專利名稱：一類含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物(又名2-[3，5-二苯基-4，5-二氫-1H-1-吡唑基-4-苯基噻唑)及其制備方法與作為抗癌藥物的用途。

背景技術(shù)：
含有吡唑環(huán)的化合物存在廣泛而且具有多樣的生物活性，在農(nóng)藥上應(yīng)用廣泛，其中許多可用作除草劑、殺蟲(chóng)劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等。在醫(yī)藥、生物領(lǐng)域中也具有十分重要的地位，現(xiàn)有上市的含吡咯環(huán)藥物可樂(lè)定(clonidine)為中樞性降壓藥，通過(guò)抑制血管運(yùn)動(dòng)中樞，使外周交感神經(jīng)的功能降低從而引起降壓。對(duì)多數(shù)高血壓病有效，對(duì)原發(fā)性高血壓療效較好。此外，吡唑環(huán)衍生物還具有廣譜的抗菌活性，而且對(duì)白血病、腫瘤也有很好的藥效。因此，含有吡唑環(huán)的化合物是具有開(kāi)發(fā)潛力的生物靶標(biāo)，開(kāi)展合理分子設(shè)計(jì)以及從天然生物活性物質(zhì)中尋找更高或更廣譜的生物活性、更高的選擇性、更低的毒性，對(duì)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)具有重要的意義。
因此，對(duì)含有吡唑環(huán)的化合物進(jìn)行深入研究具有一定的理論和實(shí)際價(jià)值，尤其是在合成系列新型含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物的基礎(chǔ)上對(duì)它們的生物活性進(jìn)行系統(tǒng)的研究具有十分重要的意義。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型的含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物及其制備方法與用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下 一類含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物，它有如下通式
式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；當(dāng)R1＝CH3，則R2＝CH3；當(dāng)R1＝Br，R2＝H。
一種制備上述含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物的方法，它包括如下步驟 步驟1.在無(wú)水乙醇中依次加入相應(yīng)的取代苯乙酮酮和相應(yīng)的取代苯甲醛，待溶解以后，逐滴加入40％氫氧化鈉溶液，室溫反應(yīng)4-8h，取代苯乙酮和取代苯甲醛的物質(zhì)的量之比為1∶1.1-1.3。待反應(yīng)完全后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，先用水洗，再用乙醇重結(jié)晶，待干燥后得到固體；
步驟2.將步驟1得到的固體與氨基硫脲溶于無(wú)水乙醇中，完全溶解后，緩慢加入20％氫氧化鈉溶液，加熱回流8-12h，步驟1得到的固體與氨基硫脲的物質(zhì)的量之比為1∶1.1-1.2，待反應(yīng)物完全后，加入冰水中，不斷攪拌，靜置4-6h，析出固體，水洗后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含吡唑環(huán)的硫脲衍生物；
步驟3.將步驟2得到的固體與相應(yīng)的取代-α-溴代苯乙酮溶于無(wú)水異丙醇中，室溫?cái)嚢?-6h，步驟2得到的固體與取代-α-溴代苯乙酮的物質(zhì)的量之比為1∶1.05-1.1，待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，水洗后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物。

上述的制法，步驟1中，所述的無(wú)水乙醇的用量為每毫摩爾取代苯乙酮用4-5ml無(wú)水乙醇。
上述的制法，步驟1中，所述的氫氧化鈉溶液的用量為每毫摩爾取代苯乙酮用0.5-1.5ml 40％氫氧化鈉溶液。
上述的制法，步驟2中，所述的無(wú)水乙醇的用量為每毫摩爾氨基硫脲用4-5ml無(wú)水乙醇。
上述的制法，步驟2中，所述的氫氧化鈉溶液的用量為每毫摩爾氨基硫脲用1-2ml 20％氫氧化鈉溶液。
上述的制法，步驟3中，所述的無(wú)水異丙醇的用量為每毫摩爾取代-α-溴代苯乙酮用4-5ml無(wú)水異丙醇。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物對(duì)人體口腔上表皮癌細(xì)胞株(KB)和人白血病細(xì)胞株(K562)有明顯的抑制生長(zhǎng)作用，因此可以用于制備抗腫瘤的藥物。

具體實(shí)施例方式 通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。
實(shí)施例一2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物1)的制備
1.于100ml單口圓底燒瓶中加入40ml無(wú)水乙醇，依次加入3，4-二甲基苯乙酮(1.48g，10mmol)和對(duì)氟苯甲醛(1.36g，11mmol)，待溶解以后，逐滴加入5ml 40％氫氧化鈉溶液，室溫反應(yīng)4-8h。待反應(yīng)完全后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，先用水洗(各100ml)兩遍后再用乙醇重結(jié)晶，待干燥后得到查爾酮；將得到的固體查爾酮(2.54g，10mmol)與氨基硫脲(1.01g，11mmol)溶于40ml無(wú)水乙醇溶液中，完全溶解后，緩慢加入20ml 20％氫氧化鈉溶液，80℃下加熱回流8-12h。待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，加入冰水中，不斷攪拌，靜置4-6h，析出固體，水洗(各100ml)兩遍后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含吡唑環(huán)的硫脲類化合物。將得到的含吡唑環(huán)的硫脲類化合物(3.27g，10mmol)和α-溴代苯乙酮(2.17g，11mmol)溶于50ml無(wú)水異丙醇中，室溫?cái)嚢?h。待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，水洗(各100ml)兩遍后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到目標(biāo)化合物1。