專利名稱：一種仙鶴草提取物及其在制備糖尿病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種仙鶴草提取物及其在制備糖尿病藥物中的應(yīng)用。仙鶴草石油醚部 位提取物能抑制NF- K B激活系統(tǒng)活性及抑制NO釋放。
背景技術(shù)：
糖尿病在全世界的發(fā)病率有逐年增高的趨勢，在發(fā)達國家已被列為繼心血管疾病 及腫瘤之后的第三大疾病，其中2型糖尿病是占了糖尿病患者的90%。目前糖尿病對人類 健康危害最大的是在動脈硬化及微血管病變基礎(chǔ)上產(chǎn)生的多種慢性并發(fā)癥，如糖尿病性心 臟病、糖尿病性腦血管病、糖尿病性腎病等，已引起全世界醫(yī)學(xué)界的高度重視。2009年11月14日是第三個聯(lián)合國糖尿病日。國際糖尿病聯(lián)合會(IDF)發(fā)布最新 數(shù)據(jù)全球糖尿病患者人數(shù)有2. 85億，而且超過一半患者屬于20 60歲人群。我國糖尿 病患者人數(shù)有4320萬。是僅次于印度(5080萬)的世界第二大糖尿病重災(zāi)區(qū)。IDF預(yù)測2010年糖尿病將耗費世界經(jīng)濟至少3760億美元或全世界醫(yī)療保健開支 總數(shù)的11. 6%。到2030年，這一數(shù)字將超過4900億美元。中藥與其他降糖藥物相比，其優(yōu)勢在于，不僅能降低血糖，還能發(fā)揮復(fù)方多靶點、 多途徑的優(yōu)勢對機體進行調(diào)整，通過辨證施治，改善患者糖耐量異常、降低血粘度，達到預(yù) 防大血管及微血管病變，降低糖尿病并發(fā)癥的效果。核轉(zhuǎn)錄因子- κ B(nuclear factor Kappa B, NF- κ B)是 1986 年由 sen 禾口 Baltimore發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時被認為是B細胞內(nèi)的一個增強子結(jié)合蛋白，而該增強子調(diào)控免疫球蛋 白kappa氫鏈的轉(zhuǎn)錄，故命名為NF-κ B。近年來的研究顯示，炎癥因子的信號傳導(dǎo)與胰島素受體的信號通路有交叉作 用。炎癥導(dǎo)致胰島素抵抗的主要分子機制是非特異性炎癥所產(chǎn)生的炎癥因子干擾胰島素 IRS(胰島素受體底物)/ΡΙ3_Κ(脂酰肌醇-3-激酶，調(diào)節(jié)糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝等)信號傳導(dǎo) 通路，其關(guān)鍵部位是IRS。通過誘導(dǎo)IRS的絲/蘇氨酸磷酸化，阻礙IRS正常的酪氨酸磷酸 化，導(dǎo)致IRS與胰島素受體(IR)的結(jié)合能力下降，并減弱IRS激活其下游的Ρ13-Κ的磷酸 化過程，干擾胰島素信號經(jīng)IR/IRS/PI3-K通路下傳。體外實驗已發(fā)現(xiàn)至少有八種激酶使IRS的絲氨酸與蘇氨酸磷酸化，其中C-Jim氨 基末端激酶(JNK)、核因子K B抑制物激酶(IKK)等6種激酶可被TNF-a(腫瘤壞死因子-a) 激活。導(dǎo)致胰島素抵抗的IKK/NF-KB途徑研究較多。IKK/NF-κΒ通路是炎癥的關(guān)鍵通路。 NF-kB是炎癥啟動、調(diào)節(jié)的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄激活因子，一般情況下NF-K B與I κ B結(jié)合以潛在 的無活性的形式存在于細胞質(zhì)中，能被LPS(脂多糖)、IL-I (白芥素-1)、TNF-a等激活， NF- κ B被激活后與I κ B分離轉(zhuǎn)移到核內(nèi)調(diào)節(jié)多種基因轉(zhuǎn)錄，參與與炎癥反應(yīng)及自然免疫 反應(yīng)，而誘導(dǎo)表達的細胞因子又能上調(diào)NF- κ B活性，形成正反饋調(diào)節(jié)機制，增強炎癥反應(yīng)， IKK β是NF-κΒ的上游激活劑。