專利名稱：一種糖尿病動物模型的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種糖尿病動物模型的制備方法。
背景技術(shù)：
I型糖尿病的發(fā)病年齡小，病因不明，至今沒有有效的預(yù)防辦法。常用 的胰島素治療盡管可以在一定程度上調(diào)節(jié)血糖水平，但長期使用并不能有效 地控制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，而且部分患者還有可能發(fā)生低血糖休克。這些 患者到了疾病晚期唯一有效的治療措施就是進(jìn)行胰腺或胰島移植，以便從生 理水平恢復(fù)機(jī)體的代謝功能。目前供器官短缺是胰島移植面臨的關(guān)鍵問題， 尋找新的可供人體移植的胰腺和胰島來源，以滿足糖尿病患者的治療需求成 為當(dāng)務(wù)之急。胰島干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化和大量擴(kuò)增可能是未來胰島移植的來源 之一，但要想得到可供移植的胰島(干)細(xì)胞，需經(jīng)長時間誘導(dǎo)培養(yǎng)，進(jìn)入 臨床前還需要進(jìn)行制備方法的規(guī)范，對其安全性和有效性進(jìn)行體內(nèi)的研究評 價。豬和人胰島素在化學(xué)結(jié)構(gòu)上僅有一個氨基酸殘基的差異，在臨床上豬胰 島素已經(jīng)使用多年且取得了較好的治療效果，豬胰島細(xì)胞也成為令人矚目的 人類胰島移植的另一個重要供源。"異種胰島移植"被認(rèn)為是臨床異種移植最 有希望的突破口。豬到人胰島移植盡管已有少量臨床試驗(yàn)性研究，但效果并 不令人滿意，在倫理學(xué)上也受到很多質(zhì)疑。這些新供源在臨床應(yīng)用前都需要 在動物模型動物體內(nèi)進(jìn)行更充分的研究論證。
目前糖尿病研究最常用模型動物是嚙齒類。由于嚙齒類在進(jìn)化關(guān)系上與 人類相距甚遠(yuǎn)，以其為研究對象所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對臨床指導(dǎo)意義不大。恒 河猴的解剖特點(diǎn)、各系統(tǒng)生理功能及對疾病和治療藥物的反應(yīng)性與人類極為 相近，是進(jìn)行干細(xì)胞和異種移植臨床前有效性和安全性評價的敏感動物。利 用恒河猴糖尿病模型評價新型糖尿病治療藥物，研究胰島干細(xì)胞和異種胰島 移植的免疫排斥機(jī)理和移植耐受誘導(dǎo)，是國際公認(rèn)的臨床前實(shí)驗(yàn)體系，對未 來這些治療方案的臨床應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)意義。因此建立非人靈長類糖尿 病模型成為糖尿病胰島(干)細(xì)胞移植治療研究和臨床前藥物評價的迫切需 要。
有文獻(xiàn)報道鏈脲菌素(STZ)誘導(dǎo)的方法制備糖尿病模型，如唐東紅代
解杰等，STZ誘發(fā)實(shí)驗(yàn)恒河猴糖尿病性視網(wǎng)膜并發(fā)癥模型的建立，《中國實(shí) 驗(yàn)動物學(xué)報》，2002年9月第10巻第3期，173-176，建立糖尿病性視網(wǎng)膜 并發(fā)癥(Diabetic Retinopathy, DR)動物模型。方法選用4只健康成熟的雄性恒河猴分別以齊JJ量為60mg/kg、 45mg/kg靜脈一次注射及30mg/kg靜脈二 次注射(中間間隔15d)鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)。