專(zhuān)利名稱(chēng)：：由秋葵果實(shí)莢分離的果膠多糖的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于制備高分子量多糖的方法。本發(fā)明進(jìn)一步還涉及所述多糖在目^ff術(shù)、皮膚病學(xué)和矯形外科中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：或植入物以便保護(hù)、,和分離病弱組織的用于幫助手氺迎程的外科手術(shù)的詞語(yǔ)。粘舉f生物質(zhì)一詞非常寬泛并且包括用于諸如目樹(shù)學(xué)、艦病學(xué)和卿外科應(yīng)用的物質(zhì)。目艮科粘彈性手術(shù)裝置(0VD)通常為用于眼科學(xué)粘彈性流體的優(yōu)選術(shù)語(yǔ)(ArshinoffS.，"Newterminology:Ophthalmicviscosurgicaldevices",J.CataractRefractSurg(2000)26:627-628)。0VD通常用于多種不同的眼種術(shù)，特別是白內(nèi)障手#眼內(nèi)晶狀體的才lA。目,晶狀體的不透明性會(huì)引起白內(nèi)障，i^i常M在老年人中。白內(nèi)障手常包括除去眼睛晶狀體。當(dāng)^J10\0)用于這種手術(shù)時(shí)主要的目的在于##^!前室且因此保護(hù)角膜內(nèi)皮并且方便了手^it程。為了保護(hù)內(nèi)皮，粘彈性裝置必須具有良好的涂布性能。而且，粘彈lt物質(zhì)必須是透明的，以避免干拔規(guī)覺(jué)。為了a發(fā)A^和眼內(nèi)壓力的不可接受的增力口，該物質(zhì)U毒的A^關(guān)緊要的。理想的粘舉性物質(zhì)相對(duì)易于注射。流變'f錄假塑性影響注射的方便性。假塑4生材料的粘度隨著剪切速率的增加而斷氐。太高的粘度在高剪切速率下使得粘舉性物質(zhì)難以注射。jH^卜，在手術(shù)中夕卜科手術(shù)器械將不太容易運(yùn)動(dòng)穿過(guò)ovd。理想的粘舉性物質(zhì)不受器m出眼睛以及插^p;M眼內(nèi)晶狀體(I0L)的辦的影響。因此，最合適的物質(zhì)具有高剪切速率下的^^占度。在手術(shù)中，粘舉性物質(zhì)不育^U刀口處漏出且^該物質(zhì)在手術(shù)的不同階段都能保留，特別是當(dāng)在前室中有正壓力時(shí)。在玻^ll/f匕期間影響保留的M為粘附性。在手術(shù)期間粘性產(chǎn)品更難以##在眼睛中，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀妆?^及出來(lái)。絲的產(chǎn)品會(huì)狄的保留，但是會(huì)紐難以除去的現(xiàn)象。理想的，粘彈性物質(zhì)是易于除去的(參見(jiàn)H.B.Dick,0.Schwenn，"Viscoelasticsinophthalmicsurgery",(2000)，Springer-VerlagBerlinHeidelbergNewYork)。最初將多種多樣的聚合^i且^f勿的粘性物質(zhì)用于動(dòng)物和人類(lèi)的眼睛以滿(mǎn)足^#前室^1的目的。1934年Meyer和Palmer^y^液中分離出了透明質(zhì)酸。這一發(fā)現(xiàn)最^^致將透明質(zhì)酸才1/^'J前段手術(shù)中(參見(jiàn)以上H.B.Dick等的文獻(xiàn))。為用作OVD存在不同的粘舉f生物質(zhì)。最"fi4使用的是以下物質(zhì)透明質(zhì)酸鈉(NaHa)和羥丙甲JJf維素(HPMC)。透明質(zhì)酸鹽，也稱(chēng)為透明質(zhì)酸酯或透明質(zhì)酸，是一種從大多數(shù)脊推動(dòng)物的結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)的線(xiàn)形聚陰離子果膠狀多糖分子。這種分子由葡萄糖醛酸和N-乙?；?D-葡萄糖胺^L^。最通常的是它指的是透明質(zhì)酸鹽，因?yàn)樗鳛榫坳庪x子存在而不是以質(zhì)子化酸的形i^在。透明質(zhì)酸鹽廣泛的存在于脊堆動(dòng)物中并iL^一些菌林細(xì)胞膜的成分。在眼睛中存在高濃度的NaHa。NaHa在體內(nèi)完全代謝JMt目W^術(shù)后少量存在于前室的^體內(nèi)降解。