專利名稱：一種具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
內(nèi)毒素對(duì)機(jī)體造成的損害，除其本身的毒性作用外，更主要的是通過(guò)刺激炎癥細(xì)胞和非炎癥細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，引起系列炎癥反應(yīng)和免疫功能紊亂。內(nèi)毒素是感染性疾病發(fā)生發(fā)展的主要原因。目前用于臨床和正在進(jìn)行臨床前研究的抗內(nèi)毒素治療的措施有①清除和中和內(nèi)毒素，如脂質(zhì)A合成抑制齊[J、抗內(nèi)毒素抗體、重組HDL、多粘菌素B與不溶性纖維相互連接裝置成的血液灌流系統(tǒng)等應(yīng)用抗LBP抗體和殺菌/通透性增加蛋白(BPI)阻斷LPS與LBP結(jié)合；@應(yīng)用抗⑶14抗體阻斷LPS-LBP復(fù)合物與⑶14的結(jié)合；④阻斷胞漿內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，如抑制NF-KB、MAPK38、SOCS等；⑤影響細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的合成等。但由于內(nèi)毒素發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一些已上市藥物由于作用環(huán)節(jié)單一，臨床收效甚微，目前尚無(wú)確切有效的治療方法。瀉心湯為醫(yī)圣張仲景名方，記載于《金匱要略》瀉心湯(異名瀉心湯《奇效良方》卷六十三)，由大黃、黃連和黃芩三味藥組成，又稱“三黃湯”或“瀉心湯”，全方重在瀉火解毒，清熱燥濕，原為治療邪火內(nèi)熾，迫血妄行，癥見吐血、衄血等等的中醫(yī)常用方劑，功效卓著。后世廣泛用于里熱火毒之證，為歷驗(yàn)不爽之名方，現(xiàn)代主要用于由細(xì)菌或病毒感染所引起上呼吸道感染、流感、發(fā)熱、急性化膿性扁桃體炎等多種急性感染性疾病，以及上消化道出血和心腦血管疾病的治療。近代瀉心湯主要用于多種急性感染性疾病及上消化道出血，在日本則多用于心腦血管疾病的治療。本方對(duì)感染性疾病而呈三焦熱盛者，特別是急性感染性疾病療效較好。尤其以對(duì)急性胃腸炎、扁桃體炎等為佳。本方對(duì)于因熱甚而迫血妄行之吐血、衄血、便血、尿血等多種出血均有較好療效。尤其對(duì)上消化道出血療效為佳。在瀉心湯“拆方”研究中，發(fā)現(xiàn)大黃一黃連藥對(duì)在煎煮時(shí)，由于黃連的小檗堿成分分別與大黃鞣質(zhì)和蒽醌類成分反應(yīng)生成難溶性沉淀物，結(jié)果湯劑中的蒽醌類成分和小檗堿成分的含量較之單煎藥材均有所降低，而且降低的量與兩藥的配伍比例有關(guān)，配伍比例相差越大，則被研究成分下降的程度也越大。薛燕周同惠王小民.用LC/MS/MS和RP-HPLC法對(duì)瀉心湯煎煮產(chǎn)生的沉淀物的研究.藥物分析雜志，1999，19 (4) :36-37.單味大黃、黃連和黃芩基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究開展得較為深入，但仍存在著化學(xué)成分與生物活性研究的脫節(jié)現(xiàn)象，既往那種分離、提取、再合成的研究方法，雖取得了一定成就，但失去了復(fù)方藥味有機(jī)配伍的特性。研究該方的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為何物，目前配伍是否為最佳配伍等，這是經(jīng)方應(yīng)用 與發(fā)展所必須探討的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種質(zhì)量穩(wěn)定、可控性強(qiáng)，藥效明確的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑黃岑I份、大黃1-15份。進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑黃芩I份、大黃2份。本發(fā)明藥物組合物是由黃芩、大黃的原生藥材或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，力口上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。所述的活性成分為黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌、大黃游離蒽醌。其中，所述的活性成分為黃芩提取物、大黃游離蒽醌，其重量配比為