結(jié)果使用不同 劑量的STZ注射恒河猴，分別造成了胰島素依賴性糖尿病(Insulin Depen-dent Diabetes Mellltus， IDDM )及慢性持續(xù)性高血糖癥(State of Chronic Hyperglycemia, SCH)兩種類型的模型，從而誘導(dǎo)出不同程度的DR，眼底熒 光造影結(jié)果顯示，用藥后63 91天4只實(shí)驗(yàn)猴均出現(xiàn)不同程度的視網(wǎng)膜病， 分別顯示早期眼底微血管動脈擴(kuò)張，視網(wǎng)膜出血瘤，微血管瘤及新生血管， 晚期白內(nèi)障等?？锏滦?，實(shí)驗(yàn)性1型糖尿病恒河猴的組織病理學(xué)觀察，中 國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報，2004年9月第12巻第3期，報道了觀察實(shí)驗(yàn)性l型糖尿 病恒河猴的組織病理學(xué)變化。方法7只恒河猴分別靜脈注射不同劑量的鏈 脲佐菌素(streptozotocin， STZ)，建立STZ性1型糖尿病恒河猴模型，觀察其 心臟、腎臟、胰臟、脾臟等組織病理學(xué)變化，結(jié)果動物胰島數(shù)量明顯減少， 分布稀疏，殘存胰島萎縮，胰島大小不等，成纖維細(xì)胞增生；腎小球增大， 毛細(xì)血管壁增厚、僵硬，腎小管內(nèi)膜細(xì)胞玻璃樣變性，腎小球球囊內(nèi)皮細(xì)胞 增生；心肌變性、壞死、淤血，心肌細(xì)胞肥大，中、小血管壁增厚，血管壁 纖維組織增加，冠狀動脈內(nèi)膜局部增厚，內(nèi)皮細(xì)胞增生；脾臟小動脈硬化。 結(jié)論通過對STZ誘發(fā)的1型糖尿病模型胰島、腎臟和心臟等結(jié)構(gòu)病理觀察說 明，該動物模型可用于糖尿病組織病理研究和藥物療效的評價?？锏滦龋?不同劑量鏈脲菌素對恒河猴某些常規(guī)生理指標(biāo)的影響，中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報， 2003年3月第11巻第1期，報道了研究鏈脲菌素(STZ)對恒河猴攝食、飲水、 排尿、體重、血糖及尿糖等生理指標(biāo)的影響，為建立糖尿病動物模型積累資 料。方法通過靜脈給7只恒河猴注射不同劑量的STZ。結(jié)果使用不同劑 量STZ后，7只恒河猴均在不同時間、不同程度出現(xiàn)與人糖尿病相類似的"三 多一少"癥狀，同時對糖尿病猴使用不同劑量胰島素可使其癥狀減輕。尤其是 中、高劑量組的動物癥狀較為明顯，而低劑量組體重有一個短時間的增加后 又迅速下降。實(shí)驗(yàn)組中血糖和尿糖均出現(xiàn)不同程度的升高，以中、高2個劑 量組的動物變化較大。結(jié)論采用中、高劑量組的STZ可誘導(dǎo)類似人類糖尿 病的急性動物模型，一而使用胰島素治療或低劑量STZ可使該動物模型疾病病 程延長，有禾U于進(jìn)行其并發(fā)癥的研究。Biochemical changes in rhesus monkey during the first days after streptozotocin administration are indicative of selective beta cell destruction/Takimoto G Jones C， Lands "W， Bauman A, Jeffrey J, Jonasson OV/Metabolism. 1988 Apr; 37(4):364-70.選用22只恒河猴，靜脈注射 STZ(45 to 55 mg/kg)，約半數(shù)的恒河猴在注射后的5天內(nèi)誘生胰島素依賴性 糖尿病，剩余實(shí)驗(yàn)恒河猴中的4只在給藥后6個月內(nèi)未產(chǎn)生胰島素依賴性糖 尿病，被認(rèn)為誘生了非胰島素依賴型糖尿病，其余8只恒河猴未對外源性胰 島素產(chǎn)生需求。