NaHa最重要的功能為細(xì)胞和組織的穩(wěn)定化，震動(dòng)吸》1詠用于胚胎發(fā)育中(參見(jiàn)以上H.B.Dick的文獻(xiàn)以及T.C.Laurent的"Thechemistry,Biologyandmedicalapplicationsofhyaluronananditsderivatives",Wenner-Greninternationalseries,vol.72，1990)。目前，存在多種不同的用于透明質(zhì)酸(HA)提取的方法和原料。今天具有高分子量的透明質(zhì)酸可以商購(gòu)獲得并jaa常從家禽的冠中提取。還有許多來(lái)自動(dòng)物組織的其它原料用于高分子量的透明質(zhì)酸鹽，例如臍帶、玻^滑液。從研究中得到的結(jié)^4明從不同原料中分離出來(lái)的NaHa含有不同的雜質(zhì)。來(lái)自臍帶和牛玻^液的MHatb^家禽冠中分離得到的NaHa具有更高的核酸和蛋白質(zhì)^J:(Shiedlin等人，"Evaluationofhyaluronanfromdifferentsources:Streptococcuszooepidemicus，roostercomb,bovinevitreousandhumanumbilicalcord"，Biomacromolecules20045(6):2122-7)。但是關(guān)于用于醫(yī)學(xué)應(yīng)用的動(dòng)物來(lái)源的一個(gè)問(wèn)題在于導(dǎo)致il^反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。目前，市場(chǎng)考慮禽^4具有高的潛在i^K》W卜，通常使用動(dòng)物原料時(shí)，在倫理方面是復(fù)雜的。溶血,菌a和b以及枯草桿菌是商業(yè)上使用的用于透明質(zhì)酸鹽制備的細(xì)菌(參見(jiàn)wo2005098016和us4141973)。當(dāng)從艦菌^^古草桿菌的發(fā)酵制備N(xiāo)aHa時(shí)，與從家禽冠中提取的相比^^量絲I^f氐。jH^卜，核酸和蛋白質(zhì)的舍量高于從家禽冠分離的NaHa。羥丙曱基纖維素，HPMC是透明質(zhì)酸的^^^質(zhì)。實(shí)質(zhì)上甲M維素廣泛分布在例如棉花和^時(shí)中，雖然不是動(dòng)物和人類(lèi)中。羥丙曱基纖維素由甲基纖維素制備。HPMC由輕J^皮甲^J^輕丙基,J^取代的葡萄糖的長(zhǎng)^y誠(chéng)。HPMC并不存在于動(dòng)物和人類(lèi)中，因jHii^就暗示著它不是生理學(xué)上的。因此，與使用動(dòng)物原料時(shí)相比沒(méi)有倫理方面的問(wèn)題。但是，當(dāng)HPMC用作目^^占彈f生手術(shù)裝置時(shí)的一個(gè)問(wèn)題為在前室中它不能完全代謝。jtb^卜，HPMC中的植物纖維可能會(huì)導(dǎo)致炎M應(yīng)。除jtb^卜，HPMC的假塑性特;MJ^M氐于大多數(shù)疊明質(zhì)酸鈉產(chǎn)品。通常，對(duì)于透明質(zhì)^^產(chǎn)品，其在0剪切速率下的粘度比HPMC基產(chǎn)品大好膽。jH^卜，透明質(zhì)^^產(chǎn)品的M量顯著高于HPMC的分子量。手術(shù)后除去粘舉性產(chǎn)物也使困^i曽力口，特別是抽吸HPMC時(shí)。作為結(jié)論，存^it擇不包括以上指出的問(wèn)題的用于目樹(shù)學(xué)，她病學(xué)和矯形外科的粘舉性物質(zhì)的需要。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于通過(guò)提^-種制備粘舉性物質(zhì)的方法滿(mǎn);ui一需要。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提^"~種粘舉魁且*。本發(fā)明進(jìn)一步的目的在于提#~"種用于目,學(xué)、艦病學(xué)和,外科的粘萍,銀本發(fā)明的這些和其它目的通過(guò)本發(fā)明中所附權(quán)利要求所要求的方面滿(mǎn)足。