭瑞肽、伐普肽、司格列肽、替度魯肽、利那洛肽、西那普肽、帕瑞肽、曲普瑞林、替莫瑞林、利拉魯肽、貝沙羅汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、苯達(dá)莫司汀、美法侖、氯尼達(dá)明、阿曲生坦、美法侖、舒林砜、培美曲塞、氮甲、地諾前列酮、卡前列素、前列地爾、吉非貝齊、西魯瑞韋、抑肽素、格拉替雷、蘆西納坦、吲哚美辛、布洛芬、萘普生、地拉羅司、氟喹諾酮、普拉曲沙、坦諾司他、馬馬司他、普啉司他、西侖吉肽、阿加曲班、達(dá)比加群、青蒿琥酯、安立生坦、艾曲波帕、纈沙坦、莫西沙星、萘普生、伊盧多啉、格拉替雷、替羅非班、地拉羅司、頭孢他啶、左旋多巴、卡別多巴、貝西沙星、非布索坦、普盧利沙星、頭孢比普酯、頭孢吡普、加巴噴丁酯、美沙拉嗪、艾替班特、利那洛肽、貝達(dá)喹啉、沙庫(kù)必曲、依匹哌唑、多尼培南、巨大戟醇甲丁烯酸酯、屈昔多巴、卡柔比星、阿柔比星、伊巴他濱、加洛他濱、安西他濱、來(lái)他替尼、英丙舒凡、甘露舒凡、利曲舒凡、曲奧舒凡、依考莫司汀、雌莫司汀、司莫司汀、阿雌莫司汀、吉美拉西、美多比星、奈柔比星、吡柔比星、羅多比星、沙柔比星、戊柔比星、佐柔比星、流柔比星、伊達(dá)比星、加柔比星、依索比星、地托比星、氨柔比星、伐托他濱、扎西他濱、替扎他濱、非西他濱、氟西他濱、氨莫司汀、厄洛替尼、培利替尼、三甲曲沙、依達(dá)曲沙、酮曲沙、奧替拉西、米托拉酮、硼替佐米、丙酸倍氯米松、嗎替麥考酚酯、普拉洛爾、甲氫潑尼松、硫酸羥氯喹、醋酸潑尼松、二氟尼柳、依托度酸、倍他米松、雙氯芬酸、吲哚美辛、地塞米松、塞來(lái)昔布、奧沙普秦、尼美舒利、布洛芬、托美丁鈉、曲安縮松、來(lái)氟米特、氟比洛芬、氟芬那酸、氫化可的松、氫化潑尼松、氯芬那酸、阿司匹林、水楊酸、洛索洛芬、鹽酸多奈哌齊、鹽酸芐達(dá)明、美洛昔康、舒林酸、芬布芬、萘丁美酮、萘普生、賴氨匹林、酮洛芬、曲安奈德、氫化可的松、氟替卡松、丙酸氯倍他索、烏洛托品、依沙吖啶、左氧氟沙星、他克莫司、他扎羅汀、克林霉素、甲硝唑、克霉唑、利多卡因、氯己定、卡泊三醇、呋喃西林、咪喹莫特、咪康唑、哈西奈德、地奈德、地蒽酚、吲哚美辛、新霉素、氟米松、東莨菪堿、維生素、苯海拉明、酮康唑、醋酸氟輕松、頭孢克洛、頭孢地尼、布替萘芬、曲安奈德、林可霉素、氟尿嘧啶、氧氟沙星、氯霉素、沙利度胺、甲氧沙林、鹽酸異丙嗪、洛美沙星、特比奈芬、環(huán)丙沙星、西替利嗪、賽庚啶、奈替米星、磺胺噻唑、紅霉素、維生素b6、維胺酯、聯(lián)苯芐唑、苯扎溴銨、苯海拉明、莪術(shù)油、莫匹羅星、過(guò)氧苯甲酰、阿伐斯汀、阿昔洛韋、阿達(dá)帕林、馬來(lái)酸氯苯那敏。

本發(fā)明的藥物組合物是液體制劑、固體制劑、半固體制劑、膠囊劑、顆粒劑、凝膠劑、注射劑、緩釋制劑或控釋制劑。

本發(fā)明的藥物組合物為粒徑10-1000納米的納米顆粒。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物在制備抗寄生蟲(chóng)病藥物、抗自身免疫性疾病藥物、抗腫瘤藥物、抗白血病藥物、皮膚病藥物中的應(yīng)用，該應(yīng)用是將權(quán)利要求1所述雙氫青蒿素二倍體衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽，與藥學(xué)上可以接受的載體制成藥物組合物。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于制備治療或預(yù)防瘧疾、血吸蟲(chóng)病、弓形蟲(chóng)病、利什曼病、絲蟲(chóng)病、鉤蟲(chóng)病的藥物。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、硬皮病、天皰瘡、混合性結(jié)締組織病、自身免疫性溶血性貧血、甲狀腺自身免疫病或潰瘍性結(jié)腸炎的藥物。

用于治療或預(yù)防由寄生蟲(chóng)引起的疾病的藥物、治療自身免疫性疾病藥物和抗腫瘤藥物是含有上述雙氫青蒿素二倍體衍生物和藥學(xué)上可以接受的載體制成的藥物組合物，或雙氫青蒿素二倍體衍生物和增效劑與藥效學(xué)上可接受載體制成的藥物組合物。

用于治療或預(yù)防由瘧原蟲(chóng)引起的抗瘧疾藥物、治療自身免疫性疾病藥物和抗腫瘤藥物含有上述雙氫青蒿素二倍體衍生物和藥學(xué)上可以接受的載體制成的藥物組合物制成藥劑。