除了文獻(xiàn)報道外，也有相關(guān)的專利申請，如申請?zhí)?00410089318.8， 發(fā)明名稱 一種2型糖尿病動物模型的制備方法，本發(fā)明涉及一種2型糖尿 病動物模型的制備方法。具體指利用高脂高糖飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)動物產(chǎn)生胰島素抵抗，用鏈脲佐菌素(STZ)破壞動物胰腺P細(xì)胞。利用本發(fā)明方法制備的動物
模型具有與人類II型糖尿病發(fā)病相似的過程，出現(xiàn)高空腹血糖、高胰島素血
癥、糖耐量低減、胰島素抵抗等2型糖尿病的典型癥狀，可用于分析2型糖 尿病發(fā)病機(jī)理及進(jìn)行治療2型糖尿病藥物篩選。
綜上可知，鏈脲菌素(STZ)是制備糖尿病模型中比較常用的誘導(dǎo)試劑， 是誘導(dǎo)大鼠糖尿病模型的最佳選擇。鏈脲菌素(Streptozodn, STZ)，又稱鏈 氮霉素;鏈脲霉素，鏈佐星，主要用于轉(zhuǎn)移性胰島細(xì)胞腫瘤，對功能性和非功 能性細(xì)胞癌變均有作用。臨床使用方法為每體表面積1112為0.5g，每日1 次，連用5日，6周為1療程；或者每體表面積1112為lg，每周1次，連用 2周。如病人沒明顯療效和毒性，可逐步加量，但一次量小于每體表面積m2 為1.5g。 STZ臨床中有副作用，如氮血癥、低磷酸鹽血癥、無尿、糖尿、腎 小管性酸中毒及胃腸道反應(yīng)；少數(shù)病人有肝毒性，罕見有嚴(yán)重血球和血小板 數(shù)減少。給藥前，給藥期間，給藥后4周應(yīng)連續(xù)進(jìn)行尿分析、血尿氮、血漿 肌酐、血清電解質(zhì)和肌酸酐清除率的測定以監(jiān)測肝功能。
鏈脲佐菌素(Streptozotocin)現(xiàn)在常用的糖尿病動物模型有實(shí)驗(yàn)性糖尿 病動物模型和自發(fā)性糖尿病動物模型。自發(fā)性模型應(yīng)用價值較高，但因價格 昂貴，飼養(yǎng)、繁殖條件要求嚴(yán)格，而不能得到廣泛應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)性模型則應(yīng)用 比較廣泛，常用的誘導(dǎo)方法有胰腺切除術(shù)、化學(xué)藥物誘發(fā)、病毒感染、拮抗 胰島素因子、食物誘發(fā)及催肥等。其中化學(xué)藥物誘導(dǎo)方法因?yàn)椴僮骱唵?、?行性高，而得到眾多研究人員的推崇；而在這些方法中鏈脲佐菌素 (Streptozotodn， STZ)對機(jī)體組織毒性相對較小，動物存活率高，是目前 國內(nèi)外使用較多的制備糖尿病動物模型的方法。STZ對一定種屬動物的胰島 卩細(xì)胞有選擇性破壞作用，而使許多動物產(chǎn)生糖尿病。最常用的是大鼠模型。 一般常用的誘導(dǎo)方法如下:將大鼠禁食12h，按60mg / kg體重腹腔注射STZ， 每日1次，連續(xù)2次，成功制備I型糖尿病大鼠模型，并且該模型具有高血 糖、體重減輕、多飲多食多尿的特點(diǎn)，與臨床I型糖尿病吻合；但在此實(shí)驗(yàn) 中，若造模組只腹腔注射STZ—次，并給予高熱量飼料飼養(yǎng)12周，則可制 備II型糖尿病動物模型，且按該法制備出的模型具有超重、糖耐量減低、血 脂升高、血清胰島素升高及胰島素受體結(jié)合力降低伴胰島素抵抗的特點(diǎn)，類
似于n型糖尿病病人的臨床特征。i型糖尿病與ii型糖尿病動物模型的制備
