本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域,具體涉及一種抗腫瘤活性的特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，以及制備該類化合物的方法。

背景技術(shù)：

癌癥是起源于上皮組織的惡性腫瘤，以細(xì)胞的快速增殖和轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)的疾病，死亡率居于所有疾病的首位。根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的全球最新癌癥數(shù)據(jù)，2012年全球新增1410萬(wàn)例癌癥患者，并且還將以11%的年增長(zhǎng)速度遞增。因此，癌癥治療方面的研究一直被全世界所密切關(guān)注。

目前，臨床上治療癌癥的方式主要有四種：手術(shù)治療、放射線治療、化學(xué)藥物治療和免疫治療。與其他三種方法相比，化學(xué)藥物治療一般是無(wú)痛的，并且對(duì)癌細(xì)胞的殺傷力是其他治療癌癥的手段所難以達(dá)到的。但大多數(shù)的化學(xué)藥物并不具有專一性，在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，會(huì)對(duì)腫瘤周?chē)恼＝M織細(xì)胞造成損傷，這些組織通常只有在化療后可以自行修復(fù)。所以，尋找靶向性強(qiáng)、效果顯著、安全性高的抗腫瘤藥物已經(jīng)成為全球醫(yī)藥研發(fā)者研究的熱點(diǎn)之一。

隨著腫瘤分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，對(duì)多種致癌途徑的不斷揭示，研制了多種分子靶向治療藥物。分子靶向治療是針對(duì)在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起關(guān)鍵作用的靶分子及其相關(guān)信號(hào)通路，干擾或阻斷其功效，達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的目的。藥物進(jìn)入體內(nèi)靶向性地與致癌位點(diǎn)結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞特異性死亡，不會(huì)對(duì)正常組織細(xì)胞帶來(lái)?yè)p傷。目前，已進(jìn)入臨床階段的藥物包括小分子表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factorreceptor，EGFR)抑制劑、針對(duì)某些特定細(xì)胞標(biāo)記的單克隆抗體、抗腫瘤血管生成的藥物、多靶點(diǎn)激酶抑制劑(multi-targeted tyrosine kinase inhibitors，TKIs)等?？傊S著分子生物學(xué)的發(fā)展，癌癥治療已經(jīng)進(jìn)入靶向的治療時(shí)代。因此，進(jìn)一步研發(fā)靶向性強(qiáng)、高效、低毒的新型抗癌藥物，己成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究的重要方向。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了嘧啶類抗腫瘤化合物及其制備方法，此類化合物屬于新型此類化合物屬于新型VEGFR-2抑制劑，在體外對(duì)VEGFR-2激酶抑制活性實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的抑制活性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的嘧啶類抗腫瘤化合物的結(jié)構(gòu)通式為通式Ⅰ或通式Ⅱ具體如下：

。

其中:?；禄鶊F(tuán)的位置可以是2位、3位或4位；X為氫原子、甲基、氟原子、氯原子或溴原子；芳環(huán)上取代基的位置可以是2位、3位或4位取代，取代可以是單取代或多取代。

所述的抗腫瘤化合物的結(jié)構(gòu)通式優(yōu)選為：

。

其中: X為H、Cl或CH₃。

所述的通式為I的化合物的結(jié)構(gòu)選自下述任意一種，但不僅限于以下化合物，只要化合物結(jié)構(gòu)式滿足通式，均為本發(fā)明的限定范圍。

N'-苯基-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-苯基-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-苯基-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼。

所述的抗腫瘤化合物的結(jié)構(gòu)通式優(yōu)選為：

。

其中: X為H、Cl或CH₃。

所述的通式為Ⅱ的化合物的結(jié)構(gòu)選自下述任意一種，但不僅限于以下化合物，只要化合物結(jié)構(gòu)式滿足通式Ⅳ，均為本發(fā)明的限定范圍。

N'-苯基-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-苯基-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-苯基-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(2-甲苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-甲苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

N'-(3-氯苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供所述一類制備該抗腫瘤化合物的制備方法。

