一種提高青蒿花蕾的重量和青蒿素含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高青蒿花蕾的重量和青蒿素含量的方法。即采取化學(xué)調(diào)控劑， 讓花蕾膨大增重，同時(shí)提高其青蒿素含量。
【背景技術(shù)】
[0002] 青蒿（ArtemisiaeannieL.)，菊科，艾屬。學(xué)名黃花蒿，另Ij名臭蒿、香蒿、苦蒿。生 長(zhǎng)于山坡、林緣及荒地，為一年生草本。老百姓用于消暑、頭痛、退熱和感冒等的治療.提取 青蒿素則是利用青蒿地上部分葉片和未開放的花蕾，提取生產(chǎn)的有效生理活性成分如青蒿 素等產(chǎn)品，是低毒、高效、速效的抗瘧新藥（中國(guó)藥典，2005;鐘國(guó)躍，等，2007)。影響青蒿 青蒿素含量的因素有品種、土壤條件、播種時(shí)間、加工方法、收獲時(shí)間、種植密度、光照條件、 施肥水平以及青蒿植株的不同部位等。青蒿素合成和貯存的主要器官是花蕾，青蒿野生資 源豐富，但青蒿素含量不高。不同地域的青蒿品種，花蕾中青蒿素含量的變化極顯著，其中 以重慶地區(qū)酉陽(yáng)和秀山青蒿的花蕾青蒿素含量最佳。為了降低制藥廠提取青蒿素的制藥成 本，除利用傳統(tǒng)育種方法，近年來研宄利用基因工程方法提高青蒿的青蒿素含量，培育高青 蒿素含量的生物工程品種成為熱點(diǎn)。
[0003] 青蒿主要藥用成分及作用青蒿素化學(xué)結(jié)構(gòu)含有過氧基團(tuán)，是一種倍半萜內(nèi)酯， 青蒿素的多種衍生物如雙氫青蒿索（dihydroanemisin)、青蒿琥醋（anesunatc)、蒿甲醚 (ancmether)、蒿乙醚（aneether)，均是治療瘧疾的有效藥物.研宄表明，二氫青蒿素對(duì)大 鼠C6細(xì)胞有選擇性細(xì)胞毒作用.還可誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞系PC-14細(xì)胞和SPC-A-I細(xì)胞凋亡.青 蒿琥酯對(duì)人大腸癌細(xì)胞有抑制作用，能抑制大腸癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡。蒿甲醚、蒿乙醚 和青篙琥酯作用于腫瘤細(xì)胞后，表達(dá)的mRNA與其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用之間存在相關(guān)性。 結(jié)果顯示青蒿素衍生物的藥效作用方式與已知的抗癌藥物不盡一致.隨著對(duì)青蒿素類藥 物藥理作用研宄的不斷深人，已證實(shí)其具有抗纖維化、抗弓形蟲、抗瘧、抗孕、抗血吸蟲、月中 瘤細(xì)胞毒性和抗心律失常等作用.雖然該類藥物作用廣泛，但其作用機(jī)制、特點(diǎn)和應(yīng)用仍 處于初級(jí)階段，研宄表明青蒿素可通過抑制肺組織局部炎性反應(yīng)來減輕膿毒癥大鼠的肺損 傷。青蒿還含有揮發(fā)性成分，主要是揮發(fā)油包括篙酮、倍半褚醇、異篙酮、丁香烯、石竹烯氧 化物、按油精、旅烯、左旋樟腦、龍腦等成分.其中、篙酮、樟腦、丁香烯異篙酮、龍腦等含量 較高.揮發(fā)油具有抗菌消炎、解熱鎮(zhèn)痛、止咳平喘等功效。
[0004] 青蒿貓類化合物的合成主要通過MVA和DXP兩個(gè)途徑，S卩甲輕戊酸（mevalonate pathway，MVA)途徑和 1-脫氧木酮糖 5_ 磷酸合酶（l-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase，DXS)或甲基赤蘚醇 4_ 磷酸（methylerythritol4-phosphatepathway，MEP) DXP途徑。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3_methylglutaryl coenzymeAreductase，HMGR)是MVA途徑重要的限速酶，而1-脫氧木酮糖5-磷酸合 酶（l-deoxy-D-xylulose-5-phosphatesynthase，DXS)是DXP途徑的關(guān)鍵性酶。在 3 種直接前體物質(zhì)法呢基二磷酸（farnesyldiphosphate,FPP),香葉基二磷酸（geranyl diphosphate，GPP)和香葉基香葉基二磷酸（geranylgeranyldiphosphate，GGPP)合 成之后，即進(jìn)入貓稀合成過程，幾種貓稀合酶（terpenesynthase，TPS)在此過程發(fā) 揮著重要的作用。GPP在單貓稀合酶（monoteterpenesynthase)作用下生成單貓稀 (monoterpene，CIO)，F(xiàn)PP在倍半貓稀合酶（sesquiterpenesynthase，SPS)作用下生成倍 半貓?。╯esquiterpene，C15)，GGPP在二貓稀合酶（diterpenesynthase)作用下成二貓稀 (diterpene，C20) 〇
