專利名稱：：三七總皂苷的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及三七總皂苷的藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：三七與人參、西洋參統(tǒng)稱世界三大參，其中以三七在民間知名度最低，但最新研究發(fā)現(xiàn)三七的藥效成份含量最高，故三七被稱為"人參之王，，，特別是對(duì)血液類疾病具有很好療效，有血液衛(wèi)士之稱。三七為五加科人參屬多年生草本植物，生長(zhǎng)在低綿度、高海拔區(qū)域，以干燥的根入藥，別名山膝、金不換、田三七、田漆、田七、參三七、血參、人參三七、滇三七。三七用于治療疾病已有悠久的歷史，在本草綱目以前的《醫(yī)門(mén)秘旨》、《跌損妙方》中已有記載。三七中皂苷成分是三七的主要有效成分之一，迄今為止，已從三七的不同部位分離得到60余種單體皂苷成分，這些單體皂苷中有很多與人參和西洋參中所含急香成分相同，如人參皂苷R^、Rb2、Rb3、Rc、Rd、F2、七葉膽苷IX、七葉膽苷XVII和人參皂苷Re、RgpRg2、Rhp其中，尤以人參皂苷Rgi和Rh含量最高。除此以外，也有一些是三七所獨(dú)有的皂苷類成分，如三七皂苷RpR2、R4、R6、Fa等。人們通常從三七中提取三七總皂苷并將其作為藥物。例如，專利文獻(xiàn)200510047744.X7>開(kāi)了一種三七皂苷組合物制劑及制備方法，包括組分(重量百分比)三七總皂苷1%~99%,川穹嗪(包括鹽酸鹽、硫酸鹽等各種無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸鹽)99%~1%或燈盞花素99%~1%或蒺藜總皂苷99%~1%。配以適當(dāng)藥用輔料，制成醫(yī)藥上可以接受的各種制劑。再如，專利文獻(xiàn)200610046074.4公開(kāi)了一種三七皂苷組合物制劑及制備方法，包括三七總皂苷1%~99%,山碴莖葉總酚酸99%~1%或銀杏葉總黃酮99%~1%或苦碟子總黃酮及皂苷99%~1%或芍藥總苷(包括赤芍總苷和白芍總苷)99%~1%或沙棘總黃酮99%~1%,配以適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，制成醫(yī)藥上可以接受的各種制劑。但是，在現(xiàn)有技術(shù)中，通常是將三七總皂苷作為一個(gè)總體成分入藥，或者僅檢測(cè)或限定其中的少數(shù)成分。對(duì)于各個(gè)成分之間的含量及配比關(guān)系對(duì)治療效果的影響，現(xiàn)有技術(shù)中并沒(méi)有充分研究。而且在實(shí)際應(yīng)用中，也通常是將三七總皂苷直接用于治療多種心腦血管疾病，并沒(méi)有根據(jù)不同的疾病選擇具有不同針對(duì)性的皂苷成分。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種三七總皂苷組合物，該組合物對(duì)缺血組織有更好的保護(hù)作用。本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種三七總皂苷組合物，該組合物具有更好的降血脂和降血糖的作用。本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種三七總皂苷組合物，該組合物具有更好的抑制血小板聚集的作用。本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種三七總皂苷組合物，該組合物具有更好的改善血液流變性，降低紅細(xì)胞聚集性及血液粘度的作用。本發(fā)明還提供了上述組合物的制備方法。為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明先從三七提取物中分離三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi、人參皂苷Rbh、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb2,然后制備出以下組合物組合物1:該組合物含有7-9份(重量比)的Rp31-39份的Rg^31-35份的Rbi、3-6份的Re、6-11份的Rd和0.05-1.0份的Rb3。組合物2:該組合物含有7-9份(重量比)的R4、31-39份的R^、31-35份的Rbp3-6份的Re、6-11份的Rd和15-30份的Rb2。組合物3:該組合物含有7-9份(重量比)的Rp31-39份的Rg!、31-35份的Rbp3-6份的Re、6-11份的Rd、0.05-1.0份的Rt)3和15-20份的Rb2。組合物4:該組合物含有7-9份(重量比)的31-45份的Rgl、31-40份的Rb"3-6份的Re、6-11份的Rd。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，相對(duì)于市售的三七總皂香制劑，組合物l對(duì)缺血組織有更好的保護(hù)作用；組合物2具有更好的降血脂和降血糖的作用；組合物3具有更好的抑制血小板聚集的作用。組合物4具有更好的改善血液流變性，降低紅細(xì)胞聚集性及血液粘度的作用。