本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選方案中，藥物組合物為粒徑10-1000納米的脂質(zhì)體納米顆粒，該藥物組合物中還包括助劑。助劑優(yōu)選磷脂、膽甾醇。

本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選方案中，藥物組合物為粒徑10-1000納米的脂質(zhì)體納米顆粒，脂質(zhì)體納米顆粒中負(fù)載增效劑。

本發(fā)明雙氫青蒿素二倍體衍生物可以異構(gòu)體的形式存在，包括所有可能的立體異構(gòu)體以及兩種或多種異構(gòu)體的混合物。

本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?/p>

本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。

本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥，包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類(lèi)、膠體類(lèi)、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。

本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了制成各種劑型，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。

將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、磷脂等。

由本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物制成納米顆粒，顆粒粒徑10-1000納米。

由本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物制成脂質(zhì)體納米顆粒，顆粒粒徑10-1000納米。由本發(fā)明化合物和助劑制成脂質(zhì)體納米顆粒，粒徑10-1000納米，使用的助劑是磷脂。助劑還含有一種靶向基團(tuán)葉酸、半乳糖、抗體、生物素或多肽。

本發(fā)明的藥物組合物脂質(zhì)體納米顆粒，是液體制劑、固體制劑、半固體制劑、膠囊劑、顆粒劑、凝膠劑、注射劑、緩釋制劑或控釋制劑。

從活性篩選來(lái)看，本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)良好的殺滅瘧原蟲(chóng)作用。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為抗瘧疾藥物用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)良好的抗腫瘤作用。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為抗治療藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療自身免疫性疾病。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療自身免疫性疾病藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡藥物用于人。

本發(fā)明化合物或組合物表現(xiàn)治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物的無(wú)明顯體內(nèi)毒性。因此可作為治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物用于人。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法，是由本發(fā)明化合物過(guò)氧化物或本發(fā)明化合物與助劑的混合物，通過(guò)薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法、噴霧干燥法、膜擠壓法、或高壓均質(zhì)法等方法制備。

本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物，含有兩個(gè)過(guò)氧基團(tuán)，含有陰離子、陽(yáng)離子或兩性離子基團(tuán)，親水性好，水溶性好；本發(fā)明將過(guò)氧化物制備成納米顆粒，具有脂質(zhì)體的特性，具有可形成液體制劑、固體制劑、半固體制劑、滅菌制劑和無(wú)菌制劑的特性；本發(fā)明的的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物用于抗瘧疾藥物、治療自身免疫性疾病藥物、治療腫瘤藥物；本發(fā)明的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物具有抗耐藥性，無(wú)明顯毒副作用。

本發(fā)明的通式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物用于抗瘧疾藥物，具有良好的水溶性，具有抗瘧疾作用，能夠克服青蒿素導(dǎo)致瘧原蟲(chóng)出現(xiàn)的抗藥性的缺陷，也就是本發(fā)明的通式(1)的雙氫青蒿素二倍體衍生物及其藥物組合物應(yīng)用于抗瘧疾藥物，不引起寄生蟲(chóng)出現(xiàn)抗藥性，對(duì)有青蒿素抗性的瘧原蟲(chóng)有很好的殺滅作用。

下述通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于以下實(shí)施例。

以下為制備過(guò)程中使用的部分試劑代號(hào)：

dmap4-二甲氨基吡啶；cdin,n'-羰基二咪唑；dmso二甲亞砜；gpc甘油磷酰膽堿；dbu1,5-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-5-烯；tea三乙胺；diean,n-二異丙基乙胺；tfa三氟乙酸。

實(shí)施例1：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的合成(合成路線見(jiàn)圖2)

青蒿琥酯0.128g，cdi0.162g溶于15ml二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，旋干除去二氯甲烷，殘留物溶于二甲亞砜10ml,加入甘油磷酸膽堿0.026g，dbu0.05g，40℃下反應(yīng)過(guò)夜。產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率35％，純度用高效液相色譜檢測(cè)為97.3％，20℃水中溶解度為16.96g/l(青蒿琥酯僅為0.36g/l)。質(zhì)譜(ms)(m/z):[m+na]⁺1012.42。¹h-nmr(500mhz,dmso-d6)見(jiàn)圖3：δ5.67(d,j＝8.3hz,2h,h-10,10'),5.55(s,2h,h-12,12'),4.29–4.10(m,1h,h-20),4.03-3.75(m,4h,h-21,22),3.51-3.47(m,4h,h-23,24),3.13(s,9h,h-25,26,27),2.72-2.54(m,8h,h-18,18',17,17'),2.42–1.29(m,24h,h-8a,8a',5a,5a',7,7',8,8',4,4',5,5',6,6',9,9'),1.29(s,6h,h-13,13'),0.89(d,j＝6.2hz,6h,h-15,15'),0.77(d,j＝7.1hz,6h,h-14,14')。¹³c-nmr(500mhz,cdcl3):δ(ppm)172.08,171.79,171.29,171.21,104.41,92.26,92.21,91.43,80.12,70.85,66.32,62.92,59.38,54.36,51.56,45.19,37.14,36.21,34.07,31.78,28.96,28.90,25.88,24.55,21.91,20.17,12.04。

實(shí)施例2：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿的合成(合成路線見(jiàn)圖3)

雙氫青蒿素1.5g，二硫代二乙酸酐1g，溶于20ml氯仿中,加入三乙胺0.5g,40℃下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。去除溶劑，用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸為白色固體1.8g。

雙氫青蒿素二硫代二乙酸為白色固體0.5g，cdi0.3g溶于15ml二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)3小時(shí)，旋干除去二氯甲烷，殘留物溶于二甲亞砜10ml,加入甘油磷酸膽堿0.12g，dbu0.3g，40℃下反應(yīng)過(guò)夜。產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：氯仿/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿為白色固體，產(chǎn)率30％，純度用高效液相色譜檢測(cè)為95％，水中溶解度為13.6g/l。

