專利名稱：用于治療疼痛的羥苯基－哌嗪基－甲基－苯甲酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新化合物及其制備方法、應(yīng)用以及包含所述新化合物的藥用組合物。所述新化合物用于治療、尤其是用于治療疼痛。
背景和現(xiàn)有技術(shù)已確認(rèn)δ受體在許多機體機能如循環(huán)系統(tǒng)和疼痛系統(tǒng)方面具有作用。因而δ受體配體具有用作止痛藥物和/或抗高血壓藥物的潛在用途。還證實δ受體配體具有免疫調(diào)節(jié)活性。
目前充分鑒定了至少三種不同阿片樣物質(zhì)受體(μ、δ和κ)，三種阿片樣物質(zhì)受體都主要存在于包括人類在內(nèi)的許多物種的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)。當(dāng)在各種動物模型中激活一種或多種這些受體時，可觀察到痛覺缺失。
目前可應(yīng)用的選擇性阿片樣物質(zhì)δ配體幾乎無一例外地為天然肽，不適于經(jīng)全身途徑給藥。一個非肽類δ-激動劑實例為SNC80(Bilsky E.J.等，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，273(1)，第359-366頁(1995)。但是仍然需要選擇性提高而副作用減少的選擇性δ-激動劑。
因此，本發(fā)明要解決的問題是尋找與目前的μ激動劑相比，不僅止痛效果增強而且副作用減少以及提高全身性作用的新止痛藥物。
已經(jīng)鑒定和現(xiàn)有技術(shù)領(lǐng)域已有的止痛藥物存在許多缺點，它們的藥代動力學(xué)差，當(dāng)全身途徑給藥時沒有止痛作用。同時，有資料證明，現(xiàn)有技術(shù)中所述的優(yōu)選δ激動劑化合物全身給藥時表現(xiàn)出明顯的驚厥作用。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，未專門公開但包括在WO 97/23466范圍內(nèi)的某些化合物表現(xiàn)出驚人的δ-激動劑性質(zhì)而且體內(nèi)效力增強。
發(fā)明簡述本發(fā)明的新化合物由下式I表示 其中R1選自(ii)比啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一個，其中各R1雜芳環(huán)可任選并獨立地被選自以下的1、2或3個取代基進(jìn)一步取代直鏈和支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。雜芳環(huán)上的取代可發(fā)生在所述環(huán)系的任何位置。
本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案為圖I的化合物，其中R1如上定義，并且各R1苯環(huán)和R1雜芳環(huán)可獨立地被甲基進(jìn)一步取代。
本發(fā)明的一個更優(yōu)選的實施方案為圖I的化合物，其中R1為吡啶基、噻吩基或呋喃基。
式I化合物的單獨對映體和鹽(包括對映體的鹽)也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
將外消旋混合物分離為單獨對映體在本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)是普遍已知的，可以通過例如在適當(dāng)?shù)氖中陨V柱上分離來實施。鹽的分離在本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)是普遍已知的，可以通過例如將式I的化合物在適當(dāng)?shù)娜軇┲信c所需的質(zhì)子酸混合并用本技術(shù)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法分離來進(jìn)行。式I所示化合物的鹽包括藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上不可接受的鹽。
當(dāng)雜芳環(huán)被取代時，優(yōu)選的取代基選自CF3、甲基、碘、溴、氟和氯中的任何一個。
關(guān)鍵反應(yīng)步驟方案1(參見下文)是通過使通式II (其中R為N-保護(hù)基團(tuán)如Boc或CBz，P為O-保護(hù)基團(tuán)如TBS或Me)的中間體化合物發(fā)生反應(yīng)來進(jìn)行的，首先將其N-脫保護(hù)，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和適當(dāng)?shù)膲A，式中R1如上定義，X為鹵素，優(yōu)選為溴；或者ii)通式R1-CHO的化合物和適當(dāng)?shù)倪€原劑，式中R1如上定義，進(jìn)行烷基化，在O-脫保護(hù)之后得到通式I的化合物。
