專利名稱：安立生坦的代謝物和衍生物的制作方法
安立生坦的代謝物和衍生物
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種選擇性的內(nèi)皮素受體拮抗劑(ERA)安立生坦的代謝物和衍生物。內(nèi)皮素是由血管系統(tǒng)、肺、腎中的內(nèi)皮細(xì)胞、胃腸道細(xì)胞和巨噬細(xì)胞合成和釋放 的肽類家族。內(nèi)皮素家族由三個(gè)21-α-氨基酸異構(gòu)肽(ET-l、ET-2和ET-3)組成。內(nèi)皮 素-I(ET-I)已被鑒定為主要的心血管異構(gòu)肽。ET-I通過A型(ETa)和B型(ETb)的內(nèi)皮素受體亞型以自分泌和旁分泌的方式起 作用。ETa受體位于血管平滑肌細(xì)胞并且其活化介導(dǎo)了血管收縮和促有絲分裂。ETb受體主 要位于內(nèi)皮細(xì)胞，其中該受體經(jīng)由內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成活化的刺激血管舒張并且經(jīng)由受 體介導(dǎo)胞吞作用刺激ET-I的清除。但是，一些ETb受體還位于平滑肌細(xì)胞，其中該受體介導(dǎo) 血管收縮和細(xì)胞增殖。ETa受體活化還是心肌細(xì)胞肥大和腎成纖維細(xì)胞增殖的有力刺激。在人類血管中，85%的ET受體種群由ETa受體組成，這表明僅僅對(duì)該受體的拮抗 作用可能具有主要的治療益處。此外，通過內(nèi)皮細(xì)胞上的ETb受體保護(hù)由ET-I所誘導(dǎo)的天 然的血管擴(kuò)張劑和清除應(yīng)答，從而認(rèn)為對(duì)ETa的選擇性的拮抗作用是有利的。基于這些動(dòng)物模型的結(jié)果，對(duì)于ERA而言存在著若干潛在的臨床適應(yīng)癥，包括肺 性高血壓、系統(tǒng)性高血壓、慢性腎病和血管成形術(shù)后的再狹窄。安立生坦是(S)-2-[(4，6-二甲基嘧啶-2-基)氧基]_3_甲氧基_3，3_ 二苯基丙 酸。它是對(duì)內(nèi)皮素A型(ETa)受體具有選擇性的口服有效、非磺酰胺、丙酸類內(nèi)皮素受體拮 抗劑(ERA)。S/R外消旋的混合物被描述在例如Riechers等人的美國(guó)專利No. 7，109，205 中，該專利中的公開內(nèi)容通過引入并入本文。用安立生坦在人類心室組織進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)證實(shí) 了相對(duì)于ETb受體其對(duì)ETa受體的高親和力(低Ki)和大于1000-倍的ETa的選擇性。選 擇性抑制ETa受體抑制了磷脂酶C介導(dǎo)的血管收縮和蛋白酶C-介導(dǎo)的細(xì)胞增殖，同時(shí)保護(hù) 了一氧化氮和前列環(huán)素的產(chǎn)生、環(huán)GMP和環(huán)AMP介導(dǎo)的血管舒張、以及與內(nèi)皮素B型(ETb) 受體相關(guān)的內(nèi)皮素-I(ET-I)的清除。安立生坦已經(jīng)成為人類臨床測(cè)試的試驗(yàn)對(duì)象。Myogen 公司于 2003 年 12 月 4 日的新聞發(fā)布(http //www, prnewswire. com/ cgi-bin/stories. pi ？ ACCT = 104&ST0RY = /www/story/12-04-2003/0002069898&EDATE =)宣布了安立生坦在肺動(dòng)脈高壓的II期試驗(yàn)已經(jīng)完成并且啟動(dòng)III期試驗(yàn)。該新聞發(fā) 布指出了 III期試驗(yàn)將對(duì)每天一次所給予的安立生坦的口服劑量(2. 5mg、5. Omg和10. Omg) 進(jìn)行評(píng)價(jià)。Myogen 公司于 2004 年 1 月 8 日的新聞發(fā)布(http //investor, myogen. com/ phoenix, zhtml ？ c = 135160&P = irol~news Article&ID = 759080&highlight =)宣 布了在安立生坦用于治療肺動(dòng)脈高壓的III期臨床試驗(yàn)中的患者招募。根據(jù)該新聞發(fā)布， II期試驗(yàn)證實(shí)了在所有四個(gè)安立生坦受試劑量組中的主要療效終點(diǎn)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著 性和臨床上有意義的增加(通過6分鐘步行距離檢測(cè)運(yùn)動(dòng)能力)。Myogen 公司于 2004 年 2 月 16 日的新聞發(fā)布(http //investor, myogen. com/ phoenix, zhtml ？ c = 135160&P = irol~news Article&ID = 759478&highlight =)宣布了安立生坦在肺動(dòng)脈高壓的II期試驗(yàn)中的詳細(xì)結(jié)果即將在美國(guó)胸科協(xié)會(huì)(ATS) 2004年 國(guó)際大會(huì)上力口以介紹。(Rubin(2004) “Ambrisentan Improves ExerciseCapacity and Clinical Measures in Pulmonary ArterialHypertension，，，ATS May 21-26, 2004.)
Myogen 公司于 2004 年 5 月 24 日的新聞發(fā)布(http //investor, myogen. com/ phoenix, zhtml ？ c = 135160&P = irol~news Article&ID = 759469&hiRhliRht = ) 艮 道了在II期試驗(yàn)中所見的在6分鐘步行距離、基礎(chǔ)呼吸困難指數(shù)和WHO功能性分類中的改 善。另外，該新聞發(fā)布提到了安立生坦適于按每天一次進(jìn)行給藥。 Myogen 公司于 2005 年 2 月 10 日的新聞發(fā)布(http //investor, myogen. com/phoenix, zhtml ？ c = 135160&P = irol-news Article&ID = 75997l&hiRhliRht =)宣布了選擇兩篇描述安立生坦在患有肺動(dòng)脈高壓的患者中的效果的摘要在San Diego 的 ATS 2005 上加以介紹。(Gali6(2005) “Ambrisentan Long-Term Safety 和 Efficacy in Pulmonary Arterial Hypertensionl-Year Follow-Up", ATS May 23,2005 ； Frost (2005) "Ambrisentan Improves 6MWDComparably for WHO Class II and III PAH Patients，，，ATS May 22,2005.)Myogen 公司于 2005 年 5 月 19 日的新聞發(fā)布 Myogen, Inc. NewsRelease, May 19,2005(http://investor. myogen. com/phoenix, zhtml ？ c = 135160&p = irol-news Article&ID = 759658&highlight =)報(bào)道了啟動(dòng)一項(xiàng)用于評(píng)價(jià)安立生坦在患有肺動(dòng)脈高 壓的患者中的臨床試驗(yàn)，所述患者之前由于肝功能測(cè)定(LFT)異常(特別是血清氨基轉(zhuǎn)移 酶的濃度增加)而中止了波生坦和西他生坦治療。Rubin等人(2005)在Future Cardiol. 1(4) :1_8中報(bào)道了安立生坦治療12周后 所有患者的平均6分鐘步行距離均得到改善，從基線平均增加了 36米。Galie 等人(2005)在 J. Am. Coll. Cardiol. 46 (3) :529_535 中報(bào)道了一項(xiàng)檢測(cè)安 立生坦在患有肺動(dòng)脈高壓的患者中的有效性和安全性的隨機(jī)劑量范圍試驗(yàn)的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
安立生坦的代謝物已經(jīng)在人類、小鼠、大鼠、兔和犬中被鑒定和測(cè)定。在一方面，所 述代謝物是具有式(I)的化合物