產(chǎn)率76％，mp185-187℃ 1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(m，6H)；3.22-3.31(dd，J1＝6.59Hz，J2＝17.37Hz，1H)；3.82-3.93(dd，J1＝12.07Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.62-5.67(dd，J1＝6.59Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.81(m，1H)；7.13-7.22(m，2H)；7.27-7.34(m，4H)；7.43-7.46(m，3H)；7.55(s，1H)；7.64-7.68(m，2H).MS(ESI)427.2(C26H22FN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22FN3SC，73.04；H，5.19；N，9.83％；FoundC，72.86；H，5.21；N，9.97％. 2.于100ml單口圓底燒瓶中加入50ml無(wú)水乙醇，依次加入3，4-二甲基苯乙酮(1.48g，10mmol)和對(duì)氟苯甲醛(1.61g，13mmol)，待溶解以后，逐滴加入15ml 40％氫氧化鈉溶液，室溫反應(yīng)4-8h。待反應(yīng)完全后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，先用水洗(各100ml)兩遍后再用乙醇重結(jié)晶，待干燥后得到查爾酮；將得到的固體查爾酮(2.54g，10mmol)與氨基硫脲(1.10g，12mmol)溶于50ml無(wú)水乙醇溶液中，完全溶解后，緩慢加入10ml 20％氫氧化鈉溶液，80℃下加熱回流8-12h。待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，加入冰水中，不斷攪拌，靜置4-6h，析出固體，水洗(各100ml)兩遍后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含吡唑環(huán)的硫脲類化合物。將得到的含吡唑環(huán)的硫脲類化合物(3.27g，10mmol)和α-溴代苯乙酮(2.07g，10.5mmol)溶于40ml無(wú)水異丙醇中，室溫?cái)嚢?h。待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，水洗(各100ml)兩遍后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到與實(shí)施例一.1相同的目標(biāo)化合物1。產(chǎn)率與實(shí)施例一.1基本相同。
實(shí)施例二2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物2)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)氯苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率72％，mp179-181℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.32(s，6H)；3.23-3.31(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.55Hz，1H)；3.83-3.93(dd，J1＝11.88Hz，J2＝17.37Hz，1H)；5.59-5.65(dd，J1＝6.75Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.16-7.23(m，2H)；7.29-7.38(m，6H)；7.43-7.47(m，1H)；7.56(s，1H)；7.65-7.67(m，2H).MS(ESI)443.1(C26H22ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22ClN3SC，70.33；H，4.99；N，9.46％；FoundC，70.52；H，5.02；N，9.53％. 實(shí)施例三2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物3)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率74％，mp210-212℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，6H)；3.23-3.31(dd，J1＝6.57Hz，J2＝17.37Hz，1H)；3.83-3.93(dd，J1＝12.06Hz，J2＝17.55Hz，1H)；5.61-5.67(dd，J1＝6.60Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.82(s，1H)；7.16-7.24(m，2H)；7.29-7.35(m，4H)；7.44-7.48(m，3H)；7.55(s，1H)；7.65-7.68(m，2H).MS(ESI)487.1(C26H22BrN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22BrN3SC，63.93；H，4.54；N，8.60％；FoundC，63.81；H，4.50；N，8.63％. 實(shí)施例四2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲苯基-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物4)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)甲基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲苯基-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率76％，mp161-163℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，9H)；3.27-3.35(dd，J1＝6.42Hz，J2＝17.58Hz，1H)；3.81-3.91(dd，J1＝11.91Hz，J2＝17.37Hz，1H)；5.61-5.67(dd，J1＝6.39Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.79(s，1H)；7.12-7.22(m，4H)；7.28-7.33(m，4H)；7.45-7.48(m，1H)；7.57(s，1H)；7.68-7.71(m，2H).MS(ESI)423.2(C27H25N3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H25N3SC，76.56；H，5.95；N，9.92％；FoundC，76.43；H，5.86；N，9.81％. 