一種從假葉樹(shù)中提取分離假葉樹(shù)皂苷元的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于中藥活性成分的分離純化技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物化合物單體的制備方法，具體涉及一種提取分離假葉樹(shù)皂苷元的方法，尤其涉及一種從假葉樹(shù)中提取假葉樹(shù)皂苷元的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]假葉樹(shù)(Ruscus aculeatus)，一種灌木，屬于天門冬科假葉樹(shù)屬植物，喜溫暖濕潤(rùn)和陽(yáng)光充足的環(huán)境，耐半陰，怕烈日暴曬，不耐寒。原產(chǎn)于歐亞，西歐和地中海沿岸地區(qū)。假葉樹(shù)枝葉濃綠，常作為觀葉植物栽培，布置居室、廳堂等處，素雅大方，枝葉干燥后還可染色，作為裝飾品使用。另有醫(yī)學(xué)研究證明，假葉樹(shù)提取物可刺激血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，用于治療毛發(fā)病癥，特別是簇狀脫發(fā)和男性脫發(fā)。此外，假葉樹(shù)提取物也可與其它外用藥物合用誘導(dǎo)VEGF的產(chǎn)生來(lái)防止皮膚衰老。多項(xiàng)對(duì)照研究證實(shí)，假葉樹(shù)提取物的血管舒縮作用和靜脈張力增強(qiáng)作用，比金縷梅和歐洲七葉樹(shù)強(qiáng)烈得多。
[0003]假葉樹(shù)皂苷元(ruscogenin)，亦稱魯斯可皂苷元，別名螺可吉寧，主要來(lái)源于百合科沿階草屬植物麥冬Oph1pogon Japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.的干燥塊根，含多種甾體皂甙:麥冬皂甙A、B、C、D均具有抗心肌梗塞，增強(qiáng)心肌收縮力，增加冠脈流量等作用，甙元均為魯斯考皂苷元，具有明顯的抗血栓活性，能降低血清及組織的NO、MDA水平，保護(hù)各組織免受自由基攻擊，對(duì)心、肺作用更明顯并下調(diào)肺組織TF基因表達(dá)，具有很好的藥用前景，但由于在原植物中魯斯考皂苷元極少以原型存在均是以皂苷形式存在，影響了其藥效發(fā)揮。
[0004]現(xiàn)有文獻(xiàn)針對(duì)于假葉樹(shù)皂苷元提取分離的很少，并且主要采用溶劑提取及結(jié)晶等常規(guī)手段進(jìn)行假葉樹(shù)皂苷元單體的分離純化，效率低，產(chǎn)量少，工藝不穩(wěn)定，成本較高。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種從假葉樹(shù)中提取分離假葉樹(shù)皂苷元的方法。該方法操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，分離效率高，工藝穩(wěn)定，成本低廉，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化假葉樹(shù)阜苷元單體的高純度分離制備，得到的假葉樹(shù)阜苷元單體的純度達(dá)98 %以上，有效成分回收率大于85%。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:從假葉樹(shù)中提取分離假葉樹(shù)皂苷元的方法包括以下步驟:
[0007]I)將假葉樹(shù)原料粉碎后置于容器中，加入體積分?jǐn)?shù)為65-95%的甲醇或乙醇，加熱回流提取3_4次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，合并提取液；
[0008]2)將步驟I)得到的提取液按0.06-0.13BV/分鐘的速度通過(guò)裝有10g處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，吸附完畢，用60% -90%甲醇或乙醇洗脫，收集洗脫液，采用薄膜減壓濃縮，至無(wú)溶劑，再過(guò)濾，干燥得干燥物；
[0009]3)將上述步驟2)中得到的干燥物加入5% -10%硫酸15mL-30mL，回流3_4h，得到水解混合物，放冷至室溫后過(guò)濾，收集固體；
[0010]4)將步驟3)得到的固體放置容器中，加入1% -5%氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液，調(diào)至中性，用氯仿萃取，室溫萃取3-5次，合并萃取液，減壓回收溶劑至干燥得粉末；