[0005] 青蒿素是治療瘧疾的最主要的有效的臨床用藥，此外，藥理學(xué)的深入研宄表明， 青蒿素及其衍生物是一種廣譜性的天然藥物。研宄表明，每年世界上有超過100萬(wàn)人死于 瘧疾。瘧原蟲耐藥性，使得抗瘧藥物氯喹的藥物效果受限，而青蒿素對(duì)瘧疾具有低毒和速 效的特點(diǎn)。目前青蒿素是公認(rèn)有效的治療瘧疾首選藥物，這使得提取青蒿素的原材料青蒿 需求量非常大。青蒿工廠化育苗可以節(jié)約種植青蒿的成本，本發(fā)明的青蒿嫁接技術(shù)讓青蒿 工廠化育苗成為可能。野生青蒿花蕾是青蒿素含量最高的器官，也是藥廠為了降低提取青 蒿素的成本，最愿意采用的原材料部分。
[0006] 然而現(xiàn)有技術(shù)中僅對(duì)青蒿植株葉片進(jìn)行調(diào)控，忽略了花蕾作為青蒿素含量最多的 器官。因此，應(yīng)當(dāng)研宄對(duì)花蕾進(jìn)行化學(xué)調(diào)控，使花蕾膨大增重同時(shí)提高其青蒿素含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是解決青蒿花蕾化學(xué)調(diào)控的問題。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的而采用的技術(shù)方案是這樣的，一種提高青蒿花蕾的重量和青蒿 素含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0009] 1)青蒿播種及管理
[0010] 1.1)青蒿采種于10月份下旬在種子達(dá)成熟期，采種后，取出種子過篩，去除粗雜 質(zhì)，洗凈，攤放在陰涼的通風(fēng)處，晾至青蒿種子種皮發(fā)黑為止。
[0011] 1. 2)青蒿種子消毒和催芽
[0012] 用50%多菌靈+1 :1500倍液的雷多米爾+0. 48%高錳酸鉀41°C溫水對(duì)播種前的 砧木種子消毒，時(shí)間2個(gè)小時(shí)，然后清水洗凈，紗布包裹在33°C恒溫箱內(nèi)催芽30小時(shí)。播種 前夜用3%過磷酸鈣加上2% (MM)2SCV液浸種20個(gè)小時(shí)，陰干。并剔除有病毒顏色不正派 發(fā)霉的空癟籽。
[0013] 1.3)青蒿播種苗圃
[0014] 選擇地形平坦、地勢(shì)較高、排水良好的開闊地，1-3度的緩坡地最佳。既宜灌水又 宜排水，土壤肥力和質(zhì)地一般選土層深厚石礫少，結(jié)構(gòu)疏松肥沃，透水性通氣性均良好的輕 壤土或者沙壤土或者壤質(zhì)沙土，作為苗圃土壤中粉粒和黏粒含量介于18% -28%。土壤酸 堿度PH6. 4-7. 6,即一般以中性、微酸性或微堿性的土壤最適宜。青蒿育苗床地應(yīng)選擇疏松 的沙壤土地塊，陽(yáng)光充足，10-20°C斜坡地排水較好。鋤地深挖翻耕15-22公分。挖小溝成 廂寬50公分，根據(jù)地形做廂長(zhǎng)，一般5米長(zhǎng)，廂面要平，潑撒糞水。育苗圃床做好后，潑施農(nóng) 家肥（每畝15-18擔(dān)），不干不濕的時(shí)候，鋤頭欽細(xì)，整理平順，噴霧器噴消毒藥液消毒，拱膜 覆蓋。用蔬菜大棚保溫，抵御倒春寒。
[0015] 1.4)青蒿播種后管理
[0016] 砧木種子出苗前溫度多18°C，同時(shí)不高于25°C，防止砧木幼苗徒長(zhǎng)，出苗前不需 要澆水，覆蓋地膜保水保溫，出苗后7天，去除地膜，適當(dāng)澆水，見干見濕，而后0. 5%的高錳 酸鉀溶液+1 %多菌靈噴霧器噴消毒藥液消毒，拱膜覆蓋。用蔬菜大棚保溫，抵御倒春寒。
[0017] 2)大田種植
[0018] 4月下旬-5月上旬幼苗長(zhǎng)出2-3個(gè)枝丫的時(shí)候，選擇健壯無病蟲的幼苗移栽到大 田，幼苗栽培適宜選擇砂壤土，陽(yáng)光充足，排水通暢。幼苗大田種植地要求翻梨耙細(xì)碎，除雜 草后，整理平順，施肥要求腐熟土雜肥或者農(nóng)家肥2200-2600kg及磷肥40-55kg，K肥5kg作 底肥，蓋土作壟。周圍開溝，溝深18-22公分，溝寬32-45公分，利于排水排澇。
[0019] 移栽前幼苗和大田均用I:1500倍液的雷多米爾+0. 5%的高錳酸鉀溶液+1 %多菌 靈消毒殺菌。幼苗苗高在15公分左右時(shí)候，幼苗苗移栽定植到大田，最好選陰雨天。幼苗 苗大田種植密度為株行距0. 8X0. 8米，每畝850-950株。種植稀密可根據(jù)土壤肥沃程度調(diào) 整，比較簡(jiǎn)單。幼苗病蟲害防治：用甲基托布津等殺菌劑藥液噴霧預(yù)防莖腐病、霜霉病、白粉 病以及炭疽病，撒施樂斯本顆粒劑或噴施敵殺死藥液防蚜蟲和小地老虎，施用吡蟲啉防治 蚜蟲。