黃芩提取物1-4份、大黃游離蒽醌1-4份。進(jìn)一步優(yōu)選地，黃芩提取物、大黃游離蒽醌的重量配比為黃芩提取物I份、大黃游離蒽醌2份；黃芩提取物I份、大黃游離蒽醌4份；黃芩提取物3份、大黃游離蒽醌2份。其中，所述的活性成分為黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌，其重量配比為黃芩提取物1-4份、大黃結(jié)合蒽醌1-4份。進(jìn)一步優(yōu)選地，黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌的重量配比為黃芩提取物3份、大黃結(jié)合蒽醌4份；黃芩提取物2份、大黃結(jié)合蒽醌3份；黃芩提取物3份、大黃結(jié)合蒽醌2份。所述的黃芩提取物，以黃芩苷計(jì)在80%以上。大黃游離蒽醌，以大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚計(jì)算在50%以上。所述的藥劑是口服制劑。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、稱取下述重量配比的原料黃芩、大黃；b、將a步驟直接打粉，或?qū)ⅫS芩提取黃芩提取物、大黃提取結(jié)合蒽醌或游離蒽醌，混合，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備具有抗內(nèi)毒素的藥物中的用途。內(nèi)毒素是G_桿菌生長(zhǎng)時(shí)釋放或死亡時(shí)裂解出來(lái)的細(xì)胞壁成分，主要成分為脂多糖，創(chuàng)傷、休克、感染等可使大量?jī)?nèi)毒素，尤其是腸源性內(nèi)毒素侵入血循環(huán)而形成內(nèi)毒素血癥，引起發(fā)熱、血管擴(kuò)張、血管通透性增加、中性粒細(xì)胞增多、補(bǔ)體激活、血壓下降等病理生理反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致彌散性血管內(nèi)凝血和多器官功能衰竭。臨床上許多疾病均可伴發(fā)內(nèi)毒素血癥，如急性肝炎、爆發(fā)性肝炎、膽石癥伴急性梗阻性化膿性感染、燒傷、敗血癥、多器官功能衰竭、急性胰腺炎、皮膚軟組織感染、腹腔感染、尿路感染、癌癥、肺炎和上呼吸道感染等。本發(fā)明藥物藥效明確，原料用量少，可控性強(qiáng)，且確定了其中的有效活性成分黃芩提取物、結(jié)合蒽醌或游離蒽醌，配伍使用，能發(fā)揮協(xié)同增效作用。
圖1不同濃度LPS對(duì)ΜΦ分泌NO的影響具體實(shí)施方式
實(shí)施例1本發(fā)明藥物原料提取工藝取藥用大黃500g，切片或打成粗粉，加6 8倍量熱水(70 90)，溫浸30分鐘，力口熱回流提取兩次，第一次1. 5小時(shí)，第二次1. O小時(shí)，合并兩次水提液，保溫(60 80°C)，離心(3600r/min，lOmin)，取上清液，置4°C冰箱中冷置12 24小時(shí)后，抽濾，濾餅待處理；取抽濾液，過(guò)大孔吸附樹脂，先用水洗，繼用20%乙醇洗至近無(wú)色，再用60% 70%乙醇洗脫。收集60% 70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并適當(dāng)濃縮，用鹽酸或枸椽酸調(diào)pHl 2，密封，置4°C冰箱中冷置12 24小時(shí)后,抽濾,棄抽濾液。合并以上兩次濾餅，加入上述回收的乙醇使溶解(濃度約為50% 65%，目的在于去除濾紙中夾帶入的雜質(zhì)，并且能使下一步工序中濾液的減壓濃縮得到加快)，抽濾，取濾液，減壓回收乙醇，并濃縮至稠膏，真空干燥，得黃褐色粉末(結(jié)合蒽醌類)。
取上述大黃藥渣(水加熱提取后濾過(guò)的藥渣)，加入5 6倍量用8%鹽酸配制而成的50%乙醇溶液，加熱回流提取2次，第一次1. 5小時(shí)，第二次1. O小時(shí)，趁熱過(guò)濾，取濾液，減壓回收乙醇至無(wú)味(無(wú)醇味、無(wú)鹽酸味)，得清膏，加入I 2倍溫水(60 80°C)攪勻稀釋后，用氯仿萃取至萃取液呈淺綠色，合并，往氯仿萃取液繼續(xù)加入5% 8%氫氧化鈉萃取至近淡紅色，合并氫氧化鈉萃取液，加鹽酸調(diào)pH為I 2,密封,置4°C冰箱中冷置12 24小時(shí)后，抽濾，濾餅洗至中性，減壓干燥，得棕黃色沉淀物(游離蒽醌)。黃芩提取物的制備方法取黃芩，加水煎煮，合并煎液，濃縮至適量，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1. O 2. 0，80°C保溫，靜置，濾過(guò)，沉淀物加適量水?dāng)噭?，?0 %氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 0，加等量乙醇，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1. O 2. 0，60°C保溫，靜置，濾過(guò)，沉淀依次用適量水及不同濃度的乙醇洗至PH值至7. O,揮盡乙醇，減壓干燥，即得。(中國(guó)藥典2010年版一部黃芩提取物標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下方法)黃芩提取物，以黃芩苷計(jì)在80%以上。