因此，第一方面，本發(fā)明提^-"種用于^M4^果實(shí)莢制備^^狀多糖的方法，其包括a)^^鎮(zhèn)果實(shí)莢^f成片，b)制粉開(kāi)的果實(shí)莢和水性提取介質(zhì)的水性混合物,所述;E^具有4到12范圍內(nèi)的pH值，c)使水性混^^^#足夠;^從分開(kāi)的果實(shí)莢提^狀多糖到提取介質(zhì)中的一段時(shí)間，d)從水性混合物中分離分開(kāi)的果實(shí)莢以形成級(jí)狀多糖的水性提取物，e)向提，中加7^L，f)通itit;慮器itiJyC^^，以及g)用有機(jī)的、與水易混溶的溶劑AUt濾的提取物中沉i^斤i^^狀多糖以形成^J^狀多糖的i^定物，所iiiJD定可以^^重復(fù)一次或多次。這種方法可以以^f可步驟^0^進(jìn)行。鎮(zhèn)的，這種方法以步驟a)到g)的連續(xù)^fi^f亍。當(dāng)本方法以連續(xù)的次序進(jìn)行時(shí)，步驟d之后，通過(guò)使用在步驟d中分離的矛鎮(zhèn)果實(shí)莢重復(fù)步驟b-d—次或多次，且步驟d中獲得的兩個(gè)或多個(gè)水l"生提取物可以在步驟e之前^。來(lái)自矛鎮(zhèn)的^m狀多糖的提Wp純化中存在不同的方法。例如，US4154822描述了一種用于從植物組織中提取、純4b^沉淀多糖材料的方法，該方法包含均化的步驟，離心的幾個(gè)步驟、透析和分M^J定。在US6124248中，描述了一種從分泌粘液的植物，例如來(lái)自分類(lèi)家族的錦IW的物種中提取粘液的方法。這種粘^M作潤(rùn)滑劑和/或冷凍劑。這種方法基于多個(gè)提取循環(huán)而沒(méi)有進(jìn)一步沉淀的步驟。但是，這些方法tbm^本發(fā)明的方法更費(fèi)力。itb^卜，它們更昂貴且導(dǎo)致較少的收率。除jtb^卜，先前的方法包含在高速和例如500X:的高溫下離心的步驟，包含了失去粘舉魁方面的風(fēng)險(xiǎn)。才Nt本發(fā)明的方法解決了這些問(wèn)題。才本發(fā)明的另一方面，提供了一種結(jié)構(gòu)為—2-ct-L-Rha1-(1—4)-oc-D"GalAiv-(1—2)[P-D~Galvi-(1—4)-P-D~Galv-(1—4)]ct-L-Rha'"-(卜4)-a-D"GalA"-(1—的^J^狀多糖，該^^狀多糖具有低于1.5EU/ml的內(nèi)毒素7Jc平。矛A^是咖啡黃葵(同義詞為羊角豆)的通用名。其它通用名為蘭花指、黃矛AI^或bindi。矛A^屬于錦M。這種植物的花類(lèi)^^LEL開(kāi):^形成可食用的蒴果。矛膝的果實(shí)Ai角形、狹長(zhǎng)的、圓柱狀的蒴果，2-12英寸且含有粘液性物質(zhì)。它的粘'絲常在烹飪中用作增稠劑。在烹飪中以及醫(yī)藥用途中有^^I秋葵的長(zhǎng)期傳統(tǒng)。發(fā)明AJi膝到脈自矛鎮(zhèn)的果實(shí)莢的粘液中分離的^^狀多糖具有粘陣性質(zhì)，當(dāng)將其溶于生體沖液時(shí)，適合用作粘舉昧物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"生理緩沖液"指緩沖溶;^l一^S^加少量的酸或堿，或^#釋時(shí)能夠^^水合氫離子和氬|^艮離子^的(以及因此的pH值)的溶液。這種緩沖溶液包括^限于磷g緩沖液、鉀緩沖液、乙酸和鉤緩沖液。許多種溶液可以用作本發(fā)明中的生體沖液，JLii些都是^4頁(yè)域技權(quán)員已知的。jH^卜，本發(fā)明人iMJ見(jiàn)來(lái)自秋參的果膠狀多糖溶解于生m沖液后的流變^^"表現(xiàn)為透明質(zhì)酸的流變性質(zhì)而不是HPMC的。才財(cái)居本發(fā)明的另一方面，提供了一種包含上艦構(gòu)^l^狀多糖、7澤/或生皿沖液的醫(yī)用組^稱(chēng)。本發(fā)明的果^^狀多糖可以用作藥劑。本發(fā)明還涉;SJ斤i^^狀多糖用于制it^于目,疾病，例如白內(nèi)障，，外科疾病或皮膚病的手術(shù)處理的藥物組合物的用途。#卜，本^發(fā)明涉;sj^gji述疾病的方法。"處理"表示^f可減輕疾病癥狀，或手術(shù)中便利的處理，例如在手術(shù)中使用粘舉性產(chǎn)品。本發(fā)明的^^狀多艦可以用于外辨術(shù)、艦病學(xué)或藥物艇。本發(fā)明還涉^^狀多糖在^#:品應(yīng)用的用途，即非醫(yī)學(xué)目的。^"發(fā)明的另一方面還涉及一種用于制造^^生醫(yī)用《且*的方法。粘剩生主要M:于產(chǎn)品的高^(guò)"量。粘斷生使得溶解的^^狀多^:合用于例如目,學(xué)、外#她病學(xué)。