可能與STZ注射的劑量有關(guān)系大劑量(常為120mg/kg)注射時，由于直 接引起胰島(3細(xì)胞的廣泛破壞，可造成I型糖尿病模型；而注射較少量STZ 時，由于只是破壞一部分胰島(3細(xì)胞的功能，造成外周組織對胰島素不敏感， 同時給予高熱量飼料喂養(yǎng)，兩者結(jié)合便誘導(dǎo)出病理、生理改變都接近于人類 II型糖尿病的動物模型。也有研究表明，用STZ按90mg / kg體重處理過的 新生大鼠長至成鼠后，表現(xiàn)出糖耐量異常、胰島素分泌下降、體重下降等特 征，其主要機(jī)制是新生鼠出生后一周內(nèi)P細(xì)胞對STZ敏感性不同，以及再生 力不同，導(dǎo)致成鼠后P細(xì)胞數(shù)量相對減少。故大鼠出生后一周內(nèi)注射STZ，其P細(xì)胞壞死及增生可使成鼠|3細(xì)胞數(shù)量及生化特點(diǎn)穩(wěn)定。這說明該方法穩(wěn)
定性好，是研究非肥胖型非胰島素依賴性糖尿病的理想載體。因此，鏈脲菌
素STZ的用量的多少，直接決定了制備的糖尿病動物模型的類型。目前，尚 無將低劑量STZ用于制備I型糖尿病動物模型的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種恒河猴胰島素依賴型糖尿病模型，它是 采用胰腺部分切除聯(lián)合低劑量的鏈脲菌素(STZ)誘導(dǎo)的方法，建立了恒河 猴胰島素依賴型糖尿病模型。
本發(fā)明提供了一種糖尿病動物模型的制備方法，它是將靈長類動物的胰 腺部分切除，聯(lián)合鏈脲菌素誘導(dǎo)的方法，建立了恒河猴胰島素依賴型糖尿病 模型，其中，鏈脲菌素的使用方法和劑量為靜脈給予，每次15-20 mg/Kg。
進(jìn)一步優(yōu)選地，鏈脲菌素的使用方法和劑量為靜脈給予，每次15mg/Kg
其中，所述靈長類動物為恒河猴。
本發(fā)明制備方法，包括如下步驟
a、 胰腺部分切除手術(shù)動物麻醉，胰腺分離切除從胰尾部、脾門開始， 先分離脾結(jié)腸韌帶、脾胃韌帶，鈍性分離胰尾及脾動、靜脈的后面；將胰尾 提起，由脾門處向右沿脾動脈和脾靜脈鈍性剝離胰尾和胰體，結(jié)扎和切斷胰 腺與脾動、靜脈之間的血管小分支；胰體、胰頸分離從腸系膜上動脈分離 胰背動脈，雙重結(jié)扎、切斷；保留胰頭及鉤突部(約占胰腺重量20-25%)， 鉗夾、結(jié)扎胰腺總胰管，從結(jié)扎處離斷胰腺；手術(shù)蘇醒及術(shù)后護(hù)理；
b、 鏈脲菌素誘導(dǎo)造糖尿病l個月內(nèi)靜脈注射鏈脲菌素每次15mg/Kg， 每間隔3天注射1次，總共1次-5次。
進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的脲菌素的使用劑量為每次15mg/Kg ， l次-5次。
本發(fā)明是采用胰腺部分切除聯(lián)合鏈脲菌素(STZ)誘導(dǎo)的方法，建立了 恒河猴糖尿病模型，對模型的各項(xiàng)生理指標(biāo)進(jìn)行了觀察比較，采用胰島素治 療方案具有經(jīng)濟(jì)性和安全可行性。
本發(fā)明模型以外科手術(shù)切除部分胰腺聯(lián)合小劑量STZ注射，誘導(dǎo)的恒河 猴糖尿病模型表現(xiàn)為持續(xù)的高血糖、高尿糖胰島素依賴性糖尿病，建模一年 后動物模型穩(wěn)定。在胰島素治療下，動物沒有發(fā)生明顯的其他臟器損傷和微 血管病變，除血糖、尿糖和C-肽外其他生理及生化指標(biāo)正常，該模型動物的 生理背景清楚，適用于胰島(干)細(xì)胞移植治療I型糖尿病研究和糖尿病并 發(fā)癥發(fā)病和治療研究。


圖1恒河猴手術(shù)前的IVGTT檢測結(jié)果(胰島素變化曲線) 圖2恒河猴手術(shù)前的IVGTT檢測結(jié)果(血糖變化曲線) 圖3恒河猴胰腺部分切除手術(shù)前后腹部CT檢査結(jié)果(A和B是恒河猴 術(shù)前腹部增強(qiáng)CT: A、白箭示胰體部胰腺組織；B、黑箭示胰頭區(qū)胰腺組織； C和D是恒河猴術(shù)后腹部平掃，其中C胰體尾部無實(shí)質(zhì)性組織存在；D、白 箭示胰頭區(qū)少量胰腺組織。)