實(shí)施例五2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物5)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)甲氧基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率73％，mp188-189℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，6H)；3.24-3.31(dd，J1＝6.54Hz，J2＝17.35Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.85-3.94(dd，J1＝12.09Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.63-5.67(dd，J1＝6.68Hz，J2＝11.83Hz，1H)；6.84(m，1H)；7.14-7.22(m，2H)，7.27-7.35(m，4H)；7.45-7.49(m，3H)；7.56(s，1H)；7.67-7.69(m，2H).MS(ESI)439.2(C27H25N3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H25N3OSC，73.77；H，5.73；N，9.56％；FoundC，73.59；H，5.63；N，9.58％. 實(shí)施例六2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物6)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)羥基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率68％，mp176-177℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，6H)；3.22-3.30(dd，J1＝6.74Hz，J2＝17.56Hz，1H)；3.81-3.92(dd，J1＝11.84Hz，J2＝17.36Hz，1H)；5.57-5.63(dd，J1＝6.76Hz，J2＝11.84Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.13-7.21(m，2H)；7.28-7.36(m，6H)；7.42-7.47(m，1H)；7.56(s，1H)；7.64-7.69(m，2H).MS(ESI)425.2(C26H23N3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H23N3OSC，73.38；H，5.45；N，9.87％；FoundC，73.14；H，5.57；N，10.07％. 實(shí)施例七2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物7)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)硝基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率69％，mp171-173℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，6H)；3.24-3.31(dd，J1＝6.58Hz，J2＝17.36Hz，1H)；3.82-3.93(dd，J1＝12.14Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.63-5.67(dd，J1＝6.64Hz，J2＝11.89Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.15-7.24(m，2H)；7.27-7.35(m，4H)；7.46-7.49(m，3H)；7.56(s，1H)；7.63-7.67(m，2H).MS(ESI)454.2(C26H22N4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22N4O2SC，68.70；H，4.88；N，12.33％；FoundC.68.58；H，4.96；N，12.18％. 實(shí)施例八2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物8)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率74％，mp165-166℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.34-3.39(dd，J1＝6.47Hz，J2＝17.24Hz，1H)；3.97-4.14(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.14Hz，1H)；5.61-5.68(dd，J1＝6.23Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.24-7.26(m，1H)；7.36-7.42(m，5H)；7.46-7.52(m，1H)；7.53-7.57(m，3H)；7.71-7.73(m，2H).MS(ESI)461.1(C26H21ClFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21ClFN3SC，67.60；H，4.58；N，9.10％；FoundC，67.53；H，4.70；N，9.30％. 實(shí)施例九2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物9)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)氯苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率70％，mp158-160℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.30-3.36(dd，J1＝6.46Hz，J2＝17.23Hz，1H)；3.96-4.09(dd，J1＝12.07Hz，J2＝18.12Hz，1H)；5.61-5.68(dd，J1＝6.27Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.24-7.29(m，1H)；7.37-7.45(m，5H)；7.49-7.54(m，1H)；7.56-7.59(m，3H)；7.73-7.75(m，2H).MS(ESI)477.1(C26H21Cl2N3S，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H21Cl2N3SC，65.27；H，4.42；N，8.78％；FoundC，65.13；H，4.31；N，8.67％. 實(shí)施例十2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物10)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率72％，mp161-163℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.32-3.37(dd，J1＝6.43Hz，J2＝17.21Hz，1H)；3.98-4.08(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.14Hz，1H)；5.63-5.69(dd，J1＝6.21Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.23-7.26(m，1H)；7.34-7.42(m，5H)；7.49-7.52(m，1H)；7.54-7.57(m，3H)；7.70-7.73(m，2H).MS(ESI)521.0(C26H21BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21BrClN3SC，59.72；H，4.05；N，8.04％；FoundC，59.49；H，4.00；N，7.88％. 