質(zhì)譜分析(m/z):[m+h]⁺1119.29。

實(shí)施例3：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿的合成(合成路線見(jiàn)圖4)

實(shí)施例10的雙氫青蒿素二硫代二乙酸0.3g，cdi0.2g溶于10ml二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，旋干除去二氯甲烷，殘留物溶于二甲亞砜10ml,加入3-二甲氨基-1,2-丙二醇0.1g，dbu0.2g，35℃下反應(yīng)過(guò)夜。產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：氯仿/甲醇)，得到產(chǎn)物a雙氫青蒿素二硫代二乙酸酯二倍體-1,2-丙二醇-n,n-二甲胺基0.24g，為白色固體。

取產(chǎn)物a0.12g溶于20ml二氯甲烷中，加入diea0.1g，25℃攪拌20min，向反應(yīng)體系中緩慢加入溴乙酸叔丁酯0.2g,加熱55℃反應(yīng)24h。反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋至50ml，1m鹽酸洗滌3遍，na2so4干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干溶劑，得產(chǎn)物b0.1g。

取產(chǎn)物b0.1g溶于20ml二氯甲烷中，加入10mltfa和1ml三異丙基硅烷，25℃反應(yīng)2h。反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋至50ml，飽和nahco3洗滌3遍，na2so4干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干溶劑，得粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品通過(guò)硅膠柱純化(流動(dòng)相為二氯甲烷:甲醇/65:25)的產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿。產(chǎn)物為白色粉末0.08g，產(chǎn)物純度為96.6％，水中溶解度為15.3g/l。ms:[m+h]⁺1039.27。

實(shí)施例4：

雙氫青蒿素二倍體絲氨醇酯鹽酸鹽的合成(合成路線見(jiàn)圖5)

青蒿琥酯0.1g，cdi0.1g溶于15ml二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，旋干除去二氯甲烷，殘留物溶于二甲亞砜10ml,加入絲氨醇0.06g，dbu0.1g，40℃下反應(yīng)過(guò)夜，用鹽酸調(diào)節(jié)ph為6。產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，產(chǎn)物雙氫青蒿素二倍體絲氨醇酯鹽酸鹽為白色固體，產(chǎn)率65％，純度用高效液相色譜檢測(cè)為98.3％。產(chǎn)物質(zhì)譜(m/z):[m+na]⁺1012.42。

實(shí)施例5：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羥基磺酸甜菜堿的合成(合成路線見(jiàn)圖6)

實(shí)施例11的產(chǎn)物a雙氫青蒿素二硫代二乙酸酯二倍體-1,2-丙二醇-n,n-二甲胺基0.12g，溶于20ml二氯甲烷中，加入diea0.1g，25℃攪拌20min，向反應(yīng)體系中緩慢加入3-氯-2-羥基丙磺酸鈉0.3g,加熱55℃反應(yīng)24h。反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋至50ml，1m鹽酸洗滌3遍，na2so4干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干溶劑，得粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品通過(guò)硅膠柱純化(流動(dòng)相為二氯甲烷:甲醇/50:50)的產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羥基磺酸甜菜堿。產(chǎn)物為白色粉末0.06g，產(chǎn)物純度為98.2％。ms:[m+h]⁺1119.37。

實(shí)施例6：

雙氫青蒿素二甘醇酸二倍體磷脂酰膽堿的合成(合成路線見(jiàn)圖7)

雙氫青蒿素1g，二甘醇酸酐1g，溶于20ml氯仿中,加入三乙胺1g,40℃下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。去除溶劑，用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二甘醇酸為白色固體1.1g。

雙氫青蒿素二甘醇酸為白色固體1g，cdi0.6g溶于15ml二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)3小時(shí)，旋干除去二氯甲烷，殘留物溶于二甲亞砜10ml,加入甘油磷酸膽堿0.3g，dbu0.6g，40℃下反應(yīng)過(guò)夜。產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：氯仿/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二甘醇酸二倍體磷脂酰膽堿，為白色固體，產(chǎn)率,56％，純度用高效液相色譜檢測(cè)為96.5％。

質(zhì)譜分析(m/z):[m+h]⁺1023.03。

實(shí)施例7：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磺酸甜菜堿的合成(合成路線見(jiàn)圖8)

實(shí)施例11的產(chǎn)物a雙氫青蒿素二硫代二乙酸酯二倍體-1,2-丙二醇-n,n-二甲胺基0.1g，溶于20ml二氯甲烷中，加入diea0.1g，25℃攪拌20min，向反應(yīng)體系中緩慢加入丙磺酸內(nèi)酯0.3g,加熱55℃反應(yīng)24h。反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋至50ml，1m鹽酸洗滌3遍，na2so4干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干溶劑，得粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品通過(guò)硅膠柱純化(流動(dòng)相為二氯甲烷:甲醇/50:50)的產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磺酸甜菜堿。產(chǎn)物為白色粉末0.07g，產(chǎn)物純度為98.2％。ms:[m+h]⁺1103.37。

實(shí)施例8：

雙氫青蒿素二硫代二乙基氨基甲酸酯二倍體磷脂酰膽堿的合成(路線見(jiàn)圖9)

雙氫青蒿素1g，二硫代二乙基二異氰酸酯0.4g，溶于20ml氯仿中,加入二丁基二月硅酸錫0.1g,40℃下攪拌反應(yīng)6小時(shí)。加入甘油磷酸膽堿0.3g，40℃下繼續(xù)反應(yīng)10小時(shí)。去除溶劑，用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙基氨基甲酸酯二倍體磷脂酰膽堿1.2g，為白色固體。質(zhì)譜分析(m/z):[m+h]⁺1235.45。

