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一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法

文檔序號:3508033閱讀:356來源:國知局
專利名稱:一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,特別是涉及一種高速逆流色譜從卷柏中分離純化穗花杉雙黃酮的方法。
背景技術(shù)
穗花杉雙黃酮是一種從卷柏科植物卷柏klaginella tamariscina(Beauv.) Spring 或墊狀卷柏 Selaginella pulvinata(Hook, et Grev.)Maxim.中分離得到的雙黃酮類化合物。卷柏在我國主要分布在廣東、廣西、福建、臺灣、浙江、江蘇、江西、湖南等地。穗花杉雙黃酮具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、血管舒張等生理活性,是卷柏類藥材的特征性成分。魏麗娜建立了初步純化提取物的兩步沉淀工藝,采用了制備型高效液相色譜、硅膠柱層析和低壓柱層析對粗品進行了分離純化。在中國申請?zhí)朇N200410034002. 9公開的方法為,回流提取、真空濃縮、柱吸附純化。在中國申請?zhí)朇N200910012091.X用有機溶劑和/或水進行提取并且采用柱層析分離法進行分離得到的95%以上的穗花杉雙黃酮。在中國申請?zhí)?CN200910064058. 1公開了一種卷柏提取物及其提取方法和應(yīng)用,該方法將卷柏全草用溶劑重復(fù)冷浸2-4次,每次6-8天,過濾,合并濾液,用萃取劑萃取2-4次,得有效部位;將有效部位進行硅膠常壓柱O00-300目)層析,經(jīng)洗脫,TLC檢測合并含有穗花衫雙黃酮部分,在 Sephadex LH-20柱色譜以丙酮進行洗脫,得到單體化合物穗花衫雙黃酮,得到的穗花杉雙黃酮能降低CCl4小鼠肝損傷模型小鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)水平, 達到保肝降酶的作用。但是以上這些方法總結(jié)歸納起來主要采用柱色譜法,包括硅膠柱、 大孔吸附樹脂柱、凝膠柱,這些柱色譜使用固體填料,易產(chǎn)生不可逆吸附,樣品易損失、速度慢、分離步驟繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,將卷柏提取物采用高速逆流色譜法進行分離純化,制得高純度的穗花杉雙黃酮。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,其特征在于將卷柏加水或其他極性溶劑回流提取,所得到的提取物采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水的混合溶液作為溶劑體系,經(jīng)制備型高速逆流色譜儀進行分離純化,即得穗花杉雙黃酮。所述水或其他極性溶劑為水、甲醇、丙酮、乙醇中的一種或其中兩種的混合溶液。所述溶劑體系由石油醚、乙酸乙酯、丙酮、水組成,組成比例為 0.5-3 4-6 4-6 1-4。所述高速逆流色譜儀為制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,主機轉(zhuǎn)速為500rpm, 流速為 5. 0-10. Oml/min。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用高速逆流色譜法對卷柏提取物進行分離純化, 得到高純度的穗花杉雙黃酮,用高速逆流色譜法制備穗花杉雙黃酮可連續(xù)、高效、快速的液液分配色譜分離,分離量大、重復(fù)性好、樣品無損失、分離環(huán)境緩和、節(jié)約溶劑,且制備工藝簡單,易操作,適合于生產(chǎn)工藝放大。
具體實施例方式實施例1 (1)卷柏粗提物的制備取卷柏Ikg粉碎成粗粉,置于15L的提取罐中,用10L70%乙醇回流提取3次,每次 Ih,合并提取液,濃縮至膏狀,得到卷柏粗提物。(2)分離純化將體積比為1 :5:6: 1的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中,振搖均勻,使兩相達到平衡,靜置分層后分離,上相為固定相,下相為流動相,分別對其超聲脫氣 30分鐘后,冷卻備用;稱取IOOmg卷柏粗提物溶解于等體積的上相和下相的溶劑(各IOml) 中,過濾,得樣品溶液;采用制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,將配制好的固定相溶劑充滿聚四氟乙烯柱(柱容量為1000ml),然后開啟高速逆流色譜儀,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速為500rpm, 以5. Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi),待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣80ml ; 收集含穗花杉雙黃酮的組分峰,冷凍干燥,得到穗花杉雙黃酮固體,經(jīng)HPLC分析,其純度達到98%以上。實施例2:(1)卷柏粗提物的制備取卷柏Ikg粉碎成粗粉,置于15L的提取罐中,用9L80%丙酮回流提取2次,每次 Ih,合并提取液,濃縮至膏狀,得到卷柏粗提物。