專利名稱：一類三萜皂苷化合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類三萜皂苷化合物在抗腫瘤方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
兩頭尖為毛茛科植物多被銀蓮花(Anemone raddeana Regel.)的根莖，始載于明代劉文泰所著《本草品匯精要》。臨床上具有祛風(fēng)濕、消癰腫的作用，用于治療風(fēng)濕寒痹，四肢拘攣，癰腫潰爛等疾病，是著名中成藥“活絡(luò)丹”和“再造丸”的主要原料。新華本草綱要記載，中藥兩頭尖多分布于山東、遼寧、吉林、黑龍江等地區(qū)。該植物的化學(xué)成分有三萜、有機(jī)酸類化合物。近年來，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從兩頭尖中分離出多種三萜皂苷成分。
廖循等報(bào)道了牡丹草皂甙B，即下述式(I)中的化合物1(R1＝-Ara4-1Glc，R2＝CH2OH，R3＝CH3)(天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1999，11(4)1-6)；Jincai Lu等從兩頭尖中分離到下述式(I)中的化合物2( R2＝CH3，R3＝CH2OH)(Biochemical and Biophysical Research Communications，2001，280(3)918-922)。其中，ara為α-L-阿拉伯糖，glc為β-D-葡萄糖，rha為α-L-鼠李糖。

對(duì)上述化合物進(jìn)行進(jìn)一步研究，開發(fā)出具有治療活性的藥物一直是本領(lǐng)域的技術(shù)人員著力解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明利用上述化合物1和化合物2及其溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體及前藥作為活性成分，單獨(dú)或組合使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的用于腫瘤治療的藥物。
上述的化合物不僅是化合物本身，適當(dāng)時(shí)也可以是立體異構(gòu)體(包括光學(xué)異構(gòu)體，例如對(duì)映體和外消旋體)。下文中為簡便起見，本發(fā)明限定的任何化合物、其溶劑化物及其立體異構(gòu)體都簡稱為本發(fā)明的化合物。
在治療腫瘤中，用本發(fā)明的化合物，以常規(guī)的制劑工藝，單獨(dú)使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。如注射劑，散劑，丸劑，膠囊劑，片劑，微囊劑，軟膠囊劑，膜劑，栓劑，膏劑，酊劑，沖劑，氣霧劑等各種制劑。
本發(fā)明的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有一定的抑制人胃癌細(xì)胞株BGC-823、人紅白血病細(xì)胞株K562、鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株collon-26、人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞株9L、人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、人卵巢癌細(xì)胞株SK、人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3等腫瘤細(xì)胞的活性，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，提示可以用于腫瘤治療。


圖1為化合物1的1H-NMR圖譜圖2為化合物1的13C-NMR圖譜圖3為化合物1的ESI-MS圖譜圖4為化合物2的1H-NMR圖譜圖5為化合物2的13C-NMR圖譜圖6為化合物2的ESI-MS圖譜具體實(shí)施方式
下述實(shí)施例及實(shí)驗(yàn)例將對(duì)本發(fā)明做更詳細(xì)的說明，它們并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。除非特別說明，本發(fā)明中所有百分比均為體積百分比。
中藥兩頭尖(中國藥典)石家莊樂仁堂有限公司AB-8大孔樹脂南開大學(xué)化工廠柱層析硅膠青島海洋化工廠Sephadex LH-20安瑪西亞公司薄層層析用硅膠板及色譜純乙腈默克公司INVOA 500型核磁共振波譜儀Volian公司，TMS為內(nèi)標(biāo)ZMD Micromass型質(zhì)譜儀英國Micromass公司CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱美國SHELLAN公司PMI1640培養(yǎng)液GIBCO公司MTTSigma公司實(shí)施例化合物的制備干燥的兩頭尖藥材4.5Kg粉碎后，用80％乙醇(乙醇/水，以下同)回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑得乙醇提取浸膏580g。將其懸浮于5L水中，分別以等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別回收各部分溶劑后得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。正丁醇萃取物經(jīng)AB-8大孔樹脂柱，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇梯度洗脫，50％和70％乙醇洗脫液減壓回收乙醇后干燥得干膏，再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇-水(8∶2∶1體積比)洗脫，薄層層析檢測合并成8份，第4份再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇-水(7∶3∶1體積比)洗脫，薄層層析檢測合并成4份，其中第2份經(jīng)Sephadex LH20柱層析(60％甲醇-水)得到化合物1(24mg)，第3份經(jīng)Sephadex LH20柱層析(60％甲醇-水)化合物2(12mg)。
實(shí)驗(yàn)例MTT法體外抑瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料人胃癌細(xì)胞株BGC-823、人紅白血病細(xì)胞株K562、鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株collon-26、人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞株9L、人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、人卵巢癌細(xì)胞株SK、人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3。
采用常規(guī)MTT法。收集處于對(duì)數(shù)生長期的上述各腫瘤細(xì)胞，用0.25％的胰蛋白酶消化細(xì)胞，然后用10％的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1.0×105/ml，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100ul，分別加入不同濃度的化合物1，陰性對(duì)照藥為磷酸鹽緩沖液。每組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，于培養(yǎng)結(jié)束前4h，各培養(yǎng)孔加入10ul MTT(5mg/ml)，培養(yǎng)結(jié)束后，吸去培養(yǎng)上清，每孔加入10％的SDS 100ul，震蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解，放置過夜，最后用酶標(biāo)儀于490nm波長處測定各孔OD值，進(jìn)行細(xì)胞增殖分析，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并進(jìn)行t檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物1在極小劑量下對(duì)BGC823，K562，Collon-26，MCF-7，Hela，9L，PANC-1，SK，Bxpc-3細(xì)胞生長即有明顯的抑制作用。
在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，化合物2也取得了類似的結(jié)果?；衔?、2對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的IC50值見下表

權(quán)利要求
1.式(I)化合物、其溶劑化物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體及前藥在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。 其中R1為-Ara4-1Glc或 R2為CH2OH或CH3，R3為CH3或CH2OH。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，式(I)中R1為-Ara4-1Glc，R2為CH2OH，R3為CH3。
3.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，式(I)中R1為 R2為CH3，R3為CH2OH。
4.權(quán)利要求1-3任一所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤為胃癌、白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌、腦神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤、胰腺癌或卵巢癌。
5.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤為胃癌或白血病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類三萜皂苷化合物在醫(yī)藥方面的用途，特別是在制備抗腫瘤藥物中的新用途。該三萜皂苷類化合物具有明顯地抑制人胃癌細(xì)胞株、白血病細(xì)胞株等多種腫瘤細(xì)胞的作用。以此類化合物為活性成分，單獨(dú)或組合或與其他藥物配合使用，可以制成抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)C07J63/00GK101062045SQ20061001265
公開日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者劉剛?cè)? 任風(fēng)芝, 陳書紅, 成曉迅, 朱京童, 牛桂云, 賀建功 申請(qǐng)人:華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司