為了獲得期望的粘舉性，襯量必須為至少1x106Da。本發(fā)明的^M狀多糖滿(mǎn);U1些標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明的前#其它方面通過(guò)以下詳細(xì)的描述#^更顯而易見(jiàn)。發(fā)明詳述子量^^狀多糖。^f鎮(zhèn)的果實(shí)莢中發(fā);了^^狀多糖:^實(shí)組織中提取并純^ii種物質(zhì)。這種物質(zhì)是穩(wěn)定的并易溶于生理鹽水。據(jù)^ii^狀多糖的分子量在l(^Da數(shù)量級(jí)(用于加強(qiáng)心,出的多糖，US4154822)。才M居以下描述的方法，通朋7^^大葵的果實(shí)莢提_得至少1xio6Da的分子量，1.5x106—6.5xl06Da。提取介質(zhì)的pH值影響^^狀多糖的產(chǎn)率。傾向堿l"生糾的pH值導(dǎo)致更高的產(chǎn)率。過(guò)高的pH值降解^^狀多糖，因此影響產(chǎn)物的分子量。提取介質(zhì)的pH做該在4-12的區(qū)間內(nèi)。M的，pH錄6-12、或8-12或10-12的區(qū)間內(nèi)。提取介質(zhì)的堿l"紐過(guò)"f^I多種堿性物質(zhì)形成，包括it^減，例如氬氧^#1,氫氧化鉀，氬氧化銨，碳酸鈉，碳酸鉀或有才減。甚至可以^^)堿性物質(zhì)的》'^^物。提f^顯度影響用于提取的時(shí)間。用于提取的溫度區(qū)間在15-40'C之間。艦用于^l^的溫度區(qū)間為19-21°C。進(jìn)e^取需要的時(shí)間取決于例如pH值，溫度，時(shí)間以及果實(shí)莢組織的特性等因素。來(lái)自矛膝薄片的^^狀多糖的擴(kuò)上去是限制因素。因此果實(shí)莢組織的尺寸和厚;1A^關(guān)重要的。提取前對(duì)矛^果實(shí)莢切片是極為重要的。薄片，提取的時(shí)間越長(zhǎng)。用于矛膝果實(shí)薄片的提取時(shí)間可以在4-48小時(shí)的范圍內(nèi)，M6-24小時(shí)。用于l-3mm厚矛AI^果實(shí)薄片的M的提取時(shí)間為24小時(shí)。但是，6小時(shí)這#[氐的提取時(shí)間也會(huì)得到非常好的結(jié)果。提取的效率^:i^午多因素，例如pH值，時(shí)間，果實(shí)材^p提取介質(zhì)的比，攪拌的力;l和液體與組織的比。通過(guò)重復(fù)一次或兩次提M:程，可^J^得盡可能高的產(chǎn)率。to的，提取重復(fù)至少一次。oH^卜，伊^^提取中緩慢微。Wdi^it為至少2rpm。關(guān)于提^^體和果實(shí)組織比例的選擇包括一些重要的方面。提:^i^體的量必須M^^P果實(shí)莢的薄片。液體的^、不能太大，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致低的果l^狀多糖的狄。提絲中的〈^1需要大量的溶M于W定。因此，矛膝果實(shí)莢和水性提取介質(zhì)之間的重量比在1:l-l:8的范圍內(nèi)。提職通過(guò)穿iti^慮器i^慮進(jìn)行純化。to的，純^it過(guò)穿過(guò)纖維素Ut濾器iti慮i^f亍。itj慮^^具有小于0.5孩沐的網(wǎng)孑LX寸，M0.22樣OMl更小。這為本發(fā)明的^^狀多糖提供了低的內(nèi)毒素值。jrt^卜，多^^且M為清澈透明的i^液，it^l于目^hf術(shù)。^^狀多糖的^錄與水^膝的溶劑中進(jìn)行，例如丙酮、乙醇、甲醇、異丙醇等。沉淀可以在酸的存在下進(jìn)行，例如乙酸、鹽酸、減黢等，或者在鹽的存在下進(jìn)行，例如氯化鈉、乙酸鈉、氯化鉀等。鹽的添加用量為至少0.5%(w/v)。^^狀多#它的鹽的^^定通常是纖維或粉末的形式。為了洗滌產(chǎn)品，可以使用與用于沉i定的溶劑相同的溶劑。其它不^^溶解產(chǎn)品的溶劑也可以用于洗滌。洗滌后，產(chǎn)品可以?xún)?chǔ)存M才;i^劑中，例如乙醇、丙酮等。還可以干燥洗涂后的產(chǎn)品，例如在真空干^Tf或干燥器中。才Mt本發(fā)明的多糖溶解于7Ml生理緩沖液中后提供實(shí)質(zhì)Jiit明的溶液。當(dāng)該多糖用作ovd時(shí)itA非常重要的，因?yàn)橥饪漆t(yī)生需要能夠在視覺(jué)上注視眼睛中的手術(shù)中M了什么。