1300g，煅牡蠣1100g，延胡索 1100g，益母草1200g，血余炭1100g，黨參1200g，五靈脂1200g，茯苓1200g，熟地1200g，香 附1200g，女貞子1200g，白術(shù)1200g，仙鶴草1200g，炒地榆1200g，雞血藤1200g，旱蓮草 1200g，取所有原料藥泡入水中，浸泡2小時(shí)以上，分別加原料藥總重量的8倍量、6倍量的 水提取2次，提取時(shí)間為2小時(shí)、1小時(shí)；合并2次提取液，提取液通過管式離心，得離心液， 離心液過D 101大孔樹脂進(jìn)行吸附，先用水洗除雜，然后用70%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫 液，減壓濃縮，成浸膏，為組分成1 ;將上述提取過的原料藥的藥渣加乙醇，分別加藥渣總重 量的10倍量、8倍量的乙醇溫浸2次，溫浸時(shí)間為2小時(shí)、1. 5小時(shí)，溫度為85°C，合并2次 溫浸液；溫浸液減壓濃縮至密度為60°C時(shí)1. 25浸膏，將浸膏加入其4倍量的乙酸乙酯萃取 二次，萃取液回收完乙酸乙酯，成浸膏，得到組分2 ;將上述兩種提取液合并，減壓濃縮相對 密度為80°C時(shí)1. 35的濾液，回收乙醇，將上述兩種提取液置入雙效真空濃縮器中，濃縮至 90°C時(shí)相對密度為1. 60的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí)；將冷藏液加0. 3%的助濾 劑硅藻土，過濾，濾液再置入雙效真空濃縮器中，濃縮至每1ml含0. 2g生藥量，加糊精調(diào)和 后殺菌裝瓶。
[0066] 本發(fā)明粉劑制備步驟為：取取當(dāng)歸1300g，白芍1300g，覆盆子1200g，黃芪1200g， 淫羊藿130(^，菟絲子120(^，合歡花120(^，柴胡130(^，煅牡蠣110(^，延胡索110(^，益母 草1200g，血余炭1300g，黨參1300g，五靈脂1200g，茯苓1200g，熟地1300g，香附1200g，女 貞子1200g，白術(shù)1300g，仙鶴草1200g，炒地榆1200g，雞血藤1300g，旱蓮草1300g，藥材加 水浸泡30分鐘至1小時(shí)，加熱煮沸30~40分鐘，過濾，濾液備用；濾渣加水第二次加熱，煮 沸30~40分鐘，過濾，濾液備用；濾渣再加水，第三次加熱煮沸30~40分鐘，過濾；將三次 濾液合在一起，加熱濃縮至糊狀藥液，放入烘箱80度烘干至粉末狀。
[0067] 毒理學(xué)試驗(yàn)：
[0068] 試驗(yàn)例1 :本發(fā)明急性毒性試驗(yàn)
[0069] 一、試驗(yàn)材料：
[0070] 動物：昆明種小鼠，體重21_24g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗(yàn)室育種。藥物：本發(fā) 明內(nèi)服膠囊劑。
[0071] 二、方法：
[0072] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將 栓劑溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18,14. 4， 11.5,9.2,7.4&.1^-1)，在動物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小 時(shí)），每次〇. 5ml，治療動物死亡情況。
[0073] 2、最大耐受劑量測定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將栓劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動為準(zhǔn)。在動物禁食（不禁水）18 小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次〇. 5ml (每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g 生藥/kg. d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)治療7天。
[0074] 三、試驗(yàn)結(jié)果：
[0075] 在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg. d)，未見 小鼠死亡，即未測出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天治療期中，動物其食欲、活動、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD > 18g/Kg. d。
[0076] 試驗(yàn)例2 :本發(fā)明急性皮膚刺激試驗(yàn)報(bào)告
[0077] 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測本發(fā)明栓劑對實(shí)驗(yàn)動物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度