具體實(shí)施例方式以下所述實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明了本發(fā)明。其中，除另有說(shuō)明外，所有份數(shù)和百分?jǐn)?shù)比均按重量計(jì)算。實(shí)施例1大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行分組分離將三七生藥材1000g粉碎成粗粉，分別用2、1.5、1.5倍量乙醇回流提取3次，每次1.5h,濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇至干；或?qū)⑷叽址?，加入多功能熱回流提取濃縮器內(nèi)，力口2.3倍量90%乙醇，加熱回流提取濃縮10小時(shí)后，將濃縮液移到單效外循環(huán)濃縮器減壓濃縮至無(wú)醇味。殘?jiān)眠m量甲醇溶解。通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用25%、40%、800/0和95%(體積比)乙醇梯度洗脫，流速10ml/min,以每份500ml收集。洗脫液用硅膠H薄層色譜分析，展開(kāi)劑為"正丁醇-乙酸乙酯-水，，4:1:5(上層)，10%(體積比)硫酸乙醇溶液顯色。合并色i普斑點(diǎn)相同組分，減壓回收溶劑。實(shí)施例2三七皂苷&、人參皂苷Rgi、人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參急苷Rd、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb2的分離提取。將實(shí)施例1經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離含有上述各組分的濃縮液分別上層析硅膠柱，依次用"氯仿-甲醇-水"為83:16:1、76:22:2、68.5:27.5:4、65:30:5、61:33:6、54:38.5:7.5的溶劑洗脫，流速10ml/min,以每份500ml收集。洗脫液用硅膠H薄層色譜分析，展開(kāi)劑同上。合并色譜斑點(diǎn)相同組分，減壓回收溶劑，分別得高純度的上述各組分。以乙腈-水二元梯度洗脫，乙腈0-30min,18%-19%(體積比)；30誦35min,19-35%(體積比)；35-60min，35-55%(體積比)。流速1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，進(jìn)樣量20W，柱溫為4(TC的方法檢測(cè)上述各成分。分離提取三七皂苷R^3.07g,其中三七皂苷R4的含量為95.8%.分離提取人參皂苷Rgil2.25g，其中三七皂苷Rgi的含量為96.9%.分離提取人參皂苷Rel.54g,其中三七皂苷Re的含量為96.4%。分離提取人參皂苷Rbi18.4g，其中三七皂苷Rbi的含量為96.7%。分離提取人參皂苷Rb22.15g，其中三七皂苷Rb2的含量為94.9%。分離提取人參皂苷Rb30.62g,其中三七皂苷Rb3的含量為95.2%。分離提取人參皂苷Rd3.65g,其中三七皂苷Rd的含量為94.6%。實(shí)施例3組合物的制備取上述分離獲得的各成分，按比例混合，用注射用水適量溶解，加針用活性炭脫色，濾過(guò)，加注射用水至總量，調(diào)節(jié)pH值至6.5-7.0,濾過(guò)，冷凍干燥，即得。按照上述方法，制備出如下組合物組合物1-1:7份的Rp31份的Rgp31份的Rbh、3份的Re、6份的Rd和0.05份的Rb3。且在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.53%。組合物1-2:9份的R4、39份的Rg"35份的Rt^、6份的Re、11份的Rd和1.0份的Rb3。且在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.40%。組合物2-l:RrRg^Rb^:Re:Rd:10)2為7:31:31:3:6:15,在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.30%。組合物2國(guó)2:RrRg^Rb^:Re:Rd:Rb2為9:39:35:6:11:30，在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.11%。組合物3-l:R^:Rg^Rb^:Re:Rd:Rb3:Rbz為7:31:31:3:6:0.05:15,在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.32%。組合物3-2:R4:RgrRb^:Re:Rd:Rb3:Rb2為9:39:35:6:11:1.0:20,在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.21%組合物4-l:7份的Rp31份的Rgp314分的Rt^、3份的Re和6份的Rd。且在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.52%。組合物4-2:9<分的Rp45<分的R^、40^f分的Rb^、6<分的Re和ll份的Rd。