一種三萜類化合物的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)和藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種五環(huán)三萜類化合物的新的醫(yī)藥用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲型流感病毒為常見流感病毒，對人類致病性高，不僅引起季節(jié)性流感，也曾多次 引起世界性大流行，如1918年的西班牙大流感，1957年的亞洲流感，1968年的香港流感，以 及2009年4月最初從墨西哥和美國爆發(fā)并在全球范圍內(nèi)廣泛流行的甲型HlNl流感。由于甲 型流感的高致病性和高死亡率，無論是季節(jié)性還是世界性流行，都會造成嚴重的經(jīng)濟負擔(dān) 和社會恐慌。
[0003] 疫苗雖然是防止病毒傳染的最有效手段，但是由于甲型流感病毒容易變異且疫苗 生產(chǎn)需要一定周期，導(dǎo)致流感疫苗的防治作用不盡如人意。藥物治療仍然是流感治療的主 要手段，尤其是在感染初期盡早采用抗流感病毒藥物治療，對于患者尤其是老人、兒童、有 心血管等基礎(chǔ)疾病的易感人群的預(yù)后有重要意義。
[0004] 目前臨床上用于抗流感病毒的藥物有：（一）離子通道M2阻滯劑，如金剛烷胺 (Amantadine)、金剛乙胺(Rimantadine)等，此類藥臨床應(yīng)用時間較長久，耐藥毒株耐藥較 多。（二)神經(jīng)氨酸酶抑制劑，如：奧司他韋(Oseltamivir)、扎那米韋(Zanamivir )、帕拉米韋 (Peramivir)等，是目前主流的抗流感病毒藥物。雖然報道較少，但是也出現(xiàn)了流感病毒對 該類藥物耐藥的臨床報告。面對病毒的變異和耐藥，目前的抗流感病毒藥物遠未滿足臨床 的需要。因此，尋找新的有效的安全性好的抗流感病毒藥物。
[0005] 柴胡皂苷a(Saikosaponin A，SSa)、柴胡皂苷c(SSc)和柴胡皂苷d(SSd)等是從柴 胡屬植物的地下部分分離出的主要活性成分，它們都是具有環(huán)氧醚鍵的五環(huán)三萜類化合 物，其中柴胡阜苷a和柴胡阜苷d互為異構(gòu)體。Jianxin Chen等報道柴胡阜苷a體外和體內(nèi)都 具有抗甲型流感病毒的作用：其中，柴胡皂苷a抑制H1N1PR8、H9N2和H5N1流感病毒株在A549 細胞中復(fù)制的 IC5。分別為 1 .98,2.21 和 2.07 μΜ (Jianxin Chen，Mubing Duan，et al.Saikosaponin a inhibits influenza A virus replication and lung immunopathology[ J]，Oncotarget，2015,6(40) :42541-42556)。但是該篇文獻中也同時披 露柴胡皂苷a體外48小時7.6μΜ濃度下即對A549細胞表現(xiàn)出細胞毒性;而柴胡皂苷a的異構(gòu) 體柴胡皂苷d的細胞毒作用濃度更低。因此，上述研究表明，以柴胡皂苷a、d為代表的這類成 分安全劑量窗口窄，不是理想的新藥開發(fā)候選化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種三萜類化合物抗流感 病毒的醫(yī)藥新用途。相較柴胡皂苷a，該類皂苷化合物細胞毒性小或甚至沒有細胞毒性，安 全窗口大，更適合作為抗流感藥物開發(fā)的候選化合物。
[0007] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：
[0008] 一種結(jié)構(gòu)式I所示的三萜類化合物、其立體異構(gòu)體、外消旋體、溶劑化物、多晶型 體，或結(jié)構(gòu)式I所示的三萜類化合物、其立體異構(gòu)體、外消旋體、溶劑化物、多晶型體的藥學(xué) 上可以接受的鹽在制備抗流感病毒藥物中的用途，
[0009；
[0010] 其中，Ri選自H、直鏈或支鏈C1-C6烷氧基、甲?；鸵阴；械囊环N，或者選自0~2 個羥基被&-〇5脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、巖藻糖和木糖中的一種，或者選自由0~2個 羥基被C1-C 6脂肪?；〈氖罄钐?、葡萄糖、巖藻糖、木糖連接成的任意二糖、三糖或四糖； [0011 ] R2、1?5和1?6選自甲基或-CH2R 7，其中R7選自羥基、取代或未取代的直鏈或支鏈&-〇5燒 氧基、甲酰氧基或乙酰氧基；
[0012] R3和R4各自獨立地選自羥基、取代或未取代的直鏈或支鏈心-以烷氧基、甲酰氧基 或乙酰氧基。
[0013] 優(yōu)選的，R1選自H，或者0~2個羥基被&-〇4脂肪?；〈氖罄钐?、葡萄糖、巖藻糖 和木糖中的一種，或者選自由〇~2個羥基被(^-〇4脂肪?；〈氖罄钐?、葡萄糖、巖藻糖、 木糖連接成的任意二糖或三糖。