實(shí)施例9：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體-n,n-二甲胺基鹽酸鹽的合成(合成路線見(jiàn)圖10)

實(shí)施例11的產(chǎn)物a雙氫青蒿素二硫代二乙酸酯二倍體-1,2-丙二醇-n,n-二甲胺基0.1g加入鹽酸酸化，得粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品通過(guò)硅膠柱純化(流動(dòng)相為二氯甲烷:甲醇/50:50)的產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體-n,n-二甲胺基鹽酸鹽。產(chǎn)物為白色粉末0.06g，產(chǎn)物純度為96.2％。ms(m/z):[m+h]⁺1017.23。

實(shí)施例10：

雙氫青蒿素二硫代二甘醇碳酸酯二倍體絲氨醇鹽酸鹽的合成(合成路線見(jiàn)圖11)

雙氫青蒿素1g，溶于20ml氯仿中,加入三乙胺1g和三光氣0.4g，40℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí)。去除溶劑，加入二硫代二乙二醇0.3g，反應(yīng)3小時(shí)。除去溶劑，粗品用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：二氯甲烷/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二甘醇0.7g。中間產(chǎn)物溶于10ml二氯甲烷中，加入三乙胺1g和三光氣0.3g，40℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí),然后加入叔丁氧羰基保護(hù)的絲氨醇0.3g，反應(yīng)完畢后，用三氟乙酸脫除保護(hù)基團(tuán)，并用鹽酸處理，產(chǎn)物用快速制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化(色譜柱：硅膠，淋洗液：氯仿/甲醇)，得到產(chǎn)物雙氫青蒿素二硫代二甘醇碳酸酯二倍體絲氨醇鹽酸鹽，為白色固體，產(chǎn)率35％，純度用高效液相色譜檢測(cè)為95.3％。質(zhì)譜分析(m/z):[m+h]⁺1109.40。

實(shí)施例11：

薄膜法制備雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體

實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿10毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米顆粒溶液，粒徑分析結(jié)果(autosizer4700馬爾文動(dòng)態(tài)光散射儀)如下圖12，平均粒徑190納米，表面電位-20.35mv。透射電鏡(200kv，jem-2100system，jeol)測(cè)量納米顆粒的形態(tài)如圖13，顯示脂質(zhì)體雙脂質(zhì)層結(jié)構(gòu)。

實(shí)施例12：

薄膜法制備雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體

實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿20毫克和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇(dspe-peg，peg分子量2000)6毫克溶于20毫升氯仿中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入20毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體納米顆粒溶液，粒徑分析顯示，平均粒徑150納米。冷凍干燥脂質(zhì)體納米顆粒溶液，得到粉末狀納米顆粒。

實(shí)施例13：

薄膜法制備雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿共組裝脂質(zhì)體

實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿10毫克和二硬脂酰磷脂酰膽堿10毫克溶于20毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入20毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿共組裝脂質(zhì)體納米顆粒溶液，粒徑分析結(jié)果，平均粒徑185納米。冷凍干燥脂質(zhì)體納米顆粒溶液，得到粉末狀納米顆粒。

實(shí)施例14：

薄膜法制備雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體

實(shí)施例2的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿10毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米顆粒溶液，粒徑分析顯示，平均粒徑170納米。冷凍干燥脂質(zhì)體納米顆粒溶液，得到粉末狀納米顆粒。

實(shí)施例15：

薄膜法制備雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿納米粒子

實(shí)施例3的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿10毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿納米顆粒溶液，粒徑分析顯示，平均粒徑190納米。冷凍干燥得到粉末狀納米顆粒。

實(shí)驗(yàn)例16：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體藥代動(dòng)力學(xué)

balb/c小鼠(雌性,5周,20-22g)分成4組(每組3只)。第一組青蒿琥酯；第二組實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿；第三組實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體；第四組實(shí)施例12的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(青蒿琥酯給藥劑量10mg/kg，均為等青蒿琥酯摩爾劑量)。尾靜脈注射藥物pbs溶液。

分別在預(yù)定時(shí)間(0.25h,0.5h,1h,3h,6h,12h,24h,and48h)取血樣，3,000rpm離心10分鐘獲得血漿。血液中的藥物用甲醇抽提，用hplc(agilent1100,ca)分析測(cè)量(hplc分析,青蒿琥酯洗脫液：乙腈/水＝51/49，含0.1％tfa；雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿洗脫液：乙腈/水＝60/40,含0.1％tfa；流速:1.0ml/min；溫度:25℃.測(cè)量波長(zhǎng):210nm)，計(jì)算血液中藥物濃度和動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

結(jié)果：血液中藥物濃度與時(shí)間關(guān)系如圖14，計(jì)算得到藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。

可以看出，3-4小時(shí)內(nèi)血液中青蒿琥酯基本代謝完畢，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的半衰期高于原藥，達(dá)到9小時(shí)以上，而雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的血液清除半衰期長(zhǎng)達(dá)13小時(shí)，且最大藥物濃度達(dá)到34.68μg/ml，高于青蒿琥酯的23.4μg/ml。此外，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的生物利用度是青蒿琥酯的6倍以上,而血漿清除速率cl(0.019l/h/kg)遠(yuǎn)低于青蒿琥酯的值。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的藥物血液清除半衰期長(zhǎng)達(dá)20小時(shí)以上，更顯示藥物突出的長(zhǎng)效作用，以及更高的藥物生物利用度。所以，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體有很長(zhǎng)的血液循環(huán)時(shí)間，很低的血漿清除速度。

表1.雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(靜脈給藥)

