在30~50°C之間， 以1000 bar壓力均質(zhì)6次； (5) 過(guò)濾，通氮?dú)?，灌封，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)式高壓蒸汽滅菌，得到硫色滿酮脂肪乳劑。
[0041] 實(shí)施例8 按以下配方稱量：3_氯代亞甲基-6-氟-硫色滿-4-酮0. 5g，大豆油12g，卵磷脂13g， 甘油2g，泊洛沙姆188 3g，膽固醇3g，維生素E0.lg，抗壞血酸2. 0g，pH值調(diào)節(jié)劑（0. 1 mol?L1的氫氧化鈉2. 0g、0.Imol?L1的鹽酸3. 0g)，補(bǔ)充注射用水至lOOmL。
[0042] 制備方法： (1)將3-氯代亞甲基-6-氟-硫色滿-4-酮、維生素E、膽固醇、卵磷脂加入大豆油中， 在溫度為80°C的條件下攪拌均勻，得到油相； (2) 將泊洛沙姆188、甘油、抗壞血酸加入40mL注射用水中，在溫度為80°C的條件下攪 拌至所述原料全部溶解，得到水相； (3) 將所得水相和油相混溶，用高速組織分散機(jī)進(jìn)行分散，然后以15000rpm攪拌5min， 得到乳濁液； (4) 用適量的pH值調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)乳濁液的pH值范圍在6. 0~8.O之間，然后用剩余注射 用水定容至lOOmL，將定容后的初乳轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，控制均質(zhì)溫度在40~60°C之間， 以800bar壓力均質(zhì)10次； (5) 過(guò)濾，通氮?dú)?，灌封，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)式高壓蒸汽滅菌，得到硫色滿酮脂肪乳劑。
[0043] 對(duì)比例1 按以下配方稱量：3_氯代亞甲基-6-氟-硫色滿-4-酮0. 5g，聚氧乙烯蓖麻油30g，維 生素E0.lg，氯化鈉0. 9g，補(bǔ)充注射用水至100mL。
[0044]制備方法： (1) 將3-氯代亞甲基-6-氟-硫色滿-4-酮、聚氧乙烯蓖麻油在溫度為80°C的條件下 攪拌均勻，得到油相； (2) 將50mL注射用水加入油相中，攪拌均勻后用剩余注射用水定容至IOOmL; (3) 用0?Imol*L1鹽酸調(diào)節(jié)pH值的范圍在6~8之間； (4) 過(guò)濾，通氮?dú)?，灌封，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)式高壓蒸汽滅菌，得到硫色滿酮注射液。
[0045] 實(shí)施例9對(duì)硫色滿酮注射用脂肪乳劑的各項(xiàng)性能進(jìn)行考察： 一、血管刺激性實(shí)驗(yàn) 取健康家兔15只，隨機(jī)分成5組，每組3只。5組家兔左耳均注射氯化鈉注射液，右耳 分別注射本發(fā)明實(shí)施例1、2、3、6、7和對(duì)比例1的硫色滿酮注射用脂肪乳劑，每天給藥1次， 連續(xù)3天。給藥期間每天肉眼觀察給藥局部血管有無(wú)血栓形成，周圍組織有無(wú)紅腫淤血等 炎癥反應(yīng)。給藥結(jié)束后處死，自給藥處向心方向3cm處取下耳組織，以10%福爾馬林固定、 石蠟包埋、制片、染色，光鏡下觀察血管及周圍組織形態(tài)學(xué)改變。
[0046] 表1血管刺激試驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例1、2、3、6和7的組織學(xué)觀察結(jié)果表明：給藥組兔耳緣靜脈血管壁完整，光滑。未 見內(nèi)皮損傷，無(wú)血栓形成及周圍組織水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、炎癥及壞死等病理變化。給藥組與 陰性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別，表明所制備的注射用硫色滿酮脂肪乳對(duì)家兔耳血管未見明顯 刺激。對(duì)比例1采用聚氧乙烯蓖麻油處方血管可見明顯擴(kuò)張，管壁及管周存在明顯炎癥細(xì) 胞浸潤(rùn)，對(duì)家兔耳血管有明顯刺激。
[0047] 二、動(dòng)物過(guò)敏性試驗(yàn) 取體重250g~350g健康豚鼠42只，隨機(jī)分為7組，一組作為陰性對(duì)照組注射0. 9%氯 化鈉注射液，每次注射劑量為0. 5mL/只，一組作為陽(yáng)性對(duì)照組注射10%卵白蛋白溶液，每次 注射劑量為〇.ImL/只，其余五組作為供試品組分別注射本發(fā)明實(shí)施例1、2、3、6、7和對(duì)比例 1的硫色滿酮注射用脂肪乳劑，每次注射劑量為0. 5mL/只。注射方式與次數(shù)：隔日腹腔注 射一次，共注射三次。分別在第一次注射后第14日及21日靜脈注射供試品ImL/只、0. 9% 氯化鈉注射液ImL/只和10%卵白蛋白溶液ImL/只進(jìn)行激發(fā)，在注射后15分鐘內(nèi)，觀察注 射藥液的豚鼠是否出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。如有豎毛、呼吸困難或咳嗽3聲等現(xiàn)象中的兩種或兩種 以上者，或有抽搐、虛脫或死亡等現(xiàn)象之一者，則判為陽(yáng)性(有過(guò)敏反應(yīng))。結(jié)果見表2。
[0048] 表2過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果（n= 6)
從表2中可以看出，陰性對(duì)照組及本發(fā)明制備得到的硫色滿酮注射用脂肪乳劑兩次靜 脈給藥后15分鐘內(nèi)每組各6只豚鼠均未出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，陽(yáng)性對(duì)照液兩次靜脈給藥后1分鐘 內(nèi)6只豚鼠全部出現(xiàn)咳嗽、呼吸抑制、抽搐直至死亡。結(jié)果表明：在本試驗(yàn)條件下本發(fā)明實(shí) 施例1、2、3、6、7制備得到的硫色滿酮注射用脂肪乳劑過(guò)敏試驗(yàn)未出現(xiàn)全身過(guò)敏反應(yīng)。對(duì)比 例1部分動(dòng)物出現(xiàn)全身過(guò)敏反應(yīng)。
[0049] 三、動(dòng)物溶血性試驗(yàn) 2%紅細(xì)胞懸液的制備：取新鮮兔血10mL，置于燒杯中，用玻璃棒輕微攪動(dòng)，數(shù)分鐘后除 去纖維蛋白，取出血液，加入5倍量生理鹽水，搖勾，2500rpm/min離心5min，棄去上清液；沉 淀的紅細(xì)胞再用同量的生理鹽水清洗，離心，如此反復(fù)洗滌3~4次，至上清液成無(wú)色透明 為止。將洗滌好的紅細(xì)胞用生理鹽水配制成2%紅細(xì)胞懸液，備用。