實(shí)施例2本發(fā)明藥物含量測(cè)定方法1、游離蒽醌取上述游離蒽醌樣品約0.05g，精密稱定，置50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超聲使溶解，取出，放冷，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL至50mL圓底燒瓶中，揮干甲醇,加入IOmL水及IOmL氯仿,超聲處理5分鐘,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并用少量氯仿洗滌圓底燒瓶數(shù)次，并入氯仿液中，分取氯仿層，繼續(xù)用氯仿萃取I 2次，合并氯仿液，減壓回收氯仿，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得供試液A。2、結(jié)合蒽醌取上述結(jié)合型蒽醌樣品約0.05g，精密稱定，置50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超聲使溶解，取出，放冷，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL至50mL圓底燒瓶中，揮干甲醇,加入IOmL水及IOmL氯仿,超聲處理5分鐘,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，并用少量氯仿洗滌圓底燒瓶數(shù)次，并入氯仿液中，分取氯仿層，繼續(xù)用氯仿萃取I 2次，合并氯仿液，減壓回收氯仿，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得供試液B。繼續(xù)精密量取上述結(jié)合型蒽醌的甲醇續(xù)濾液2mL，同藥典法操作，得供試液C。對(duì)照品溶液1，8_ 二羥基蒽醌對(duì)照品溶液17.4ug/mL或大黃素對(duì)照品溶液(13.2ug/mL)。分別精密吸取供試液AlmL、B5mL、C0. 5mL,置IOmL量瓶中，水浴蒸干，加1%醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，溶液應(yīng)呈紅棕色，暗處放置30分鐘后，在可見分光光度計(jì)上于40分鐘內(nèi)測(cè)定完畢。(如以1，8_ 二羥基蒽醌作對(duì)照，檢測(cè)波長(zhǎng)為535nm;如以大黃素作對(duì)照，檢測(cè)波長(zhǎng)為510nm。)含量計(jì)算供試液A的測(cè)定值即為游離型蒽醌樣品中游離蒽醌的含量值，應(yīng)^ 50%;結(jié)合型蒽醌樣品中結(jié)合蒽醌的含量值(以大黃素單葡萄糖計(jì))=(C測(cè)定值-B測(cè)定值)X1. 7，應(yīng)彡 50. 0%。以下通過(guò)具體藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例題“瀉心湯飲片”抗內(nèi)毒素作用篩選試驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料1.1藥材制備大黃、黃連和黃芩購(gòu)自四川省藥材公司，大黃、黃連、黃芩按2 :1 1比例分為瀉心湯全方、黃連-黃芩/大黃-黃連/大黃-黃芩藥對(duì)和大黃(按瀉心湯中原料 的用量配比)、黃連、黃芩單味藥組，常規(guī)水煎后水浴濃縮，減壓干燥，得干浸膏粉待用，其中黃連-黃芩藥對(duì)水煎后產(chǎn)生大量沉淀，將沉淀過(guò)濾后得到該藥對(duì)的上清部分和沉淀部分，以上藥物的得率分別為全方(31. 2%)、黃連-黃芩上清(21. 29%)、黃連-黃芩沉淀(7. 06%)、大黃-黃連(29. 78%)、大黃-黃芩(38. 47%)、大黃(35. 06%)、黃連(23. 79%)、黃芩(40. 95%)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)民族藥研究所提供。1. 2試劑細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、動(dòng)態(tài)比濁法鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水)，細(xì)菌內(nèi)毒素(05B111)。1. 3儀器BET-32M內(nèi)毒素測(cè)定儀，XW-80A型旋渦混合器，電子溫度計(jì)，烘箱，立式自動(dòng)電熱壓力蒸氣滅菌鍋，電熱恒溫水溫箱。1. 4動(dòng)物雄性SD大鼠(200_220g)，四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，根據(jù)適用條件方差齊采用方差分析，方差不齊采用非參數(shù)檢驗(yàn)。2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1試管凝膠法測(cè)定瀉心湯及其拆方體外抗內(nèi)毒素活性2.1.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所用器皿(反應(yīng)試管、毛細(xì)吸管等)經(jīng)250°C干烤2小時(shí)以除去可能存在的外源性內(nèi)毒素。2.1. 2供試藥液的制備取瀉心湯及其各拆方浸膏適量，按其得率和在全方中所占比例以O(shè). 5%CMC配成含全方生藥量為100%混懸液，用安瓿分裝、封口，調(diào)節(jié)pH值約7. 5-8.0，流通蒸汽滅菌30min備用。取已滅菌各受試藥原液O. 