用于上述標(biāo)準(zhǔn)烷基化步驟i)的適當(dāng)?shù)膲A包括但不限于三乙胺和碳酸鉀。
用于上述標(biāo)準(zhǔn)還原步驟ii)的適當(dāng)?shù)倪€原劑包括但不限于氰基硼氫化鈉和三乙酰氧基硼氫化鈉。
本發(fā)明的新化合物用于治療、尤其是用于治療各種痛癥，例如慢性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、急性疼痛、癌痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎性疼痛、偏頭痛、內(nèi)臟痛等。但所列未能盡述。
本發(fā)明化合物可用作免疫調(diào)節(jié)劑，尤其可用于自身免疫疾病(如關(guān)節(jié)炎)；皮膚移植、器官移植及類似的外科需要；膠原性疾病；各種變態(tài)反應(yīng)；用作抗腫瘤藥和抗病毒藥。
本發(fā)明化合物可用于所述范例中存在或涉及阿片樣物質(zhì)受體退變或功能障礙的疾病。包括在診斷技術(shù)和成象如正電子成象術(shù)(PET)中應(yīng)用同位素標(biāo)記形式的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物可用于治療腹瀉、抑郁癥、焦慮癥、尿失禁、各種精神疾病、咳嗽、肺水腫、各種胃腸道疾病、脊柱損傷和藥物成癮(包括治療酒精、尼古丁、阿片樣物質(zhì)和其它藥物成癮)以及交感神經(jīng)系統(tǒng)疾病如高血壓。
本發(fā)明化合物可用作在全身麻醉和監(jiān)控麻醉護(hù)理時使用的止痛藥物。常常聯(lián)合使用不同性質(zhì)的藥物，以達(dá)到維持麻醉狀態(tài)(例如記憶缺失、痛覺缺失、肌肉松弛和鎮(zhèn)靜)所需的平衡作用。聯(lián)合用藥包括吸入麻醉劑、安眠藥、抗焦慮藥、神經(jīng)肌肉阻滯劑和阿片樣物質(zhì)。
應(yīng)用任何上式I化合物生產(chǎn)治療上述任何疾病的藥物也屬于本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明再一方面是治療患有任何上述疾病的患者的治療方法，其中對需要這種治療的患者給予有效量的上式I的化合物。
本發(fā)明的再一方面是通式II的中間體， 其中R為N-脫保護(hù)基團(tuán)如Boc或CBz，P為O-脫保護(hù)基團(tuán)如TBS或Me。制備方法本發(fā)明的化合物可以通過下述方案I、II、III和IV中所述的任何一種來進(jìn)行制備。類似的步驟描述在J.March，Advanced OrganicChemlstry，4thEditlon，John Wiley and Sons(1992)；Katritsky，A.R.，Lan，X.Chem.Soc.Rev，363-373頁(1994)中，它們都通過使用被結(jié)合在此以作參考。
方案I R＝一個保護(hù)基團(tuán)如Boc、CBzP＝一個保護(hù)基團(tuán)如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定義方案II R＝一個保護(hù)基團(tuán)如Boc、CBzP＝一個保護(hù)基團(tuán)如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定義方案III R＝一個保護(hù)基團(tuán)如Boc、CBzP＝一個保護(hù)基團(tuán)如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定義方案IV R＝一個保護(hù)基團(tuán)如Boc、CBzP＝一個保護(hù)基團(tuán)如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定義方案1
方案1(續(xù)) 實施例1N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羥苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制備(i)3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯甲醛(化合物2)的制備將3-羥基苯甲醛(10g，82mmol)溶解在含咪唑(12g，180mmol)和氯化叔丁基二甲基甲硅烷(13g，90mmol)的DMF(50mL)中，在25℃攪拌12小時。經(jīng)含水后處理和硅膠層析得到化合物2(18g，93％)。
