一種羊毛甾烷型三萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從商陸的干燥根中分離得到的一種具有治療 急性T淋巴細胞白血病作用的羊毛留烷型三萜類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 商陸為商陸科植物商陸Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陸Phytolacca americana L.的干燥根。秋季至次春采挖，除去須根和泥沙，切成塊或片，曬干或陰干。作為 傳統(tǒng)中藥，商陸具有逐水消腫、通利二便、解毒散結(jié)的功效;主治水腫脹滿、二便不通，外治 癰腫瘡毒等。
[0003] 商陸中分離發(fā)現(xiàn)的化合物類型包括三萜皂苷類、黃酮類、酚酸類、留醇類以及多糖 類等，其中對三萜皂苷元與三萜皂苷類成分研究得較為深入。20世紀70年代至今，已從商陸 中分離得到21個三萜皂苷元，且均為齊墩果烷型，具體分為5種母核類型：商陸酸、商陸酸 30-甲酯、美商陸皂苷元、加利果酸、商陸酸G。此外，還有42種三萜皂苷配糖體從商陸中分離 得到。商陸中所含的黃酮類成分主要為黃酮醇類和黃酮木脂素類，其中以山柰酚型黃酮醇 為主。
[0004] 現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)商陸的特征性化學成分為三萜皂苷類，其顯著的生理活性已成為研 究的熱點?，F(xiàn)代藥理實驗發(fā)現(xiàn)商陸有顯著的利尿、抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤活性;臨床多 用商陸治療乙型肝炎、銀肩病、白帶癥、血小板減少性紫癜以及乳腺增生等臨床疑難病癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從商陸的干燥根中分離得到的一種具有治療急性T淋巴 細胞白血病作用的羊毛留烷型三萜類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0008]
〇
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將商陸的干燥根粉碎，用80 ~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用80%乙醇洗脫8個柱體積， 收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中80%乙醇洗脫浸膏 用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50 :1、35:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和5: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療急性T淋巴細胞白血病的藥物中的應用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020]下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023] 經(jīng)鑒定商陸為商陸科植物商陸Phytolacca acinosa Roxb.的干燥根。
[0024]制備方法：（a)將商陸的干燥根(8kg)粉碎，用85 %乙醇熱回流提取(25L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(359g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用 80%乙醇洗脫8個柱體積，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫物浸膏（138g); (c)步驟(b)中80%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個柱體積）、50:1 (8個柱體積）、35:1 (6個柱體積）、15:1 (8個柱體積)和1:1 (5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(32g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 25:1(8個柱體積）、15:1(10個柱體積)和5:1(6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3 個組分；（e)步驟(d)中組分2(17g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(39mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：白色粉末;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 519 · 2714，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C3QH4Q〇6，不飽和度為11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 · 74， m)，H-l(2.99，m)，H-2(2.38，m)，H-2(2.59，m)，H-5(2.38，m)，H-6(2.41，m)，H-6(2.65，m)，H-12(2.74，d，J=16.2)，H-12(2.89，d，J=16.2)，H-15(5.62，m)，H-16(6.25，m)，H-17(1.90， m)，H-18(1.36，s)，H-19(1.23，s)，H-20(1.86，m)，H-21(1.09，d，J=4.2)，H-22(1.75，m)，H-22(1.89，m)，H-23(5.01，s)，H-24(7.35，m)，H-27(2.06，br，s)，H-28(1.01，s)，H-29(0.98， s)，H-30(1 · 32，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS〇-d6，150MHz):35 ·4(CH2，1-C)，34· 3(CH2， 2-C)，215.5(C，3-C)，47.1(C，4-C)，50.5(CH，5-C)，37.7(CH2,6-C)，203.2(C，7-C)，151.4 (C，8-C)，150.3(C，9-C)，39.6(C，10-C)，202.2(C，11-C)，52.8(CH2，12-C)，46.9(C，13-C)， 54.6(C，14-C)，135.2(CH，15-C)，133.7(CH，16-C)，52.1(CH，17-C)，18.2(CH 3，18-C)，19.1 (CH3，19-C)，34.4(CH，20-C)，20.3(CH 3,21-C)，44.5(CH2,22-C)，67.3(CH，23-C)，145.2(CH， 24-C)，129.1(C，25-C)，170.8(C，26-C)，14.1(CH3,27-C)，20.3(CH 3,28-C)，27.4(CH3,29-C)，24.2(CH3，30-C);碳原子標記參見圖1。IR譜表明該化合物含有羥基(3442CHT 1)和α，β-不 飽和羰基（1708CHT1)基團。此外，紫外在252nm處有最大吸收波長，也表明了該化合物含有a， β-不飽和羰基結(jié)構(gòu)。1H M1R譜顯示六個單峰甲基信號[δΗ0. 98(H3-29)，1.01 (H3-28)，1.23 (出-19)，1.32(!13-30)，1.36(!13-18)，2.06(!13-27)]，一個雙峰甲基信號[5!11.09((1，了 = 4.2取，出-21)]，一個含氧次甲基信號[5!15.01(8，!1-23)]，三個烯屬次甲基質(zhì)子信號[5 !15.62(!1-15)，6.25(!1-16)，7.35(!1-24)]。 130 NMR譜顯示30個共振碳信號，七個甲基，五個亞 甲基，七個次甲基(三個烯屬次甲基，一個含氧次甲基），十一個季碳（四個羰基碳，三個烯烴 季碳）dHMBC譜中H2-1，H 2-2，H-5，Me-28和Me-29與C-3，Me-28和Me-29與C-3和C-4，以及H-5和 H2-6與C-4的相關(guān)性表明C-3為酮羰基，C-4連有兩個甲基。13C-DEPT譜中，碳信號6〇203.2(〇 7)，151 · 4(C-8)，150 · 3 (C-9)和202 · 2 (C-l 1)表明該化合物含有一個共輒系統(tǒng)(C-7/C-8/C-9/011)。兩個烯屬次甲基質(zhì)子信號[6!15.62(!1-15)和6.25(!1-16)]以及碳信號[6(：133.7((：-16)和135.2(C-15)]表明C-15和C-16之間存在雙鍵。R0ESY譜中，沒有觀察到H-24與Me-27的 相關(guān)性，表明C-24和C-25之間的雙鍵為E構(gòu)型。此外，含氧碳信號[SC67.3(C-23)]以及氫質(zhì) 子信號[δΗ5.01(Η-23)]表明C-23位連有一個羥基基團。HMBC譜中Me-27與C-24，C-25和C-26 的相關(guān)性表明C-26為羧基基團。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型 核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實 驗值基本一致(圖2)。
[0026]實施例2:化合物（I)藥理作用試驗 [0027] 一、材料和儀器
[0028]急性T淋巴細胞白血病Molt4細胞由暨南大學血液病研究所惠贈;慢性粒細胞白血 病細胞K562細胞由暨南大學由生物化學與分子生物學教研室惠贈?；衔铮↖)為自制，HPLC 歸一化純度大于98%，用DMS0分析純?nèi)芙馀渲瞥?.5yg/mL溶液備用。DMEM/F12培養(yǎng)基粉、羥 乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇藍試劑（MTT)購于美國Gibeo公司。新生牛血清 (Newborn Calf Serum)購于中國杭州四季青公司。青霉素（Penicillin)、鏈霉素 (S