<image>image see original document page 9</image>其中R1為-OH或-OCH3, R2為-H或葡糖苷酸基，并且R3和R4獨(dú)立為-CH3或_CH20H。 此外，所述代謝物在結(jié)構(gòu)方面與安立生坦不同，以至于至少R1、R2> R3和R4之一與其在安 立生坦中不同。因此，在不同的實(shí)施方案中R1S-OH, R2為葡糖苷酸基，R3為-CH2OH或R4為-CH2OH。除了代謝物之外，合成的化合物包括式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶 劑化物、水合物、外消旋體和旋光異構(gòu)體。在不同的實(shí)施方案中，所述代謝物以分離形式提 供，其已經(jīng)在測(cè)試動(dòng)物的身體組織或流體中被鑒定并且分離或分開。在不同的實(shí)施方案中， 所述化合物以固體或結(jié)晶形式合成提供，并且/或在組合物中具有50%純度或更高，優(yōu)選 90%純度或更高。在不同的實(shí)施方案中，所述化合物還涵蓋上述代謝物結(jié)構(gòu)的衍生物，包括 烴基酯類、低級(jí)烷基酯類、合成中間體等。安立生坦的旋光代謝物具有圍繞不對(duì)稱碳的S構(gòu)型，并且通過具有如上對(duì)R1-R4相 同定義的(II)表示
<formula>formula see original document page 10</formula>在不同的實(shí)施方案中，安立生坦的代謝物包括ο-脫甲基化安立生坦、4-羥基化安 立生坦和4，6- 二羥基化安立生坦以及安立生坦的葡糖苷酸和該葡糖苷酸的0-脫甲基化衍 生物和羥基化衍生物。通過在不同的位置的脫甲基化或羥基化而與安立生坦在結(jié)構(gòu)上不同 的代謝物是所謂的I相代謝途徑的產(chǎn)物，而含有葡糖苷酸酯的安立生坦的代謝物是所謂的 II相代謝途徑的產(chǎn)物。用于治療疾病狀態(tài)的劑型包括選自所述化合物的活性物質(zhì)以及適用于對(duì)受試者 給藥的載體。


圖1給出了顯示代謝的主要位點(diǎn)的安立生坦分子(以旋光形式存在)的概述。圖2給出了在多種哺乳動(dòng)物(包括人類)中所鑒定的若干安立生坦代謝物的結(jié) 構(gòu)。發(fā)明詳述在本文中所使用的術(shù)語“安立生坦”指⑶-2-[(4，6_ 二甲基嘧啶-2-基)氧 基]-3-甲氧基_3，3-二苯基丙酸。在其被稱為安立生坦“母體”化合物時(shí)，僅僅表明它與 被描述為衍生物的本發(fā)明的不同化合物有關(guān)(例如，“脫甲基的”安立生坦為其中甲基被除 去的衍生物)。所述安立生坦的結(jié)構(gòu)相當(dāng)于結(jié)構(gòu)II，其中R1為_0CH3、R2為-H、R3為-CH3, 并且R4為-CH3。在安立生坦的丙酸主鏈上的α-碳是不對(duì)稱的。在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離形式的通式(I)化合物<formula>formula see original document page 11</formula>或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、外消旋體或旋光異構(gòu)體。所述化合物可 以旋光形式(圍繞不對(duì)稱的α -碳的S或R構(gòu)型)、外消旋的(S/R)形式或其組合的形式存 在。在不同的實(shí)施方案中，所述化合物充當(dāng)對(duì)ETa受體具有選擇性親和力的內(nèi)皮素受體拮 抗劑。在一些實(shí)施方案中，所述化合物的結(jié)構(gòu)相當(dāng)于在非人類的臨床前測(cè)試期間所產(chǎn)生的 代謝物和/或在人類的臨床試驗(yàn)期間所產(chǎn)生的代謝物。臨床前的代謝物和臨床階段的代謝 物已經(jīng)在不同的組織、體液和排泄介質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)和鑒定。在式(I)中，R1為-OH或-OCH3 ；R2為-H、低級(jí)烷基(例如，C1-C4烷基)或糖苷基； 并且R3和R4獨(dú)立為-CH3、-C (0) H或-CH2OR6,其中R6為-H或具有1_20個(gè)碳原子的烴基基 團(tuán)。示例性地，當(dāng)R6不為-H，它作為羥基的保護(hù)基，其可用于合成和/或便于鑒定或色譜分 離和制備。R6的非限制性實(shí)例包括甲基和芐基。為了進(jìn)一步說明，當(dāng)R3或R4為-C(O)H時(shí)， 所述化合物充當(dāng)制備醇基團(tuán)-CH2OH的合成中間體。至少R1、R2、R3和R4之一相對(duì)于安立生 坦母體化合物顯示出衍生化。也就是說，此處所描述的新的化合物不包括安立生坦本身。因 此，在不同的實(shí)施方案中R1為-0H，R2為葡糖苷酸基，R3為-CH2OH或R4為-CH20H。在不同的方面，糖苷基基團(tuán)R2為糖苷基(即，衍生自葡萄糖)或葡糖苷酸基(即， 衍生自葡糖醛酸)，其中在糖苷基基團(tuán)上的羥基任選地被酰基化(例如被乙?；鶊F(tuán)-C (0) CH3?；?并且在糖苷基基團(tuán)上的羧基任選地被例如，C1-C4醇類酯化。如下面進(jìn)一步所 討論地，在不同的實(shí)施方案中，所述化合物相當(dāng)于安立生坦的體內(nèi)代謝產(chǎn)物或用于本文所 述代謝產(chǎn)物合成的合成中間體。安立生坦的旋光代謝物具有圍繞不對(duì)稱的碳的S構(gòu)型并且通過具有對(duì)R1-R4相同 定義的式(II)表示。
<formula>formula see original document page 11</formula>在特定的實(shí)施方案中，R1為-OCH3或-OH ；R2為-H或葡糖苷酸基；并且R3和R4獨(dú) 立為-CH3或-CH20H。在不同的實(shí)施方案中，至少禮、R2> R3和R4之一與其在安立生坦中不同。因此，在不同的實(shí)施方案中，R2為葡糖苷酸基，R1為-OH，R3為-CH2OH或R4為-CH20H。 據(jù)信，旋光代謝物由在不對(duì)稱的原料安立生坦上的酶促作用所產(chǎn)生。代謝物還包括式(II) 化合物的鹽。在不同的實(shí)施方案中，式(II)的光活性物質(zhì)以分離形式提供。在不同的實(shí)施方案中，提供包含藥學(xué)可接受的載體和按重量計(jì)為0. -90%的 活性物質(zhì)的藥物劑型，其中該活性物質(zhì)包含至少一種選自下述通式(I)，
<formula>formula see original document page 12</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、旋光異構(gòu)體和外消旋體的那些，其中R1 為-OH 或-OCH3 ；R2為-H、低級(jí)烷基或糖苷基；并且R3和R4獨(dú)立為-CH3、-C(0)H或-CH2OR6 ；其中R6為-H或具有1_20個(gè)碳原子的烴
基基團(tuán)；并且其中所述化合物不是安立生坦。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供安立生坦的人類臨床試驗(yàn)代謝物，示例性地以純的或分 離形式存在?！叭祟惻R床試驗(yàn)的代謝物”指根據(jù)關(guān)于包括本文所描述的那些給藥和監(jiān)測(cè)的臨 床方案在攝入或施用安立生坦之后，在人類受試者的身體中形成的安立生坦的代謝物。在 不同的實(shí)施方案中，所述術(shù)語涵蓋體內(nèi)形成的分子種類，無論該種類是否在特定的臨床試 驗(yàn)中檢測(cè)或甚至分析。還預(yù)期一些代謝物對(duì)于特定的個(gè)體而言是唯一的，這反映了不同基 因組成和包括細(xì)胞色素P450和UGT酶在內(nèi)的參與代謝的不同酶的存在和活性。人類臨床 試驗(yàn)的代謝物涵蓋了在人類身體中所形成的所有的這種代謝物。對(duì)人類的臨床試驗(yàn)采取了多種形式。例如，在健康受試者中評(píng)價(jià)安全性、耐受性、 藥物代謝動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。在1、5、10、15、20、50和IOOmg的口服劑量檢測(cè)了單次劑量的藥 物代謝動(dòng)力學(xué)。在48小時(shí)的間隔評(píng)價(jià)動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。另外，在禁食狀態(tài)和標(biāo)準(zhǔn)高脂飲食 之后在接受了 50mg劑量的受試者中研究食物對(duì)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響。以5、7.5和IOmg的口 服劑量每天給予一次共10天研究多劑量藥物代謝動(dòng)力學(xué)。在24小時(shí)間隔收集血液和尿。其它臨床測(cè)試包括評(píng)價(jià)安立生坦與其它藥物之間的藥物代謝動(dòng)力學(xué)相互作用的 可能性的交叉試驗(yàn)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，將單獨(dú)安立生坦的單劑量藥物代謝動(dòng)力學(xué) 與其它藥物給藥7天之后給予安立生坦的單劑量藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較。其它臨床試驗(yàn)調(diào)查了安立生坦在患有肺動(dòng)脈高壓(PAH)的患者中的作用。受試者 接受了 1、2. 5、5或IOmg的劑量，每天一次共12周。在試驗(yàn)過程中定期進(jìn)行肝功能測(cè)試。