^*參數(shù):auc,0-t曲線下面積；mrt0-t,滯留時(shí)間；k,消除速度常熟；t1/2,消除半衰期；cl,血漿清除率；vd,表觀分布體積；cmax,血漿峰值濃度。

實(shí)施例17：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的體外降解試驗(yàn)

樣品：實(shí)施例1制備的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿溶于5mlpbs(ph7.4)、pbs(ph7.4，含10％小牛血清fbs)、pbs(ph5.0)溶液配制成濃度為0.1mg/ml的溶液；實(shí)施例11制備的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米顆粒溶液用5mlpbs(ph7.4)、pbs(ph7.4，含10％fbs)、pbs(ph5.0)分別稀釋至濃度為0.1mg/ml。37℃下孵育24小時(shí)。在預(yù)定時(shí)間(0.5h,1h,3h,5h,10h,15h,20h,24h)，取20微升樣品溶液，hplc方法測(cè)量雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的含量。(agilent1100色譜儀,zorbax反相c18柱，150×4.6mm，5μm，進(jìn)樣量20μl，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)λ＝254nm；梯度淋洗：2-90％緩沖液b/a，流速1.0ml/min，緩沖液a:0.1％tfa的去離子水，緩沖液b:0.1％tfa的乙腈)。

結(jié)果：雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的含量與時(shí)間的關(guān)系如圖15。結(jié)果表明：ph7.4(不含或含有fbs)條件下，24小時(shí)后，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的含量高達(dá)80％，說(shuō)明雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的體外降解很慢，也說(shuō)明脂質(zhì)體在模擬生理?xiàng)l件下比較穩(wěn)定。ph5.0條件下，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體體外降解很快，24小時(shí)后雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿降解率達(dá)到88％。所以，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體在酸性條件下易于解體和降解。

實(shí)施例18：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的體外釋藥試驗(yàn)

實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體溶液(濃度1mg/ml)各10ml，置于透析袋中(mwco1000)。透析袋浸入200mlpbs(ph7.4)、pbs(ph7.4，含10％小牛血清fbs)、pbs(ph5.0)緩沖液(同時(shí)加入0.5％吐溫80)，37℃培養(yǎng)箱中孵育。在預(yù)定時(shí)間(0.5h,1h,3h,5h,10h,15h,20h,24h)取樣透析液10ml并加入等體積新緩沖液。透析液凍干后溶于2ml甲醇，用高效液相色譜進(jìn)行分析。

結(jié)果：脂質(zhì)體降解后釋放出的青蒿琥酯含量如圖16所示。顯然，在中性條件下，24小時(shí)釋放出的青蒿琥酯小于20％。酸性條件下，85％的青蒿琥酯釋放出來(lái)。

實(shí)施例19：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

激光共聚焦顯微鏡法：培養(yǎng)板每孔中種植mcf-7細(xì)胞(2.0×10⁵)，加入負(fù)載熒光探針cy5.5的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體(50μg/ml)，并孵育3h。同樣條件下等量的cy5.5用作對(duì)照組(含有等當(dāng)量青蒿琥酯)。然后，除去培養(yǎng)液，并用pbs洗滌2次，用4％甲醛溶液固定30min(25℃)。最后，細(xì)胞用100μl(10μg/ml)的4',6-diamidino-2-phenylindole(dapi)溶液處理5分鐘,pbs洗滌三次。用leicatcssp8激光共聚焦顯微鏡(leica,germany)觀察。

結(jié)果：3小時(shí)后，對(duì)照組觀察不到熒光，而雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體處理的細(xì)胞顯示很強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，說(shuō)明雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體被mcf-7細(xì)胞快速攝取。

實(shí)施例20：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體細(xì)胞內(nèi)降解實(shí)驗(yàn)

培養(yǎng)板6孔中每孔種植mcf-7細(xì)胞(1.0×10⁵)，dmem培養(yǎng)基，并孵育24h。然后，除去培養(yǎng)液，并用pbs洗滌。加入實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體(100μg/ml)，37℃繼續(xù)培養(yǎng)12小時(shí)。小心除去培養(yǎng)基，加入5ml甲醇和pbs混合液(體積比1:1)抽提，離心。上清液凍干后用質(zhì)譜儀分析提取物。

結(jié)果：細(xì)胞提取物中，質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯分子離子峰385.6(m+h⁺,m/z)。說(shuō)明雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體被細(xì)胞內(nèi)化，并在細(xì)胞內(nèi)降解釋放出青蒿琥酯原藥。

實(shí)驗(yàn)例21：

薄膜法制備負(fù)載甲氟喹的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體

實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿10毫克和甲氟喹3毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到負(fù)載甲氟喹的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米顆粒溶液，粒徑分析結(jié)果顯示納米粒子平均粒徑170納米。

實(shí)驗(yàn)例22：

負(fù)載全反式維甲酸的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的制備

實(shí)施例2的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿10毫克和全反式維甲酸3毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到負(fù)載全反式維甲酸的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體溶液，粒徑分析結(jié)果顯示納米粒子平均粒徑185納米。

實(shí)驗(yàn)例23：

負(fù)載紫杉醇的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的制備

實(shí)施例2的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿10毫克和紫杉醇2毫克溶于10毫升甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘。最后，過(guò)0.22微米濾膜，得到負(fù)載紫杉醇的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體溶液，粒徑分析結(jié)果顯示納米粒子平均粒徑185納米。

實(shí)驗(yàn)例24：

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體殺滅瘧原蟲(chóng)試驗(yàn)

方法：sybrgreeni熒光法測(cè)量樣品的殺滅瘧原蟲(chóng)效果

藥品樣品：

a)雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體(實(shí)施例11)，pbs溶液，ph7.4，濃度：5000nm,1000nm,200nm,40nm,8.0nm,1.6nm，0.32nm

b)青蒿琥酯，碳酸氫鈉溶液

c)雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿(實(shí)施例1),pbs溶液(10％dmso)

