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一種融合蛋白、其制備方法及一種豬用口服疫苗或藥物與流程

文檔序號:11931469閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種融合蛋白,所述融合蛋白為由布魯氏菌外膜蛋白(OMP16)和豬流行性腹瀉病毒S蛋白(PEDV-S)中的全部或部分片段融合而得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述融合蛋白,其特征在于,布魯氏菌外膜蛋白片段和豬流行性腹瀉病毒S蛋白片段間用接頭連接起來;優(yōu)選所述接頭由甘氨酸和絲氨酸組成,且所述接頭的序列為GGGGSGGGGSGGGGS,其中甘氨酸端與布魯氏菌外膜蛋白片段連接,絲氨酸端與豬流行性腹瀉病毒S蛋白片段連接。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白是在包含豬流行性腹瀉病毒S蛋白493-708位氨基酸序列的片段前用接頭連接了包含布魯氏菌外膜蛋白Omp16蛋白26-168位氨基酸的片段。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID No.2所示序列,或所述融合蛋白基因的核苷酸序列包含如SEQ ID No.1所示序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的氨基酸序列包括不間斷地截取Omp16蛋白26-168位氨基酸鏈中60%以上氨基酸數(shù)形成的肽段一,且所述融合蛋白的氨基酸序列包括不間斷地截取豬流行性腹瀉病毒S蛋白493-708位氨基酸鏈中60%以上氨基酸數(shù)形成的肽段二,肽段一和肽段二間以接頭連接形成所述融合蛋白的氨基酸序列;所述融合蛋白基因的核苷酸序列為前述融合蛋白的氨基酸序列對應的核苷酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白中包括由肽段A產(chǎn)生一處或多處突變而形成的肽段B,所述肽段A為不間斷地截取豬流行性腹瀉病毒S蛋白493-708位氨基酸鏈中60%~100%氨基酸數(shù)形成的肽段,且所述多處突變所涉及的總突變氨基酸數(shù)目為肽段A總氨基酸數(shù)的10%以內(nèi);而融合蛋白基因的核苷酸序列中包括與肽段B相應的核苷酸序列。

7.一種如權(quán)利要求1~6中任意一項所述融合蛋白的制備方法,其特征在于,將所述融合蛋白的基因克隆至原核表達載體并轉(zhuǎn)化到原核表達宿主菌上,再經(jīng)純化得到融合蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法,其特征在于,所述原核表達載體為pET28a,所述原核表達宿主菌為BL21(DE3)。

9.一種豬用口服疫苗或藥物,包括如權(quán)利要求1~6中任意一項所述融合蛋白裝入乳酸菌表達載體后,將乳酸菌表達載體轉(zhuǎn)化到干酪乳桿菌標準菌株中并培養(yǎng)所述菌株而得到所述豬用口服疫苗或藥物;優(yōu)選所述乳酸菌表達載體為pVE5523,所述干酪乳桿菌標準菌株為ATCC393。

10.如權(quán)利要求9所述豬用口服疫苗或藥物在預防和治療豬流行性腹瀉中的應用。

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