研究發(fā)現(xiàn)，IKK β通過二種途經(jīng)干擾胰島素的信號傳導(dǎo)， 一是直接使IRS的絲氨酸磷酸化，另一條是IKK β降解IkB，激活NF- κ B，啟動并放大炎癥。 炎癥導(dǎo)致胰島素抵抗，參與了代謝綜合征和T2DM(2型-糖尿病)發(fā)生、發(fā)展，抑制慢性、亞臨床性炎癥可能成為治療代謝綜合征和T2DM藥物的新靶點。Stephens等使用TNF刺激胰島β細胞，觀察到抑制NF- κ B的活性可以保護胰島 β細胞免除TNF誘導(dǎo)的細胞死亡。因此，抑制NF-κ B活性可能抑制β細胞中免疫介導(dǎo)的 幾種不同的細胞死亡途徑，這種機制在自身免疫性糖尿病中可能作為保護胰島β細胞的 有效策略。更多的研究正逐步向人們揭示糖尿病、炎癥和各種炎癥因子之間存在必然的聯(lián) 系，糖尿病病因及機制十分復(fù)雜，而炎癥是其中重要因素之一。針對炎性因子及其靶基因在 人體內(nèi)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)NF-κ B的研究開創(chuàng)了糖尿病防治的新領(lǐng)域。目前已知由iNOS催化產(chǎn)生的NO是細胞因子介導(dǎo)的體內(nèi)多種細胞損害及功能異常 的潛在的介質(zhì)。能抑制NF-K B活性和抑制NO釋放的藥物，在糖尿病治療及并發(fā)癥的防治上具有 明顯的優(yōu)勢。近年來。從中藥中篩選出能抑制NF-kB活性和抑制NO釋放的物質(zhì)成為國內(nèi) 研究降糖藥物的熱點之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明鑒于上述狀況下進行，其目的在于提供來源于植物，通過抑制NF- κ B活性 和抑制NO釋放防治糖尿病的藥物。本發(fā)明以薔薇科(Rosaceae)植物的仙鶴草為原料。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)仙鶴草提取物能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠和鏈佐霉素糖尿病小鼠高 血糖的上升，有較強的降糖活性。本發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明所述的一種仙鶴草提取物用以下方法提取獲得首先取干燥的薔薇科 (Rosaceae)植物仙鶴草(Agrimonia pilosa Ledeb. ) Ikg粉碎，過60目篩，稱取中藥粉碎機 粉碎仙鶴草后所得的粉末IOOg于2000ml圓底燒瓶中，加IOOOml的質(zhì)量濃度為60%的乙醇 為提取溶劑，加熱至80°C進行熱回流，回流提取3次，每次1小時，合并醇提液，濃縮，制成浸 膏；浸膏用水溶解，按極性大小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇對水溶液進行萃取，揮干石 油醚部位的溶劑得石油醚部位的浸膏，即是仙鶴草提取物。本發(fā)明所述的一種用于治療糖尿病的藥物，其中含有所述的植物仙鶴草石油醚部 位提取物，以及藥學(xué)上可接受的輔助劑。本發(fā)明所述的藥物制成片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑。本發(fā)明的有益效果是與目前市場上的降糖藥相比所具有的優(yōu)勢是本發(fā)明中所述 提取物通過抑制NO釋放和NF- κ B活性等發(fā)揮復(fù)方多靶點、多途徑的優(yōu)勢，從而不僅能降低 血糖，還能對機體進行調(diào)整，通過辨證施治，改善患者糖耐量異常、降低血粘度，達到預(yù)防大 血管及微血管病變，降低糖尿病并發(fā)癥的效果。