材料：瘧原蟲(chóng)株(3d7)感染的人紅細(xì)胞(0.5％parasitemia)，rpmi1640完全培養(yǎng)基，二氧化碳培養(yǎng)箱(5％co2,5％o2,平衡n2,37℃)

100μl含培養(yǎng)基的藥品樣品(均按等摩爾青蒿琥酯劑量)加入到96孔板,然后每個(gè)孔中加入100μl瘧原蟲(chóng)感染的紅細(xì)胞(0.5％parasitemia)。培養(yǎng)基為空白。二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育48h(37℃)。然后，避光條件下每個(gè)孔中加入50μl裂解緩沖液(含sybrgreeni)，繼續(xù)孵育30分鐘.測(cè)量熒光強(qiáng)度.數(shù)據(jù)用graphpadprism(graphpadsoftware,inc.,sandiego,ca)進(jìn)行非線性擬合，計(jì)算ic50值(n＝3)。

結(jié)果：不同樣品殺滅瘧原蟲(chóng)的半數(shù)抑制濃度ic50值如圖17所示。結(jié)果表明，青蒿琥酯的ic50為10.3nm,雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿的ic50為6.5nm，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的ic50為1.2nm。結(jié)果表明，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿殺滅瘧原蟲(chóng)的效果顯著優(yōu)于青蒿琥酯，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體殺滅瘧原蟲(chóng)的藥效大約是青蒿琥酯的9倍，顯示特別高效的殺滅瘧原蟲(chóng)的作用。這是因?yàn)殡p氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體納米粒子利用感染瘧原蟲(chóng)的紅細(xì)胞表面的“新滲透通道”(newpermeabilitypathways，npps)高效進(jìn)入紅細(xì)胞，殺滅瘧原蟲(chóng)。

實(shí)驗(yàn)例25：

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的殺滅瘧原蟲(chóng)試驗(yàn)

方法：sybrgreeni熒光法測(cè)量樣品的殺滅瘧原蟲(chóng)效果

藥品樣品：

a)雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體(實(shí)施例14)，pbs溶液，ph7.4，濃度：5000nm,1000nm,200nm,40nm,8.0nm,1.6nm，0.32nm

b)青蒿琥酯，碳酸氫鈉溶液

c)雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿(實(shí)施例2),pbs溶液

d)雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿(實(shí)施例3),pbs溶液

e)雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿納米顆粒的pbs溶液(實(shí)施例15)

f)負(fù)載甲氟喹的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體(實(shí)施例21)

材料：瘧原蟲(chóng)株(3d7)感染的人紅細(xì)胞(0.5％parasitemia)，rpmi1640完全培養(yǎng)基，二氧化碳培養(yǎng)箱(5％co2,5％o2,平衡n2,37℃)

100μl含培養(yǎng)基的藥品樣品(均按等摩爾青蒿琥酯劑量)加入到96孔板,然后每個(gè)孔中加入100μl瘧原蟲(chóng)感染的紅細(xì)胞(0.5％parasitemia)。培養(yǎng)基為空白。二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育48h(37℃)。然后，避光條件下每個(gè)孔中加入50μl裂解緩沖液(含sybrgreeni)，繼續(xù)孵育30分鐘.測(cè)量熒光強(qiáng)度.數(shù)據(jù)用graphpadprism(graphpadsoftware,inc.,sandiego,ca)進(jìn)行非線性擬合，計(jì)算ic50值(n＝3)。

結(jié)果：不同樣品殺滅瘧原蟲(chóng)的半數(shù)抑制濃度ic50值分別為：青蒿琥酯的ic50為10.3nm,雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿的ic50為5.4nm，雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的ic50為0.8nm。雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿的ic50為7.6nm，雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿納米顆粒的ic50為1.0nm，負(fù)載甲氟喹的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的ic50為0.6nm。

結(jié)果表明，雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿殺滅瘧原蟲(chóng)的效果顯著優(yōu)于青蒿琥酯，雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體殺滅瘧原蟲(chóng)的藥效大約是青蒿琥酯的12倍，顯示特別高效的殺滅瘧原蟲(chóng)的作用。雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿殺滅瘧原蟲(chóng)的效果顯著優(yōu)于青蒿琥酯，雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羧基甜菜堿納米顆粒殺滅瘧原蟲(chóng)的藥效大約是青蒿琥酯的10倍，顯示高效的殺滅瘧原蟲(chóng)的作用。負(fù)載甲氟喹的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的ic50最低，顯示最優(yōu)的抗瘧疾作用，表明甲氟喹具有增效抗瘧疾功能。

實(shí)驗(yàn)例26：

mtt法人癌細(xì)胞殺傷試驗(yàn)

藥品及試劑：小牛血清為南京生興生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；dmso分析純；rpmi1640為gibco產(chǎn)品。

儀器：biorad680型酶標(biāo)儀。

收集生長(zhǎng)良好的腫瘤細(xì)胞，用含10％小牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基配制成1×10-4/ml細(xì)胞懸液，于96孔培養(yǎng)板內(nèi)接種，每孔100μl(含1000個(gè)腫瘤細(xì)胞)，置37℃，5％co2溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后加藥物(見(jiàn)表2)，實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照及溶劑對(duì)照，受試樣品設(shè)4個(gè)濃度，每濃度3個(gè)平行孔，置37℃，5％co2溫箱內(nèi)培養(yǎng)4天。棄去培養(yǎng)液，每孔加入mtt溶液(0.4mg/ml，rpmi1640配制)100μl，37℃孵育4小時(shí)。棄去上清液，每孔加入mtt溶液150μl，溶解顆粒，輕度振蕩后，用550型酶標(biāo)儀在檢測(cè)波長(zhǎng)540nm，參考波長(zhǎng)450nm下測(cè)定od值。