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明動物模型的制備
1、材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)材料
2-3歲雌性和雄性恒河猴各2只，無B皰疹病毒、猴逆轉(zhuǎn)錄病毒、猴白 血病病毒和免疫缺陷病毒感染；購自成都平安動物繁育基地。 1.2主要試劑
手術(shù)用藥品和耗材均購自華西醫(yī)院利康藥房 1.3主要溶液的配制
STZ的配制稱取鏈脲霉素(STZ) 100mg，力n 0.05 mol/L枸櫞酸緩沖 液(pH = 4.5) 5ml溶解(20mg/ml)。配好后的溶液應(yīng)在30分鐘內(nèi)注射。 1.4主要儀器
1) 64通道螺旋CT機(jī)Philips公司
2) 麻醉機(jī)Excel 210 SE， Datex-Ohmeda， USA
3) 呼吸機(jī)配心電監(jiān)護(hù)儀M/206B， Philips公司
4) 高頻電刀(H.F.ELECTROTOME): GD-350-P型，上海滬通電子有限公
司
5) 血糖檢測儀羅康全活力型血糖檢測儀，羅康全活力型血糖試紙 1.5實(shí)驗(yàn)方法
1.5.1恒河猴靜脈葡萄糖耐受實(shí)驗(yàn)
通過靜脈葡萄糖耐受實(shí)驗(yàn)(The intravenous glucose tolerance test, IVGTT) 測試動物胰腺功能，了解血糖波動范圍，排除動物患有自發(fā)性糖尿病的可能。
1) 動物禁食10-12h，不禁水；
2) 根據(jù)動物購買時體重，按15mg/Kg肌肉注射氯氨酮(50 mg/ml);
3) 待動物麻醉后，準(zhǔn)確稱量體重，并記錄；
4) 將恒河猴上下肢固定于手術(shù)臺上，下肢小腿后側(cè)備皮暴露大隱靜脈，碘 氟消毒；
5) 20G留滯針穿剌大隱靜脈，5ml注射器抽血6ml (分別做生化、血常規(guī)、血糖和空腹胰島素，并標(biāo)記為0分鐘數(shù)值)；
6) 立即用5ml注射器靜脈推注50%葡萄糖高滲溶液0.5g/Kg(在30sec內(nèi)推 完)，并開始記時，再注射生理鹽水5ml，向留滯針內(nèi)推肝素(250U/ml) lml;
7) 分別于記時后的第l， 3， 5， 10， 30min時采血1.5ml，放入紅頭采血管， 測定胰島素水平；同時分別于第O， 1, 3， 5， 10， 30， 60， 120 min時
測定血糖；
8) 檢測結(jié)束，將動物放回飼養(yǎng)籠中，觀察動物狀況至蘇醒。 1.5.2恒河猴血清胰島素測定(放射免疫分析法)
1.5.3胰腺部分切除手術(shù)
1) 動物麻醉15mg/Kg氯氨酮(50mg/ml)基礎(chǔ)麻醉，麻醉后稱動物體重；
2) 動物固定于手術(shù)臺上，仰臥位，雙下肢備皮，建立靜脈通道；
3) 手術(shù)區(qū)域皮膚準(zhǔn)備，備皮區(qū)域?yàn)殡p側(cè)乳頭連線以下、腹股溝以上、腋
前線以前；
4) 通過靜脈通道，進(jìn)行靜脈全麻，氣管插管，使用呼吸機(jī)、麻醉機(jī)。貼電 極片，進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)。監(jiān)測氧飽和度、呼吸及體溫；建立股動脈通道， 測動脈血壓；
5) 手術(shù)人員洗手消毒，手術(shù)區(qū)域消毒艾力克紗布對以手術(shù)切口 (上腹正
中切口)為中心向周圍至少15cm皮膚無遺漏地涂擦。待艾力克涂液自
然干燥后，再用70%酒精棉球?qū)瞬寥ィ?br> 6) 鋪無菌巾單和無菌大單和大洞單，無菌大單上端應(yīng)蓋過麻醉架，下端蓋 過動物足部。大洞單洞口要對準(zhǔn)手術(shù)野皮膚；