且在上述組合物中，上述各成分的總含量為96.48%。實(shí)施例4對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠缺血心肌的保護(hù)作用藥物組合物1-1,組合物1-2,市售三七總皂苷制劑(R4:RgrRl^為ll:38:21,總含量為78.6%)試劑烏拉坦、鹽酸異丙腎上腺素、氯化鈉注射液、CK、CK-MB試劑盒儀器生理記錄儀BL-420生理信號(hào)采集系統(tǒng)、離心機(jī)、半自動(dòng)生化分析儀動(dòng)物健康雄性Wastar大鼠50只，清潔級(jí)，體重180-220g。方法a)分組及模型制備試驗(yàn)用藥前各組大鼠先做心電圖檢查，棄去S-T段、T波有異常改變者和心律失常者，將50只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組10只，造模組40只，每天分別灌胃生理鹽水、組合物1-1、組合物l-2和市售品，連續(xù)10天，于10天灌藥后30min,按照如下方法造才莫將50只大鼠用20%烏拉坦5ml/kg腹腔注射淺麻醉后，背位固定，皮下多點(diǎn)注射鹽酸異丙腎上腺素，正常對(duì)照組給予等容量的生理鹽水，連接心電圖機(jī)，走紙速度50cm/s,標(biāo)準(zhǔn)電壓10mm/mv,記錄成膜后心電圖變化。導(dǎo)聯(lián)心電圖，觀察ST段的改變。具備以下條件之一者判斷為心肌缺血陽(yáng)性1)S-T段水平向下或向上偏移20.1mv;2)T波高卑超過(guò)同導(dǎo)聯(lián)R波的1/2;3)T波高卑伴S-T段移位。陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)l)S-T段斜形偏移，或水平偏移〈0.1mv;2)T波低平或雙向倒置。以模型組大鼠心電圖ST段抬高^(guò)0.1mv作為造模成功的標(biāo)志。b)試驗(yàn)方法連續(xù)給藥IO天，于末次灌藥后30min造模，造模前、造模后即刻、5min、10min、20min、30min時(shí)用生理記錄儀導(dǎo)聯(lián)心電圖，并在6h后采血，離心取血清檢測(cè)CK、CK-MB。統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果a)對(duì)J點(diǎn)位移的影響與空白組比較有非常顯著性差異；與模型組比較，在不同時(shí)間對(duì)J點(diǎn)位移有顯著下降作用，且組合物1-1與組合物l-2作用好于市售品組。見(jiàn)表1。表l對(duì)J點(diǎn)位移的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>b)對(duì)異丙腎上腺素所致急性心肌缺血大鼠血清CK、CK-MB的影響與空白組比較，有非常顯著性差異；與模型組比較，造模6h后，可使CK、CK-MB明顯減少，且組合物1-1組和組合物l-2組減少的更明顯。表明組合物1-1和組合物l-2對(duì)異丙腎上腺素致大鼠急性心肌缺血損傷具有良好的保護(hù)作用。見(jiàn)表2。表2對(duì)異丙腎上腺素所致急性心肌缺血大鼠血清CK、CK-MB的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例5對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用藥物組合物1-1,組合物1-2,市售三七總皂苷制劑(R「.Rg1:Rbi為11:38:21,總含量為78.6%)試劑氯代三苯基四氮唑、多聚甲醛、水合氯醛、儀器激光多普勒血流儀動(dòng)物健康清潔級(jí)SD大鼠，體重230-280g。方法a)分組及給藥方法隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、組合物組和市售品組。于術(shù)前3d開(kāi)始每天一次各組分別尾靜脈注射給藥，造模前0.5h進(jìn)行第三次給藥，造模后6h和12h分別進(jìn)行第四、五次給藥，即總共給藥五次。模型組和假手術(shù)組大鼠給予注射生理鹽水。b)模型制備取0.235mm尼龍魚(yú)線，截作每段8cm左右，頭端0.5mm加熱成光滑的球形，距插入端10mm、18mm、20mm三處分別用信號(hào)筆做標(biāo)記，酒精清潔后置生理鹽水中備用。將大鼠用10%水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉，頸部正中切口，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)月永，并分離翼額動(dòng)脈。在頸內(nèi)動(dòng)脈近端備線、遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾，頸總動(dòng)脈近分叉處切口，插入栓線，避開(kāi)翼突腭動(dòng)脈，插至大腦中動(dòng)脈稍感阻力時(shí)即可，其深度為17-20mm,動(dòng)脈外用手術(shù)線綁扎固定，栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，入顱至大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來(lái)源。