(2)分離純化將體積比為3 :4:6: 3的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中,振搖均勻,使兩相達到平衡,靜置分層后分離,上相為固定相,下相為流動相,分別對其超聲脫氣 30分鐘后,冷卻備用;稱取IOOmg卷柏粗提物溶解于等體積的上相和下相的溶劑(各IOml) 中,過濾,得樣品溶液;采用制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,將配制好的固定相溶劑充滿聚四氟乙烯柱(柱容量為1000ml),然后開啟高速逆流色譜儀,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速為500rpm, 以6. Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi),待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣80ml ; 收集含穗花杉雙黃酮的組分峰,冷凍干燥,得到穗花杉雙黃酮固體,經(jīng)HPLC分析,其純度達到98%以上。實施例3 (1)卷柏粗提物的制備取卷柏Ikg粉碎成粗粉,置于15L的提取罐中,用12L75%乙醇回流提取2次,每次 Ih,合并提取液,濃縮至膏狀,得到卷柏粗提物。(2)分離純化將體積比為0.5 :4:5: 2的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中,振搖均勻,使兩相達到平衡,靜置分層后分離,上相為固定相,下相為流動相,分別對其超聲脫氣30分鐘后,冷卻備用;稱取IOOmg卷柏粗提物溶解于等體積的上相和下相的溶劑(各 IOml)中,過濾,得樣品溶液;采用制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,將配制好的固定相溶劑充滿聚四氟乙烯柱(柱容量為1000ml),然后開啟高速逆流色譜儀,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速為 500rpm,以10. Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi),待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣80ml ;收集含穗花杉雙黃酮的組分峰,冷凍干燥,得到穗花杉雙黃酮固體,經(jīng)HPLC分析,其純度達到98%以上。實施例4 (1)卷柏粗提物的制備取卷柏Ikg粉碎成粗粉,置于15L的提取罐中,用10L60%甲醇回流提取3次,每次 Ih,合并提取液,濃縮至膏狀,得到卷柏粗提物。(2)分離純化將體積比為2 :6:4: 4的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中,振搖均勻,使兩相達到平衡,靜置分層后分離,上相為固定相,下相為流動相,分別對其超聲脫氣 30分鐘后,冷卻備用;稱取IOOmg卷柏粗提物溶解于等體積的上相和下相的溶劑(各IOml) 中,過濾,得樣品溶液;采用制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,將配制好的固定相溶劑充滿聚四氟乙烯柱(柱容量為1000ml),然后開啟高速逆流色譜儀,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速為500rpm, 以8. Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi),待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣80ml ; 收集含穗花杉雙黃酮的組分峰,冷凍干燥,得到穗花杉雙黃酮固體,經(jīng)HPLC分析,其純度達到98%以上。
權(quán)利要求
1.一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,其特征在于將卷柏加水或其他極性溶劑回流提取,所得到的提取物采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水的混合溶液作為溶劑體系,經(jīng)制備型高速逆流色譜儀進行分離純化,即得穗花杉雙黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,其特征在于溶劑體系由石油醚、乙酸乙酯、丙酮、水組成,組成比例為0.5-3 4-6 4-6 1-4。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,其特征在于所述高速逆流色譜儀為制備型TBE-1000A高速逆流色譜儀,主機轉(zhuǎn)速為500rpm,流速為5. 0-10. Oml/mirio
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域,涉及一種分離純化穗花杉雙黃酮的方法,特別是涉及一種利用高速逆流色譜法富集純化穗花杉雙黃酮的方法,其特點是采用兩相互不混溶的溶劑系統(tǒng)在支撐管內(nèi)高速行星運動的方式下進行分離純化,適用于各種型號的逆流色譜儀分離穗花杉雙黃酮,具有無不可逆吸附、樣品無損失、無污染、高效快速、回收率高、分離環(huán)境緩和、產(chǎn)品純度高和大制備量分離的優(yōu)點,適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D311/40GK102229590SQ201110117938
公開日2011年11月2日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司
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