實(shí)施例十一2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物11)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)甲基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率73％，mp160-161℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，9H)；3.36-3.43(dd，J1＝6.52Hz，J2＝17.36Hz，1H)；3.95-4.08(dd，J1＝12.04Hz，J2＝18.17Hz，1H)；5.61-5.69(dd，J1＝6.27Hz，J2＝11.78Hz，1H)；7.21-7.26(m，1H)；7.33-7.41(m，5H)；7.46-7.52(m，1H)；7.52-7.57(m，3H)；7.71-7.73(m，2H).MS(ESI)457.1(C27H24ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcdfor C27H24ClN3SC，70.80；H，5.28；N，9.17％；FoundC，70.68；H，5.11；N，9.02％. 實(shí)施例十二2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物12)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)甲氧基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率76％，mp174-175℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.31-3.36(dd，J1＝6.38Hz，J2＝17.16Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.95-4.12(dd，J1＝12.16Hz，J2＝18.18Hz，1H)；5.60-5.66(dd，J1＝6.29Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.23-7.26(m，1H)；7.34-7.42(m，5H)；7.48-7.52(m，1H)；7.53-7.59(m，3H)；7.69-7.73(m，2H).MS(ESI)473.1(C27H24ClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H24ClN3OSC，68.41；H，5.10；N，8.86％；FoundC，68.16；H，4.97；N，8.93％. 實(shí)施例十三2-[5-(4-羥基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物13)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)羥基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-羥基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率70％，mp156-157℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.36-3.45(dd，J1＝6.36Hz，J2＝17.24Hz，1H)；3.96-4.07(dd，J1＝12.17Hz，J2＝18.13Hz，1H)；5.61-5.69(dd，J1＝6.19Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.21-7.26(m，1H)；7.35-7.43(m，5H)；7.47-7.52(m，1H)；7.56-7.63(m，3H)；7.74-7.78(m，2H).MS(ESI)459.1(C26H22ClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H22ClN3OSC，67.89；H，4.82；N，9.13％；FoundC，67.74；H，4.78；N，8.96％. 實(shí)施例十四2-[5-(4-硝基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物14)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)硝基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到4-(4-氯苯基)-2-(3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-吡唑-1-yl)噻唑。產(chǎn)率67％，mp149-150℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.37-3.49(dd，J1＝6.45Hz，J2＝17.39Hz，1H)；3.91-4.04(dd，J1＝12.28Hz，J2＝18.09Hz，1H)；5.57-5.64(dd，J1＝6.23Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.26-7.30(m，1H)；7.33-7.41(m，5H)；7.44-7.51(m，1H)；7.55-7.63(m，3H)；7.73-7.78(m，2H).MS(ESI)488.1(C26H21ClN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21ClN4O2SC，63.86；H，4.33；N，11.46％；FoundC，63.99；H，4.23；N，11.31％. 實(shí)施例十五2-[5-(4-氟苯基)-3-(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物15)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，得到2-[5-(4-氟苯基)-3-(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率75％，mp166-167℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.33-3.41(dd，J1＝6.96Hz，J2＝18.12Hz，1H)；3.99-4.09(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.12Hz，1H)；5.67-5.73(dd，J1＝6.96Hz，J2＝11.91Hz，1H)；7.16-7.27(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.44-7.49(m，4H)；7.67-7.74(m，6H).MS(ESI)477.0(C24H17BrFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrFN3SC，60.26；H，3.58；N，8.78％；FoundC，60.35；H，3.47；N，8.68％. 