在另一方面，本發(fā)明提供安立生坦的臨床前ADME代謝物?！芭R床前ADME代謝物”指在非人類受試者的臨床前測(cè)試期間體內(nèi)或體外形成的安立生坦的那些代謝物。進(jìn)行這種 測(cè)試是為了在人類臨床測(cè)試之前對(duì)所提議的藥物產(chǎn)物的吸收、分布、代謝和排泄(ADME)進(jìn) 行表征。這種測(cè)試的非限制性的描述在下面的實(shí)施例1-6中提供。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)若干通過式(I)和(II)表示的化合物衍生自哺乳動(dòng)物中的作為藥物由 所謂的I相或II相代謝途徑的代謝的結(jié)果的安立生坦。這種被稱為I相和II相的途徑是 代謝領(lǐng)域中所常見的，并且其不會(huì)與用于支持藥物批準(zhǔn)的I期和II期臨床試驗(yàn)的措辭相混 淆。在安立生坦分子上代謝的示例性的位點(diǎn)和方式如圖1所示。在不同的方面，代謝的特征是氧化反應(yīng)。例如，不同烷基或芳基基團(tuán)被羥基化和/ 或烷氧基基團(tuán)被脫烷基化。這些均為I相代謝途徑。I相代謝途徑的代謝主要在細(xì)胞色素 P450酶的介導(dǎo)下在肝臟中進(jìn)行。盡管所有調(diào)查的細(xì)胞色素P450酶基本上都能代謝安立生 坦，但是參與安立生坦代謝的主要的P450酶為細(xì)胞色素P450 3A4、3A5和2C19。安立生坦 的代謝物包括通過細(xì)胞色素P450酶或其它氧化酶對(duì)安立生坦的體內(nèi)或體外催化作用所產(chǎn) 生的化合物。安立生坦的代謝物包括通過所謂的II相代謝途徑作用的安立生坦的生物合成反 應(yīng)所產(chǎn)生的化合物。例如，安立生坦的一個(gè)重要的代謝反應(yīng)為形成諸如在下面和圖2中所 示的A、E和F的這種代謝物的?；咸擒账岬纳锖铣?。發(fā)現(xiàn)所述反應(yīng)參與了安立生坦在 大鼠、犬、和人的肝細(xì)胞中的代謝。在?；咸擒账岬纳锖铣芍械牡谝徊绞切纬搔?D-葡糖苷酸。然后，該1-0-酰 基-β -D-葡糖苷酸可以通過酰基基團(tuán)遷移至碳水化合物部分的C-2、C-3和C-4位經(jīng)歷分 子內(nèi)重排。所述反應(yīng)已經(jīng)由Hayball在雜志Chirality，volume 7，pages 1-9(1995)中報(bào)道。在犬和人的肝細(xì)胞中，葡糖苷酸化是主要的代謝途徑。在大鼠肝細(xì)胞中，還觀察到 顯著量的氧化產(chǎn)物(例如，代謝物B)。這些發(fā)現(xiàn)與犬和大鼠的體內(nèi)結(jié)果一致。總體而言， 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶UGT1A9S、UGT1A3S和UGT2B7S被鑒定為參與該代謝的酶。 安立生坦的代謝物包括通過UGT酶對(duì)安立生坦的體內(nèi)或體外催化作用所產(chǎn)生的化合物。代謝物的實(shí)施例包括被稱為代謝物A-G的那些。這些代謝物如圖2所示，以如在 安立生坦母體中的具有圍繞不對(duì)稱的碳的S構(gòu)型的旋光形式存在。相應(yīng)的結(jié)構(gòu)在下面的外 消旋形式的式(III)-(IX)中所示。-代謝物A為安立生坦葡糖苷酸(R2為葡糖苷酸基，R1為-OCH3,并且R3和R4均 為-CH3)。在外消旋形式中，化合物通過式(III)表示<formula>formula see original document page 13</formula>
-代謝物B為4-羥基甲基安立生坦(R1為-OCH3,R2為H，R3和R4之一為-CH2OH,
并且R3和R4的另一個(gè)為-CH3)。在外消旋形式中，化合物通過式(IV)及其鹽表示<formula>formula see original document page 14</formula>
-代謝物C為O-脫甲基安立生坦(R1為-0H)。在外消旋形式中，化合物通過式(V) 及其鹽表示<formula>formula see original document page 14</formula>
-代謝物D為4，6-二羥基甲基安立生坦(R3和R4均為-CH2OH)。在外消旋形式中， 化合物通過式(VI)及其鹽表示<formula>formula see original document page 14</formula>-代謝物E為4，6-二羥基甲基安立生坦葡糖苷酸(R3和R4均為-CH2OH并且R2為 葡糖苷酸基)。在外消旋形式中，化合物通過式(VII)及其鹽表示<formula>formula see original document page 15</formula>-代謝物F為4-羥基甲基安立生坦葡糖苷酸(R3和R4之一為-CH2OH-另一個(gè) 為-CH3-并且R2為葡糖苷酸基)。在外消旋形式中，化合物通過式(VIII)及其鹽表示
<formula>formula see original document page 15</formula>-代謝物G為O-脫甲基4-羥基甲基安立生坦(R1為-OH并且R3為-CH2OH)。在 外消旋形式中，化合物通過式(IX)及其鹽表示<formula>formula see original document page 15</formula>在不同的實(shí)施方案中，安立生坦代謝物_包括代謝物A、B、C、D、E、F和G-和上述 具有式(III)-(IX)的化合物從身體組織和流體中分離和/或合成制備。多種色譜分離方 法-諸如氣相色譜法、液相色譜法和薄層色譜法(TLC)-可在組織和流體樣本上進(jìn)行以提供 用于進(jìn)一步分析，諸如通過核磁共振或質(zhì)譜分析的受試樣本。在所述樣本中，代謝物存在于 基本上沒有其它代謝物存在的組合物中。在這種情況下，樣本中存在的代謝物可通過物理 方法，諸如檢測(cè)放射性同位素中的核衰減、通過檢測(cè)折射指數(shù)、通過火焰離子化、通過在磁 場(chǎng)中，諸如在質(zhì)譜中的電離和偏離定量等等。在不同的實(shí)施方案中，提供具有相當(dāng)高純度的結(jié)晶或溶液形式的化合物和代謝 物。有機(jī)合成途徑適用于制備相對(duì)純的形式的所述化合物，例如，純度為80%或更高、90%或更高、95%或更高和99%或更高的所述化合物?？蛇M(jìn)行重結(jié)晶和其它純化方法以提供基 本上100%純的化合物。這種合成方法和純化技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并且以非限制性的方式 在隨后的實(shí)施例中說明。 在不同的實(shí)施方案中，提供基本上純的形式的化合物?；旧霞兊闹杆龌衔?足夠的純以至于達(dá)到FDA認(rèn)可，并且基本上不含污染物或其它物質(zhì)，或可選擇地，雜質(zhì)的水 平不會(huì)不利地或不能接受地影響化合物在安全性、有效性、穩(wěn)定性方面的性質(zhì)或其它所需 的性質(zhì)。本發(fā)明的方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物給予安立生坦或安立生坦代謝物并通過在該哺乳 動(dòng)物的組織或體液中測(cè)量代謝物之一的水平或濃度檢測(cè)該代謝物。體液非限制性地包括血 漿、膽汁、尿和糞便，而組織非限制性地包括肝微粒體、肝細(xì)胞和灌流的肝臟。在不同的實(shí)施 方案中，代謝物用不同同位素標(biāo)記以有助于在組織或體液中對(duì)代謝物進(jìn)行檢測(cè)或定量。因 此，代謝物包括為了從其衰減的產(chǎn)物中檢測(cè)或鑒定種類的目的而用14C或氚(3H)標(biāo)記的那 些以及為了有助于化合物的核磁共振和/或質(zhì)譜分析而用13C或氘(2H)標(biāo)記的代謝物。如 本文所使用的，氘化的指用氘(2H)取代并且氚化的指用氚(3H)取代。 在不同的實(shí)施方案中，化合物表現(xiàn)出對(duì)ETa和ETb受體的拮抗性結(jié)合，并且對(duì)ETa受 體具有選擇性。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于ETb，所述化合物表現(xiàn)出對(duì)ETa的至少約50-倍， 并且優(yōu)選大于或等于約100-倍的更敏感的親和力。在不同的實(shí)施方案中，盡管相對(duì)于母體 安立生坦，代謝物的Ki和IC5tl值趨于高一個(gè)數(shù)量級(jí)左右，但是該代謝物仍保持對(duì)ETa的選擇 性。示例性地，與安立生坦母體化合物在中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞中溫孵30分鐘后的結(jié)果相比， 相對(duì)于母體物質(zhì)安立生坦，代謝物B和C顯示出對(duì)ETa受體的35-64倍更弱的親和力以及 對(duì)ETb受體的11-84倍更弱的親和力，而代謝物B和C對(duì)ETa受體的親和力是其對(duì)ETb受體 親和力的約100倍。