結(jié)果計(jì)算：以藥物的不同濃度及對(duì)細(xì)胞的抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出半數(shù)抑制濃度(ic50)，結(jié)果見(jiàn)表2。從體外抗腫瘤活性篩選來(lái)看，本發(fā)明雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的半數(shù)抑制濃度均高于青蒿琥酯，可能是因?yàn)榍噍镧メ尫泡^慢。雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的半數(shù)抑制濃度均低于青蒿琥酯，顯示較強(qiáng)的抗腫瘤效果。這是因?yàn)殡p硫鍵在細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽作用下快速斷裂，釋放出青蒿琥酯原藥。

雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體和雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞有良好的誘導(dǎo)凋亡作用，且明顯優(yōu)于青蒿琥酯。負(fù)載全反式維甲酸的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體具有最優(yōu)的殺滅白血病細(xì)胞的效果，顯示負(fù)載全反式維甲酸具有增效殺滅白血病細(xì)胞的功能。

負(fù)載紫杉醇的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體具有最優(yōu)的殺滅人乳腺癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人肺腺癌細(xì)胞的效果，顯示負(fù)載紫杉醇具有增效殺滅腫瘤細(xì)胞的功能。

表2.本發(fā)明化合物對(duì)人腫瘤細(xì)胞株和白血病細(xì)胞株的殺滅活性結(jié)果

mcf-7：人乳腺癌細(xì)胞；hepg2：人肝癌細(xì)胞；a549：人肺腺癌細(xì)胞；hela：人血管內(nèi)皮正常細(xì)胞；hl-60：人早幼粒白血病細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)例27

小鼠體內(nèi)毒性試驗(yàn)

動(dòng)物：icr小鼠，雄性，18-22g，購(gòu)自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

口服給藥。本發(fā)明化合物(表3)的體內(nèi)毒性試驗(yàn)的結(jié)果，其口服半致死量大于2000mg/kg，表明毒性遠(yuǎn)低于雙氫青蒿素。

表3藥物在小鼠體內(nèi)毒性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例28

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡動(dòng)物試驗(yàn)

mrl/lpr小鼠狼瘡模型制備(文獻(xiàn)：梁濤，等.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2013，29(3):288-291.)。mrl/lpr小鼠是一種基因突變小鼠，其fas表達(dá)異常，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞過(guò)度增生，出現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣的改變，作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)的模型小鼠。

取12只8周齡雌性mrl/lpr小鼠作為狼瘡模型鼠，隨機(jī)分為四組(空白組、雙氫青蒿素組、實(shí)施例1的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿組、實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體組)，每組6只，其中一組不做任何處理，另兩組每?jī)商煲淮戊o脈注射藥物2毫克(等雙氫青蒿素摩爾量)，另取6只同周齡的c57bl/6雌性小鼠作為正常對(duì)照組，8周后處死取血及組織。

取小鼠血液，elisa試劑盒測(cè)血清抗ds-dna抗體及抗核抗體(ana)水平，具體操作步驟根據(jù)說(shuō)明書(shū)。取小鼠尿液，bca試劑盒法檢測(cè)小鼠尿蛋白濃度，用bca檢測(cè)尿蛋白濃度，具體操作步驟根據(jù)說(shuō)明書(shū)。

小鼠腎臟病理學(xué)觀察：取小鼠腎臟組織，用10％中性福爾馬林溶液固定后制作石蠟切片，將切片進(jìn)行蘇木素－伊紅染色(he染色)，顯微鏡下觀察，攝片。

結(jié)果：8周后，脂質(zhì)體組的mrl/lpr小鼠脾臟最小，雙氫青蒿素組的mrl/lpr小鼠脾臟大于正常對(duì)照組，但與未治療組相比顯著減小?？筪s-dna抗體和抗核抗體水平(其中抗ds-dna抗體與狼瘡疾病活動(dòng)度相關(guān))：8周后，mrl/lpr小鼠發(fā)病后這兩種自身抗體水平顯著高于正常對(duì)照組，脂質(zhì)體組的抗ds-dna抗體水平與雙氫青蒿素組和未治療組相比顯著下降，然而抗核抗體水平無(wú)明顯改變。

mrl/lpr小鼠發(fā)病后也會(huì)出現(xiàn)腎炎改變，腎臟病理表現(xiàn)為：腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量增多，系膜細(xì)胞增生，腎間質(zhì)內(nèi)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。8周后，脂質(zhì)體組的腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量減少，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，并低于雙氫青蒿素組和雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿組，但雙氫青蒿素組高于后者。隨著腎炎的出現(xiàn)，mrl/lpr小鼠尿蛋白濃度比同周齡正常對(duì)照組顯著增高。8周后，脂質(zhì)體組的尿蛋白水平與正常對(duì)照組相當(dāng)；雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿組高于正常對(duì)照組，但低于雙氫青蒿素組；雙氫青蒿素組雖然仍高于正常對(duì)照組，但與未治療組相比有所下降。

結(jié)論：雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體對(duì)mrl/lpr小鼠的治療效果優(yōu)于雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿，后者優(yōu)于雙氫青蒿素。

