以常春藤皂苷元為有效成分的藥物及其在藥物方面的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了以常春藤皂苷元為活性成分的藥物，其可單獨與藥用輔料或與其它藥物聯(lián)合制備成藥物，本發(fā)明還提供了其在制備藥物方面的應(yīng)用，具體地提供了其在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【專利說明】以常春藤皂苷元為有效成分的藥物及其在藥物方面的應(yīng)用
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及以常春藤皂苷元為有效成分的藥物，及其在藥物方面的應(yīng)用，更具體地提供了其在抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]常春藤皂苷元，為加科常春藤屬植物中華常春藤
HederanepalensisK.Kochvar.sinensis (Tobl.)Rehd.所含主要成分，具有吸濕性、味苦、刺激黏膜的作用，一般可溶于水，易溶于熱水、熱甲醇及熱乙醇，不溶于乙醚等極性小的有機溶劑。本發(fā)明人經(jīng)過研究，發(fā)現(xiàn)常春藤皂苷元具有抗腫瘤作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了以常春藤皂苷元為有效成分的藥物。
[0005]本發(fā)明提供了包含常春藤皂苷元的藥物組合物，該組合物可以是常春藤皂苷元與藥學上可接受的輔料或其它藥物聯(lián)合制備而成。
[0006]本發(fā)明提供了常春藤皂苷元在藥物方面的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明提供了常春藤皂苷元在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明提供的化合物的制備方法可以根據(jù)ZL200710146725.1中所述制備方法制備。本發(fā)明提供的含有常春藤皂苷元化合物的藥物，可以通過將化合物添加藥學上可接受的輔料或可選的其它成分而制成適于臨床使用的藥物組合物。
[0009]本發(fā)明的化合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，是通過以下的藥效實驗得到證實的。
【具體實施方式】
[0010]實驗例1:常春藤皂苷元對體外腫瘤細胞的抑制作用 材料和試劑
藥物及試劑:常春藤皂苷元，按照ZL200710146725.1中所述制備方法制備。注射用硫酸長春新堿，上海華聯(lián)制藥有限公司，Img/支。RPMI1640培養(yǎng)基:GIBC0公司生產(chǎn)；新生牛血清(超級)，杭州四季青生物工程材料有限公司。胰蛋白酶，Sigma公司生產(chǎn)；磺基羅丹明B (sulforhadamine B, SRB), Sigma公司;注射用鏈霉素，山東瑞陽制藥有限公司，Ig (100萬單位)/支；注射用青霉素鈉，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，80萬單位/支。其它常用化學試劑為國產(chǎn)分析純。
[0011]細胞株:人肝癌細胞株SMMC-7721、Bel-7402、人卵巢癌細胞株H08910、人前列腺癌胞PC-3M、人肺腺癌細胞株A549、人結(jié)腸癌細胞株HCT-8、人食管癌細胞株CaEs_17、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251、人胃癌細胞株BGC-823、人胃腺癌細胞株SGC-7901，均購自中國醫(yī)學科學院北京腫瘤研究所藥理室。
[0012]儀器:C02培養(yǎng)箱，超凈工作臺，酶標儀，倒置顯微鏡，細胞培養(yǎng)瓶(Costar，USA),96孔細胞培養(yǎng)板(Costar，USA)。
[0013]軟件:MicrosoftExcel 7.0 統(tǒng)計分析軟件；Microcal Origin 6.0 數(shù)據(jù)處理軟件。
[0014]實驗方法
藥物及試劑配制:
RPMI1640培養(yǎng)基一袋加水一升，補加2克碳酸氫鈉，10萬單位青霉素和IOOmg鏈霉素，調(diào)節(jié)pH值至7.4，用0.22Mm除菌濾膜過濾除菌。90ml培養(yǎng)基加滅活新生牛血清IOml即為完全培養(yǎng)液。胰蛋白酶用D-hanks緩沖液配成0.25%溶液后過濾除菌。