[0014] 優(yōu)選的,R1選自H，或者0~1個羥基被&-〇4脂肪?；〈氖罄钐?、葡萄糖、巖藻糖 和木糖中的一種，或者選自由〇~1個羥基被(^-〇4脂肪?；〈氖罄钐恰⑵咸烟?、巖藻糖、 木糖連接成的任意二糖或三糖。
[0015]更優(yōu)選的，R1選自H，或者0~1個羥基被心-心脂肪?；〈南率鰡翁?、二糖和三 塘中的一種或多種：
[0016]
[0017]進一步優(yōu)選的，Rl選自H、或者0~1個羥基被(^-(：4脂肪?；〈南率鰡翁?、二糖 和三塘中的一種或多種：
[0018]
[0019] 優(yōu)選的，R7選自羥基、直鏈或支鏈C1-C4烷氧基、甲酰氧基或乙酰氧基。
[0020] 更優(yōu)選的，R7選自羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、甲酰氧基或乙酰氧基。 [0021 ]優(yōu)選的，R3和R4各自獨立地選自羥基、直鏈或支鏈C1-C4烷氧基、甲酰氧基或乙酰氧 基。
[0022] 更優(yōu)選的，R3和R4各自獨立地選自羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、甲?；?或乙酰基。
[0023] 作為優(yōu)選的實施方式，所述結(jié)構(gòu)式I的三萜類化合物選自具有如下結(jié)構(gòu)的化合物 中的一種或多種：
[0024]
[0025]
[0026] 作為本發(fā)明可以替代的一種實施方式，結(jié)構(gòu)式I的三萜類化合物A環(huán)和B環(huán)還可以 是如下的結(jié)構(gòu)：
[0027]
[0028] 其中，R3和R4如前所定義，R8選自H、羥基、直鏈或支鏈C1-C 4烷氧基。
[0029] 優(yōu)選的，R8選自H、羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或異丙氧基;更選為H、羥基或甲氧 基。
[0030] 上述可以替代的實施方式中，優(yōu)選具有如下結(jié)構(gòu)的三萜類化合物：
[0032]
[0033] 本發(fā)明所提供的所述結(jié)構(gòu)式I的三萜類化合物在制備抗流感病毒藥物的用途，是 指所述結(jié)構(gòu)式I的三萜類化合物、其立體異構(gòu)體、外消旋體、溶劑化物、多晶型體，或結(jié)構(gòu)式I 所示的三萜類化合物、其立體異構(gòu)體、外消旋體、溶劑化物、多晶型體的藥學(xué)上可以接受的 鹽作為唯一活性成分，或者與其它具有抗流感病毒作用的物質(zhì)共同作為活性成分，與藥學(xué) 上可以接受的輔料經(jīng)過常規(guī)方法制備得到所述抗流感病毒藥物。
[0034] 所述其它具有抗流感病毒作用的物質(zhì)選自金剛烷胺、金剛乙胺、奧司他韋、扎那米 韋和帕拉米韋中的一種或多種。
[0035] 所述藥學(xué)上可以接受的輔料選自溶劑(如水、乙醇等）、填充劑(如淀粉、預(yù)膠化淀 粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纖維、硫酸鈣等）、粘合劑(如水、乙醇、淀粉漿、糊精、糖粉、糖漿、 膠漿、聚乙二醇、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素等）、崩解劑 (如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素 鈉、碳酸氫鈉、枸櫞酸、硬脂酸鎂、滑石粉等)和包衣材料中的一種或多種。
[0036] 所述抗流感藥物包括口服制劑和非口服制劑。所述口服制劑包括但不限于片劑、 膠囊劑、滴丸劑、混懸劑、糖漿劑、口服液和顆粒劑。所述非口服制劑包括但不限于注射劑、 噴霧劑、滴鼻劑和栓劑。
[0037] 本發(fā)明所述的三萜類化合物在體外表現(xiàn)出較強的抗流感病毒活性，其中代表性化 合物體外抑制流感病毒W(wǎng)SN33的EC5q都小于利巴韋林，而上述化合物的細胞毒性都小于柴胡 皂苷a。因此，本發(fā)明有望為臨床治療流感提供新的選擇。
【附圖說明】
[0038]以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中：
[0039]圖1顯示了實施例2的各受試化合物抗流感病毒活性，縱坐標(biāo)為相對Gluc活性，橫 坐標(biāo)為受試化合物的編號和名稱。
[0040] 圖2顯示了實施例2的各受試化合物細胞毒性，縱坐標(biāo)為相對細胞活性，橫坐標(biāo)為 受試化合物的編號和名稱。