所述通式Ⅰ和 Ⅱ所示化合物的制備方法，具體包括以下步驟。

步驟1、羧酸尿嘧啶通過(guò)鹵化反應(yīng)得到尿嘧啶酰氯。

步驟2、硝基苯甲酸與取代苯肼通過(guò)脫水縮合并還原得到氨基苯甲酰芳基肼。

步驟3、將步驟1所得嘧啶酰氯與2步驟所得氨基苯甲?；蓟陆?jīng)酰化反應(yīng)得到通式Ⅰ和Ⅱ所示化合物。

所述的化合物可用于制備抗腫瘤藥物。

本發(fā)明的有益效果。

本發(fā)明在設(shè)計(jì)該化合物時(shí)，對(duì)小分子抑制劑與VEGFR-2復(fù)合物結(jié)構(gòu)中配體-受體相互作用的特點(diǎn)進(jìn)行分析，提取關(guān)鍵藥效團(tuán)并進(jìn)行虛擬篩選，設(shè)計(jì)了一類全新結(jié)構(gòu)類型的VEGFR-2抑制劑。藥理研究顯示，本發(fā)明的化合物對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞、人胃癌MGC-803細(xì)胞、人白血病K562細(xì)胞和人白血病HL60細(xì)胞均有一定的抑制活性。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1。

N'-苯基-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

步驟（1）、N'-苯基-2-硝基-苯甲酰肼的制備：于100ml反應(yīng)瓶中加入鄰硝基苯甲酸(4g，23.94mmol)，1-羥基苯并三唑(3.4g，25.13mmol)，DMF 40ml，0℃條件下，緩慢加入EDCI(4.82g，25.13mmol)，攪拌半小時(shí)，移至室溫下反應(yīng)2h，即得活性酯溶液；于另一250ml反應(yīng)瓶中加入苯肼鹽酸鹽(25.13mmol)，吡啶(3.98g，50.26ml)，DMF 30ml，室溫?cái)嚢?0min，于0℃條件下，緩慢加入上述制備的活性酯溶液，反應(yīng)2h，移至室溫下反應(yīng)6h；反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液倒入水中，析出粗品，靜置30min，抽濾，得濾餅，水洗，40℃干燥過(guò)夜，得白色固體4.20g，收率：68.21%。

步驟（2）、N'-苯基-2-氨基-苯甲酰肼的制備：于250ml反應(yīng)瓶中加入鋅粉(4.07g，62.20mmol)，氯化銨(2.5g，46.65mmol)，乙醇90ml，水60ml，少量冰醋酸，50℃下反應(yīng)30min，活化鋅粉；放冷，將反應(yīng)瓶移至冷井中，溫度控制在0℃以下，緩慢加入N'-取代苯基-鄰/間/對(duì)硝基苯甲酰肼(15.55mmol)，攪拌10min，移至常溫下反應(yīng)4h，反應(yīng)完畢后，靜置半小時(shí)；將反應(yīng)液倒入20%的NaHCO₃溶液中，乙酸乙酯萃取，旋干乙酸乙酯得粗品，乙酸乙酯重結(jié)晶，得純品1.20g，收率33.96%。

步驟（3）、尿嘧啶-5-甲酰氯的制備：于100 mL反應(yīng)瓶中加入脲嘧啶-5-羧酸(2g，12.81mmol)，氯化亞砜(1.73ml，19.22mmol)，甲苯30 mL，兩滴 DMF，回流反應(yīng)24h，冷卻，抽濾，即得脲嘧啶-5-甲酰氯，白色粉末2.12g，收率94.80%。

步驟（4）、N'-苯基-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼（A1）的制備：于100ml反應(yīng)瓶中加入N'-苯基-2-氨基-苯甲酰肼(2.86 mmol)，DMF 20ml，吡啶(0.45 g，5.73 mmol),0℃下緩慢加入脲嘧啶-5-甲酰氯(0.5 g，2.86 mmol)，反應(yīng)1h，常溫下繼續(xù)反應(yīng)12h；反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)液緩慢倒入水中，析出固體，用10%的稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至2-3，抽濾得固體，用飽和Na₂CO₃溶液洗滌，得白色固體粉末，40℃干燥過(guò)夜得目標(biāo)化合物0.35g ，收率：33.44%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.63 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.34 – 8.19 (m, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.18 (dt, J= 15.6, 7.5 Hz, 3H), 6.83 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.72 (t, J = 7.3 Hz, 1H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ167.6, 164.0, 161.9, 152.9, 152.1, 149.6, 137.4, 131.3, 129.1, 128.5, 125.0, 123.7, 123.7, 119.0, 112.7, 103.8。