7) 上腹正中切口，切口前用70%酒精再次消毒切口皮膚，依次切開皮膚、 皮下脂肪、肌層、腹膜進(jìn)入腹腔；
8) 胰腺探査，切開胃結(jié)腸韌帶，進(jìn)入小網(wǎng)膜腔；
9) 胰腺分離切除從胰尾部、脾門開始，先分離脾結(jié)腸韌帶、脾胃韌帶， 鈍性分離胰尾及脾動、靜脈的后面；將胰尾提起，由脾門處向右沿脾動 脈和脾靜脈鈍性剝離胰尾和胰體，結(jié)扎和切斷胰腺與脾動、靜脈之間的 血管小分支；胰體、胰頸分離從腸系膜上動脈分離胰背動脈，雙重結(jié) 扎、切斷；保留胰頭及鉤突部(占胰腺重量20-25 %)，鉗夾、結(jié)扎胰腺總胰管，從結(jié)扎處離斷胰腺；
10) 術(shù)中測定恒河猴末梢血血糖濃度；
11) 鉗夾、結(jié)扎胰腺總胰管入十二指腸處，從結(jié)扎處離斷胰腺。切除胰腺前 測末梢血血糖。胰腺殘端創(chuàng)面徹底止血，1號絲線結(jié)扎胰管，可將大網(wǎng) 膜縫蓋于胰腺斷端創(chuàng)面；
12) 切除胰腺后測定末梢血血糖；
13) 局部置多孔乳膠管引流殘液，縫合胃結(jié)腸韌帶，清洗腹腔，按層縫合腹 壁切口；
14) 手術(shù)蘇醒及術(shù)后護(hù)理動物術(shù)后禁食3天。手術(shù)蘇醒后24小時內(nèi)肌肉注 射曲馬多鎮(zhèn)痛治療，輸注止血芳酸、酚磺乙胺(止血敏)和巴曲亭止血 治療；營養(yǎng)支持治療3天；頭孢噻肟鈉抗感染治療5天；
15) 術(shù)后檢測動物血糖，48小時后拔除引流管，7天后拆線，生化血常規(guī)檢 査；
16) 以動物血糖水平持續(xù)兩天高于ll.lmM， C-肽陰性為建模成功。 1.5.4恒河猴的腹部增強(qiáng)CT檢査
恒河猴用15 mg/Kg氯氨酮(50 mg/ml)基礎(chǔ)麻醉后，固定于Philips螺
旋CT機(jī)檢查臺，做腹部平掃；大隱靜脈注射碘海醇溶液(造影劑)lml/Kg，
做增強(qiáng)CT檢查，觀察比較手術(shù)前后胰腺位置和狀態(tài)。 1.5.5小劑量STZ誘導(dǎo)造糖尿病模型
靜脈給予小劑量STZ:每次15-20 mg/Kg;觀察空腹血糖以連續(xù)2天 空腹血糖高于11.1 mM。 C-肽水平低于0.5 nM為建模成功。
2、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1胰腺部分切除加小劑量STZ誘導(dǎo)恒河猴糖尿病模型 恒河猴手術(shù)前IVGTT檢査結(jié)果正常(圖1、圖2，其中M01、 M02、 M05、 M06為四只動物的編號)，切除胰腺11.4g和12.2 g，術(shù)后恢復(fù)良好，空腹血 糖在3.2-21.6之間波動，分別在手術(shù)后第3天和第4天恢復(fù)正常。腹部CT 檢查結(jié)果(圖3)顯示，部分胰腺切除后胰頭部位仍有胰腺組織殘存)。分別 于術(shù)后1個月靜脈注射STZ 15 mg/Kg 1次和5次，動物的空腹血糖持續(xù)升高 于11.1 mM，血清C-肽檢測為0.421 nM，判斷為建模成功。 以下通過具體動物實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明模型的有益效果。 試驗(yàn)例1利用建立的恒河猴糖尿病模型，進(jìn)行I型糖尿病的胰島素治療 研究1、 根據(jù)恒河猴每天進(jìn)食兩餐的習(xí)慣，應(yīng)用一天兩次(9:30am& 16:30pm) 注射不同劑量不同種類胰島素的方法，治療恒河猴糖尿病①長效胰島素
萬邦(徐州)產(chǎn)豬胰島素(精蛋白鋅胰島素)和②短效胰島素萬邦(徐州) 產(chǎn)豬普通胰島素的聯(lián)合治療；
2、 為了防止低血糖發(fā)生，從小劑量(0.4U/Kg)開始皮下注射胰島素；