在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物被配制成用于對(duì)人類或其它哺乳動(dòng)物給藥的 合適的劑型，所述化合物包括代謝物A、B、C、D、E、F和G及其鹽、旋光異構(gòu)體、外消旋體、互 變異構(gòu)體和同位素標(biāo)記的變體(包括14C、13C、氚和氘取代的變體)。在一些實(shí)施方案中，例 如，相對(duì)于用母體化合物的常規(guī)治療或治療，本發(fā)明化合物可表現(xiàn)出有利的毒理學(xué)特征。作為選擇性的內(nèi)皮素受體拮抗劑，在不同的實(shí)施方案中本發(fā)明化合物可用于治療 下述病癥，例如肺性高血壓、系統(tǒng)性高血壓、慢性腎病和血管成形術(shù)后的再狹窄。因此，在優(yōu) 選的實(shí)施方案中，對(duì)具有疾病狀態(tài)的患者給予所述化合物，所述疾病狀態(tài)為包括像安立生 坦的選擇性內(nèi)皮素受體拮抗劑在內(nèi)的ERA的適應(yīng)癥?？蛇x擇地或另外地，為了研究非藥理 學(xué)作用，諸如副作用、毒性、代謝、攝取、生物利用度以及排泄途徑目的，可對(duì)不具有疾病狀 態(tài)的受試者或測(cè)試動(dòng)物給予所述化合物。在不同的實(shí)施方案中，所述化合物可通過任意合適的途徑，包括經(jīng)口、直腸、鼻內(nèi)、 肺內(nèi)(例如，經(jīng)吸入)、或非腸道(例如，真皮內(nèi)、透皮、皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi))途徑給予。 在一些實(shí)施方案中，經(jīng)口給藥是優(yōu)選的，并且劑量可以與食物或不與食物共同提供，即在禁 食或非禁食狀態(tài)提供。劑型的非限制性實(shí)例包括未包衣或包衣的片劑、膠囊、粉末、顆粒、栓 齊U、溶液、軟膏、霜?jiǎng)┖蛧婌F劑。 適用于經(jīng)口給藥的本發(fā)明的制劑被制備為離散的單位，諸如膠囊、扁膠囊或片劑， 各自含有預(yù)定量的有效成分；為粉末或顆粒；為含水液體或不含水液體中的溶液或懸浮液；或?yàn)樗鸵后w乳劑或油包水液體乳劑。有效成分還可以丸劑、煎膏劑或糊劑存在。片劑通過任選地與一種或多種助劑壓制或模壓制得。壓制片劑可通過在合適的機(jī)器中壓制自由流動(dòng)形式(諸如，粉末或顆粒)的有效成分，任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋 齊U、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合制備。模壓的片劑可通過在合適的機(jī)器中模壓經(jīng)惰性 液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉末活性成分的混合物制得。所述片劑可任選地被包衣或刻痕并且任選 地配制成提供有效成分從中緩慢釋放或受控釋放的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物的酸水 解通過使用腸溶衣得以避免。腸溶衣是為了避免胃腸道的一部分，典型地上胃腸道，特別是胃和食管暴露于本 發(fā)明的化合物而保護(hù)本發(fā)明化合物的一種手段。在這種方式下，保護(hù)胃粘膜組織以抵抗對(duì) 本發(fā)明化合物的暴露速率，該暴露速率產(chǎn)生副作用，諸如惡心；并且，可選擇地，使本發(fā)明化 合物不受胃腸道的一部分或多部分，典型地上胃腸道中存在的環(huán)境的影響。適用于在口腔中局部給藥的制劑包括在調(diào)味基質(zhì)，通常為在蔗糖和阿拉伯膠或黃 蓍膠中含有有效成分的糖錠劑；在惰性基質(zhì)，諸如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含有有 效成分的軟錠劑；以及在合適的液體載體中含有有效成分的漱口劑。用于直腸給藥制劑的制劑可作為含有合適基質(zhì)(包括，例如可可脂或水楊酸酯) 的栓劑存在。雖然有可能單獨(dú)給予有效成分，但是它們可以優(yōu)選作為藥物制劑存在。本發(fā)明的 獸用和人用制劑包含如上定義的至少一種有效成分以及一種或多種可接受的載體并且任 選地合有其它治療成分。所述載體必須在與制劑的其它成分相容并且對(duì)其接受者在生理學(xué) 上無毒的意義上說是“可接受的”。在不同的實(shí)施方案中，所述化合物被配制在載體系統(tǒng)中。這種系統(tǒng)是已知的并且 包括粘合劑、填充劑、防腐劑、崩解劑、流動(dòng)調(diào)節(jié)劑、增塑劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、分散劑、潤(rùn)滑 齊 、溶劑、緩慢釋放劑(包括腸溶衣)、抗氧化劑和推進(jìn)劑氣體。特別地，當(dāng)配制用于人類給 藥時(shí)，活性物優(yōu)選與至少一種藥學(xué)可接受的載體合并。這種載體是已知的，并且非限制性地 包括纖維素衍生物、聚乙二醇和N-乙烯基吡咯烷酮聚合物。給藥形式包含治療有效量的化 合物，該化合物按重量計(jì)組成劑型的0. 至約90%。本發(fā)明的化合物用常規(guī)的載體和賦形劑配制，所述載體和賦形劑將根據(jù)通常習(xí)慣 選擇。片劑將包含賦形劑、助流劑、填充劑、粘合劑等。含水的制劑以無菌的形式制備，并 且在意欲不經(jīng)口遞送時(shí)通常為等滲的。所有制劑將任選地含有賦形劑，諸如在"Handbook ofPharmaceutical Excipients〃 (1986)中記載的那些。賦形劑包括抗壞血酸和其它抗氧 化劑、螯合劑，諸如EDTA、碳水化合物，諸如糊精、羥基烷基纖維素、羥基烷基甲基纖維素、硬 脂酸等。制劑包括適用于前述給藥途徑的那些。所述制劑可適宜的以單位劑型存在， 并且可通過藥學(xué)領(lǐng)域公知的任意方法制備。所述技術(shù)和制劑通常可在Remington' s Pharmaceutical Sciences (MackPublishing Co. , Easton, Pa.)中找至lj。所述方法包括 有效成分與構(gòu)成一種或多種助劑的載體相結(jié)合的步驟。一般而言，所述制劑通過下述步驟 制備將有效成分與液體載體或細(xì)分的固體載體或其二者均勻地且直接地結(jié)合，然后如果 需要的話對(duì)產(chǎn)物成型。已經(jīng)在小鼠、大鼠、兔、犬和人類的不同組織和體液中檢測(cè)到代謝物A、B、C、D、E、F和G。對(duì)所述發(fā)現(xiàn)的總結(jié)在圖1中示例性地給出，其顯示在代謝物中的生物合成關(guān)系，并且 表明在哪個(gè)種類中存在的代謝物是顯著的。在其它實(shí)施方案，安立生坦的裂解產(chǎn)物在代謝時(shí)形成。在小鼠、大鼠、兔和犬中觀 察到的所述裂解產(chǎn)物是已知的化合物4，6_ 二甲基-2-羥基嘧啶。實(shí)施例_仿丨丨1-安立糊.代遍_搬ET,禾口 ET,剩本齢評(píng)價(jià)了 2個(gè)安立生坦代謝物(代謝物B (羥基化衍生物)和代謝物C (0-脫甲基化 衍生物))對(duì)在CHO細(xì)胞中表達(dá)ETa和ETb受體的體外結(jié)合活性。將測(cè)試化合物溶解在10_2M 的甲醇Cremophor EL 100 1中并且在去離子水中稀釋為ΙΟ,-Ι ^Μ的濃度。在代謝 物B或代謝物C的存在下的膜的2分鐘預(yù)溫孵之后，分別通過加入相對(duì)ETa和ETb受體的 [125I]-標(biāo)記的ET-I或[125I]-標(biāo)記的ΕΤ-3啟動(dòng)結(jié)合反應(yīng)。將與每個(gè)受體的特異性放射性 配體結(jié)合計(jì)算為總結(jié)合與非特異性結(jié)合之間的差，其通過在過量的未標(biāo)記的ET-I的存在 下測(cè)定。Ki值通過從3個(gè)濃度的測(cè)試化合物所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中的非線性曲線擬合法測(cè)定。抑 制50%的放射性配體結(jié)合所需的濃度(IC5tl)通過基于百分置換(percent displacement)的 非線性回歸測(cè)定，并且Ki基于IC5tl值計(jì)算。這些實(shí)驗(yàn)在30分鐘的溫孵時(shí)間進(jìn)行，而不是在 安立生坦的穩(wěn)態(tài)條件下進(jìn)行。結(jié)果在表1中給出表 1安立生坦及其代謝物B和C對(duì)ETa和ETb受體的Ki值
物質(zhì)KJnM] ± SE