傷口和腹腔均注入少量抗生素后，縫合皮膚，回籠飼養(yǎng)。造模成功的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)后24h，每只取手術(shù)側(cè)腦小片進(jìn)行染色，變白色者為模型成功；動(dòng)物手術(shù)后有明顯手術(shù)側(cè)Homer癥及手術(shù)側(cè)偏癱體癥。檢測(cè)指標(biāo)l)腦含水量測(cè)定造模24h,快速斷頭取鼠大腦。取左側(cè)半腦后半部分分別稱濕重，置120。C烤箱烘干至恒重按下列公式計(jì)算腦組織含水量，腦組織含水量(％)=(濕重-干重)/濕重\100%。2)腦組織勻漿測(cè)定超氧化物歧化酶、丙二醛的含量腦組織勻漿液的制備迅速斷頭取腦，耳又左側(cè)半腦前小部分》文于液氮中保存待測(cè)。從液氮中取出半腦稱取100mg,置于9倍生理鹽水中，用研磨器于冰塊上研磨，制成100%(W/V)腦勻漿液，3500r/min，離心10min。才全測(cè)方法MDA測(cè)定采用石危代巴比妥酸法，SOD活力檢測(cè)采用黃噤呤氧化法。3)腦梗塞范圍的測(cè)定造模后24h大鼠，快速取全腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冰凍25min。然后行冠狀切面取大腦中間一片，迅速置1%紅四氮唑中，避光，37。C溫孵20min，其間每隔7-8min翻動(dòng)一次，染色后以4%多聚甲酪固定。染色結(jié)果正常組織呈紅色，損傷梗死組織呈白色。以稱重法計(jì)算腦梗塞面積百分比。結(jié)果與模型組比較，腦含水量均明顯下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腦組織中丙二醛含量明顯降低，超氧化物歧化酶活性升高，腦梗死面積明顯減少。組合物組差異非常顯著(P<0.01)，而市售品組顯示有差異(P<0.05)。表3各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>市售品組1079.4±1.054.52±1.10142.06±32.1019.27±0.046實(shí)施例6降血脂試驗(yàn)藥物組合物2-1，組合物2-2,市售三七總皂苷制劑(RrRgl:Rb為ll:38:21，總含量為78.6%)試劑總膽固醇(TC)測(cè)定試劑盒；甘油三酯(TG)測(cè)定試劑盒動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22g儀器B-260型恒溫水浴鍋；TDL80-2B型^f氐速離心機(jī)；THER-MOLABSYSTEMMK3型酶標(biāo)儀方法取62只昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組(16只)、高脂模型組(16只)、組合物2-1組(10只)、組合物2-2組(10只)和市售品組(10只)，每組雌雄各半。正常對(duì)照組喂普通飼料，其余3組飼喂高脂飼料(配方為77.5%基礎(chǔ)飼料，2%膽固醇，10%豬油，10%蛋黃粉，0.5%去氧膽酸鈉)。小鼠每周稱體重一次，喂養(yǎng)5周。5周后，隨機(jī)取正常對(duì)照組和高脂模型組雌雄動(dòng)物各3只，摘除眼球取血，測(cè)定血清TC、TG。正常對(duì)照組的血清TC、TG均低于高脂模型組，數(shù)據(jù)差異顯著，提示小鼠的高脂血癥模型已經(jīng)形成，該批小鼠可用于正式實(shí)驗(yàn)。隨后按表2劑量給各組小鼠等體積灌胃給藥。各組藥物均用1%羧曱基纖維素鈉制成混懸液。給藥3周后，各組動(dòng)物均禁食12h,稱重，摘除眼球取血，血液樣品3000rpm離心10min，分離血清，按照總膽固醇和甘油三酯試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定TC、TG。所得數(shù)據(jù)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)以x士s表示。結(jié)果a)樣品對(duì)高脂血癥小鼠體重增長(zhǎng)的影響試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組小鼠的體重均在18-20g左右，經(jīng)過(guò)5周的高脂飼料造模，各組小鼠的體重變化不一(見(jiàn)表4)。可以看出高脂模型組、組合物2-1組、組合物2-2組和市售品組的體重變化與正常對(duì)照組相比，均有明顯增大，給藥3周后，模型組體重升至最高，提示高脂模型的保持，組合物2-1組、組合物2-2組和市售品組均能明顯降低高脂模型動(dòng)物的體重。且組合物2-1組、組合物2-2組降低體重的效果最好，2組試驗(yàn)結(jié)束時(shí)平均體重較模型組分別輕3.3g，3.4g，表現(xiàn)出一定的降低體重效果。