可以容易的制名^^有^^狀多#水的醫(yī)用組^4勿。它還可以含有生g沖液。此外，醫(yī)用組*可以含有0.1-20%的果1^狀多糖。它可以具有大于1.0mVkg的特性粘度n(對(duì)應(yīng)于1.0x106Da的襯量)。藥物組*。這種目,疾病可以是白內(nèi)障。醫(yī)用組賴(lài)還可以用作目^^占萍性手術(shù)裝置(0vd)。高粘度和高敝的果膠狀多糖，和由于^J^狀多糖不是動(dòng)物來(lái)源因而不容易在患者體內(nèi)引起炎癥反應(yīng)的事實(shí)，使得^^狀多^it合用作0vd。itb^卜，^^狀多糖可以用于,外辨術(shù)，或者用于藥物輸送。上述高粘途。''、'、'，、''、這種^^狀多糖或醫(yī)用組^的可以用于皮膚病學(xué)應(yīng)用，例如M病的手術(shù)處理。這種^l^狀多糖ii可以用于化妝品應(yīng)用中，例如用于減少鈹紋的目的，以及使鈹紋平滑。這種應(yīng)用是非醫(yī)學(xué)的。當(dāng)果膠狀多糖用于^^r品應(yīng)用時(shí)，它可以是俗fct品配方或產(chǎn)品的形式，例如是面部、M的形式。或者，果膠狀多糖配制成皮下施用劑，例々魂過(guò)^j)注射器的施用劑。這種組^4勿或^^狀多糖可以通過(guò)以治療有效量對(duì)需要這種處理的Ail動(dòng)物施用^1^狀多糖或醫(yī)用組合物用于影響關(guān)節(jié)的疾病處理的方法中。治療有效量意p^"足以處理具有所述疾病或病痛的病人或減輕病人癥狀的用量。效量施用^J^狀多糖用于^CJ坎病或化妝品疾病的處理方法中。治療有效量意味著足以處理具有所述疾病的病人或減輕病人癥狀的用量。itW卜，果膠狀多糖可以通過(guò)對(duì)需要這種處理的人或動(dòng)物以治療有效量施用^^狀多糖用于白內(nèi)障的處理方法中。治療有效量意PM足以處理具有所述疾病或病痛的病Ail減輕病y^癥狀的用量。才M居本發(fā)明，還提供了一種用于制^^生醫(yī)用組^^的方法，其包括a)^f膝果實(shí)莢^f成片，b)制於開(kāi)的果實(shí)莢和水f生提取介質(zhì)的水性混合物，所述:^^具有4到12范圍內(nèi)的pH值，c)使^0性濕^##足夠;^從分開(kāi)的果實(shí)英提^狀多糖的一段時(shí)間，d)^7M生》'^^中分離所述的^f的果實(shí)莢以形成^^狀多糖的^Mi提緣e)向提^4勿中加7vilL，f)通iii^慮器i^:fycw，g)用有機(jī)的、與水易濕溶的溶劑^Mat濾的提取物中沉淀所ii^狀多糖以形成^J^狀多糖的^it物，所ii^i定可以^i^重復(fù)一次或多次，以及h)將所述^^狀多糖的沉淀物溶解在水中和/或生理緩沖液中以形成粘小生醫(yī)用細(xì)L，。將與從矛膝果實(shí)莢制it^^狀多糖的方法相同的*應(yīng)用于以上方法中，例如〉'^^;的pH值^i^6到12的pH值范圍內(nèi)，更艦為8到12，JL^魅為10到12。凈M生醫(yī)用組^^可以具有大于1.0mVkg的特性粘度n。才缺一個(gè)實(shí)施方案，在上#法中，粘性醫(yī)用組^4勿為目W^占彈性手術(shù)裝置。這種物質(zhì)通itiMl腿(1D和2D)的糖分析、元素分析以及HPLC確認(rèn)。果膠狀多糖的濃度通過(guò)Kimberley和Buchanan-Smith的呻峻分沖斤(Kimberley和Buchanan-Smith,"AcolorimetricMethodfortheQuantificationofUremicAcidsandaSpecificAssayforGalacturonicAcid",AnalyticalBiochemistry201,190—196(1992))測(cè)定。蛋白質(zhì)^l:通過(guò)Lowry的^S^劑方法測(cè)定。無(wú)菌'llit過(guò)EuropeanPharmacopeia中2.6.1的方法控制。內(nèi)毒素值也采用il種方法測(cè)量。流變學(xué)^Eiti^f^^莫量G'和豐M封莫量的測(cè)定進(jìn)行。棒性粘JUD常規(guī)的方法測(cè)量。純化的纖^i^解于例如生理鹽緩沖液中。物質(zhì)易于以0.1%-20%(v/v)之間以下實(shí)施例描述了用于^^膝果實(shí)莢制備^^狀多糖的M的方法，以及這種多糖的應(yīng)用領(lǐng)域。實(shí)施例實(shí)施例1^f膝果實(shí)莢切成大約2咖的薄片。