[0011]5)將步驟4)得到的粉末加入使其剛好溶解的甲醇，并加入與粉末等質(zhì)量的100-200目硅膠，混勻后烘干，再以一定比例裝柱，進(jìn)行硅膠色譜柱層析，以體積分?jǐn)?shù)65-85%的甲醇或乙醇水溶液為流動(dòng)相洗脫，薄層層析跟蹤監(jiān)測(cè)，收集假葉樹(shù)皂苷元洗脫液，并濃縮；
[0012]6)將步驟5)所得濃縮物加入5-10倍質(zhì)量的甲醇或乙醇溶解，并加入活性炭加熱回流脫色，過(guò)濾，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥至恒重，收集干品，即得假葉樹(shù)皂苷元單體
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[0013]上述步驟I)中提取溶劑的用量為藥材質(zhì)量:溶液體積為IKg: 4-12L ;
[0014]步驟2)中減壓濃縮條件為真空度10.7kPa，溫度為70_90°C ；
[0015]步驟3)中最佳水解條件為5%硫酸25mL回流4h ；
[0016]步驟4)中氯仿加入量為固體質(zhì)量:氯仿體積為IKg: (6-10) L ；
[0017]步驟5)中所述一定比例為粉末:200-300目硅膠的質(zhì)量比為1: 30_50 ;
[0018]步驟6)中活性炭的加入量為濃縮物的3%-8%質(zhì)量。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
[0020]本發(fā)明提高了一種從假葉樹(shù)中提取分離假葉樹(shù)皂苷元的方法，該方法采用假葉樹(shù)作為提取假葉樹(shù)皂苷元的原料，假葉樹(shù)原料含量高于傳統(tǒng)的麥冬原料，便于后續(xù)提取純化。該發(fā)明通過(guò)對(duì)假葉樹(shù)藥材的粉碎、加熱回流提取、大孔樹(shù)脂吸附聯(lián)合薄膜減壓濃縮，確保了所得的總皂苷浸膏中主要含有皂苷成分，在酸水解之前預(yù)先去掉了部分雜質(zhì)，使得酸水解具有進(jìn)一步的針對(duì)性，采用硅膠柱層析，成本低廉，操作簡(jiǎn)便，所得洗脫液濃縮后直接進(jìn)行重結(jié)晶即可的純度較高的產(chǎn)品。本發(fā)明所提供的從假葉樹(shù)原料中提取假葉樹(shù)皂苷元的方法，優(yōu)化提取步驟，降低生產(chǎn)成本，依據(jù)該方法所得的假葉樹(shù)皂苷元含量大于98 %，有效成分回收率大于85%。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。
[0022]下述各實(shí)施例中，終產(chǎn)品假葉樹(shù)皂苷元單體的純度檢測(cè)均采用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)法，色譜條件如下:
[0023]流動(dòng)相:甲醇-水(85: 15);流速 1.0mL/min ；
[0024]色譜柱填料為C1S，粒度為5um，色譜柱內(nèi)徑為4.6mm,長(zhǎng)度為150mm ；
[0025]檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
[0026]實(shí)施例1:
[0027]方法包括以下步驟:
[0028]取假葉樹(shù)原料10kg，粉碎后置于容器中，加入60L體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇，加熱回流提取4次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并提取液；將提取液按0.08BV/分鐘的速度通過(guò)裝有10g處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，吸附完畢，用80%甲醇洗脫，收集洗脫液，于真空度10.7kPa，溫度為70-90°C條件下采用薄膜減壓濃縮，至無(wú)溶劑，再過(guò)濾，干燥得干燥物；將干燥物加入5%硫酸25mL，回流3h，得到水解混合物，放冷至室溫后過(guò)濾，收集固體；固體放置容器中，加入5%氫氧化鈉溶液，調(diào)至中性，以固體質(zhì)量:氯仿體積為IKg: 8L的用量加入氯仿萃取，室溫萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑至干燥得粉末；將粉末加入使其剛好溶解的甲醇，