專利名稱：一種新型硝酸酯類甾體化合物的制作方法
專利說明一種新型硝酸酯類甾體化合物 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一種新型硝酸酯類甾體化合物和它們的制備方法。本發(fā)明也涉及含有該化合物的藥用制劑以及該化合物的治療用途，特別是對炎性疾病、變應性疾病或過敏性疾病的治療。

背景技術(shù)：
糖皮質(zhì)激素為維持生命所必需，對蛋白質(zhì)、糖、脂肪、水、電解質(zhì)代謝及多種組織器官的功能有重要影響，超生理量的糖皮質(zhì)激素具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用，臨床應用非常廣泛。超生理量糖皮質(zhì)激素可以治療原發(fā)性或繼發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥；治療合成糖皮質(zhì)激素所需酶系缺陷所致的各型腎上腺增生癥(包括21-羥化酶缺陷，17—羥化酶缺陷，11-羥化酶缺陷等)；利用激素的抗炎、抗風濕、免疫抑制作用治療多種疾病，自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血管炎、多肌炎、皮肌炎、Still病、Graves’眼病、自身免疫性溶血、血小板減少性紫癲、重癥肌無力，過敏性疾病如嚴重支氣管哮喘、過敏性休克、血清病、特異反應性皮炎，器官移植排異反應如腎、肝、心、肺等組織移植，炎癥性疾患如節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性眼病，血液病如急性白血病、淋巴瘤，其他疾病如結(jié)節(jié)病、甲狀腺危象、亞急性非化膿性甲狀腺炎、敗血性休克、腦水腫、腎病綜合征、高鈣血癥。但是超生理量的糖皮質(zhì)激素不適當?shù)氖褂没蜷L期大劑量使用或停藥可導致多種不良反應和并發(fā)癥，甚至危及生命。
NO供體一般是指在體內(nèi)經(jīng)酶或非酶作用釋放NO的化合物，它可作為一種NO體內(nèi)運輸形式，又可作為一種貯存形式，延長NO半衰期，克服吸人NO所引起的諸多不便及難以控制的缺點?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種結(jié)構(gòu)類型的NO供體，但較為重要的是硝酸酯、亞硝基硫醇、偶氮鎓二醇鹽、噁三唑-5-亞胺等幾類。NO供體型藥物主要是以已知藥物或活性化合物的結(jié)構(gòu)為母核，與NO供體通過各種連接基團結(jié)合而成的前藥，它可在體內(nèi)經(jīng)相關(guān)酶或非酶作用釋放原藥和NO。
李松等人在中國生化藥物雜志2006年第27卷第6期374頁發(fā)表的“一氧化氮供體最新研究進展及應用前景”中對一氧化氮供體藥物的發(fā)展做出了較為全面地介紹。
近年來，NO供體型藥物研究取得了重大進展。已有1個NO供體型抗心衰藥Bi dil于2005年在美國上市，10多個處于不同臨床研究階段。但是由于藥物的特殊性，這些產(chǎn)品的開發(fā)也存在著較大的風險，其中NO供體型非甾體抗炎藥(NO-NsAIDs)AZD3582(又名HCI3012，naproxcinod)已進入III期臨床研究，但最近其開發(fā)商阿斯特拉已經(jīng)對外宣布該藥失去了治療潰瘍的目標。
美國NitroMed制藥公司將可釋放NO的RNSO與其他生物活性分予如類固醇、多巴胺等連接起來構(gòu)成新的RNSO/藥物的結(jié)合物，如通過與(fluticasone)21羥基相結(jié)合形成例1，與氟替卡松相比是一種更有效的急性反應抑制劑，這使得例1及其類似物在哮喘和其他呼吸性疾病的治療中有重要應用前景。

例1 法國NICOX公司于上世紀末研究出大量的皮質(zhì)激素NO供體衍生物，尤其是CN97180284專利中提到的皮質(zhì)激素NO供體衍生物氫化可的松(4—硝?；?丁酸酯、地塞米松21-(4-硝基氧丁酸酯)，具有較前體甾體具有更好的活性和安全性。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及全身和非全身使用的新甾族化合物1，并涉及其組合物，該組合物用于哺乳類動物尤其是人類的疾病。具體地說本發(fā)明主要涉及具有抗炎性、免疫抑制和angiostatic活性(所謂的抗炎甾族化合物)，或胃腸道活性的甾族結(jié)構(gòu)的化合物。
眾所周知，皮質(zhì)甾體激素在治療炎癥疾病中是作為首選的治療措施。該類別的藥物包括，例如氫化可的松，可的松，潑尼松龍，潑尼松，氟氫可的松，甲基潑尼松龍，曲安西龍，倍他米松，地塞米松，倍氯米松等，對各種器官具有顯著的藥理學作用。但是它們的臨床應用以及停止應用造成了一系列的副作用。其中有些還非常嚴重。例子見Goodmn & Gilman“治療劑的藥物學基礎”，第9版，1459—1465頁，1996。這些毒性作用包括在骨上的毒性作用導致細胞代謝的改變和高發(fā)生率的骨質(zhì)疏松；對冠狀血管系統(tǒng)的毒性作用引起高血壓反應；對胃腸道的毒性作用造成胃損傷。例子見Martindale“The Extrapharmacopoeia”(馬丁代爾藥典)，第30版，712—723頁，1993。按照上面所述的，皮質(zhì)甾體激素要將治療活性與副作用相分離幾乎不可能的，見Gooddman等，如上述，1474頁。
令人驚訝地和意外地發(fā)現(xiàn)，在一般應用皮質(zhì)甾體激素類治療的疾病中，本發(fā)明的化合物在治療上是有用的，而又有更多的好處。它表明要比已知的皮質(zhì)類激素產(chǎn)品具有意想不到的優(yōu)點。事實上，用本發(fā)明的新產(chǎn)品，總是有可能找到要比其前體的皮質(zhì)甾體激素有更好的結(jié)果，事實上它們表現(xiàn)出改善的治療性能高的活性加上低的副作用。同時本發(fā)明的提供的化合物提供了更好的穩(wěn)定性。