[0078] 2、材料和方法：
[0079] 2. L受試物：名稱：本發(fā)明丸劑（實(shí)施例3方法制得）
[0080] 2. 2.實(shí)驗(yàn)動物：壹級大耳白種家兔，10只，雌性，體重2. 1-2. 3kg;由青島大學(xué)醫(yī)學(xué) 院生物系實(shí)驗(yàn)動物中心提供；
[0081] 2. 3.試驗(yàn)方法：
[0082] 選用皮膚完好的健康家兔10只，于試驗(yàn)前24小時(shí)將其背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去 毛面積左、右各約4cmX4cm。試驗(yàn)時(shí)取受試物0. 2ml涂于2. 5cmX2. 5cm的二層紗布上，敷 貼于一側(cè)去毛皮膚表面，油紙覆蓋，膠布固定。另一側(cè)皮膚作為空白對照。封閉4小時(shí)后， 去除覆蓋物，并用溫水清洗去殘留受試物，于去除受試物后的1、24和48小時(shí)治療涂抹部位 皮膚反應(yīng)，并評分。
[0083] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)動物皮膚未出現(xiàn)任何紅斑，紅腫，發(fā)炎現(xiàn)象。
[0084] 4、小結(jié)：根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（1999)中皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)判定，本發(fā)明軟膏 劑對動物皮膚刺激強(qiáng)度屬無刺激性。
[0085] 實(shí)施例3 :陰道粘膜刺激試驗(yàn)結(jié)果
[0086] L試驗(yàn)方法：
[0087] 實(shí)驗(yàn)動物檢疫3天后，選用18只上述健康家兔，隨機(jī)分為三組，每組各6只，分別 為：空白對照、賦形劑對照、本發(fā)明丸劑組（按應(yīng)用液5倍濃度）。分別用適當(dāng)大小的滅菌 棉條浸以滅菌生理鹽水和受試物置于賦形劑對照組和受試物組動物陰道內(nèi)，與陰道粘膜接 觸6小時(shí)，24小時(shí)后處死動物。取出局部陰道組織，治療病變情況。
[0088] 2、試驗(yàn)結(jié)果：陰道粘膜刺激試驗(yàn)結(jié)果
[0091] 實(shí)施例4 :皮膚過敏試驗(yàn)結(jié)果
[0092] 用本發(fā)明片劑，進(jìn)行誘導(dǎo)和激發(fā)接觸試驗(yàn)，在24小時(shí)和48小時(shí)后治療試驗(yàn)小鼠， 均不見皮膚有紅斑及水腫等現(xiàn)象，與陰性對照組無差異。結(jié)果表明，該片劑對皮膚反應(yīng)強(qiáng)度 近于零，即無皮膚變態(tài)反應(yīng)。
[0093] 實(shí)施例5 :長期毒性實(shí)驗(yàn)資料
[0094] 1、實(shí)驗(yàn)方法
[0095] 將豚鼠隨機(jī)份成4組，每組15只。在豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使其脫 毛范圍約40平方厘米。洗凈脫毛劑，治療24小時(shí)后每組豚鼠分別涂本發(fā)明栓劑溶液0. 2、 0. 4和0. 8ml，分別含生藥92、184和368mg，另一組涂溶媒0. 8ml每日二次，連續(xù)30天，治療 豚鼠的一般情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動物進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理學(xué)檢查。
[0096] 2、結(jié)果
[0097] 上述三組用藥豚鼠軀干去毛區(qū)，未見局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點(diǎn)及潰瘍。 用藥組與對照組動物毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動等對照組無明顯差異，血液生化檢查，用藥 組與對照組均在正常范圍。病理組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)各組心、肝、腎及局部皮膚均未見明顯病 變。提示，本發(fā)明中藥片劑長期用藥對局部皮膚及全身重要臟器均未見明顯的毒性作用。
[0098] 試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明中藥片劑實(shí)驗(yàn)安全。該藥對乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌的最小抑制濃度為1 : 150,淋球菌為1 : 150,白色念珠菌為1 : 300,對1 : 20 稀釋度時(shí)的殺滅時(shí)間為5分鐘，1 : 50時(shí)為10分鐘，1 : 100時(shí)為20分鐘，1 : 200時(shí)為 40分鐘，1 : 400時(shí)為8小時(shí)。