_EL_ΕΤβ__安立生坦 0.63 ± 0.2 48.7 士 1.17 代謝物 B 40.3 士 6. 1 4099 土 322 代謝物 C_22.2 ± 4.2_556 土 43.6實(shí)施例2-在肝微粒體和肝細(xì)胞中的體外代謝調(diào)查了安立生坦在大鼠、犬、和人類的肝微粒體和肝細(xì)胞中的體外代謝。在針對(duì)I相代謝的大鼠、犬和人類肝微粒體實(shí)驗(yàn)中，觀察了安立生坦的羥基化代 謝物(代謝物B)。但是，安立生坦母體化合物向該代謝物的轉(zhuǎn)換很低(3-4% )，這暗示I相 代謝對(duì)安立生坦代謝的貢獻(xiàn)較小。在犬和人肝細(xì)胞中，II相代謝是優(yōu)選的途徑，其中在24-小時(shí)的時(shí)間段中25%和 21%的放射性標(biāo)記的安立生坦通過該途徑被代謝。所鑒定的主要代謝物為安立生坦母體化 合物的?；咸擒账?代謝物Α)，僅檢測(cè)到痕量的羥基化代謝物(< )。在大鼠肝細(xì)胞 中，II相代謝出現(xiàn)的程度較低，在24-小時(shí)的時(shí)間段中15%被代謝，并且還形成了顯著量的 I相羥基化代謝物(代謝物B)。使用表達(dá)單個(gè)CYP同工酶或尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(UGT)同工酶的微粒 體的反應(yīng)表型用于鑒定體外足以代謝安立生坦的那些酶。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明安立生坦 可經(jīng)由若干UGT同工酶(UGT1A9S、UGT2B7S和UGT1A3S)葡糖苷酸化并由若干CYP同工酶 (CYP3A4、CYP2C19 和 CYP3A5)氧化代謝。
實(shí)施例3-在大鼠中的肝臟灌流實(shí)騎使用分離的灌流大鼠肝臟模型調(diào)查了安立生坦在雄性Wistar大鼠中的代謝途 徑。以 0. 058 和 0. 052mg/g 肝臟，0. 186 和 0. 199mg/g 肝臟，以及 0. 616 和 0. 556mg/g 肝臟 的灌流劑量(分別相當(dāng)于3、10和30mg/kg的劑量)使用[14C]-標(biāo)記的安立生坦作為放射 性標(biāo)記的藥物。從每個(gè)劑量組的2個(gè)動(dòng)物中取走肝臟，并且在一個(gè)再循環(huán)的系統(tǒng)中灌流6 個(gè)小時(shí)，并確定灌流介質(zhì)和膽汁的代謝物模式。給藥后六小時(shí)，對(duì)于3mg/kg劑量和10mg/kg劑量而言灌流液中總放射活性的水平 降低55%并且對(duì)于30mg/kg劑量而言灌流液中總放射活性的水平降低45%。在相同的時(shí)間 段，在膽汁中總放射活性的累積排泄為25% (3mg/kg劑量)、30% (10mg/kg劑量)和31% (30mg/kg 劑量)。在不同的實(shí)施方案中，代謝物通過HPLC方法分離，且所述代謝物的結(jié)構(gòu)通過液相 色譜法/質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定。代謝產(chǎn)物包括C-氧化的化合物(I相代謝途徑)和與葡糖醛酸綴 合的化合物(II相代謝途徑)。沒有出現(xiàn)C-氧化反應(yīng)的飽和。代謝物的模式與灌流液和 膽汁中的相似，含有被鑒定為1)未變化的母體化合物、2)母體葡糖苷酸(代謝物A)、3)母 體化合物的羥基化衍生物(代謝物B)和4)羥基化代謝物的葡糖苷酸(代謝物F)的4個(gè) 峰。母體化合物是在灌流液中所有受試劑量以及在膽汁中10mg/kg和30mg/kg劑量的主要 的峰。在3mg/kg劑量，母體葡糖苷酸是膽汁中的主要的峰。另外，在膽汁中檢測(cè)到痕量的 另外2個(gè)代謝物。這些代謝物通過甲基基團(tuán)的氧化裂解和通過嘧啶環(huán)的甲基基團(tuán)之一羥基 化以及通過與葡糖醛酸的綴合形成。實(shí)施例4-安立生坦的體內(nèi)代謝在小鼠、大鼠、兔和犬中的體內(nèi)肝代謝實(shí)驗(yàn)表明未變化的母體化合物在血漿、尿和 糞便中占優(yōu)勢(shì)地位。在所有動(dòng)物種類中所鑒定的代謝物包括安立生坦母體化合物的?；?糖苷酸(代謝物A)、0-脫甲基化衍生物(代謝物C)、羥基化衍生物(代謝物B)、二羥基化 衍生物(代謝物D)和4，6-二甲基-2-羥基吡啶。在人類體外實(shí)驗(yàn)(微粒體和肝細(xì)胞)中 觀察到這5個(gè)代謝物中的三個(gè)，并且在人類體外實(shí)驗(yàn)中未能觀察到在4種受試動(dòng)物種類中 沒有觀察到的代謝物。實(shí)施例5-體內(nèi)排泄在穿過肝細(xì)胞膜的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)之后，安立生坦被分泌進(jìn)入膽小管并且經(jīng)由膽汁排泄 進(jìn)入糞便。在以10mg/kg單劑量靜脈給予大鼠安立生坦和以3mg/kg單劑量經(jīng)口給予犬安立 生坦之后，評(píng)價(jià)了安立生坦及其代謝物的排泄。在兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，排泄的主要途徑是經(jīng)由糞 便。在大鼠的實(shí)驗(yàn)中，放射性標(biāo)記的化合物的回收率在糞便中平均為88%并且在尿中平均 為9%。在犬的實(shí)驗(yàn)中，放射性標(biāo)記的化合物的回收率在糞便中平均為90%并且在尿中平 均為8%。在兩項(xiàng)動(dòng)物模型中，大多數(shù)放射性標(biāo)記的化合物在給藥后的第一個(gè)24小時(shí)內(nèi)排 泄。在犬的實(shí)驗(yàn)中，未變化的物質(zhì)在糞便和尿中占優(yōu)勢(shì)地位。母體化合物葡糖苷酸 (代謝物A)是糞便中的主要代謝物。在尿中的主要代謝物是安立生坦的裂解產(chǎn)物(4，6_ 二 甲基-2羥基嘧啶)。實(shí)施例6-膽汁排泄
在放射性標(biāo)記的安立生坦的十二指腸內(nèi)給藥之后，在麻醉的雄性大鼠中評(píng)價(jià)了安 立生坦及其代謝物的膽汁排泄和腸肝循環(huán)。在24-小時(shí)時(shí)間段收集膽汁和尿。在給藥24 小時(shí)內(nèi)，從膽汁中回收了 94. 8%的總放射活性，并從尿中回收了 1.5%的總放射活性。在膽 汁中的高回收率表明吸收幾乎完全出現(xiàn)在腸中。為了評(píng)價(jià)腸肝循環(huán)，第二組大鼠(受體大 鼠)經(jīng)十二指腸內(nèi)給予來自第一組大鼠(供體大鼠)的混合膽汁(0-12小時(shí)時(shí)間段)，并且 在24-小時(shí)時(shí)間段收集膽汁和尿。在給予膽汁后，在受體大鼠的膽汁中回收了 76. 5-94%的 總放射活性，這表明安立生坦及其代謝物的高腸肝循環(huán)。來自供體和受體大鼠的代謝物模 式是相似的。經(jīng)十二指腸內(nèi)對(duì)犬給予放射性標(biāo)記的安立生坦(10mg/kg)以評(píng)價(jià)膽汁排泄的程 度和鑒定膽汁中的安立生坦代謝物。給藥后八小時(shí)，54%和47%的總放射活性分別被排泄 進(jìn)入雄犬和雌犬的膽汁中。其中，安立生坦母體 葡糖苷酸(1-0-?；咸擒账?(代謝物A) 是占優(yōu)勢(shì)的代謝物，其占總放射活性観-81%。?；咸擒账崮阁w化合物(代謝物A)是膽汁中的占優(yōu)勢(shì)的代謝種類，但是母體化 合物是糞便中的占優(yōu)勢(shì)的代謝種類。這暗示?；咸擒账崮阁w化合物的酰基葡糖苷酸鍵 在糞便中裂解，釋放出安立生坦母體化合物。該酶促裂解很可能是由于腸內(nèi)微生物區(qū)系作 用的結(jié)果。與之相比，在大鼠中的膽汁排泄和ADME實(shí)驗(yàn)表明安立生坦母體化合物是膽汁 (95% )和糞便(約80% )中的主要的代謝種類。實(shí)施例7-19-化合物的合成除非另有說明，反應(yīng)在環(huán)境溫度和壓力下進(jìn)行，并且在干燥的氮?dú)夥障峦ㄟ^磁力 攪拌混合。合并有機(jī)提取物并經(jīng)無水硫酸鈉干燥，然后過濾并且在減壓下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 濃縮濾液。光譜數(shù)據(jù)與結(jié)構(gòu)和命名一致。在一些實(shí)施例中給出了示例性的數(shù)據(jù)。實(shí)施例7-19 提供了不同光活性物質(zhì)的合成，通過安立生坦開始制備，該安立生坦具有在α (2-)碳的絕 對(duì)S構(gòu)型。類似地制備外消旋的化合物和R-化合物，其分別由外消旋的(S/R) _2-[ (4，6- 二 甲基嘧啶-2-基)氧基]-3-甲氧基-3，3- 二苯基丙酸和(R) -2- [ (4，6- 二甲基嘧啶_2_基) 氧基]-3-甲氧基_3，3-二苯基丙酸開始制備。用于下述實(shí)施例的安立生坦化合物的原料 根據(jù)已知的操作合成，例如通過3-甲氧基_3，3，_ 二苯基-2-羥基丙酸中間體(或其甲 酯)的外消旋的拆分，隨后醚化為旋光安立生坦，或使用合適的對(duì)映體純的堿通過外消旋 的2-[ (4，6- 二甲基嘧啶-2-基)氧基]-3-甲氧基-3，3- 二苯基丙酸的經(jīng)典的外消旋體進(jìn) 行分離。安立生坦和相關(guān)化合物的合成已經(jīng)在文獻(xiàn)中報(bào)道，例如Riechers等人，Journal of Medicinal Chemistry,vol. 39,pp. 2123-2138(1996) ；Drugs of the Future 2005,30(8), 765-770 Jansen 等人，Organic Process R&D (2001) 5，16-22 ；和 Riechers 等人 1996 年 4 月25日公開的WO 1996/11914，所述公開內(nèi)容作為背景知識(shí)并通過引用并入本文。