實(shí)施例2 。

N'-(2-甲苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以鄰甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲基苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得淺黃色固體，即為目標(biāo)化合物。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.64 (s, 3H), 10.34 (s, 1H), 8.25 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 16.6, 9.1 Hz, 2H), 7.02 (dd, J = 18.1, 7.5 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 167.5, 163.6, 161.2, 151.0, 149.3, 146.8, 137.3, 131.5, 130.4, 128.4, 126.8, 124.9, 124.0, 123.8, 122.3, 119.2, 111.4, 104.8, 17.7。

實(shí)施例3。

N'-(3-甲苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲基苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體，即為目標(biāo)化合物。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.63 (s, 2H), 10.27 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 7.76 (d, J = 40.7 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.71 – 6.50 (m, 3H), 2.20 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) d 167.5, 163.6, 161.3, 151.2, 149.6, 138.2, 137.3, 131.4, 129.0, 128.4, 124.9, 123.8, 119.9, 113.2, 110.0, 21.7。

實(shí)施例4 。

N'-(3-氯苯基)-2-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼制備方法。

以間甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲基苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體，即為目標(biāo)化合物。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.59 (s, 3H), 10.34 (s, 1H), 8.23 (dd, J = 20.5, 11.5 Hz, 3H), 7.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.86 – 6.68 (m, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 167.6, 163.7, 161.3, 151.3, 151.1, 149.7, 137.1, 133.9, 131.5, 130.8, 128.4, 125.0, 124.0, 123.9, 118.4, 111.9, 111.3, 104.5。

實(shí)施例5。

N'-苯基-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-苯基-3-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體0.38g，即為目標(biāo)化合物，收率：36.31%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.89 (s, 2H), 11.07 (s, 1H), 10.39 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.91 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.72 (t, J = 7.3 Hz, 1H)。 ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.4, 165.0, 160.9, 150.8, 149.8, 149.3, 138.7, 134.3, 129.6, 129.1, 123.0, 122.8, 119.0, 119.0, 112.7, 104.2。

實(shí)施例6 。

N'-(2-甲苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和鄰甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲基苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得黃色固體粉末0.42g ，即為目標(biāo)化合物，收率：38.65%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 10.43 (dd, J = 18.5, 2.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.12 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.82 – 7.73 (m, 1H), 7.66 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 15.9, 7.9 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 12.1, 7.4 Hz, 2H), 6.73 – 6.65 (m, 2H), 2.21 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.4, 165.0, 161.0, 151.1, 149.7, 147.1, 138.8, 134.3, 130.4, 129.6, 126.8, 123.0, 122.7, 122.3, 119.1, 119.0, 111.4, 104.1, 17.7。

實(shí)施例7 。

N'-(3-甲苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和間甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲基苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得黃色固體粉末0.46g ，即為目標(biāo)化合物，收率：42.33%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 8.30 (br. s., 1H), 7.98 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.65 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.47 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.03 (t, J=7.6 Hz, 1H), 6.61 (br. s., 1H), 6.54 (d, J=7.3 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.4, 149.9, 138.2, 134.3, 129.6, 129.0, 128.9, 123.0, 119.9, 119.0, 113.2, 113.2, 113.2, 110.0, 21.7。

實(shí)施例8。

N'-(3-氯苯基)-3-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和間氯苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-氯苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.40g ，即為目標(biāo)化合物，收率：34.93%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.33 (s, 1H), 10.44 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 11.2, 4.9 Hz, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.6, 165.7, 162.4, 151.5, 139.4, 133.9, 133.9, 130.8, 129.6, 122.9, 122.2, 118.7, 118.4, 111.9, 111.3, 102.3。