實(shí)施例十六2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物16)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)氯苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率73％，mp164-165℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.32-3.41(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.67Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝11.91Hz，J2＝17.93Hz，1H)；5.68-5.74(dd，J1＝6.84Hz，J2＝11.93Hz，1H)；7.21-7.28(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.41-7.47(m，4H)；7.67-7.75(m，6H).MS(ESI)493.0(C24H17BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrClN3SC，58.25；H，3.46；N，8.49％；FoundC，58.47；H，3.57；N，8.52％. 實(shí)施例十七2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑]-4-苯基噻唑(化合物17)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)溴苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-(3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-吡唑-1-yl)-4-苯基噻唑。產(chǎn)率70％，mp176-177℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.34-3.40(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.43Hz，1H)；3.99-4.09(dd，J1＝12.08Hz，J2＝17.91Hz，1H)；5.66-5.72(dd，J1＝5.76Hz，J2＝11.97Hz，1H)；7.22-7.27(m，1H)；7.32-7.39(m，3H)；7.55-7.57(m，4H)；7.66-7.74(m，6H).MS(ESI)537.0(C24H17Br2N3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17Br2N3SC，53.45；H，3.18；N，7.79％；FoundC，53.23；H，3.31；N，7.60％. 實(shí)施例十八2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基)-4-苯基噻唑(化合物18)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)甲基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基)-4-苯基噻唑。產(chǎn)率72％，mp154-156℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，3H)；3.30-3.38(dd，J1＝6.71Hz，J2＝17.63Hz，1H)；4.03-4.11(dd，J1＝11.93Hz，J2＝17.87Hz，1H)；5.65-5.72(dd，J1＝6.82Hz，J2＝11.96Hz，1H)；7.24-7.29(m，1H)；7.31-7.37(m，3H)；7.44-7.49(m，4H)；7.69-7.77(m，6H).MS(ESI)473.1(C25H20BrN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H20BrN3SC，63.29；H，4.25；N，8.86％；FoundC，63.40；H，4.20；N，8.64％. 實(shí)施例十九2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物19)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)甲氧基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率71％，mp152-154℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.30-3.41(dd，J1＝6.68Hz，J2＝17.41Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.98-4.10(dd，J1＝12.12Hz，J2＝17.97Hz，1H)；5.62-5.71(dd，J1＝5.82Hz，J2＝11.91Hz，1H)；7.20-7.25(m，1H)；7.34-7.41(m，3H)；7.52-7.57(m，4H)；7.64-7.74(m，6H).MS(ESI)489.1(C25H20BrN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H20BrN3OSC，61.23；H，4.11；N，8.57％；FoundC，61.06；H，4.01；N，8.37％. 實(shí)施例二十2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物20)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)羥基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率67％，mp147-149℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.31-3.41(dd，J1＝6.87Hz，J2＝18.16Hz，1H)；3.98-4.12(dd，J1＝12.14Hz，J2＝18.06Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.92Hz，J2＝11.94Hz，1H)；7.14-7.27(m，1H)；7.31-7.37(m，3H)；7.43-7.52(m，4H)；7.65-7.73(m，6H).MS(ESI)475.0(C24H18BrN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H18BrN3OSC，60.51；H，3.81；N，8.82％；FoundC，60.34；H，3.83；N，8.67％. 