實(shí)施例7(2S, 3S, 4S, 5S, 6S) _2_ ((S) _2_ (4，6- 二甲基嘧啶 _2_ 基氧基)~3~ 甲氧基-3，3- 二 苯基丙?；趸?-6_(甲氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3，4，5-三基三乙酸酯。<image>image see original document page 21</image>將(S)-2-(4，6-二甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸(以下稱 為“安立生坦”，1.9g，5.0mmol)和碳酸鉀(0. 83g，6. Ommol)在乙腈(30mL)中的混合物攪拌 0.5hr。將(2札31 ，45，55，65)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3，4，5-三基三乙 酸酯(2. Og, 5. Ommol)加入到反應(yīng)混合物并且攪拌該反應(yīng)12hr。在減壓下，將所得的混合物 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干燥。將水(20mL)加入到所得的殘余物并且攪拌混合物0.5hr產(chǎn)生 沉淀。粗產(chǎn)物通過過濾分離并且所獲得的固體經(jīng)水洗滌(2X20mL)。粗產(chǎn)物通過從甲醇-水 (2 1)中重結(jié)晶純化，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(1.78，49%)，為白色固體。1^ m/z 695. 2 (M+.+1)。實(shí)施例8-代謝物A(2S, 3S, 4S, 5R, 6S) _6_ ((S) _2_ (4，6_ 二甲基嘧啶 _2_ 基氧基)~3~ 甲氧基-3，3- 二 苯基丙酰基氧基)_3，4，5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸。
<image>image see original document page 21</image>將實(shí)施例7的化合物(1. Og，1. 44mmol)溶解在甲醇(87mL)中，然后加入三乙胺 (25mL)。將水(25mL)緩慢地加入反應(yīng)溶液并且攪拌反應(yīng)超過0. 5hr。在減壓下，從終反應(yīng) 中蒸發(fā)揮發(fā)物。將所得的混合物用0-5°C的2N HCl調(diào)節(jié)至pH 2，然后經(jīng)乙酸乙酯萃取 (2X15mL)。粗產(chǎn)物的產(chǎn)量為600mg。一部分粗產(chǎn)物(200mg)通過制備型HPLC純化，產(chǎn)生標(biāo) 題化合物(80mg,30% ) ο MS m/z 555. 1 (M+ +1) ；1H NMR (CDCl3, 200ΜΗζ) δ 5. 32 (C-6 吡喃 H，
d，J5，6 = 7. 4Hz) ；= -52. 95° (c = 1，CH3OH)。實(shí)施例9(S)-甲基2-(4，6-二甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3_ 二苯基丙酸酯。<formula>formula see original document page 22</formula>將(S)-安立生坦(15.Og,40. Ommol)和碳酸鉀(8. 28g，60. Ommo 1)在丙酮(IOOmL) 中的混合物攪拌0.5hr。將碘代甲烷(3mL，47.0mmol)緩慢地逐滴加入，然后攪拌反應(yīng)混合 物3hr。在減壓下，將所得的混合物濃縮至干燥。將殘余物與水(IOOmL)混合并經(jīng)乙酸乙酯 萃取(4X1 OOmL) ο 標(biāo)題化合物的產(chǎn)量為 15. 0g(96% ) MS m/z 392. 9 (M+_+1)。實(shí)施例10(S)-甲基2-(4-甲?；?6-甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3_ 二苯基丙酸酯。
<formula>formula see original document page 22</formula>將二氧化硒(8. 5g,76mmol)溶解在55-60°C的二噁烷(238mL)和水(40mL)的溶 液中。向該二氧化硒的溶液中，加入實(shí)施例9的化合物(20g，51mmol)然后反應(yīng)混合物在 回流加熱10hr。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用乙醚(200mL)稀釋并過濾。在減壓下，在 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮濾液，然后經(jīng)乙酸乙酯萃取(2X100mL)產(chǎn)生粗的標(biāo)題化合物。MS m/z 406. 9 (M+-+1)。實(shí)施例11(S)-甲基2-(4-(羥基甲基)-6-甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基-3，3_ 二苯基
丙酸酯。
<formula>formula see original document page 22</formula>
向來自實(shí)施例10的粗的化合物(76mmol)在甲醇(170mL)中的溶液中分部分加入 硼氫化鈉(1.93g，51mm0l)并攪拌反應(yīng)3hr。將該反應(yīng)冰-水(50mL)淬滅并在減壓下在旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去甲醇。殘余的水相經(jīng)乙酸乙酯萃取(2X100mL)產(chǎn)生粗產(chǎn)物(25g)。該粗產(chǎn) 物通過在硅膠上柱色譜純化，經(jīng)乙酸乙酯/己烷洗脫，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(1. Sg,8. 6% )0 MS m/z 409. 1(Μ+·+1)。實(shí)施例12-代謝物B
(S)-2-(4-(羥基甲基)-6-甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3_ 二苯基丙酸。
<formula>formula see original document page 23</formula>向?qū)嵤├?1的化合物(0. 8g，1. 96mmol)在甲醇(IOmL)中的溶液中加入氫氧化鈉 (0. 392g,9. 8mmol)在水(5mL)中的溶液并且所得的混合物回流2hr。將反應(yīng)冷卻至室溫并 且在減壓下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去甲醇。殘余的水相經(jīng)乙醚洗滌(2X10mL)，然后用2N硫酸 將水相的PH調(diào)節(jié)至2-3并且經(jīng)乙酸乙酯萃取(2X20mL)產(chǎn)生標(biāo)題化合物(0. 6g,80% )。MS m/z 395. 1 (Μ+·+1) ；[ α ] 2D° = +141. 09。(c = 1，CH3OH)。實(shí)施例13(S)-甲基2-(4-(芐氧基甲基)-6-甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3_ 二苯
基丙酸酯。
<formula>formula see original document page 23</formula>向0°C的氫化鋰(0. 235g,29. 4mmol)在四氫呋喃和二甲基甲酰胺(30mL IOmL) 中的混合物中加入實(shí)施例11的所述化合物(3. Og, 7. 3mmol)并且攪拌混合物0. 5hr。然后加 入芐基溴(1.257g，7. 3mmol)并且在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12hr。將反應(yīng)倒入冰-水(IOOmL)并且 淬滅的混合物經(jīng)乙酸乙酯萃取(2X100mL)。濃縮產(chǎn)生粗產(chǎn)物，其通過在硅膠上柱色譜純化， 經(jīng)乙酸乙酯-己烷(1 9)洗脫，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(2. 5g,69% )0 MS m/z 499. 0 (M+_+l)。實(shí)施例14(S)-2-(4-(芐氧基甲基)-6-甲基嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3_ 二苯基丙酸。<formula>formula see original document page 23</formula>