MS(EI)m/e 236，179，151。
(ii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(羥基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物4)的制備在氮氣氣氛下，將N，N-二乙基-4-碘代苯甲酰胺(3.0g，10mmol)溶解在THF(100mL)中并冷卻至-78℃。在-65℃至-78℃、10分鐘內(nèi)滴加入n-BuLi(7.7mL，1.3M己烷溶液，10mmol)。將前述步驟中制得的化合物2(1.9g，8.0mmol)滴加溶解在THF(2mL)中。30分鐘后加入NH4Cl(含水)。真空濃縮后，用EtOAc/水萃取，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)有機相，通過硅膠層析純化殘余物，得到化合物4(2.0g，60％)。
1H NMR(CDCl3)δ0(s，6H)，0.80(s，9H)，0.9-1.2(m，6H)，2.6(s，1H)，3.0-3.5(m，4H)，5.59(s，1H)，6.55-7.25(m，8H)。
(iii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(1-哌嗪基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物5)的制備將前述步驟中制得的化合物4(2.0g，4.8mmol)溶解在無水CH2Cl2(50mL)中，并在0-25℃用SOCl2(0.38mL，5.2mmol)處理30分鐘，真空蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解在MeCN(50mL)中，并在80℃與哌嗪(1.6g，19mmol)反應(yīng)12小時。經(jīng)真空濃縮和硅膠層析得到化合物5(1.2g，52％)。
1H NMR(胺，CDCl3)δ＝1.0，1.1(2m，6H)，2.2-2.4(m，4H)，2.80(m，4H)，3.15，3.45(2m，4H)，4.10(s，1H)，6.58-7.38(m，8H)。
(iv)4-{(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氫基}苯基)[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物6)將2-呋喃基甲醇(如上述方案1所示制備的化合物3)(0.29mL，3.3mmol)溶解在含三乙胺(1.0mL，7.4mmol)的CH2Cl2(5mL)中。在0℃加入甲磺酰氯(0.26mL，3.4mmol)，將該溶液在0℃攪拌15分鐘，然后加入前述步驟中制得的化合物5(0.81g，1.7mmol)。將反應(yīng)物在25℃攪拌48小時，之后真空濃縮，并經(jīng)硅膠層析，得到化合物6(0.40g，42％)。
(v) N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羥苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制備將前述步驟中制得的化合物6用DMF/2N HCl(1∶2)在25℃處理1小時。濃縮并經(jīng)反相層析，得到為二三氟乙酸鹽形式的化合物7(0.26g，54％)。
MS(ES)448.24(MH+單種同位素峰)IR(2x TFA，NaCl)3232，1674，1599，1457，1288，1199，1134(cm-1)。
1H NMR(2x TFA，CDCl3)δ＝1.1，1.2(2m，6H)，2.5-3.6(m，13H)，4.21(s，2H)，4.28(s，1H)，6.44-7.50(m，11H)。實施例2N，N-二乙基-4-{(3-羥苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二三氟乙酸鹽(化合物11)的制備由上述實施例1iii所制得的化合物5如實施例1iv和1v所述進(jìn)行制備，經(jīng)反相層析進(jìn)行純化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以堿的形式得到標(biāo)題化合物11(28mg，31％)。
MS(ES)464.10(MH+單種同位素峰)
IR(2x TFA，NaCl)3393，3180，1672，1607，1457，1289，1199，1133(cm-1)。