表4各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重變化表(g)組別Od7d14d21d28d35d42d49d56d正常對(duì)照組19.920.421.522.123.225.426.928.727.6高脂模型組19.220.221.422.224.627.028.228.829.4組合物2-1組18.819.421.924.226.128.227.426.726.1組合物2-2組18.919.522.024.225.828.027.626.626.0市售品組18.819.621.823.825.127.327.527.626.3b)樣品對(duì)高脂血癥小鼠血清TC、TG的影響結(jié)果給藥3周后，測(cè)定各組小鼠血清的總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)。結(jié)果見(jiàn)表5。表5對(duì)小鼠血脂水平的影響組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(mg/kg)TC(mmo1/1)TG(mmo1/1)正常對(duì)照組102.69±0.251.25±0.52高脂模型組105.75±1.023.05±0.44組合物2-1組101253.23±0.522.07±0.60組合物2-2組101253.29±0.462.16±0.37市售品組105003.48±0.362.40±0.33由表5可以看出，高脂模型組的TC、TG水平均比正常對(duì)照組明顯升高，表明小鼠高脂血癥模型造模成功。與模型組相比，組合物2-l組、組合物2-2組和市售品組均可明顯降低小鼠的TC、TG水平，且組合物2-1組和組合物2-2組效果優(yōu)于市售品組而用量^f又為市售品組的1/4，表明組合物2-1組和組合物2-2組降血脂作用好于市售品組。實(shí)施例7降血糖試驗(yàn)藥物組合物2-1,組合物2-2,市售三七總皂苷制劑(RrRgrRbi為11:38:21，總含量為78.6%);動(dòng)物昆明小鼠80只，雄性，體重均在18-22g。試劑四氧嘧啶、胰島素放射免疫分析藥盒儀器血糖/血酮儀及配套試紙、電熱恒溫水浴鍋、電子天平、低速冷凍離心機(jī)、放射免疫計(jì)數(shù)器方法a)糖尿病模型小鼠的制備雄性昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取IO只作為正常對(duì)照組，其余小鼠禁食(不禁水)24小時(shí)后，將四氧嘧啶用生理鹽水新鮮配成2%溶液，以200mg/kg劑量腹腔注射，72小時(shí)后剪尾取血檢測(cè)血糖，以血糖在ll.lmmol/1以上的小鼠為糖尿病模型小鼠，納入試驗(yàn)。b)分組及給藥取糖尿病模型小鼠40只隨機(jī)分為4組，每組10只。各組血糖值相近，其中1組為模型對(duì)照組，其余3組為給藥組，即組合物2-l組、組合物2-2組和市售品組。各組小鼠均灌胃相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予相應(yīng)量的生理鹽水，定期稱量體重調(diào)整給藥量，連續(xù)21d。c)指標(biāo)檢測(cè)試-驗(yàn)期間分別于0d、7d、14d、21d剪尾取血檢測(cè)血糖?？诜悄土吭囼?yàn)在灌胃結(jié)束4全測(cè)血糖后，將小鼠以2.5g/kg劑量灌服葡萄糖，并才企測(cè)Omin、30min、60min、120min血糖。小鼠于第22天眼眶取血，4°C,3000rpm離心10min分離血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)4企測(cè)血清胰島素水平。統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t;險(xiǎn)驗(yàn)。結(jié)果a)對(duì)四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖的影響小鼠腹腔注射四氧嘧啶后，血糖顯著升高，給藥后7d、14d模型組小鼠血糖很高，與正常組比較具有顯著性差異，說(shuō)明四氧嘧啶致糖尿病模型成功，并在試驗(yàn)期間持續(xù)高血糖。給藥7d后各給藥組小鼠血糖開(kāi)始下降，給藥14d后，組合物2-1組和組合物2-2組小鼠血糖下降明顯，與模型組比較有顯著性差異。灌胃21d后組合物2-l組和組合物2-2組小鼠與模型組比較有非常顯著性差異。結(jié)果提示組合物2-1組和組合物2-2組具有較好的降血糖作用。表6對(duì)四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖的影響組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量0h血糖(mmol/L)30minlh2h正常對(duì)照組106.23±2.0315.04±3.5313據(jù)±3.4511.09±3.04模型對(duì)照組1023.47±4.0225.46±3.5524.305±4.0222.46±3.44組合物2-1組1040g/kg/d生藥16.53±3.2522.77±4.0721.15±3.6217.65±2.41組合物2-2組1040g/kg/d生藥17.0U3.0222.61±4.1121.08±3.3117.60±2.03市售品組1040g/kg/d生藥17.49±3.4422.04±3.5220.09±4.0817.82±2.68b)對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠血清胰島素的影響與正常對(duì)照組相比較，模型組小鼠的血清胰島素水平明顯降低，說(shuō)明腹腔注射四氧嘧啶后，小鼠胰島p細(xì)胞的功能受到破壞，造模成功；與模型對(duì)照組相比較，3組供試品組血清胰島素水平均有不同程度的升高，其中組合物2-1組和組合物2-2組具有非常顯著性差異，而市售品組具有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表7。