5mL加入等量蒸餾水，依次將其稀釋成 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128 系列濃度。2.1. 3實(shí)驗(yàn)方法取12EU/支內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，每支加1. 2mLBET水用封口膜封口后在渦旋儀上混均15min，制成10EU/mL的內(nèi)毒素液。分別取上述各稀釋藥物O. 3mL加入已裝有O. 3mL10EU/mL的內(nèi)毒素液的試管中，封口混勻后置水浴鍋上56°C 30min，取各混合液O.1mL加入O.1mL鱟試劑中，封口后37°C水浴60min，觀察內(nèi)毒素與鱟試劑作用后的凝膠生成情況，每個(gè)樣品均設(shè)復(fù)管，同時(shí)設(shè)立內(nèi)毒素陽(yáng)性和BET水陰性對(duì)照。2.1. 4結(jié)果若反應(yīng)結(jié)果澄清或雖有混濁但緩慢倒轉(zhuǎn)即流動(dòng)者判為對(duì)內(nèi)毒素有破壞作用(_);如果緩慢倒轉(zhuǎn)180°C管內(nèi)仍呈堅(jiān)實(shí)凝膠判為無(wú)破壞內(nèi)毒素作用(+);介于二者之間，即有明顯凝膠生成，緩慢倒轉(zhuǎn)時(shí)有少量流動(dòng)者判為弱陽(yáng)性(±)，結(jié)果見表1:
表I瀉心湯及其拆方試管凝膠法抗內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑 黃芩I份、大黃1-15份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑 黃芩I份、大黃2份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于它是由黃芩、大黃的原生藥材或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于所述的活性成分為黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌、大黃游離蒽醌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于所述的活性成分為黃芩提取物、大黃游離蒽醌，其重量配比為 黃芩提取物1-4份、大黃游離蒽醌1-4份。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于黃芩提取物、大黃游離蒽醌的重量配比為 黃芩提取物I份、大黃游離蒽醌2份；黃芩提取物I份、大黃游離蒽醌4份；黃芩提取物3份、大黃游離蒽醌2份。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于所述的活性成分為黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌，其重量配比為 黃芩提取物1-4份、大黃結(jié)合蒽醌1-4份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌的重量配比為 黃芩提取物3份、大黃結(jié)合蒽醌4份；黃芩提取物2份、大黃結(jié)合蒽醌3份；黃芩提取物3份、大黃結(jié)合蒽醌2份。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑。
10.一種制備權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，它包括如下步驟 a、稱取原料黃芩、大黃； b、將a步驟直接打粉，或?qū)ⅫS芩提取黃芩提取物、大黃提取結(jié)合蒽醌或游離蒽醌，混合，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
11.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備具有抗內(nèi)毒素的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種具有抗內(nèi)毒素作用的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑黃芩1份、大黃1-15份。其中的活性成分為黃芩提取物、大黃結(jié)合蒽醌、大黃游離蒽醌。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法。本發(fā)明藥物藥效明確，原料用量少，可控性強(qiáng)，且確定了其中的有效活性成分黃芩提取物、結(jié)合蒽醌或游離蒽醌，配伍使用，能發(fā)揮協(xié)同增效作用。
文檔編號(hào)A61P31/04GK103006804SQ201310000970
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2013年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月5日
發(fā)明者孟憲麗, 王平, 張藝, 賴先榮 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)