向純水中加入5升0,5M的Na0H。在室溫下(20°)在pH值為11的條件下緩慢,混合24小時(shí)。通過(guò)穿it^龍網(wǎng)i^慮將剩余的果實(shí)組織從提,中分離出來(lái)。提^4勿儲(chǔ)存在溫劾4-8'C的冷藏室內(nèi)。^!^狀多糖的^i:為56.23%，蛋白質(zhì)的^i:為0.016%，且其特性粘^3.40mVkg。^^相同的矛A^果實(shí)材^Hi行第^:提取。將3升純凈水加AJ，J果實(shí)組織中，pH值為ll。在室溫下緩隻,下提取時(shí)間為24h。因此形成的提取物完全艦理為第一提,。其^^狀多糖的恒為51.68%，蛋白質(zhì)^J:〈0.010mg/ml且特性粘^4.26m7kg。第三次提取以正好與第二次提擬目同的方法進(jìn)行。其^1^^*為47.56%，蛋白質(zhì)襯<0.010mg/m且特性粘;1^4.01ra3/kg。將因otk^得的三個(gè)提,〉、^^成一個(gè)溶液并加入0.58°/。的NaCl。溶液i^慮通過(guò)0.2jLini的纖維素過(guò)濾器。用乙醇^it^^狀多糖，因此形成白色纖維狀纖維物質(zhì)。然后在乙醇和丙酮中洗滌纖維。纖^真空干燥器中干燥48-72h。干燥纖維的總干重為10.72g。^分析纖維的^^狀多糖的襯為58%,且特性粘^4,42mVkg。蛋白質(zhì)的^<0.10mg/ml。實(shí)施例2才財(cái)居實(shí)施例i中描述的方法進(jìn)行實(shí)施例2，除了提M:程中的pH值方面。通過(guò)乙酸將其pH值調(diào)整為4-5。纖維的總干重為9.773g。^分析纖維的^1^狀多糖的^*為57.05%，蛋白質(zhì)的含量為0.36mg/g且特性粘度為3.40mVkg。實(shí)施例3才實(shí)施例1中描述的方法進(jìn)行實(shí)施例3,除了提^it程中的pH^r面。通過(guò)乙酸將其pH值調(diào)整為7-8。纖維的總干重為5.070g。^分析纖維的果l^狀多糖的含量為48.10%，蛋白質(zhì)的^*為0.084mg/g且特性粘^0.98mVkg。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>M1中可以看到pH值為11時(shí)給出了最高的^量?？傊路椒?U]于AM^果實(shí)莢中以高的產(chǎn)率4^^純化高分子量M狀多糖的直接的tt的方法。應(yīng)用領(lǐng)域?qū)嵤├?用于目辨手術(shù)的粘萍性物質(zhì)目^手術(shù)中粘彈性物質(zhì)的主要功能在于保持前室并保護(hù)內(nèi)皮免受枳^^員傷。理論上來(lái)講，其粘M高，剩余前室^JL的^l^^f。AM^^取的物質(zhì)將溶解于生理緩沖液中以形成粘舉^且，。在目財(cái)恃術(shù)期間，將粘舉魁且合物注射到其中需要的人或動(dòng)物患者的深前室中。溶液的有效^F逸常在0.55ml或0.85ml之間。為了i^L炎癥反應(yīng)，物質(zhì)是無(wú)菌的和無(wú)熱原的是極為重要的。因jH^且^的內(nèi)毒素水平低于1.5EU/ml。實(shí)施例5皮映病學(xué)當(dāng)應(yīng)用于化妝品配制劑時(shí)，來(lái)自羊角豆的提取物顯示用作用于透明質(zhì)酸合成的^tlii劑(JP2004051533,HyaluronicAcidSynthesisPromoter).與透明質(zhì)酸類(lèi)似，A^膝中提取的粘萍性物質(zhì)可應(yīng)用于她病學(xué)。然后矛鎮(zhèn)的藥物組合物可以用作抗皺紋的可注射皿。之后以有效劑量將組^;注射到患者面部的M下，以便減少可見(jiàn)的鈹玟。實(shí)施例6,外科從羊角豆提取的物質(zhì)的粘萍性可以用于潤(rùn)滑關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)，例如需要這種處理的人或動(dòng)物患者的膝蓋、髖或肩膀。來(lái)自秋葵的果膠狀多糖溶解于生理緩沖液中因此形成藥物組合物，將該藥物組*注射到患者的受影響的關(guān)節(jié)中。注射到關(guān)節(jié)中的組^的的僻^P、大約為2ml。實(shí)施例7將交聯(lián)的透明質(zhì)酸鹽用于藥物員，其特別表現(xiàn)出釋改性藥物輸送?；钚詣┍籑網(wǎng)捕獲，在那里它變ft^^文到處理的AiL動(dòng)物患者的體內(nèi)。