表7對(duì)四氧嗜啶性糖尿病小鼠血清胰島素的影響組別ii劑量血清胰島素(|aIU/ml)正常對(duì)照組1018.58±3.04模型對(duì)照組1010.52±3.24組合物2-1組1040g/kg/d生藥15息4.33組合物2-2組1040g/kg/d生藥_15.28士4.04市售品組1040g/kg/d生藥_13.17士3.89實(shí)施例8抑制血小板聚集作用藥物組合物1-1、組合物2-2、組合物3-1和市售三七總皂苷制劑(R1:RgrRbi為11:38:21，總含量為78.6%)。試劑二甲亞煩L研究對(duì)象健康成人20例無(wú)償獻(xiàn)血者，男女不限，年齡34士6歲，采血前2周未服用過(guò)阿司匹林等抗血小板聚集藥物。儀器多功能智能血液凝聚儀，離心機(jī)，血小板計(jì)數(shù)儀方法a)制備富血小板血漿由健康志愿者按常規(guī)肘靜脈取血，用3.8%枸櫞酸鈉1:9抗凝混勻，于PVC離心管中，以1000r/min、20。C離心10min,取上層淡黃色液體即為富血小板血漿，剩余部分以5000r/min20。C離心12min,取上層清液為貧血小板血漿，以貧血小板血漿液調(diào)富血小板血漿液使富血小板血漿液的血小板數(shù)為1.5-2.0xl08/ml,備用。b)血小板聚集測(cè)定參考Born比濁法測(cè)定血小板聚集性。血小板聚集儀于實(shí)驗(yàn)前預(yù)熱15min,按儀器操作方法用200|al貧血小板血漿調(diào)儀器。于比色杯中加入200|al富血小板血漿和1^1藥物溶劑二曱亞砜混勻，37。C溫浴5min,攪拌30秒后，分別加入不同劑量的誘導(dǎo)劑ADP,記錄5min內(nèi)血小板聚集曲線，觀察5min內(nèi)最大聚集率，從而確定誘導(dǎo)劑的闊劑量。藥物試驗(yàn)時(shí)，于比色杯中加入200iul富血小板血漿，分別加入lpl藥物溶液，溶媒空白對(duì)照為二甲亞砜溶液，37。C溫浴5min，攪拌30秒后，加入終濃度為4.0|imol/L的ADP,記錄5min血小板聚集曲線，觀察5min內(nèi)的聚集率和最大聚集率。所有樣本的血小板聚集測(cè)定均在3h內(nèi)完成。數(shù)據(jù)處理血小板聚集抑制率按下式計(jì)算。聚集抑制率(％)=(空白對(duì)照聚集率-藥物聚集率)/空白對(duì)照聚集率xiooy。結(jié)果本發(fā)明組合物對(duì)血小板的抑制作用較強(qiáng)，尤其是組合物3-1的作用最強(qiáng)。表8抑制血小板聚集作用<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例9對(duì)血液流變性的影響藥物組合物4-1、組合物4-2和市售三七總皂苷制劑(Ri:RgrRbi為ll:38:21,總含量為78.6%)。試劑紅細(xì)胞懸浮液、生理鹽水、肝素鈉儀器LG-B-190紅細(xì)胞變形、聚集測(cè)試儀、R-80全自動(dòng)全血粘度測(cè)試儀、孩i量高速離心機(jī)對(duì)象31例獻(xiàn)血者的靜脈血，其中男16例，女15例，平均年齡53歲，肝素抗凝(34U/ml)。方法將肝素抗凝血，用生理鹽水稀釋，分為6個(gè)濃度組，濃度分別為6.25、12.5、25、50、10(M/ml及原濃度。組合物4-l、4-2和市售品分別用生理鹽水稀釋成200ml。每個(gè)濃度組分為加生理鹽水組、加4-1組合物組、加4-2組合物組和加市售品組。37。C溫箱孵育1Omin。分別取樣品測(cè)定最大紅細(xì)胞聚集指數(shù)、最大紅細(xì)胞變形指數(shù)、全血高切粘度及全血低切粘度。紅細(xì)胞聚集指數(shù)測(cè)定采用光密度法，紅細(xì)胞變形指數(shù)測(cè)定采用激光衍射法，全血粘度測(cè)定采用錐板法，切變率200s^下全血粘度為全血高切粘度，切變率"_1下全血粘度為全血低切粘度。統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用成對(duì)資料樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果與生理鹽水組比較，各藥物組紅細(xì)胞聚集性降低，同時(shí)紅細(xì)胞變形性增高，血液粘度降低。而2組組合物組效果好于市售品組。詳見(jiàn)表9-11。