[0050] 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：取干凈試管7個(gè)，分別編號(hào)，依次加入下表內(nèi)各液，第6管不加供試液為 空白對(duì)照管，第7管用蒸餾水代替生理水，搖勻，置于37°C水浴中，分別于0. 5h、lh、2h、3h、 4h觀察是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生。
[0051] 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：全溶血：溶液澄明紅色，管底無(wú)紅細(xì)胞殘留；部分溶血：溶液澄明 或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留；無(wú)溶血：紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明；凝集：不溶 血，紅細(xì)胞在試管底部凝集，振搖后細(xì)胞不能分散。結(jié)果見表3。
[0052] 表3本發(fā)明實(shí)施例1的硫色滿酮注射用脂肪乳劑的溶血試驗(yàn)結(jié)果
注：+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；_不溶血，也不發(fā)生凝集 試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在4小時(shí)內(nèi)未引 起溶血或凝集反應(yīng)。
[0053] 四、加速穩(wěn)定性試驗(yàn) 將本發(fā)明實(shí)施例1和對(duì)比例1制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在25±2°C的條件下放 置6個(gè)月，考察物理化學(xué)穩(wěn)定性的變化。結(jié)果見表4-a及4-b。
[0054] 表4_a本發(fā)明加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
從表4-a中可以看出，本發(fā)明實(shí)施例1制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在25±2°C的條 件下加速6個(gè)月后外觀、物理穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性更好。
[0055]采用上述方法對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2-8制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑進(jìn)行加速穩(wěn) 定性試驗(yàn)，在25±2°C的條件下加速6個(gè)月后外觀、物理穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性良好。
[0056] 五、長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn) 將本發(fā)明實(shí)施例1制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在6±2°C的條件下放置12個(gè)月，考 察物理化學(xué)穩(wěn)定性的變化。結(jié)果見表5-a和5-b。
[0057] 表5_a長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
從表5中可以看出，本發(fā)明實(shí)施例1制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在6±2°C長(zhǎng)期試 驗(yàn)12個(gè)月各項(xiàng)考察指標(biāo)的檢驗(yàn)結(jié)果仍符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
[0058] 采用上述方法對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2-8制備的硫色滿酮注射用脂肪乳劑進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn) 定性試驗(yàn)，在6±2°C長(zhǎng)期試驗(yàn)12個(gè)月后外觀、物理穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性良好。
[0059] 綜上，本發(fā)明的硫色滿酮注射用脂肪乳劑在經(jīng)25±2°C加速試驗(yàn)6個(gè)月和6±2°C 長(zhǎng)期試驗(yàn)12個(gè)月各項(xiàng)考察指標(biāo)的檢驗(yàn)結(jié)果仍符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，可以保證制劑在貯藏期 間的質(zhì)量穩(wěn)定。
[0060] 實(shí)施例10靜脈注射用3-氯代亞甲基-6-氟-硫色滿-4-酮脂肪乳劑對(duì)鼠源腫 瘤細(xì)胞移植瘤的抑制作用 (1)給藥組及給藥試劑 脂肪乳劑：以實(shí)施例1制備的注射用的脂肪乳劑為試驗(yàn)藥物乳劑，生理鹽水制成Img?mL1原液保存于4°C，用前稀釋至0.Img?mL1C3
[0061] 陽(yáng)性對(duì)照：注射用順鉑(齊魯制藥有限公司，批號(hào)712058CF)，生理鹽水制成 Img?mL1原液保存于4°C，用前稀釋至0.Img?mL1C3
[0062] 陰性對(duì)照組：給與藥物體積相同的食用豆油。
[0063] (2)動(dòng)物及瘤株 昆明種小鼠18~22g，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)： 806121)。小鼠H22肝癌細(xì)胞引自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞所。
[0064] (3)體內(nèi)抑制活性測(cè)試，測(cè)試藥物對(duì)H22小鼠皮下移植瘤的抑制作用 建立模型：無(wú)菌取腹腔內(nèi)傳代6~7d的H22小鼠肝癌細(xì)胞，2000r/min離心5min后去其 上清液，再用生理鹽水按1:3的比例稀釋搖勻，并調(diào)細(xì)胞數(shù)至2X10Vml，取0. 2m