向?qū)嵤├?3的化合物(1. 17g，2. 34mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入氫氧化 鉀(0.987g，23.4mmol)在水(IOmL)中的溶液并且在回流下攪拌反應(yīng)5hr。將該反應(yīng)冷卻 至室溫并且在減壓下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去甲醇。含水的殘余物經(jīng)乙酸乙酯(2X25mL)洗滌 然后用2N HCl將pH調(diào)節(jié)至2-3。水相經(jīng)乙醚萃取(2X50mL)，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(0. 997g， 88% )。實(shí)施例15(2S，3R，4S，5S，6S) _2_ ((S) _2_ (4_ (芐氧基甲基)-6-甲基嘧啶 _2_ 基氧基)_3_ 甲 氧基-3，3-二苯基丙?；趸?-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3，4，5-三基三乙酸酯。
<formula>formula see original document page 24</formula>向?qū)嵤├?4的化合物(0. 997g，2. 05mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中加入碳酸鉀 (0. 284g,2. 05mmol)并攪拌反應(yīng)混合物 0. 5hr。將(2R，3R，4S，5S，6S)-2-溴-6-(甲氧基羰 基)四氫-2H-吡喃-3，4，5-三基三乙酸酯(0.817g，2.05mmol)加入至反應(yīng)混合物并攪拌 反應(yīng)12hr。將反應(yīng)混合物過濾并在減壓下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮濾液，產(chǎn)生粗產(chǎn)物。該粗產(chǎn) 物通過在硅膠上的柱色譜純化，經(jīng)乙酸乙酯-己烷(2 8)洗脫，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(l.Og， 60%)。MS m/z 801.1 (M+.+1) ；1H NMR(CDCl3, 200ΜΗζ) δ 5· 65 (C—6 口比喃 H，d，J5,6 = 8Hz)。實(shí)施例16 (2S，3S,4S, 5R，6S) _6_ ((S) _2_ (4-(芐氧基甲基)-6-甲基嘧啶 _2_ 基氧基)-3-甲
氧基-3，3- 二苯基丙酰基氧基)_3，4，5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸。<formula>formula see original document page 25</formula>從實(shí)施例15的化合物開始，以類似于實(shí)施例2的操作獲得標(biāo)題化合物。MS m/z 683. 5 (M+- +Na) ；1H NMR (CDCl3, 200ΜΗζ) δ 5. 32 (C-6 批喃 H, d, J5,6 = 8Hz)。實(shí)施例17(2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羥基-6-((S)-2-(4-(羥基甲基)-6_ 甲基嘧 啶-2-基氧基)-3-甲氧基_3，3-二苯基丙酰基氧基)四氫-2H-吡喃-2-甲酸。
<formula>formula see original document page 25</formula>
從實(shí)施例16的化合物開始，在氫氣氛下通過使用10%碳載鈀氫解使標(biāo)題化合物 脫芐基化。標(biāo)題化合物通過制備型HPLC純化。MS m/z570. 9(M+ +1) ；1H匪R(⑶Cl3，500MHz) δ 5. 35 (C-6 吡喃 H，d, J5,6 = 8. 5Hz)。實(shí)施例18-代謝物D(S)-2-(4，6-雙(羥基甲基)嘧啶-2-基氧基)-3-甲氧基-3，3-二苯基丙酸。
<formula>formula see original document page 25</formula>標(biāo)題化合物從實(shí)施例9的化合物開始并使用實(shí)施例9、10、11和12的操作制備， 除了在實(shí)施例10的操作中使用過量的二氧化硒制備二醛中間體(S)-2-(4，6-二甲?；?啶-2-基氧基)-3-甲氧基-3，3- 二苯基丙酸。實(shí)施例19-代謝物E
(2S，3S，4S，5R，6S)-6-((S)_2-(4，6-| (羥基甲基)嘧啶 _2_ 基氧基)_3_ 甲氧 基-3，3- 二苯基丙?；趸?_3，4，5-三羥基四氫-2H-吡喃_2_甲酸。
<image>image see original document page 26</image>標(biāo)題化合物從(S)-甲基2- (4，6-雙(羥基甲基)嘧啶-2-基氧基)~3~甲氧基_3， 3-二苯基丙酸酯(其在實(shí)施例18的制備中作為中間體獲得)開始，并且使用實(shí)施例13、14、 15、16和17的操作制備。
權(quán)利要求
純的或分離形式的安立生坦的人類臨床試驗(yàn)的代謝物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的人類臨床試驗(yàn)的代謝物，該代謝物是通過I相代謝途徑的安立生 坦的代謝產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的人類臨床試驗(yàn)的代謝物，該代謝物是通過II相代謝途徑的安立生 坦的代謝產(chǎn)物。
4.純的或分離形式的安立生坦的臨床前ADME代謝物。
5.體內(nèi)細(xì)胞色素P450對(duì)安立生坦的酶促作用所產(chǎn)生的代謝物。
6.體內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶對(duì)安立生坦的酶促作用所產(chǎn)生的代謝物。
7.分離形式的一種或多種化合物，選自通式(I)<formula>formula see original document page 2</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、旋光異構(gòu)體和外消旋體，其中R1 為-OH 或-OCH3 ；R2為-H、低級(jí)烷基或糖苷基；并且R3和R4獨(dú)立為_CH3、-C(O)H或-CH2OR6 ；其中R6為-H或具有1-20個(gè)碳原子的烴基基團(tuán)；其中所述化合物不是安立生坦。
8.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中 R1 為-OH 或-OCH3 ；R2為-H或糖苷基；并且 R3和R4獨(dú)立為-CH3或-CH20H。
9.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中R2為-H或葡糖苷酸基。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-0H，R3為-CH2OH或R4為_CH20H。
11.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中所述化合物為選自式(III)<formula>formula see original document page 2</formula> (III)
12.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(IV) <formula>formula see original document page 3</formula>。
13.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(V)<formula>formula see original document page 3</formula>
14.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(VI)<formula>formula see original document page 3</formula>
15.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(VII)<formula>formula see original document page 3</formula>
16.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(VIII)<formula>formula see original document page 4</formula>
17.根據(jù)權(quán)利要求7化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中所述化合物選自式(IX)<formula>formula see original document page 4</formula>
18.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，包括光學(xué)活性化合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，具有圍繞不對(duì)稱碳的S構(gòu)型。