表9對(duì)紅細(xì)胞聚集性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表IO對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表11對(duì)全血粘度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>權(quán)利要求1.一種三七總皂苷藥物組合物，包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb3，各組分之間的重量比為7～931～3931～353～66～110.05～1.0，且上述所有組分占整個(gè)組合物重量的90.0-99.0％。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中三七皂苷Rp人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb3之間的重量比為7:31:31:3:6:0.05。3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中三七皂苷Rp人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb!、人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb3之間的重量比為9:39:35:6:11:1.04.一種三七總皂苷藥物組合物，包括組分三七皂苷R4、人參皂苷Rgi、人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb2,各組分之間的重量比為7~9:31~39:31~35:3~6:6~11:15~30。5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中三七皂苷Ri、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb2之間的重量比為7:31:31:3:6:15。6.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中三七皂苷R4、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbh、人參皂苷Re、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb2之間的重量比為9:39:35:6:11:30。7.—種三七總皂苷藥物組合物，包括三七皂苷Rp人參皂苷Rg1人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb2,各組分之間的重量比為7~9:31~39:31~35:3~6:6~11:0.05~1.0:15~20。8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中三七皂苷R4、人參皂苷Rgp人參皂苷Rbp人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3和人參急苦Rb2之間的重量比為7:31:31:3:6:0.05:15。9.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中三七皂苷Rp人參皂苷Rgi、人參皂苷Rbh、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb2之間的重量比為9:39:35:6:11:1.0:20。10.—種三七總皂苷藥物組合物，包括三七皂苷Rp人參皂苷Rgi、人參皂苷Rt^、人參皂苷Re和人參皂苷Rd,各組分之間的重量比為7~9:31~45:31~40:3~6:6~11。11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中三七皂苷Rp人參皂苷Rgi、人參皂苷Rb"人參皂苷Re和人參皂苷Rd之間的重量比為7:31:31:3:6。12.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中三七皂普Ri、人參皂苷Rgt、人參皂苷Rbp人參皂苷Re和人參皂苷Rd之間的重量比為9:45:40:6:11。全文摘要本發(fā)明涉及三七總皂苷藥物組合物及其應(yīng)用，其特征在于其活性成分由三七總皂苷組成，分別為三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rb₁、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb₃和人參皂苷Rb₂，并配制總皂苷的含量和成分不同的組合物，這些組合物具有不同的治療效果。文檔編號(hào)A61P3/06GK101390887SQ20081017644公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2008年11月11日優(yōu)先權(quán)日2008年11月11日發(fā)明者周廣紅,周雪峰,岳大彪,方同華,項(xiàng)彥華申請(qǐng)人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司