實(shí)施例9。

N'-苯基-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-苯基-4-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得目標(biāo)化合物0.41g ，收率：39.18%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ10.34 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 18.2, 7.7 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (dt, J = 15.6, 7.5 Hz, 3H), 6.82 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.50 (t, J = 7.3 Hz, 1H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ166.1, 164.9, 161.0, 150.7, 150.0, 149.3, 141.4, 129.2, 129.1, 128.9, 128.8, 128.5, 125.3, 123.2, 122.9, 119.4, 119.0, 112.8, 112.7, 104.2。

實(shí)施例10 。

N'-(2-甲苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和鄰甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲苯基)-4-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得黃色固體粉末0.41g ，即為目標(biāo)化合物，收率：37.73%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.49 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 8.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.02 (dd, J = 11.6, 7.5 Hz, 2H), 6.73 – 6.63 (m, 2H), 2.21 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.1, 147.3, 142.3, 130.3, 128.8, 127.5, 126.8, 122.3, 119.0, 111.5, 17.7。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.4, 165.0, 161.0, 151.1, 149.7, 147.1, 138.8, 134.3, 130.4, 129.6, 126.8, 123.0, 122.7, 122.3, 119.1, 119.0, 111.4, 104.1, 17.7。

實(shí)施例11。

N'-(3-甲苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和間甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲苯基)-4-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得黃色固體粉末0.39g ，即為目標(biāo)化合物，收率：35.89%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.75 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.79 – 7.67 (m, 3H), 7.02 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.63 – 6.56 (m, 2H), 6.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.7, 166.3, 164.4, 163.2, 160.1, 150.1, 143.0, 138.1, 129.0, 128.7, 126.8, 119.8, 118.6, 113.3, 110.1, 99.5, 60.1, 21.7。

實(shí)施例12 。

N'-(3-氯苯基)-4-(尿嘧啶-5-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和間氯苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲苯基)-4-硝基-苯甲酰肼，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得黃色固體粉末0.38g ，即為目標(biāo)化合物，收率：33.18%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.59 (s, 1H), 10.31 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.16 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.83 – 6.67 (m, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.3, 166.2, 163.4, 159.1, 157.3, 151.7, 142.7, 133.8, 130.8, 128.8, 126.9, 118.9, 118.3, 111.9, 111.3, 100.9。

實(shí)施例13 。

N'-苯基-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，并按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.42g ，即為目標(biāo)化合物，收率：40.13%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.14 (d, J = 83.4 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.20 (dt, J = 41.3, 7.7 Hz, 4H), 6.87 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.73 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.4, 166.2, 162.6, 151.6,149.6, 137.4, 131.3, 129.1, 128.5, 125.0, 123.7, 123.7, 119.0, 112.7, 103.8。

實(shí)施例14。

N'-(2-甲苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以鄰甲基苯肼為原料，按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲基苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.44g ，即為目標(biāo)化合物，收率：40.49%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.09 (d, J = 27.4 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.24 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.86 (s, 1H), 6.74 – 6.65 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 2.24 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 169.1, 166.9, 166.8, 166.8, 150.3, 146.6, 138.4, 132.5, 130.4, 128.9, 126.9, 123.6, 122.7, 121.0, 119.3, 119.0, 111.2, 17.8。

實(shí)施例15 。

N'-(3-甲苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲基苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體0.46g ，即為目標(biāo)化合物，收率：42.33%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.03 (s, 1H), 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.03 – 7.86 (m, 2H), 7.56 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.56 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.88 (s, 1H), 2.22 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 167.0, 149.4, 138.5, 138.3, 129.1, 128.8, 123.5, 120.8, 120.3, 113.6, 110.3, 96.3, 21.7。

實(shí)施例16。

N'-(3-氯苯基)-2-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氯苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-氯苯基)-2-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體0.36g ，即為目標(biāo)化合物，收率：31.43%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.11 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.64 (s, 2H), 7.16 (s, 2H), 6.73 (s, 4H), 6.55 (s, 1H), 6.39 (s, 2H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 169.2, 151.8, 150.3, 133.8, 132.7, 130.8, 128.3, 118.3, 116.8, 115.1, 112.8, 111.8, 111.2。