作為NO供體的約物使用時也存在一些缺陷，如藥物穩(wěn)定性差。而孕甾-NO供體藥物，一般都是通過孕甾21-羥基與NO供體通過酯鍵相連，如背景技術(shù)中提到的美國NitroMed制藥公司和法國NICOX公司研制成的相關(guān)化合物，眾所周知，NO供體的穩(wěn)定性較差，例如硝酸甘油，而21位羥基形成的酯鍵較為容易解離，當NO供體游離從而釋放NO，從而造成化合物的穩(wěn)定性差。一種如下通式的化合物1或其酯或鹽 T-B-O-NO2，T為化合物1除去B-O-NO2的甾體殘基，TH為甾體化合物。

其中，1的取代通式中所示的CH基中的H或CH2基中的H2可以不存在取代基，也可以存在的取代基，各位置的取代基可為 在第1-2位可以是雙鍵； 在第2-3位可以是如下取代基 在第2位可以是Cl，Br；OCH3 在第3位可以是酮基(＝O)，-O-CH2-CH2-Cl，OH； 在第4-5位可以是雙?。? 在第5-6位可以是雙鍵； 在第6位可以是Cl，F(xiàn)，CH3，-CHO； 在第7位可以是Cl； 在第6-7位可以是雙鍵； 在第9位可以是F，α-Cl； 在第11位可以是酮基，OH，Cl； 在第16位可以是CH3，OH，＝CH2； R1，R2可以相同或彼此不同，可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基 R3可為(-CO-L)b-Q，L為(CR4R5)b1(O)b2(CR4R5)b2(CO)b3(O)b4(CO)b5(CR4R5)b6 Q為H，OH，CH3，Cl，OCH2CN，SCH2CN，SH，SCH2F，1至16碳的碳氫化合物 b為1，b1，b2，b3，b4，b5，b6可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物， B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”- a為0或1，b’，b”可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至2個雜原子的1至8碳的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種，B與TH上17位的羥基以酯鍵的形式相連。
R3和B中所述的任一R4，R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
R3和B中所述的任一R4取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
R3和B中所述的任一R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
其中R1，R2優(yōu)選為甲基。
其中其R3可為(-CO-L)b-Q，b為1時 L不存在時Q為OCH2CN，SCH2CN，SH，SCH2F 其中其R3可為(-CO-L)b-Q，b為1時 L為CH2，CH20，CH2OC＝O，CH2OCOO，CH2OCOOC＝O，Q為H，OH，CH3，Cl 1至16碳的碳氫化合物 其中R3可為CO-CH3，CO-CH2OH，CO-CH2OCOCH3，CO-CH2OCOCH2CH3，CO-CH2Cl，CO-CH2OCOOCH3，CO-CH2OCOOCH2CH3，CO-OCH2CN，CO-SCH2CN，CO-SH，CO-SCH2F，CO-CH2OCO(CH2)3CH3，，CO-CH2OCO(CH2)14CH3 其中B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”- a為0時，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的直鏈或支鏈烴類，D可以不存在也可以為含有0至2個雜原子的1至8碳的烴。
其中B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”- a為1時，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至2個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)碳氫化合物。
其中B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”- a為0或1時，b’，b”為0，D為含有0至兩個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)烴，如苯環(huán)，雜原子在環(huán)上，如噻吩環(huán)、呋喃環(huán)、吡啶環(huán)等。
其中B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”- a為0時，D可以不存在也可以為含有1至兩個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)烴，雜原子在環(huán)上，如噻吩環(huán)、呋喃環(huán)、吡啶環(huán)等。
其中甾體殘基T的H，H2，R1，R2，R3具有下面所列的化合物所定義的結(jié)構(gòu)；氫化可的松，阿氯米松，倍氯米松，倍他米松，氯潑尼松，氯倍他索，氯倍他松，氯潑尼醇，可的松，可的松龍，地塞米松，二氟拉松，二氟可龍，氟潑尼松龍，鹵米松，鹵潑尼松，甲羥松，甲潑尼松，甲潑尼龍，莫米他松，帕拉米松，潑尼松龍，潑尼松龍磷酸鈉，潑尼松，強的松龍戊酸酯，利美索龍，曲安西龍，氟替卡松。
其中化合物1可為醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯、甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯、醋酸倍他米松17-(5-硝基氧)戊酸酯、莫米松(Momethasone)17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯、醋酸潑尼松龍17-(2-硝基氧)乙基碳酸酯或醋酸潑尼松龍17-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯。