實(shí)驗(yàn)例29

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體對(duì)皮膚銀屑病動(dòng)物的作用

制備銀屑病動(dòng)物模型(參考文獻(xiàn))：取小鼠36只，隨機(jī)分為3組，每組12只，正常組、咪喹莫特(imiquimod，imq)組。普萘洛爾組小鼠背部涂抹普萘洛爾乳膏；咪喹莫特組小鼠背部涂抹咪喹莫特乳膏；正常組小鼠背部涂抹空白的乳膏基質(zhì)，涂抹面積1cm2，每天2次，每次涂抹乳膏各3mg，連續(xù)8d。咪喹莫特動(dòng)物模型組的皮膚出現(xiàn)紅斑、鱗屑，皮膚增厚；涂抹7～8d后紅斑由淡粉色的斑點(diǎn)，逐漸演變成為深紅帶褐色的斑塊，鱗屑由原來(lái)的零星，變?yōu)槌蓪訝畹拿芗癄疃逊e；皮膚肥厚出現(xiàn)明顯浸潤(rùn)的現(xiàn)象。

取制備好的咪喹莫特模型小鼠15只，隨機(jī)分為3組，每組5只：實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體組、雙氫青蒿素組(pbs溶液，劑量3mg/20g體重，等雙氫青蒿素摩爾量)、模型對(duì)照組、陰性對(duì)照組。陰性對(duì)照組小鼠背部涂抹生理鹽水；模型對(duì)照組小鼠背部不做任何處理；給藥組分別涂抹雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體和雙氫青蒿素，每天2次，每次涂抹，連續(xù)8天，觀察皮膚變化。

結(jié)果：與模型組、陰性對(duì)照組相比，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體組的皮損癥狀有明顯的減輕，小鼠背部皮膚變得光滑、細(xì)膩，鱗屑明顯減少，紅斑色澤變淡，皮膚肥厚程度減輕。雙氫青蒿素組的皮損癥狀也有改善，但不及脂質(zhì)體組明顯。結(jié)果表明，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體有最好的修復(fù)皮膚損傷的效果。

實(shí)驗(yàn)例30

雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的作用

動(dòng)物模型：大鼠2～3個(gè)月齡，體重160～180g，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，將大鼠ⅱ型膠原溶于0.1mol/l的醋酸水溶液中,在4℃下攪拌充分溶解,濃度為2g/l,置4℃冰箱過(guò)夜,再將滅活卡介苗(bcg)置于液體石蠟中,配成2g/l的完全弗氏佐劑,將二者等體積混合、乳化,制成cⅱ乳劑。將該乳劑于小鼠的尾根部皮內(nèi)注射0.1ml致炎,21天腹腔注射乳劑0.1ml作為激發(fā)注射。致炎后24d,小鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹,36d達(dá)高峰，用足爪儀測(cè)足爪變化,在致炎28d,足爪明顯大于正常對(duì)照組(p<0.01)為造模成功。

16只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、實(shí)施例11的雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體組、雙氫青蒿素組(pbs溶液，劑量3mg/20g體重，等雙氫青蒿素摩爾量)，每組4只。陰性對(duì)照組給生理鹽水；模型對(duì)照組不做任何處理；給藥組分別靜脈注射雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體和雙氫青蒿素pbs溶液，每?jī)商?次，連續(xù)20天。參考文獻(xiàn)方法(北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014,37(3)，190)，觀察大鼠足跖腫脹度，血清白細(xì)胞介素1、2(il-1、il-2)的含量和關(guān)節(jié)滑膜組織細(xì)胞凋亡抑制基因(bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)蛋白表達(dá)情況。

結(jié)果：模型大鼠足跖與踝部呈急性炎癥性紅腫，跖圍較正常組明顯增粗，血清中il-1含量升高，il-2水平降低，bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)均升高(p<0.05)。經(jīng)給藥處理后，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體組跖圍減小，血清中il-1含量降低，il-2水平升高，bcl-2蛋白表達(dá)明顯下降(p<0.05)，caspase-3蛋白表達(dá)升高(p<0.05)，雙氫青蒿素組效果稍差，但指標(biāo)優(yōu)于未給藥陽(yáng)性對(duì)照組。所以，雙氫青蒿素二倍體磷脂酰膽堿脂質(zhì)體有較好的治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。

實(shí)施例31

薄膜法制備雙氫青蒿素二倍體衍生物納米顆粒

實(shí)施例4的雙氫青蒿素二倍體絲氨醇酯鹽酸鹽、實(shí)施例5的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羥基磺酸甜菜堿、實(shí)施例6的雙氫青蒿素二甘醇酸二倍體磷脂酰膽堿、實(shí)施例7的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磺酸甜菜堿、實(shí)施例8的雙氫青蒿素二硫代二乙基氨基甲酸酯二倍體磷脂酰膽堿、實(shí)施例9的雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體-n,n-二甲胺基鹽酸鹽、實(shí)施例10的雙氫青蒿素二硫代二甘醇碳酸酯二倍體絲氨醇鹽酸鹽各10毫克分別溶于10毫升氯仿中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，然后加入10毫升pbs緩沖液(ph7.4),50℃下震蕩10分鐘，過(guò)0.22微米濾膜，得到雙氫青蒿素二倍體絲氨醇酯、雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體羥基磺酸甜菜堿、雙氫青蒿素二甘醇酸二倍體磷脂酰膽堿、雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體磺酸甜菜堿、雙氫青蒿素二硫代二乙基氨基甲酸酯二倍體磷脂酰膽堿、雙氫青蒿素二硫代二乙酸二倍體-n,n-二甲胺基、雙氫青蒿素二硫代二甘醇碳酸酯二倍體絲氨醇納米顆粒溶液。動(dòng)態(tài)光散射儀分析粒徑，均在150-300納米之間。透射電鏡測(cè)量納米顆粒的形態(tài)，均為球形結(jié)構(gòu)。

上述實(shí)施例僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出：對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和等同替換，這些對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求進(jìn)行改進(jìn)和等同替換后的技術(shù)方案，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。