具體實施例方式以下結(jié)合實際情況，對本明的具體實施方式
作詳細說明實施例1仙鶴草提取物(石油醚部位)的制備實施中，以在廣州附近采的仙鶴草(由廣東中研所蔡岳文教授鑒定為薔薇科(Rosaceae)植物仙鶴草(Agrimonia pilosa Ledeb.))為例，首先取干燥的仙鶴草Ikg粉 碎，過60目篩，稱取仙鶴草被中藥粉碎機粉碎后過60目篩所得的粉末IOOg于2000ml圓底 燒瓶中，加IOOOml的質(zhì)量濃度為60%的乙醇為提取溶劑，加熱至80°C進行熱回流，回流提 取3次，每次1小時，合并醇提液，濃縮，制成浸膏。浸膏用水溶解，按極性大小先后用石油 醚，乙酸乙酯，正丁醇對水溶液進行萃取，揮干石油醚部位的溶劑得石油醚部位的浸膏，即 是本發(fā)明所指的仙鶴草提取物。實施例2仙鶴草提取物(石油醚部位)抑制NF- κ B活性率檢測NF-K B活性檢測利用NF-K B轉(zhuǎn)錄活性熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)進 行。pNF-κ B-Iuc質(zhì)粒上有4個NF-K B結(jié)合位點融合在熒光素酶基因的編碼序列上。 pNF- κ B-Iuc質(zhì)粒和PcDNA3. 1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入293細胞中，通過0. 6mg/ml的G418篩選出 pNF- κ B-luc-293克隆細胞。pNF- κ B-luc-293克隆細胞經(jīng)培養(yǎng)后以1 X 105/孔鋪于96 孔板中，同時給予仙鶴草提取物(20μ g/ml)處理15min后再用TNF_a (lOng/ml)孵育6h。 裂解細胞，熒光素酶的表達水平分析通過熒光素酶檢測系統(tǒng)進行檢測。熒光檢測儀器為 Berthold Detection Systems,蒸餾水替仙鶴草提取物做空白對照，羅格列酮做陽性對照。抑制率
權(quán)利要求
1.一種仙鶴草提取物，其特征在于該提取物用以下方法提取獲得首先取干燥的薔薇 科植物仙鶴草Ikg粉碎，過60目篩，稱取中藥粉碎機粉碎仙鶴草所得粉末IOOg于2000ml 圓底燒瓶中，加IOOOml的質(zhì)量濃度為60%的乙醇為提取溶劑，加熱至80°C進行熱回流，回 流提取3次，每次1小時，合并醇提液，濃縮，制成浸膏；浸膏用水溶解，按極性大小先后用石 油醚，乙酸乙酯，正丁醇對水溶液進行萃取，揮干石油醚部位的溶劑得石油醚部位的浸膏， 即是仙鶴草提取物。
2.一種用于治療糖尿病的藥物，其中含有權(quán)利要求1所述的植物仙鶴草石油醚部位提 取物，以及藥學(xué)上可接受的輔助劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于所述的藥物制成片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮 劑或乳劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種仙鶴草提取物及其在制備糖尿病藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明以薔薇科植物仙鶴草制備仙鶴草石油醚部位提取物；仙鶴草石油醚部位提取物能抑制NF-κB激活系統(tǒng)活性及抑制NO釋放起到保護胰島β細胞免受傷害從而達到降糖作用，添加了該提取物的藥物組合物或食品組合物具有降糖作用而可用于防治糖尿病。
文檔編號A61K9/48GK102000169SQ201010526099
公開日2011年4月6日 申請日期2010年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月28日
發(fā)明者張焜, 方巖雄, 杜志云, 趙肅清, 陳優(yōu)生 申請人:廣東工業(yè)大學(xué)