上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物中的應用，哺乳動物是人類。
上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應性或過敏性疾病的藥物中應用。其中炎性、變應性或過敏性疾病是指皮膚疾病如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、疹癢和超敏性反應；鼻子、咽喉或肺部的炎性疾病如哮喘(包括過敏引起的哮喘反應)、鼻炎(包括枯草熱)、鼻息肉、慢性阻塞性肺病、間質(zhì)性肺部疾病和纖維變性；眼部炎癥包括結(jié)膜和結(jié)膜炎；炎性腸疾病如潰瘍性結(jié)腸炎和節(jié)段性回腸炎；或自體免疫性疾病如風濕性關(guān)節(jié)炎。
上述任一項的化合物在制備類皮質(zhì)激素藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備抗炎劑藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備免疫抑制類藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備血管生成抑制劑藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療呼吸道炎癥或變應性疾病藥物的應用。
上述任一項的化合物在制備治療皮膚病學疾病的藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療眼科疾病的藥物中的的應用。
上述任一項的化合物在制備治療腸部炎癥疾病的藥物中的應用。
上述任一項的化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用 上述任一項的化合物在制備治療心肌、血管局部缺血疾病藥物中的應用 上述任一項的化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用 一種藥用組合物，該組合物包含上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物，及其與一種或多種生理學上可接受的藥物輔料混合。該組合物還包含另一種治療炎性、變應性或過敏性疾病的藥物。另一種炎性、變應性或過敏性疾病的藥物可以為β2腎上腺素受體激動劑。該組合物還可以包含抑制或殺死微生物的藥物，抑制或殺死微生物的藥物是指抗菌素?；衔?的溶劑合物指水合物。
上述的藥用組合物，可以配制成液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑、噴霧劑與粉霧劑上述制劑類型的定義由藥劑學(第五版，崔福德主編，人民衛(wèi)生出版社出版)中的相關(guān)劑型定義。
一種藥用粉霧劑制劑，該制劑含有上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的乳糖、氨基酸或衍生化糖。氨基酸可為甘氨酸，衍生化糖是指單糖或雙糖的衍生物。
一種制備上述任一項定義的式1化合物的方法，其包括 (1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr反應形成TBY；催化劑可以存在或不存在，Y為溴或氯原子，然后 (2)將上述反應中得到的產(chǎn)物TBY通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應得到T-B-O-NO2。
其中YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr，Y與B中的(CR4R5)b”-相連，O、Cl、Br與B中的-CO(O)a相連。
當式1化合物的R3取代基中存在羥基時，可以先對相應的TH的R3取代基中的羥基進行保護，再進行上述反應后脫去保護基，得到式1化合物。
上述制備方法，其特征在于第(1)步反應中的堿性有機溶媒為三烷基胺或吡啶等，催化劑為DMAP，第(2)步反應中的硝酸的無機鹽為硝酸銀，有機溶媒為乙腈。當甾體殘基TH的R3取代基中存在羥基時，可以進行酯化保護，再形成17-取代硝酸酯后脫去酯基保護，產(chǎn)生化合物1。
上述任一項定義的式1化合物，在治療哺乳動物的疾病中的劑量以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天。
上述任一項定義的式1化合物，在治療哺乳動物的疾病中的劑量以TH的計為0.005mg-2mg/kg/天。
上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天。
上述任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以TH的計為0.005mg-2mg/kg/天。
對照品 按照CN97180284中的方法制備以下化合物 對照品1甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯 對照品2倍他米松21-(5-硝基氧)戊酸酯 對照品3潑尼松龍21-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯 以甲基潑尼松龍21-(3-硝基氧)丙酸酯、倍他米松21-(5-硝基氧)戊酸酯、潑尼松龍21-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯為活性成分，投料量分別按照甲基潑尼松龍、倍他米松、潑尼松龍計為10g，按照實施例10的配方和方法制備膠囊，每粒膠囊含活性成分分別以甲基潑尼松龍、倍他米松、潑尼松龍計為4mg。