1H NMR(2x HCl，CDCl3)8＝1.1，1.3(m，6H)，2.4-3.6(m，13H)，4.27(s，1H)，4.35(s，2H)，6.64-7.45(m，11H)。實施例3N，N-二乙基-4-{(3-羥苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二鹽酸鹽(化合物9)的制備由上述實施例1iii所制得的化合物5如實施例1iv和1v所述進(jìn)行制備，經(jīng)反相層析進(jìn)行純化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以堿的形式得到標(biāo)題化合物8(29mg，52％)。用HCl(含水)進(jìn)行處理得到二鹽酸鹽。MS(ES)464.08(MH+單種同位素峰)IR(2x HCl，NaCl)3393，3180，1607，1457，1289(cm-1)。1H NMR(2x HCl，CDCl3)δ＝1.1，1.2(m，6H)，1.6-2.2(m，8H)，3.1-4.4(m，5H)，4.30(s，2H)，5.0(s，1H)，6.8-7.9(m，11H)。藥用組合物本發(fā)明的新化合物可口服、肌內(nèi)、皮下、局部、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸腔內(nèi)、靜脈內(nèi)、硬膜外、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)給藥及注射入關(guān)節(jié)給藥。
優(yōu)選給藥途徑為口服、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥。
當(dāng)為具體患者確定最佳個體給藥方案和劑量水平時，其劑量取決于給藥途徑、疾病嚴(yán)重性、患者的年齡和體重以及主治醫(yī)師通常考慮的其它因素。
為了用本發(fā)明化合物制備藥用組合物，藥學(xué)上可接受的惰性載體既可為固體也可為液體。固體制劑包括粉劑、片劑、分散顆粒劑、膠囊劑、扁囊劑和栓劑。
固體載體可以為能起稀釋劑、調(diào)味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑或片劑崩解劑作用的一種或多種物質(zhì)；也可為包囊材料。
如果為粉劑，載體為磨成細(xì)粉的固體，它可與磨成細(xì)粉的活性成分混合。如果為片劑，活性成分與具有必要粘合性的載體按適當(dāng)比例混合，并壓制成需要的形狀和規(guī)格。
為了制備栓劑組合物，首先熔解低熔點蠟如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物，例如通過攪拌將活性成分分散于其中。然后將熔融的均勻混合物傾入常用規(guī)格模型中，使其冷卻固化。
合適的載體有碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、乳糖、糖、果膠、糊精、淀粉、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。
鹽包括但不限于藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明發(fā)范圍內(nèi)的藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、glucaptate、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰阿散酸鹽、己基間苯二酚鹽、hydrabamine、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、溴代甲烷、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿、triethiodide、苯乍生、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、1，2-乙二胺、葡甲胺、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅。在本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)上不可接受的鹽的例子包括氫碘酸鹽(hydroiodide)、高氯酸鹽和四氟硼酸鹽。優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽和酒石酸氫鹽。特別優(yōu)選鹽酸鹽和硫酸鹽。
術(shù)語組合物包括所述活性成分與作為載體的包囊材料的制劑，在包囊材料產(chǎn)生的包囊中活性成分(與或不與其它載體一起)被所述載體所包圍，因此載體與活性成分締合。同樣，扁囊劑也包括在內(nèi)。
片劑、粉劑、扁囊劑和膠囊劑可用作適于口服給藥的固體劑型。