；M^A^取的^M狀多^^襯網(wǎng)的作用，緩慢的#^文活性劑。^^]的^^狀多糖的量可以才M居個(gè)案情況由本領(lǐng)域技^A員確定。權(quán)利要求1.一種用于從秋葵果實(shí)莢制備果膠狀多糖的方法，其包括a)將秋葵果實(shí)莢分開(kāi)成片，b)制備所述分開(kāi)的果實(shí)莢和水性提取介質(zhì)的水性混合物，所述混合物具有4到12范圍內(nèi)的pH值，c)使所述水性混合物保持足夠發(fā)生從所述分開(kāi)的果實(shí)莢提取果膠狀多糖到所述提取介質(zhì)中的一段時(shí)間，d)從所述水性混合物中分離所述的分開(kāi)的果實(shí)莢以形成果膠狀多糖的水性提取物，e)向所述的提取物中加入鹽，f)通過(guò)過(guò)濾器過(guò)濾所述提取物，以及g)用有機(jī)的、與水易混溶的溶劑從所述過(guò)濾的提取物中沉淀所述果膠狀多糖以形成果膠狀多糖的沉淀物，所述沉淀可以任選重復(fù)一次或多次。2.才娥權(quán)利要求1的方法，以從步驟a)到步驟g)的連續(xù)的狄i^f亍。3.才財(cái)居權(quán)利要求2的方法，其中步驟d^，通過(guò)^^]在步驟d中分離的矛>^^果實(shí)莢重復(fù)步驟b-d—次或多次，JLt步驟d中獲得的兩個(gè)或多個(gè)提,在進(jìn)行步驟6之前^f。4.才^居前i^又利要求^-"項(xiàng)的方法，其中所iii^慮器具有低于0.5Mm的網(wǎng)孔尺寸。5.才娥前i^又利要求任一項(xiàng)的方法，其中所iiit濾器為纖維素JJt濾器。6.才M居前i^又利要求li-項(xiàng)的方法，其中所述ii;慮在具有網(wǎng)孑L尺寸^.22Mm的纖維素itii器上進(jìn)行。7.才Nt前i^又利要求^-項(xiàng)的方法，其中所^實(shí)莢和所ii7JOf生^^取介質(zhì)之間的重量H^E1:l到l:8的范圍內(nèi)。8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所i^J^生濕^在所述提取中在至少2rpm的速率下,。9.才娥前i^又利要求《i—項(xiàng)的方法，ii一步包:^將所i^i;D定^Hilf^vW才幾溶劑中的步驟。10.才M居前述片又利要求^^項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包旨^^斤i^W定物的步驟。11.才Nt前i^又利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述水性混^吻的pH值在8到12的范圍內(nèi)。12.4Nt權(quán)利要求11的方法，-其中所述7jO性;^^物的pH值在10到12的范圍內(nèi)。13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述提l^ii行4-48小時(shí)。14.4M居前ii^U'J要求^""項(xiàng)的方法，其中所述提M:程中溫度在15到4(TC的范圍內(nèi)。15.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中以至少0.5%(w/v)的量添加所述鹽。16.才緣前i^又利要求^-項(xiàng)的方法，其中所述鹽為堿金屬鹽。17.—種結(jié)構(gòu)為—2-cx-L-Rhai-(1—4)-oc-D~GalAiv-(l—2)[P-D~Galvi-(1—4)-(3+Galv-(1—4)]oc-L-Rha'"-(1—4)-ot—D~Ga1A"-(1—的果膠狀多糖，其中^^狀多糖具有低于1.5EU/ml的內(nèi)毒素水平。18.才權(quán)利要求17的果l^狀多糖，其具有至少1x106Da的平均W量。19.才權(quán)利要求17或18的^^狀多糖，其在水中或生S^沖液中溶解以后提供實(shí)質(zhì)M明的溶液。20.—種醫(yī)用組^4勿，其含有4Mt權(quán)利要求17-19^-"項(xiàng)的^^狀多糖。21.—種醫(yī)用組，，其含有4權(quán)利要求17-19^-項(xiàng)的^^狀多糖和生體沖液。22.才Nt權(quán)利要求20到21的醫(yī)用組#，^^有0.l-20。/。的果J^狀多糖。23.才M居權(quán)利要求20-22項(xiàng)的醫(yī)用紐L^^勿，其具有大于1.0mVkg的特性粘度n。24.才tt^U'J^"求17-19^-項(xiàng)的^^狀多^t用作藥劑。