[0041] 圖3顯示了實施例3中編號2的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒性 測定結(jié)果。其中，3A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，3B顯示的是不同濃度下細胞的 相對活性。
[0042]圖4顯示了實施例3中編號3的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒性 測定結(jié)果。其中，4A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，4B顯示的是不同濃度下細胞的 相對活性。
[0043]圖5顯示了實施例3中編號5的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒性 測定結(jié)果。其中，5A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，5B顯示的是不同濃度下細胞的 相對活性。
[0044] 圖6顯示了實施例3中編號19的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，6A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，6B顯示的是不同濃度下細胞 的相對活性。
[0045] 圖7顯示了實施例3中編號11的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，7A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，7B顯示的是不同濃度下細胞 的相對活性。
[0046] 圖8顯示了實施例3中編號15a的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，8A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，8B顯示的是不同濃度下細胞 的相對活性。
[0047]圖9顯示了實施例3中編號15b的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，9A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，9B顯示的是不同濃度下細胞 的相對活性。
[0048]圖10顯示了實施例3中編號22b的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞 毒性測定結(jié)果。其中，IOA顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，IOB顯示的是不同濃度下 細胞的相對活性。
[0049] 圖11顯示了實施例3中編號23的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，IlA顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，IlB顯示的是不同濃度下細 胞的相對活性。
[0050] 圖12顯示了實施例3中編號27的受試化合物不同濃度下抗流感病毒活性和細胞毒 性測定結(jié)果。其中，12A顯示的是不同濃度下流感病毒相對活性，12B顯示的是不同濃度下細 胞的相對活性。
【具體實施方式】
[0051] 以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實施例僅 用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0052] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的藥 材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。其中，部分試劑和中藥材購買情況 如下：
[0053] 窄竹葉柴胡（Bupleurum marginatum var · Stenophyllum(WolfT)Shan et Li)產(chǎn) 自甘肅渭源。
[0054] 二甲基亞砜（DMSO)購自Sigma公司；DMEM、含EDTA的0· 25 %胰酶、FBS購自 Invitrogen公司；Coelenterazine-h購自Promega公司；CCK-8試劑盒購自上海碧云天生物 科技有限公司。
[0055] 293T-G1UC細胞和流感病毒株A/WSN/33由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物技術(shù)研究所提供。 [0056]實施例1三萜類化合物的制備
[0057] 8.2kg窄竹葉柴胡干燥根粉碎后用10倍量加熱至沸的70 %乙醇（含0.5 %氨水)浸 泡提取2次，