：一種具有抗高糖損傷的王不留行黃酮苷的應(yīng)用，屬于中藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種具有抗高糖損傷活性的王不留行黃酮苷，闡明其在醫(yī)藥，食品、化妝品方面的新用途。

背景技術(shù)：
：王不留行為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccariasegetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子。王不留行中主要含有三萜皂苷、黃酮苷、環(huán)肽、類脂和脂肪酸、單糖等成分[1、李帆，梁敬鈺.王不留行的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2007，19(3)：1-5]，王不留行黃酮苷為淡黃色顆粒狀結(jié)晶，易溶于甲醇、甲醇-水、乙醇、乙醇-水、正丁醇等，難溶于氯仿、乙酸乙酯，石油醚等。據(jù)報(bào)道，王不留行黃酮苷在常溫下存在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)現(xiàn)象，當(dāng)溫度升高時(shí)該現(xiàn)象減弱甚至消失[2、孟賀，陳玉平等.王不留行中王不留行黃酮苷的分離與鑒定[J].中草藥，2011，42(5)：874-876]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷具有抗高糖損傷的作用，其結(jié)果為下圖所示：血管內(nèi)皮細(xì)胞(VascularEndothelialCell)具有多種生理功能，參與機(jī)體的凝血、免疫、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和生物活性物質(zhì)釋放等生活活動(dòng)。研究表明[3、ReinhartK，BayerO，BrunkhorstF，etal.Markersofendothelialdamageinorgandysfunctionandsepsis[J].CritCareMed，2002，30(5)：302.]，內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及功能紊亂與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)，包括高血壓、冠心病、糖尿病、慢性腎功能衰竭等。引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷是一個(gè)復(fù)雜的病理過(guò)程，參與的因素很多，如糖尿病、高血脂和高血壓等多種疾病，氧化應(yīng)激反應(yīng)等等。近年研究表明，多種中藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用，如中藥可降低血管內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化，抗氧化損傷，可調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)釋放，可抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，提高內(nèi)皮細(xì)胞的存活率，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。(1)中藥降低血管內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、抗氧化損傷：丹參酮IIA能抑制由過(guò)氧化氫損傷引起的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(CRL-1730)減少[4、王維蓉，林蓉，彭寧，等.丹參酮IIA對(duì)過(guò)氧化氫損傷人血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].中藥材，2006，29(1)：49-51]，抑制損傷的CRL-1730釋放LDH和MDA，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。復(fù)方丹參注射液共培養(yǎng)能提高過(guò)氧化氫氧化損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率，降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MDA的含量，通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[5、任香善，宋京郁，林貞花，等.復(fù)方丹參注射液對(duì)氧化損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，29(1)：30-34]。川芎嗪共培養(yǎng)可抑制由低氧缺糖引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞(EVC-340)釋放LDH增多、MDA生成增多和膜流動(dòng)性增強(qiáng)，可提高一氧化氮(NO)的水平。羥乙基葛根素對(duì)過(guò)氧化氫損傷的牛腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCMEC)的壞死和凋亡有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與其提高過(guò)氧化氫損傷的BCMEC存活率、降低LDH的釋放量、抗氧化作用有關(guān)[6、GUANGHM，ZHANGXM，LIYQ，etal.Protectiveeffectsofhydroxyethylpuerarinonculturedbovinecerebralmicrovaseularendothelialcellsdamagedbyhydrogenperoxide[J].ActaPharmSin，2005，40(3)：220-224.]。(2)中藥調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)的釋放：一些中藥的單體、有效成分及其復(fù)方制劑通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞培養(yǎng)液中的一氧化氮和一氧化氮合酶(NOs)的活性，抑制ET含量的增多，提高PGI的合成，抑制炎癥因子白細(xì)胞介素(IL)等物質(zhì)的分泌等作用來(lái)對(duì)抗病理?xiàng)l件下舒/縮血管活性物質(zhì)的比例失衡，發(fā)揮保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。(3)中藥抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，提高血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)：部分中藥可通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，提高血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的分泌等作用來(lái)發(fā)揮其保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。經(jīng)過(guò)調(diào)研，未見(jiàn)我國(guó)學(xué)者對(duì)王不留行黃酮苷具有保護(hù)內(nèi)皮免受氧化應(yīng)激損傷作用的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道(自CNKI、維普中國(guó)期刊網(wǎng))，因此王不留行黃酮苷在抗高糖損傷的藥理、藥效等研究領(lǐng)域尚處于空白階段。本研究發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷具有保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞抗高糖損傷的作用，為保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)疾病提供新的治療方法與應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：發(fā)現(xiàn)所述王不留行黃酮苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化應(yīng)激有保護(hù)作用：建立過(guò)氧化氫氧化模型，給藥后發(fā)現(xiàn)，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞活力有明顯改善。因此，所述王不留行黃酮苷可以用于防止和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化、白內(nèi)障、老年黃斑變性等由于內(nèi)源性或外源性活性氧類的侵襲而誘發(fā)的一系列疾病。