1.一種以懸浮細胞原生質(zhì)體為受體的雜交鵝掌楸高效的瞬間基因表達方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）使用QIAGEN Plasmid Midi Kits抽提純化質(zhì)粒，將其調(diào)整到1 μg/μl的濃度后，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>
2）雜交鵝掌楸懸浮系細胞原生質(zhì)體的分離純化，獲得濃度為106/mL的原生質(zhì)體；
3）取3 μg質(zhì)粒于2 mL離心管中，加入1μg PEI，并加入PBS至體系為50μL，通過超聲波超聲2分鐘充分混勻，然后室溫靜置反應(yīng)30分鐘，制備PEI/DNA基因載體復(fù)合物；然后加入200uL雜交鵝掌楸懸浮系細胞原生質(zhì)體，用手指輕輕敲打使溶液混勻，室溫靜置轉(zhuǎn)化5～10 min，然后加入800 uL W5溶液輕輕上下顛倒混勻，終止轉(zhuǎn)染反應(yīng)，1100rpm 離心2min，用槍頭吸出上清，收集轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體細胞1mL WI溶液輕輕懸浮原生質(zhì)體，并轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)板上
4）將細胞培養(yǎng)板放在23℃黑暗靜置培養(yǎng)18 h后，置于熒光顯微鏡下觀察。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以懸浮細胞為受體的雜交鵝掌楸高效的瞬間基因表達方法，其特征在于，步驟1）中，質(zhì)粒制備的具體過程為：
1）挑取平板中分散良好的單菌落，接種于含有100 mg/L氨芐青霉素的2 mL的LB培養(yǎng)基中，37℃，300 rpm，振蕩培養(yǎng)8 h；
2）取搖好的菌液，按1:500的比例加到含有100 mg/L氨芐青霉素的50 mL的LB培養(yǎng)基中，37 ℃，300 rpm，振蕩培養(yǎng)12～16 h；
3）在4℃用6000×g離心15分鐘收集菌體沉淀，完全棄除上清液；
4）用4 mL Buffer P1重懸菌體；
5）加入4 mL Buffer P2，上下顛倒4-6次完全混勻，室溫靜置裂解5 min；
6）加入4 mL 預(yù)冷的Buffer P3，立即顛倒4-6次混勻，冰浴靜置沉淀15min;
7）在4℃用≥20000×g離心30 min，將含有質(zhì)粒的上清液小心地轉(zhuǎn)移到一個新的干凈的離心管中；并在4℃用≥20000×g再次離心15 min；
8）將4 mL Buffer QBT加入到QIAGEN-tip 100離心柱上，靠重力作用待其完全流過離心柱；
9）將7）中含有質(zhì)粒的上清液立即轉(zhuǎn)移到平衡好的QIAGEN-tip 100離心柱上，依靠重力的作用將質(zhì)粒結(jié)合到離心柱的樹脂上；
10）加入2×10 mL Buffer QC 清洗離心柱；
11）加入5 mL Buffer QF將離心柱的樹脂上結(jié)合的質(zhì)粒洗脫到一個干凈的離心管中；
12）向質(zhì)粒洗脫液中加入3.5 mL室溫放置的異丙醇沉淀質(zhì)粒DNA，完全混勻后，在4 ℃用≥15000×g離心30 min沉淀質(zhì)粒DNA，小心棄除上清液；
13）用2 mL 室溫放置的70%乙醇洗滌質(zhì)粒DNA沉淀，用≥15000×g離心10 min，小心棄除上清液不要擾動離心管底部的沉淀；
14）室溫干燥5～10 min后；加入30 uL滅菌的ddH2O，溶解質(zhì)粒；
15）用瓊脂糖凝膠電泳和超微量分光光度計檢測質(zhì)粒的濃度和純度后，將其調(diào)整到1 μg/μL后，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以懸浮細胞原生質(zhì)體為受體的雜交鵝掌楸高效的瞬間基因表達方法，其特征在于，步驟2）中，于無菌操作臺上取繼代后第3-5天的處于對數(shù)生長期的懸浮系細胞于50 mL的量筒中靜置10 min，傾去所有上清液，取2 g沉淀于量筒底部的懸浮系細胞至培養(yǎng)皿中，加入10 mL原生質(zhì)體酶解液，置于28℃黑暗條件下，45 rpm輕微振蕩2 hr進行酶解；酶解完成后，加入適量W5溶液，輕輕搖晃，使用300目篩子過濾除去未酶解充分的細胞團；濾液經(jīng)1100 rpm離心2 min，棄上清液，用2 mL冰預(yù)冷的W5溶液洗原生質(zhì)體2次后，加入2 mL冰預(yù)冷的W5溶液重懸原生質(zhì)體，冰上靜置30 min，1100 rpm離心2 min，棄上清液，加入MMg溶液懸浮原生質(zhì)體，并調(diào)整原生質(zhì)體濃度至106/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的以懸浮細胞原生質(zhì)體為受體的雜交鵝掌楸高效的瞬間基因表達方法，其特征在于，酶解液的準備：稱取Cellulase R-10 0.15 g，Macerozyme R10 0.1 g和Pectolase Y-23 0.01 g 于6.25 mL 0.8 M甘露醇、2.5 mL 80 mM KCl、1 mL 200 mM MES的溶液中，攪勻，置4℃冰箱過夜充分溶解；再加入0.1 mL 1 M CaCl2、0.01 g BSA，定容至10 mL；用0.45 μm的滅菌過濾器過濾上述溶液，備用。