實(shí)施例二十一2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物21)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)硝基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。產(chǎn)率65％，mp138-140℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.43(dd，J1＝6.69Hz，J2＝17.57Hz，1H)；4.03-4.15(dd，J1＝11.93Hz，J2＝17.89Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.81Hz，J2＝11.97Hz，1H)；7.24-7.28(m，1H)；7.35-7.39(m，3H)；7.45-7.53(m，4H)；7.64-7.73(m，6H).MS(ESI)504.0(C24H17BrN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrN4O2SC，57.04；H，3.39；N，11.09％；FoundC，56.90；H，3.25；N，10.88％. 實(shí)施例二十二2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物22)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率70％，mp184-185℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.33-3.42(dd，J1＝18.15Hz，J2＝6.84Hz，1H)；4.02-4.10(dd，J1＝17.96Hz，J2＝11.91Hz，1H)；5.63-5.72(dd，J1＝11.94Hz，J2＝6.61Hz，1H)；7.34(s，1H)；7.36-7.42(m，4H)；7.56-7.62(m，2H)；7.69-7.76(m，6H).MS(ESI)511.0(C24H16BrClFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H16BrClFN3SC，56.21；H，3.14；N，8.19％；FoundC，56.36；H，3.01；N，8.35％. 實(shí)施例二十三2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物23)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)氯苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率68％，mp170-173℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.34-3.39(dd，J1＝6.43Hz，J2＝17.04Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝12.14Hz，J2＝17.93Hz，1H)；5.67-5.73(dd，J1＝6.24Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.37-7.41(m，4H)；7.53-7.57(m，2H)；7.65-7.73(m，6H).MS(ESI)527.0(C24H16BrCl2N3S，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H16BrCl2N3SC，54.46；H，3.05；N，7.94％；FoundC，54.23；H，3.04；N，7.86％. 實(shí)施例二十四2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物24)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)溴苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率64％，mp180-182℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.41(dd，J1＝18.1Hz，J2＝6.8Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝17.9Hz，J2＝11.9Hz，1H)；5.66-5.72(dd，J1＝11.9Hz，J2＝6.6Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.39-7.43(m，4H)；7.55-7.58(m，2H)；7.67-7.74(m，6H).MS(ESI)571.0(C24H16Br2ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H16Br2ClN3SC，50.24；H，2.81；N，7.32％；FoundC，50.01；H，2.89；N，11.34％. 實(shí)施例二十五2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物25)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)甲基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率67％，mp183-184℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，3H)；3.31-3.39(dd，J1＝6.37Hz，J2＝17.21Hz，1H)；4.02-4.13(dd，J1＝12.08Hz，J2＝17.91Hz，1H)；5.64-5.73(dd，J1＝6.17Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.37(s，1H)；7.39-7.45(m，4H)；7.51-7.57(m，2H)；7.63-7.75(m，6H).MS(ESI)507.0(C25H19BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H19BrClN3SC，59.01；H，3.76；N，8.26％；FoundC，58.87；H，3.85；N，8.07％. 實(shí)施例二十六2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物26)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)甲氧基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率65％，mp191-193℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.31-3.39(dd，J1＝6.37Hz，J2＝17.21Hz，1H)；3.84(s，3H)；4.02-4.11(dd，J1＝12.15Hz，J2＝17.94Hz，1H)；5.68-5.75(dd，J1＝6.26Hz，J2＝11.69Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.36-7.45(m，4H)；7.54-7.59(m，2H)；7.61-7.73(m，6H).MS(ESI)523.0(C25H19BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H19BrClN3SC，57.21；H，3.65；N，8.01％；FoundC，57.05；H，3.61；N，7.79％. 