發(fā)現(xiàn)所述王不留行黃酮苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞抗高糖有保護(hù)作用：建立高糖損傷模型，給藥后發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對(duì)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞活力有明顯改善。因此，所述王不留行黃酮苷是用于防止和/或治療糖尿病及其它由高糖損傷引起的相關(guān)疾病。具體實(shí)施方式：實(shí)施例1：王不留行黃酮苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)EA·hy926細(xì)胞損傷的改善選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔8000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種160μL，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，24h后隨機(jī)分組：正常組和模型組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，3個(gè)給藥組分別加入相應(yīng)濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預(yù)保護(hù)12h后，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μLH2O2，其終濃度為1000μmol/L，正常對(duì)照組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，于37℃孵育2h后，SRB法檢測(cè)細(xì)胞活力。見(jiàn)表1：表1王不留行黃酮苷對(duì)H2O2損傷的細(xì)胞活力的影響與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，過(guò)氧化氫模型損傷組細(xì)胞活力顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞活力有明顯改善。接著，選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔4×104個(gè)接種于24孔板，每孔接種800μL，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，24h后隨機(jī)分組：正常組和模型組加入100μL無(wú)血清培養(yǎng)基，三個(gè)給藥組分別加入相應(yīng)濃度等體積王不留行黃酮苷藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預(yù)保護(hù)12h后，除正常組加入100μL無(wú)血清培養(yǎng)基外，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入100μLH2O2，其終濃度為1000μmol/L，正常對(duì)照組加入100μL無(wú)血清培養(yǎng)基，于37℃孵育2h后，按說(shuō)明書要求取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH和MDA的釋放量；裂解細(xì)胞，BCA法測(cè)定蛋白含量，測(cè)定胞內(nèi)SOD活力。根據(jù)公式計(jì)算得到各組細(xì)胞的生化指標(biāo)，見(jiàn)表2：表2王不留行黃酮苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷氧化指標(biāo)的影響與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，模型組LDH和MDA水平顯著升高，SOD活性顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷中、高劑量組LDH釋放量顯著下降；而在MDA水平上，王不留行黃酮苷給藥組均能使之顯著降低；SOD活性中，和王不留行黃酮苷高劑量組均能使之顯著升高，表明王不留行黃酮苷在細(xì)胞氧化指標(biāo)上具有保護(hù)細(xì)胞抗氧化損傷的作用。實(shí)施例2：王不留行黃酮苷對(duì)高糖誘導(dǎo)EA·hy926細(xì)胞損傷的改善選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔8000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種160μL，24h后隨機(jī)分組：正常組和模型組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，3個(gè)給藥組分別加入相應(yīng)濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預(yù)保護(hù)12h后，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μL葡萄糖(終濃度180mmol/L)，正常對(duì)照組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，37℃孵育24h后，SRB法檢測(cè)細(xì)胞活力。見(jiàn)表3：表3王不留行黃酮苷對(duì)高糖損傷的細(xì)胞活力的影響與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，高糖模型損傷組細(xì)胞活力顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對(duì)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞活力有明顯改善。接著，選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔為8×104個(gè)接種于24孔板，每孔接800μL，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，24h后，隨機(jī)分6組：正常組和模型組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，陽(yáng)性對(duì)照組加入終濃度為100μmol/L的維生素C溶液(溶于無(wú)血清培養(yǎng)基中)，3個(gè)給藥組分別加入相應(yīng)濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預(yù)保護(hù)12h后，模型組、維生素C組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μL葡萄糖(終濃度180mmol/L)，正常對(duì)照組加入20μL無(wú)血清培養(yǎng)基，于37℃孵育24h后，按說(shuō)明書要求，取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH和MDA的釋放量，裂解細(xì)胞，BCA法測(cè)定蛋白含量，測(cè)定胞內(nèi)SOD活力。根據(jù)公式計(jì)算得到各組細(xì)胞的生化指標(biāo)，見(jiàn)表4：表4王不留行黃酮苷對(duì)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷氧化指標(biāo)的影響與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，模型組LDH和MDA水平顯著升高，SOD活性顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷高劑量組LDH和MDA水平顯著降低，SOD活性顯著升高；同時(shí)，王不留行黃酮苷中、低劑量組也可顯著降低細(xì)胞的MDA水平。表明王不留行黃酮苷在細(xì)胞氧化指標(biāo)上具有保護(hù)細(xì)胞抗高糖損傷的作用。本發(fā)明是結(jié)合最佳實(shí)施例進(jìn)行描述的，然而在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容后，本領(lǐng)域技術(shù)人員能領(lǐng)會(huì)在公開(kāi)的實(shí)施例中作許多改變也可獲得相同或類似的結(jié)果，而不超出本發(fā)明的構(gòu)思、精神和范圍。更具體地說(shuō)，顯然有些化學(xué)和生理性的相關(guān)試劑可替代本文所公開(kāi)的試劑而得到相同或類似的結(jié)果。所有類似的取代和修飾對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，顯然都認(rèn)為是本發(fā)明的精神、范圍和構(gòu)思及權(quán)利要求范圍內(nèi)的，即所有上述這些等價(jià)形式和所有對(duì)工藝參數(shù)的改進(jìn)和變動(dòng)都同樣屬于本發(fā)明的權(quán)利要求書所限定的范圍。