實(shí)施例17。

N'-苯基-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-苯基-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.39g ，即為目標(biāo)化合物，收率：37.26%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.35 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.04 – 7.87 (m, 2H), 7.64 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.86 – 6.65 (m, 3H), 5.87 (s, 1H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 167.4, 166.7, 163.8, 159.9, 149.8, 138.7, 134.2, 129.3, 129.1, 123.0, 122.7, 119.2, 119.0, 112.7, 95.4。

實(shí)施例18。

N'-(2-甲苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和鄰甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.33g ，即為目標(biāo)化合物，收率：30.37%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 8.30 (s, 1H), 8.08 - 8.14 (m, 1H), 7.88 - 7.98 (m, 1H), 7.65 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.46-7.53 (m, 1H), 7.28-7.30 (m, 1H), 7.03 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.70 (d, J=8.1 Hz, 1H), 2.18 - 2.22 (m, 4H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.1, 151.4, 151.2, 148.1, 143.8, 134.2, 134.0, 133.9, 133.9, 130.9, 130.9, 129.7, 124.7, 121.6, 118.6, 118.5, 112.0, 111.9, 111.4, 111.3。

實(shí)施例19。

N'-(3-甲苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和間甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.35g ，即為目標(biāo)化合物，收率：33.21%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 8.31 (d, J=7.7 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.85 - 7.94 (m, 1H), 7.75 - 7.84 (m, 1H), 7.66 - 7.74 (m, 1H), 7.62 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.46 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.03 - 7.13 (m, 1H), 6.60 - 6.66 (m, 1H), 2.14 - 2.24 (m, 4H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.0, 165.9, 161.7, 147.3, 138.2, 134.3, 129.6, 129.0, 128.9, 123.0, 119.9, 119.0, 113.2, 113.2, 113.2, 110.0, 21.7。

實(shí)施例20 。

N'-(3-氯苯基)-3-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以間氨基苯甲酸和間氯苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-氯苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.42g ，即為目標(biāo)化合物，收率：36.67%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 11.32 (s, 1H), 10.43 (br. s., 1H), 8.39 (s, 1H), 8.19 - 8.27 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.91 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.59 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.45 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.68 - 6.81 (m, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ166.1, 151.4, 151.2, 148.1, 143.8, 134.2, 134.0, 133.9, 133.9, 130.9, 130.9, 129.7, 124.7, 121.6, 118.6, 118.5, 112.0, 111.9, 111.4, 111.3。

實(shí)施例21。

N'-苯基-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸為原料按照實(shí)施例1步驟合成N'-苯基-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.38g ，即為目標(biāo)化合物，收率：36.31%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 8.40 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.26 - 8.32 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.15 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.01 - 8.06 (m, 1H), 7.97 (dd, J=13.0, 2.6 Hz, 1H), 7.86 (d, J=2.6 Hz, 1H)。 ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ150.0, 149.8, 149.7, 149.6, 129.2, 129.1, 128.9, 128.6, 128.5, 125.3, 123.2, 122.9, 119.6, 119.2, 119.1, 119.0, 112.8, 112.7。

實(shí)施例22。

N'-(2-甲苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和鄰甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(2-甲苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.38g ，即為目標(biāo)化合物，收率：34.79%。¹H NMR (DMSO-d6 ,600MHz): δ 7.85 - 7.95 (m, J=8.5 Hz, 2H), 7.70 - 7.77 (m, J=8.5 Hz, 2H), 7.21 (br. s., 1H), 6.96 - 7.05 (m, 2H), 6.58 - 6.76 (m, 2H), 2.11 - 2.24 (m, 3H)。 ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 166.0, 165.9, 161.7, 147.3, 141.3, 130.3, 128.8, 128.6, 126.8, 122.3, 119.8, 119.1, 111.5, 98.5, 17.7。

實(shí)施例23。

N'-(3-甲苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和間甲基苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-甲苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.44g ，即為目標(biāo)化合物，收率：40.49%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.86 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.60 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.60 – 6.48 (m, 6H), 5.68 (s, 2H), 2.19 (s, 3H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) d 166.7, 152.4, 150.5, 139.7, 138.0, 134.1, 133.0, 129.9, 128.9, 123.0, 121.0, 119.8, 119.6, 113.4, 113.2, 113.0, 110.0, 21.7。