[0015]準確稱取常春藤阜苷兀20.0 mg于滅菌離心管中，加入DMSO Iml,配成20 mg/ml原液。取?ο μι原液加到IOml的完全培養(yǎng)液中，即成為20 μδ/πι1應(yīng)用液，再分別用完全培養(yǎng)液稀釋為10、5、2.5和1.25μδ/πι1的應(yīng)用液。
[0016]細胞培養(yǎng)及傳代:
所有細胞均貼壁培養(yǎng)于含IOml完全培養(yǎng)液細胞培養(yǎng)瓶中，于37°C、5%C02、飽合濕度下培養(yǎng)。細胞長滿瓶底后用滅菌D-hanks液洗兩次，加0.25%胰蛋白酶消化細胞2分鐘，倒掉胰蛋白酶，待輕搖細胞能完全脫落后，加完全培養(yǎng)液30ml后，用移液管吹散細胞，分裝于3個新的細胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
[0017]藥物處理:取剛剛長滿的細胞一瓶，胰蛋白酶消化后加IOml完全培養(yǎng)液懸浮細胞，用移液管吹打均勻，取兩滴細胞懸液于顯微鏡下計數(shù)細胞數(shù)目，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞數(shù)目至IO5個細胞/毫升。取96孔板一塊,用移液槍吸取IOOul細胞懸液加到96孔板中，每株細胞加4列,一塊培養(yǎng)板可加3株不同細胞。另用一培養(yǎng)板同樣細胞懸液各四個孔做本底對照。加完細胞的培養(yǎng)板于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時后倒掉原培養(yǎng)液,96孔板中A行加入新鮮完全培養(yǎng)液200 μ1，Β行加入200μ1含0.02% 二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)液作溶劑對照，C行加入200 μ?含25 Pg/ml長春新堿的完全培養(yǎng)液作陽性對照，D行到H行加入含不同濃度常春藤皂苷元的完全培養(yǎng)液200ul，最高濃度為20 Pg/ml，按0.5倍倍比稀釋，分別為10、5、2.5、1.25 Pg/ml。加完藥后培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0018]上述實驗均在嚴格無菌條件下進行。
[0019]結(jié)果測定:將對照用培養(yǎng)板取出于含細胞孔中輕輕加入25ul 50%預冷的三氯醋酸溶液于培養(yǎng)液面上，靜置5分鐘后，在4°C冰箱放置I小時，棄去上層液體，用去離子水洗5遍，置空氣中干燥后留待與加藥培養(yǎng)板一并染色分析。
[0020]細胞加藥培養(yǎng)48小時后，取出培養(yǎng)板，于每孔加入50ul預冷的50%三氯醋酸，靜置5分鐘后移入4°C冰箱中靜置I小時，取出用去離子水洗5遍，空氣中干燥，待完全干燥后每孔加入1%的乙酸配制的0.4%的SRB lOOul，染色20分鐘后倒掉染液，用1%乙酸洗5次，去除未結(jié)合的染料?？諝庵懈稍锖笥胮H 10.5的10mmol/L的非緩沖Tris堿液150ul溶解，在平板振蕩器上振蕩5分鐘，在BioRad酶標儀上測定各孔在490nm的光吸收。本底對照板的細胞同樣處理測定0D490。
[0021]根據(jù)各孔0D490計算藥物對細胞增殖的抑制率:
【權(quán)利要求】
1.一種以常春藤阜苷兀為有效成分的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其與藥物上可接受的輔料制成藥物組合物，或與其它藥物聯(lián)合制備成藥物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征在于該藥物中含有I%至99%的常春藤皂苷元。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征為通過口服途徑、注射或外用途徑給藥。
5.常春藤皂苷元在制備藥物方面的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于常春藤皂苷元在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK103830293SQ201210474897
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月21日
【發(fā)明者】姜易恒 申請人:青島百草匯中草藥研究所