[0099] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)說明：
[0100] 1資料與方法
[0101] 中年以后婦女卵巢功能衰退，卵泡數(shù)明顯減少，且對促性腺激素的反應(yīng)性降低，卵 泡在發(fā)育過程中因退行性變而不能有規(guī)律地排卵，導(dǎo)致孕激素缺乏，使子宮內(nèi)膜在單一雌 激素作用下發(fā)生不同程度的增生，當(dāng)E2突然下降或波動幅度較大時(shí)，可發(fā)生E 2撤退性或突 破性出血。此外，無排卵性功血還與子宮內(nèi)膜出血的自限機(jī)制缺陷有關(guān)。
[0102] 本發(fā)明與媽富隆治療功能失調(diào)性子宮出血76例，目的觀察媽富隆與本發(fā)明治療 圍絕經(jīng)期型功能失調(diào)性子宮出血的臨床療效。方法選擇2010年至2013年醫(yī)院收治的功能 失調(diào)性子宮出血患者76例，根據(jù)患者病情使用不同劑量的媽富隆進(jìn)行治療，觀察臨床療效 和不良反應(yīng)發(fā)生情況。
[0103] 患者月經(jīng)周期長短不規(guī)律，閉經(jīng)或月經(jīng)頻發(fā)；出血量多少不定，出血量多少與子宮 內(nèi)膜增生程度、壞死脫落量有關(guān)；經(jīng)期長短不一，稱為三不規(guī)。。發(fā)明人分析了我院2010年 至2013年使用媽富隆與本發(fā)明治療的76例功能失調(diào)性子宮出血患者的臨床療效，現(xiàn)報(bào)道 如下。
[0104] 1.1病例選擇
[0105] 選擇2010年至2013年醫(yī)院收治的功能失調(diào)性子宮出血患者76例，診斷依據(jù)全國 高等醫(yī)藥院校教材《婦產(chǎn)科學(xué)（第6版）》。癥見：患者月經(jīng)周期長短不規(guī)律，閉經(jīng)或月經(jīng)頻 發(fā)；出血量多少不定，出血量多少與子宮內(nèi)膜增生程度、壞死脫落量有關(guān)；經(jīng)期長短不一， 稱為三不規(guī)。一般治療中患者體質(zhì)往往較差，呈貧血貌?；颊咧心挲g最大的為54歲，年齡 最小的為45歲，平均年齡為（47. 13±7. 11)歲；病程最長的為9個月，最短的為6個月，平 均病程為（5. 43±2. 01)月。根據(jù)實(shí)施治療方法的不同，將患者隨機(jī)分為本發(fā)明治療組和西 醫(yī)治療組，每組32例患者，兩組患者在年齡、病程等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有 可比性。在治療前均行診斷性刮宮，且在治療前半年內(nèi)沒有服用性激素，無性激素禁忌證； 所有患者均無血液性疾病和心腦血管疾病。
[0106] 1 2治療與觀察方法
[0107] 西藥組根據(jù)患者病情使用不同劑量的媽富隆片（荷蘭歐佳農(nóng)公司，每片含去氧孕 烯0. 15mg、炔雌醇30g，批號為741771)。出血量較大者，每天口服4片，待癥狀改善后每3 天減藥1次，減至每天1片的劑量，維持至無血21d后停藥。出血量較少者，每天口服1~ 2片，癥狀改善后減藥至每天1片的劑量，維持無血21d后停藥。若患者月經(jīng)量較大，則于 月經(jīng)來潮后第2~3天開始用藥；若患者月經(jīng)量較正常，則于月經(jīng)來潮第5天時(shí)開始用藥。 連續(xù)用藥2Id為1個治療周期，連續(xù)治療3個月經(jīng)周期。
[0108] 對比組使用本發(fā)明中藥制劑，方用：當(dāng)歸13g，白芍12g，覆盆子13g，黃芪llg，淫羊 藿llg，英絲子12g，合歡花13g，柴胡13g，煅牡嫩13g，延胡索12g，益母草llg，血余炭12g， 黨參13g，五靈脂12g，茯苓12g，熟地12g，香附13g，女貞子13g，白術(shù)12g，仙鶴草12g，炒地 榆12g，雞血藤12g，旱蓮草13g，觀察兩組患者治療前后的血清內(nèi)分泌變化情況，詳細(xì)記錄 患者治療過程的不良反應(yīng)。
[0109] 1 3療效評價(jià)
[0110] 無效為用藥48~72h，患者的陰道出血未得到有效控制；有效為用藥72h內(nèi)，患者 陰道出血明顯減少。從開始用藥到陰道出血顯著減少的時(shí)間為控制出血時(shí)間，從開始用藥 到陰道出血停止的時(shí)間為出血完全停止時(shí)間。
[0111] 1 4數(shù)據(jù)分析
[0112] 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13. 0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)用X±s表示。P < 0. 05表示差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義