實(shí)施例24 。

N'-(3-氯苯基)-4-(尿嘧啶-6-甲酰胺基)苯甲酰肼的制備方法。

以對(duì)氨基苯甲酸和間氯苯肼為原料按照實(shí)施例1步驟（1）合成N'-(3-氯苯基)-3-硝基-苯甲酰肼，再以尿嘧啶-6-甲酸為原料，按照實(shí)施例1步驟（3）合成尿嘧啶-6-甲酰氯，最后按照實(shí)施例1步驟（4）制得白色固體粉末0.40g ，即為目標(biāo)化合物，收率：34.93%。¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.36 (s, 3H), 8.20 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 26.9, 8.5 Hz, 4H), 7.16 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.83 – 6.68 (m, 3H), 5.99 (s, 1H)。¹³C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) d 166.4, 166.2, 162.6, 151.6, 141.5, 133.8, 130.8, 128.6, 128.2, 119.7, 118.4, 111.9, 111.3, 97.4。

一、體外對(duì)VEGFR-2激酶抑制活性實(shí)驗(yàn)。

利用Mobility Shift Assay的方法,在Km ATP的情況下,對(duì)體外激酶VEGFR-2進(jìn)行化合物的篩選，采用化合物staurosporine作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，每個(gè)化合物稀釋成10個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行單孔檢測(cè)。

1.化合物的稀釋。

在EP管中分別加入30pL的10 mM本發(fā)明制備的化合物,然后分別加入7μL的100% DMSO,配成100μL的2.5 mM本發(fā)明制備的化合物。將該EP管中的化合物分別轉(zhuǎn)移到96孔板第二列中,從中取20^iL加入其后孔中,同時(shí)加入60μL 100% DMSO,按此比例依次稀釋10個(gè)濃度,化合物濃度變化范圍即2.5 mM至9.5 nM。在該96孔板上每行第一，和最后兩個(gè)孔加入60μL的100% DMSO做空白對(duì)照。從上述96孔板上每孔吸取5μL加入另一 96孔板,并加入45μL超純水。再?gòu)拿靠邹D(zhuǎn)移5μL到384孔板中,即96孔板的A1中的溶液被轉(zhuǎn)移到384孔板的A1和A2兩個(gè)孔中,而A2中的溶液(化合物的最高濃度)被轉(zhuǎn)移到384孔板的A3、 A4兩個(gè)孔中,依次類推。因此,384孔反應(yīng)板中就有5μL的10% DMSO溶解的5倍化合物。

2.激酶反應(yīng)。

將激酶加入1倍激酶緩沖液,形成2.5倍酶溶液；將FAM標(biāo)記的多肽和ATP加入1倍激酶緩沖液,形成2.5倍底物溶液；在已有5μL的10% DMSO溶解的5倍化合物的384孔反應(yīng)板上加入lOμL 的2.5倍酶溶液；然后在室溫下孵育10分鐘；再向該384孔反應(yīng)板中加入10μL的2.5倍底物溶液；28℃下孵育一定時(shí)間后,加25μL終止液終止反應(yīng)。

3.抑制率計(jì)算。

從Caliper上讀取轉(zhuǎn)化率數(shù)據(jù),把轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化成抑制率數(shù)據(jù)。

Percent inhibition = (max-conversion)/(max-min)* 100，max是指DMSO對(duì)照的轉(zhuǎn)化率,min是指無(wú)酶活對(duì)照的轉(zhuǎn)化率。

XLfit后獲得IC₅₀數(shù)據(jù)。

方程如下。

。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 目標(biāo)化合物對(duì)VEGFR-2激酶抑制活性IC50 值。

其中A1-12是實(shí)施例1-12制備的化合物；B1-12是實(shí)施例13-24制備的化合物；以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明中的化合物具有較好的VEGFR-2激酶抑制活性，因而為深入研究和開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物開(kāi)辟了新的途徑。