實(shí)施例二十七2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物27)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)羥基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羥基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率62％，mp175-176℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.32-3.37(dd，J1＝6.51Hz，J2＝17.23Hz，1H)；4.03-4.14(dd，J1＝12.21Hz，J2＝17.89Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.31Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.35(s，1H)；7.35-7.40(m，4H)；7.52-7.59(m，2H)；7.64-7.71(m，6H).MS(ESI)509.0(C24H17BrClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H17BrClN3OSC，56.43；H，3.35；N，8.23％；FoundC，56.29；H，3.24；N，8.14％. 實(shí)施例二十八2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物28)的制備
制備方法同實(shí)施例一.1。以對(duì)溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以對(duì)硝基苯甲醛代替對(duì)氟苯甲醛，以α-溴代對(duì)氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-(3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫-1H-吡唑-1-yl)-4-(4-氯苯基)噻唑。產(chǎn)率63％，mp195-197℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.43(dd，J1＝18.09Hz，J2＝6.78Hz，1H)；4.01-4.13(dd，J1＝17.87Hz，J2＝11.96Hz，1H)；5.61-5.72(dd，J1＝11.91Hz，J2＝6.57Hz，1H)；7.35(s，1H)；7.37-7.42(m，4H)；7.57-7.65(m，2H)；7.67-7.76(m，6H).MS(ESI)538.0(C24H16BrClN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H16BrClN4O2SC，53.40；H，2.99；N，10.38％；FoundC，53.52；H，3.14；N，10.44％. 實(shí)施例二十九新型含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物的體外抗腫瘤活性研究 采用MTT[3-(4，5)-雙甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑藍(lán)]法來(lái)測(cè)定噻唑類衍生物對(duì)人體口腔上表皮癌細(xì)胞株(KB)和人白血病細(xì)胞株(K562)的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)。
(1)培養(yǎng)液(每升)的配制①懸浮細(xì)胞RPMI-1640培養(yǎng)粉一袋(10.4g)，新生牛血清100ml，青霉素溶液(20萬(wàn)U/ml)0.5ml，鏈霉素溶液(20萬(wàn)U/ml)0.5ml，加三蒸水溶解后，用5.6％的NaHCO3溶液調(diào)PH值至7.2-7.4，最后定容至1000ml。過(guò)濾滅菌。②貼壁細(xì)胞同上，再加入NaHCO3 2.00g，HEPES 2.38g。
(2)D-Hanks緩沖液(每升)的配制NaCl 8.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4·12H2O 0.06g，KH2PO4 0.06g，NaHCO3 0.35g。高壓滅菌。
(3)胰蛋白酶液的配制利用D-Hanks緩沖液配成濃度為0.5％胰蛋白酶液。過(guò)濾除菌。
(4)實(shí)驗(yàn)藥液的配制將測(cè)試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲(chǔ)備液，一般按實(shí)驗(yàn)最高濃度的10倍配制儲(chǔ)備液。根據(jù)化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解。DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不宜過(guò)大，加藥后的每孔細(xì)胞懸液中DMSO的終濃度一般不超過(guò)0.05％-0.1％。儲(chǔ)備液保存于-20℃冰箱中備用。
(5)人白血病細(xì)胞K562的培養(yǎng)為懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10％小牛血清、100U/ml鏈霉素)，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次。傳代時(shí)將原瓶中培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min，棄去原培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液，吹打均勻，移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。
(6)人體口腔上表皮癌細(xì)胞KB的培養(yǎng)為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10％小牛血清、100U/ml鏈霉素)，置37℃、5％O2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次。傳代時(shí)先棄去原培養(yǎng)液，再用D-Hanks緩沖液洗滌；然后用0.5％胰蛋白酶消化30秒左右，加入少量新鮮培養(yǎng)液終止消化；吹打，使貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來(lái)；移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。