液體組合物包括溶液、懸浮液和乳液。適于不經(jīng)胃腸給藥的液體制劑實例有所述活性化合物的無菌水溶液或水-丙二醇溶液。也可將液體組合物制成聚乙二醇水溶液。
通過將活性組分溶解于水中并按要求加入適當(dāng)?shù)闹珓⒄{(diào)味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑，可制備口服給藥的水溶液劑。通過將磨成細(xì)粉的活性組分和粘性原料如天然合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它藥用制劑領(lǐng)域已知的懸浮劑分散于水中，可制備口服用藥的水性懸浮液。
優(yōu)選的藥用組合物是單位劑型。單位劑型時，所述組合物分成含適量活性組分的單位劑量。所述單位劑型可為包裝制劑，包裝制劑包含個別數(shù)量的所述制劑，例如片劑、膠囊劑和用管形瓶或安瓿包裝的粉劑。單位劑型也可為一粒膠囊劑、一粒扁囊劑或一片藥物本身，或者它可為適當(dāng)數(shù)量的任何這類包裝形式。生物學(xué)評估體外模型細(xì)胞培養(yǎng)A. 37℃、5％CO2下，在含有無鈣DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml遺傳霉素的搖瓶中，懸浮培養(yǎng)表達(dá)克隆的人μ、δ和κ受體和新霉素抗性的人293S細(xì)胞。
B.稱量小鼠和大鼠腦并在冰冷卻PBS(含有2.5mM EDTA，pH7.4)中沖洗。在冰冷卻的裂解緩沖液(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，臨用前加入苯基甲基磺酰氟，由在DMSO乙醇中的儲液加至0.5MmM)中用polytron勻漿鼠腦15秒(小鼠)或30秒(大鼠)。膜制備沉淀細(xì)胞，將其重懸浮于裂解緩沖液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，臨用前用0.1M PMSF的乙醇母液口入至0.1mM)，在冰上溫育15分鐘，然后用polytron勻化30秒。在4℃下以1000g(最大)旋轉(zhuǎn)該懸浮液10分鐘。將其上清液收集于冰上，重懸浮沉淀后如上旋轉(zhuǎn)。將兩次旋轉(zhuǎn)所得的上清液混合，以46,000g(最大)旋轉(zhuǎn)30分鐘。將沉淀物重懸浮于冷Tris緩沖液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，再旋轉(zhuǎn)。將最終的沉淀物重懸浮于膜緩沖液(50mM Tris、0.32M蔗糖、pH7.0)中。聚丙烯管中的等份物(1ml)冰凍于干冰/乙醇中并在使用前貯存于-70℃。用十二烷基硫酸鈉通過改良Lowry測定法測定蛋白濃度。結(jié)合測定于37℃解凍膜，并冷卻于冰上，通過25-號針頭三次，稀釋入結(jié)合緩沖液(50mM Tris、3mM MgCl2、1mg/ml BSA(Sigma A-7888)，pH7.4，稀釋液經(jīng)0.22m濾紙過濾后貯存于4℃，并向其中加入5μg/ml抑肽酶、10μM苯丁抑制素、10-μM diprotinA，無DTT)。將100μl的等份液加入冰凍的裝有100μl適當(dāng)放射性配體和100μl各種濃度的試驗化合物的12×75mm聚丙烯管中。分別測定包含和不含10μM納洛酮的總的(TB)和非特異性(NS)結(jié)合。將所述試管渦旋并于25℃溫育60-75分鐘，之后，通過GF/B濾紙(Whatman)(在0.1％聚環(huán)乙亞胺中預(yù)浸漬至少2小時)快速真空-過濾內(nèi)容物，以約12ml/管的冰冷洗滌緩沖液(50mM Tris、pH7.0、3mM MgCl2)洗滌。將濾紙在包含6-7ml閃爍液的微管中浸漬至少12小時后，用β計數(shù)器測量保留在濾紙上的放射性(dpm)。如果所述測定在96-位深孔板中進(jìn)行，過濾物過濾在96位PEI-浸漬的單濾紙(96-place PEI-soaked unifilters)上，用3×1ml洗滌緩沖液洗后，并于55℃烤箱中干燥2小時)。加入50μl MS-20閃爍液體/孔后，用TopCount(Packard)計數(shù)濾板。機能測定通過確定化合物受體絡(luò)合物激活GPT和與受體偶聯(lián)的G-蛋白的結(jié)合的程度來測定化合物的激動劑活性。在GTP結(jié)合測定中，將GTP[γ]35S與受測化合物和來自表達(dá)克隆的人阿片樣物質(zhì)受體的HEK-293S細(xì)胞的膜或來自經(jīng)勻漿的大鼠和小鼠腦的膜結(jié)合。激動劑刺激這些膜中的GTP[γ]35S結(jié)合。由劑量反應(yīng)曲線確定化合物的EC50和Emax值。通過δ拮抗劑naltrindole將劑量反應(yīng)曲線右移，以檢定激動劑活性是δ受體間介的。數(shù)據(jù)分析以TB-NS計算出特異性結(jié)合(SB)，存在各種測試化合物時的SB表示為對照SB的百分比。根據(jù)logit圖或曲線擬合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot或ReceporFit計算置換特異性結(jié)合放射性配體的配體IC50值和Hill系數(shù)(nH)。用Cheng-Prussoff方程計算Ki值。用至少三次置換曲線，反映測試配體的IC50、Ki和nH值的均值±S.E.M。生物數(shù)據(jù)列于下頁的表1中。