25.才Mt^U'J要求17-194—項(xiàng)的罘J^狀多糖用于制iM目沐疾病的手術(shù)處理的藥物組*的用途。26.才權(quán)利要求25的用途，其中所述目,疾病為白內(nèi)障。27.才M^權(quán)利要求17-19^""項(xiàng)的果l^狀多糖用于制ii^]于矯形外科疾病手術(shù)處理的藥物組合物的用途。28.4WI;i5U'J要求17-19任一項(xiàng)的果膠狀多糖用于制造用于M病手術(shù)處理的藥物組合物的用途。29.才娥權(quán)矛J^求20-23^-項(xiàng)的組^^作為目M^占彈f生手術(shù)裝置(OVD)的用途。30.才M居權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的果膠狀多糖在矯形外科手術(shù)中的用途。31.4緣^U'J要求17-19^-項(xiàng)的果J^狀多糖在藥物銜逸中的用途。32.根據(jù)權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的級(jí)狀多糖用于M病學(xué)應(yīng)用的用途。33.才M居權(quán)利要求17-19^-項(xiàng)的^^狀多糖用于4緣品應(yīng)用的用途。34.才權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的罘J^狀多糖用于目,疾病手術(shù)處理。35.才Mt權(quán)利要求34的fj^狀多糖，其中所述目樹(shù)疾病為白內(nèi)障。36.4權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的果膠狀多糖用于矯形外科疾病的手術(shù)處理。37.才M居權(quán)利要求17-19{—項(xiàng)的^^狀多糖用于M病手術(shù)處理。38.—種用于目,疾病手術(shù)處理的方法，其中才M居權(quán)利要求17-194—項(xiàng)的果膠狀多糖以治療有效的量施用于人或動(dòng)物。39.才缺權(quán)利要求38的方法，其中所述目辨疾病為白內(nèi)障。40.—種用于矯形外科疾病手術(shù)處理的方法，其中才權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的果膠狀多糖以治療有效的量施用于人或動(dòng)物。41.一種用于M病手術(shù)處理的方法，其中#^權(quán)利要求17-19^-項(xiàng)的果膠狀多糖以治療有效的量施用于人或動(dòng)物。42.—種用于制it^4生醫(yī)用組^^勿的方法，其包括a)^f膝果實(shí)莢^f成片，b)制備所述襯的果實(shí)莢和水性提取介質(zhì)的水性〉V^^，所述》1^具有4到12范圍內(nèi)的pH值，c)^^^M生混^^M^足夠;^^^斤述分開(kāi)的果實(shí)莢提M^狀多糖的一段時(shí)間，d)^^斤i^7j^生〉'^^中分離所述的^f的果實(shí)莢以形成^^狀多糖的水〖生提綠，e)向所述的提*中加/^,f)通iii^慮器i^慮所述提:W，g)用有機(jī)的、與水易混溶的溶劑^J斤述過(guò)濾的提取物中沉^;斤it^狀多糖以形成果膠狀多糖的沉淀物，所述^i定可以任選重復(fù)一次或多次，以及h)將所述果膠狀多糖的沉淀物溶解在水中和/或生理緩沖液中以形成津M生醫(yī)用纟且^吻。43.4權(quán)利要求42的方法，其中所述粘性醫(yī)用組^4勿具有大于1.0mVkg的特性粘度n。44.才娥權(quán)利要求42或43的方法，其中所^^性醫(yī)用組^^勿為目^)^占萍好術(shù)裝置。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于從秋葵果實(shí)莢制備高分子量的果膠狀多糖的方法。這種高分子量果膠狀多糖溶解于緩沖液時(shí)表現(xiàn)出粘彈性并且對(duì)例如眼外科手術(shù)、皮膚科和矯形外科都非常有益。文檔編號(hào)C08B37/00GK101443364SQ200780016728公開(kāi)日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年5月9日優(yōu)先權(quán)日2006年5月10日發(fā)明者A·黑沃爾,D·奧格博納亞,J·卡爾德隆維拉申請(qǐng)人:博胡斯生物科技股份公司