3、 監(jiān)測空腹和餐后血糖水平，根據(jù)血糖水平調(diào)整給藥劑量，最終可將空 腹和餐后血糖控制在低于10 Mm的水平；
該實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明動物模型適用于I型糖尿病的治療研究和糖尿病并 發(fā)癥的發(fā)生和治療研究。
權(quán)利要求
1、低劑量的鏈脲菌素在制備用于篩選治療胰島素依賴型糖尿病藥物的動物模型中的用途，其中鏈脲菌素的使用方法和劑量為靜脈給予，每次15-20mg/Kg。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于鏈脲菌素的使用劑量為每次15-20 mg/Kg。
3、 一種制備權(quán)利要求1所述的胰島素依賴型糖尿病動物模型的方法，其特征在于它是將靈長類動物的胰腺部分切除，聯(lián)合鏈脲菌素誘導(dǎo)的方法，建立了恒河猴糖尿病模型，其中，鏈脲菌素的使用方法和劑量為靜脈給予，每次15-20mg/Kg。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的糖尿病動物模型的制備方法，其特征在于所述靈長類動物為恒河猴。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的糖尿病動物模型的制備方法，其特征在于它包括如下步驟a、 胰腺部分切除手術(shù)動物麻醉，胰腺分離切除從胰尾部、脾門開始，先分離脾結(jié)腸韌帶、脾胃韌帶，鈍性分離胰尾及脾動、靜脈的后面；將胰尾提起，由脾門處向右沿脾動脈和脾靜脈鈍性剝離胰尾和胰體，結(jié)扎和切斷胰腺與脾動、靜脈之間的血管小分支；胰體、胰頸分離從腸系膜上動脈分離胰背動脈，雙重結(jié)扎、切斷；保留胰頭及鉤突部(占胰腺重量20-25 %)，鉗夾、結(jié)扎胰腺總胰管，從結(jié)扎處離斷胰腺；手術(shù)蘇醒及術(shù)后護(hù)理；b、 鏈脲菌素誘導(dǎo)造糖尿病1個月內(nèi)靜脈注射鏈脲菌素每次15-20mg/Kg ， 1次-5次。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的糖尿病動物模型的制備方法，其特征在于所述的脲菌素的使用劑量為每次15-20 mg/Kg， l一5次。
7、 權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述的方法制備得到的糖尿病動物模型。
8、 權(quán)利要求7所述糖尿病動物模型在篩選治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述的藥物是治療胰島素依賴型糖尿病的藥物。
全文摘要
一種胰島素依賴型糖尿病動物模型的制備方法，它是將靈長類動物的胰腺部分切除，聯(lián)合鏈脲菌素誘導(dǎo)的方法，建立了恒河猴糖尿病模型，其中，鏈脲菌素的使用方法和劑量為靜脈給予，每次15-20mg/kg。本發(fā)明是采用胰腺部分切除聯(lián)合低劑量鏈脲菌素(STZ)誘導(dǎo)的方法，建立了恒河猴糖尿病模型，對模型的各項(xiàng)生理指標(biāo)進(jìn)行了觀察比較，采用胰島素治療方案具有經(jīng)濟(jì)性和安全可行性。
文檔編號A61B19/00GK101637405SQ20081004571
公開日2010年2月3日 申請日期2008年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月31日
發(fā)明者艷 任, 張文勝, 李宏霞, 莉 王, 田伯樂, 程驚秋, 陸燕蓉, 陳又南, 剛 麥 申請人:四川大學(xué)華西醫(yī)院;成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司