表1生物數(shù)據(jù) 受體飽和實驗用適當(dāng)放射性配體(濃度為0.2-5倍于估計Kδ(如果所需放射配體量適宜的話，可高達(dá)10倍)對細(xì)胞膜進(jìn)行結(jié)合試驗，從而測定放射性配體Kδ值。特異性放射性配體結(jié)合表示為pmole/mg膜蛋白。根據(jù)單點模式(one-site model)由各個試驗的特異性結(jié)合(B)放射性配體與nM游離(F)放射性配體的非線性擬合曲線獲得具體實驗的Kδ和B最大值。用Von Frey試驗測定機械-異常性疼痛用Chaplan等(1994)所述的方法在08:00至16:00之間進(jìn)行試驗。將大鼠置于金屬絲網(wǎng)底(可接觸到其爪)之上的Plexiglas籠中，讓其適應(yīng)10-15分鐘。試驗區(qū)域為左后爪的足底中部，避開較不敏感的足墊部分。用一系列呈對數(shù)遞增硬度(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，III，USA)的8 Von Frey毛發(fā)接觸其爪。從網(wǎng)狀底板的下面，垂直于足底表面使用Von Frey毛發(fā)，其用力足以使Von Frey毛發(fā)對爪產(chǎn)生輕微彎曲并保持約6-8秒。如爪急劇縮回則為陽性反應(yīng)。毛發(fā)一移開立即退縮也認(rèn)為是陽性反應(yīng)。走動是不明確的反應(yīng)，需要重復(fù)刺激。試驗方案FCA處理組在手術(shù)后第一天對動物進(jìn)行試驗。用Dixon(1980)的上-下方法確定50％縮回閾值。用2.04g(處于毛發(fā)系列刺激中間)毛發(fā)開始試驗。無論刺激強度是上升或下降，一直連續(xù)刺激。爪對最初選定的毛發(fā)刺激無回縮反應(yīng)時，就逐漸增強刺激；若爪回縮，則選擇更弱的刺激。應(yīng)用這種方法計算最優(yōu)閾值需要6個極為接近50％閾值的反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)發(fā)生第一個變化時，例如閾值首次交叉，才開始計數(shù)這6個反應(yīng)。如果閾值落在刺激范圍之外，各指定15.14(正常敏感度)或0.41(最大異常性疼痛)。用常規(guī)(X＝未縮回；O＝縮回)對所得的陽性和陰性反應(yīng)模式制表，有以下公式50％閾值(g)＝10(Xf+k)δ/10,000內(nèi)推出50％縮回閾值，其中Xf＝最后使用的Von Frey毛發(fā)值(對數(shù)單位)；k＝陽性/陰性反應(yīng)模式的表格數(shù)值(Chaplan等(1994))；而δ＝刺激的平均差值(對數(shù)單位)。此處δ＝0.224。
根據(jù)Chaplan等(1994)，將Von Frey閾值轉(zhuǎn)化為最大可能作用的百分比(％MPE)。下列方程用于計算％MPE 試驗物的給藥在Von Frey試驗前將試驗物注射(皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或口服)給予大鼠，試驗化合物給藥與Von Frey試驗時間間隔取決于所試驗的化合物的性質(zhì)。扭體試驗對小鼠腹膜內(nèi)給藥時，乙酸會引起腹部收縮。然后呈現(xiàn)典型的機體伸展。用了止痛藥后，則較少觀察到所述運動，則該藥選作潛在的良好侯選物。
只有出現(xiàn)下列情況才認(rèn)為是完全典型的扭體反射所述動物未運動；后背略微降低；雙爪足底表面可觀察到。本試驗證明本發(fā)明化合物在口服1-100μmol/kg后對扭體反應(yīng)有顯著抑制作用。(i)溶液制備乙酸(AcOH)將120μl乙酸加入19.88ml的蒸餾水中以得到最終體積為20ml、最終濃度為0.6％的AcOH。再將該溶液混合(渦旋)以備注射用。
化合物(藥物)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備各化合物并溶解于最適當(dāng)?shù)妮d體中。(ii)溶液的給藥在試驗前20、30或40分鐘(根據(jù)化合物的種類及其特性)，以10ml/kg(考慮平均小鼠體重)將所述化合物(藥物)經(jīng)口、腹膜內(nèi)(i.p.)、皮下(s.c.)或靜脈內(nèi)(i.v.)給藥。當(dāng)所述化合物中樞性腦室內(nèi)(i.c.v.)或鞘內(nèi)(i.t.)給藥時，給藥量為5μl。