(7)細(xì)胞孵育取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的2種腫瘤細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞懸液濃度為1-1.5×105個(gè)ml-1。在96孔培養(yǎng)板中每孔加細(xì)胞懸液100μl，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后，分別按設(shè)計(jì)加入藥液。
(8)加藥將測(cè)試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個(gè)孔中，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行孔。實(shí)驗(yàn)分為藥物試驗(yàn)組(分別加入不同濃度的測(cè)試藥)、對(duì)照組(只加培養(yǎng)液和細(xì)胞，不加測(cè)試藥)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細(xì)胞和測(cè)試藥)。將加藥后的96孔板置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。陽(yáng)性對(duì)照藥物的活性按照測(cè)試樣品的方法測(cè)定。
(9)存活細(xì)胞的測(cè)定在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加MTT 40μl(用D-Hanks緩沖液配成4mg/ml)。在37℃放置4h后，移去上清液。每孔加150μl DMSO，振蕩5min，使formazan結(jié)晶溶解。最后，利用自動(dòng)酶標(biāo)儀在570nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的光密度(OD值)。
抑制率的計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率按照下列公式計(jì)算 生長(zhǎng)抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(OD實(shí)驗(yàn)-OD空白)/(OD對(duì)照-OD空白)]×100％(OD實(shí)驗(yàn)表示測(cè)試藥物組的平均光密度，OD對(duì)照表示對(duì)照組的平均光密度，OD空白表示對(duì)照組的平均光密度)。
半數(shù)抑制濃度(IC50)定義為當(dāng)50％的腫瘤細(xì)胞存活時(shí)的藥物濃度。根據(jù)測(cè)定的光密度(OD值)，制作細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其對(duì)應(yīng)的藥物濃度。
測(cè)得的IC50見(jiàn)表1所示。
表1本發(fā)明所列噻唑類化合物的對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制IC50值(μM)。



權(quán)利要求
1.一類含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物，其特征是它有如下通式
式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；當(dāng)R1＝CH3，則R2＝CH3；當(dāng)R1＝Br，R2＝H。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物的方法，其特征是它由如下步驟組成
步驟1.在無(wú)水乙醇中依次加入相應(yīng)的取代苯乙酮酮和相應(yīng)的取代苯甲醛，待溶解以后，逐滴加入40％氫氧化鈉溶液，室溫反應(yīng)4-8h，取代苯乙酮和取代苯甲醛的物質(zhì)的量之比為1∶1.1-1.3。待反應(yīng)完全后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，先用水洗，再用乙醇重結(jié)晶，待干燥后得到固體；
步驟2.將步驟1得到的固體與氨基硫脲溶于無(wú)水乙醇中，完全溶解后，緩慢加入20％氫氧化鈉溶液，加熱回流8-12h，步驟1得到的固體與氨基硫脲的物質(zhì)的量之比為1∶1.1-1.2，待反應(yīng)物完全后，加入冰水中，不斷攪拌，靜置4-6h，析出固體，水洗后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含吡唑環(huán)的硫脲衍生物；
步驟3.將步驟2得到的固體與相應(yīng)的取代-α-溴代苯乙酮溶于無(wú)水異丙醇中，室溫?cái)嚢?-6h，步驟2得到的固體與取代-α-溴代苯乙酮的物質(zhì)的量之比為1∶1.05-1.1，待反應(yīng)物完全反應(yīng)后，真空抽濾，棄掉濾液，得到固體，水洗后，用乙醇重結(jié)晶，干燥后得到含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟1中，所述的無(wú)水乙醇的用量為每毫摩爾取代苯乙酮用4-5ml無(wú)水乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟1中，所述的氫氧化鈉溶液的用量為每毫摩爾取代苯乙酮用0.5-1.5ml 40％氫氧化鈉溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟2中，所述的無(wú)水乙醇的用量為每毫摩爾氨基硫脲用4-5ml無(wú)水乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟2中，所述的氫氧化鈉溶液的用量為每毫摩爾氨基硫脲用1-2ml 20％氫氧化鈉溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟3中，所述的無(wú)水異丙醇的用量為每毫摩爾取代-α-溴代苯乙酮用4-5ml無(wú)水異丙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一類含有吡唑環(huán)的噻唑類衍生物，它有如下通式式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；當(dāng)R1＝CH3，則R2＝CH3；當(dāng)R1＝Br，R2＝H。本發(fā)明的新型含有吡唑環(huán)的硫脲類衍生物對(duì)人體口腔上表皮癌細(xì)胞株(KB)和人白血病細(xì)胞株(K562)有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的硫脲類衍生物可以在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)了其制法。
文檔編號(hào)A61K31/427GK101759695SQ20091026411
公開(kāi)日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者朱海亮, 呂鵬程, 阮班鋒, 孫娟, 陳進(jìn) 申請(qǐng)人:南京大學(xué)