20.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，包括氘化的化合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，包括氚化的化合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中所述化合物用13C標(biāo)記。
23.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中所述化合物用14C標(biāo)記。
24.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中所述化合物是基本上純的。
25.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中所述化合物是50%純的或更高。
26.根據(jù)權(quán)利要求7化合物，其中所述化合物是至少90%純的。
27.分離形式的光學(xué)活性化合物，選自式(II)<formula>formula see original document page 4</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物的那些， 其中R1 為-OH 或-OCH3 ； R2為-H或葡糖苷酸基；R3并且R4獨(dú)立為-CH3或-CH2OH ；并且，進(jìn)一步地 其中所述光學(xué)活性化合物不是安立生坦。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R2為葡糖苷酸基。
29.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R1為-0H。
30.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R3和R4至少之一為-CH20H。
31.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R3和R4為-CH20H。
32.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式化合物<formula>formula see original document page 5</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
33.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
34.根據(jù)權(quán)利要求27化合物，選自下式的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
35.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
36.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
37.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
38.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，選自下式化合物<formula>formula see original document page 6</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物和溶劑化物。
39.一種體內(nèi)方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物給予安立生坦并且隨后在該哺乳動(dòng)物的組織或體 液中檢測(cè)和/或測(cè)量安立生坦的代謝物的水平或濃度，其中該代謝物包括式(I)的一種或 多種化合物，包括其藥學(xué)可接受的鹽、外消旋體和旋光異構(gòu)體<formula>formula see original document page 6</formula>其中R1 為-OH 或-OCH3,R2為-H或葡糖苷酸基；并且 R3和R4獨(dú)立為-CH3或-CH2OH。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述體液選自血漿、膽汁、尿和糞便。
41.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中R2為葡糖苷酸基。
42.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中R1為-OH。
43.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中R3或R4為-CH2OH。
44.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，包括從對(duì)哺乳動(dòng)物所給予的氚化的或14C標(biāo)記的安立生 坦分子中檢測(cè)核衰減的產(chǎn)物。
45.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物給予13C增強(qiáng)的安立生坦。
46.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述代謝物具有圍繞不對(duì)稱碳的S構(gòu)型。
47.一種藥物劑型，包含藥學(xué)可接受的載體和按重量計(jì)為0. -90%的活性物質(zhì)，其 中該活性物質(zhì)包含至少一種選自通式(I)的化合物<formula>formula see original document page 2</formula>及其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、旋光異構(gòu)體和外消旋體的那些，其中R1 為-OH 或-OCH3 ；R2為-H、低級(jí)烷基或糖苷基；并且R3和R4獨(dú)立為_CH3、-C(O)H或-CH2OR6 ；其中R6為-H或具有1-20個(gè)碳原子的烴基基團(tuán)；其中所述化合物不是安立生坦。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的藥物劑型， 其中R1 為-OH 或-OCH3 ；R2為-H或葡糖苷酸基；并且R3和R4獨(dú)立為-CH3或-CH20H。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物劑型，其中R2為葡糖苷酸基。
50.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物劑型，其中R1為-0H，R3為-CH2OH或R4為_CH20H。
51.根據(jù)權(quán)利要求48的藥物劑型，其中所述化合物為旋光異構(gòu)體。
52.一種治療受試者哺乳動(dòng)物的方法，該受試者哺乳動(dòng)物表現(xiàn)出內(nèi)皮素受體拮抗劑的 臨床適應(yīng)癥的疾病狀態(tài)，其中該方法包括對(duì)該哺乳動(dòng)物給予權(quán)利要求47至51中任一項(xiàng)的 劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及安立生坦的衍生物和代謝物，包括通式(I)的化合物或其鹽、水合物、溶劑化物、外消旋體或旋光異構(gòu)體，其中R1為-H或-OCH3；R2為-H、低級(jí)烷基(例如，C1-C4烷基)或糖苷基；并且R3和R4獨(dú)立為-CH3、-C(O)H或-CH2OR6，其中R6為-H或具有1-20個(gè)碳原子的烴基基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，式(I)的化合物表現(xiàn)出對(duì)ETA受體的選擇性的親和力并充當(dāng)內(nèi)皮素受體拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，化合物相當(dāng)于通過細(xì)胞色素P450或尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的酶促作用所產(chǎn)生的安立生坦的代謝物，例如在臨床前或臨床試驗(yàn)中所闡明的。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101801936SQ200880107150
公開日2010年8月11日 申請(qǐng)日期2008年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月31日
發(fā)明者H-G·海格, J·維曼, L·S·小麥爾溫, M·尤爾里奇 申請(qǐng)人:吉利德科羅拉多公司;艾伯特有限及兩合公司