臨試驗前以10ml/Kg(考慮平均小鼠體重)AcOH在兩側(cè)腹膜內(nèi)(i.p.)給藥。(iii)試驗觀察所述動物(小鼠)20分鐘，記錄(扭體反射)發(fā)生次數(shù)，實驗結(jié)束時進(jìn)行數(shù)據(jù)匯編。將小鼠放置在帶接觸襯墊(bedding)的單個“鞋盒”狀籠中。通常同時觀察4只小鼠一只對照，三只給予藥物。
權(quán)利要求
1.一種式I的化合物及其對映體和鹽， 其中R1選自(ii)吡啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一個，其中各R1雜芳環(huán)可獨立地被選自以下的1、2或3個取代基進(jìn)一步取代直鏈和支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。
2.一種權(quán)利要求1的化合物，其中各R1雜芳環(huán)可獨立地被選自以下的1、2或3個取代基進(jìn)一步取代甲基、CF3、氯、氟、溴和碘。
3.一種權(quán)利要求1的化合物，其中各R1苯環(huán)和R1雜芳環(huán)可獨立地被甲基進(jìn)一步取代。
4.一種權(quán)利要求1的化合物，其中R1為吡啶基、噻吩基或呋喃基。
5.一種權(quán)利要求1或2的化合物，它選自N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羥苯基)甲基]苯甲酰胺；N，N-二乙基-4-{(3-羥苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺；和N，N-二乙基-4-{(3-羥苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基)苯甲酰胺中的任一種。
6.一種前述權(quán)利要求中任一項的化合物，它為其鹽酸鹽、二鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、二三氟乙酸鹽或檸檬酸鹽的形式。
7.一種制備式I化合物的方法，它包括下述反應(yīng)，即使通式II的化合物發(fā)生反應(yīng)， 其中R為N-保護(hù)基團(tuán)，P為O-保護(hù)基團(tuán)如TBS或Me，首先將其N-脫保護(hù)，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和適當(dāng)?shù)膲A；其中R1如權(quán)利要求1的定義，X為鹵素，或者ii)通式R1-CHO的化合物和適當(dāng)?shù)倪€原劑，其中R1如權(quán)利要求1的定義，進(jìn)行烷基化，并在O-脫保護(hù)之后得到通式I的化合物。
8.一種用于治療的權(quán)利要求1的化合物。
9.一種權(quán)利要求8的化合物，其中所述治療為疼痛治療。
10.一種權(quán)利要求8的化合物，其中所述治療針對胃腸道疾病。
11.一種權(quán)利要求8的化合物，其中所述治療針對脊柱損傷。
12.一種權(quán)利要求8的化合物，其中所述治療針對交感神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
13.權(quán)利要求1的式I所示化合物用于制備治療疼痛、胃腸道疾病或脊柱損傷的藥物的應(yīng)用。
14.一種藥用組合物，它包含作為活性成分的權(quán)利要求1的式I所示化合物以及藥理學(xué)和藥學(xué)上可接受的載體。
15.一種治療疼痛的方法，其中將有效量的權(quán)利要求1的式I所示化合物給予需要治療疼痛的患者。
16.一種治療胃腸道疾病的方法，其中將有效量的權(quán)利要求1的式I所示化合物給予患有所述胃腸道疾病的患者。
17.一種治療脊柱損傷的方法，其中將有效量的權(quán)利要求1的式I所示化合物給予患有所述脊柱損傷的患者。
18.一種式II的化合物， 其中R為N-保護(hù)基如Boc或CBz，P為O-保護(hù)基如TBS或Me。
全文摘要
本申請公開并要求保護(hù)以下通式(I)化合物，其中R
文檔編號C07D307/52GK1422266SQ01807719
公開日2003年6月4日 申請日期2001年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月4日
發(fā)明者W·布朗, N·普洛貝克, C·瓦爾波勒 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司