具體實施例方式 層析方法 層析柱的長度最少70cm，內(nèi)部裝填254-硅膠，并將需要分離的有機物全溶于最少量的氯仿甲醇＝11中，用最少量254-硅膠將該溶液吸收后置于層析柱內(nèi)硅膠的上部，使用流動相洗脫，層析柱下用若干個10ml試管接經(jīng)過柱層析得到的溶液，控制流速為10ml/3min，將每個試管的溶液用HPLC進行分析，將保留時間相同的試管溶液合并，取主點的化合物進行重結(jié)晶，得到相應的產(chǎn)物。
確定主點的方法將需要分離的有機物用HPLC進行分析，除原料外峰面積最大的點確定為主點，其保留時間為主點的保留時間。
HPLC的條件按照化合物1相應的TH的分析方法測定，如果沒有相應的測定方法也可以按照以下方法測定。
設備HP 1084B液相色譜儀，HP 79850 BLC終端和UV檢測器 柱材料Supelcosil Lc-18，5um，150×4.6mm 檢測波長245nm 流動相乙腈水四氫呋喃＝36643 柱溫25℃ 流速約0.8ml/分 DMAP4-二甲基氨基吡啶 實施例1.醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯
1 醋酸甲基潑尼松龍17-(3-氯)丙酸酯
方法1 將40ml的三乙胺、0.05g的DMAP和0.015mol的3-氯丙酰氯在反應并內(nèi)攪拌并降溫至0度，緩慢加入0.01mol醋酸甲基潑尼松龍并保持溫度0-5度，該反應為放熱反應，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應液溫度保持在10℃以下，加畢后于1小時內(nèi)緩慢升至10-15度，與該溫度保溫15小時后，稀釋到50ml，pH為1-2，溫度為0度的水中，緩慢加入鹽酸調(diào)節(jié)pH為3-5，該液體使用二氯甲烷90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30ml X3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，二氯甲烷層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到標題化合物粗品0.006mol。
方法2 將0.01mol醋酸甲基潑尼松龍、0.05g的DMAP加入60ml吡啶中在，0—10℃加入攪拌均勻，在0—10℃慢慢加入3-氯丙酰氯0.0015mol，該反應為放熱反應，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應液溫度保持在10℃以下，加完后在這個溫度下保溫15小時，然后將反應液冷卻到0—5℃，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，并在冷卻和攪拌下慢慢加入HCl，上述反應為放熱反應，但是溫度不能超過20℃，一定量的HCl是用來將pH值調(diào)到3-5。該液體使用二氯甲烷90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，二氯甲烷層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到標題化合物粗品0.0055mol。
反應方法1和2中也可以不使用DMAP，相應的收率會不同，未反應的原料會增加。
2 醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯 醋酸甲基潑尼松龍17-(3-氯)丙酸酯0.005mol在乙腈40ml的溶液中，將AgNO30.1克加入并回流20小時，后將溶液于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和氯仿(18)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標題化合物0.003mol。
元素分析計算值C 60.78％，H 6.61％，N 2.63％，O 29.99％， 元素分析測定值C27H35NO10 C 60.71％，H 6.65％，N 2.65％，O 30.00％ 13C-NMR(CDCl3)1位至27位碳的數(shù)值 152.0，128.5，185.9，121.4，176.9，33.7，36.2，27.1，58.4，35.9，70.1，40.9，41.3，49.7，24.0，27.9，101.9，16.8，19.8，212.3，68.4，174.1，29.9，68.9，170.1，20.9，20.0 實施例2.甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯
如上述制備了的醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯0.002mol溶于甲醇和氯仿(11)20ml中，氮氣保護下于0度滴加0度下飽和的0.005mol的碳酸鈉水溶液，強力攪拌10小時后，用鹽酸調(diào)節(jié)反應體系PH為中性后減壓濃縮，除去氯仿，將該溶液稀釋于50ml冰水中，過濾，干燥得標題化合物粗品。將粗品進行柱層析，用甲醇和氯仿(14)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標題化合物0.001mol。
元素分析計算值C 61.09％，H 6.77％，N 2.85％，O 29.30％， 元素分析測定值C25H33NO9 C 61.31％，H 6.68％，N 2.68％，O 29.33％ 13C-NMR(CDCl3)1位至25位碳的數(shù)值 152.0，128.5，185.9，121.4，176.9，33.7，36.2，27.1，58.4，35.9，68.9，40.9，41.3，50.1，24.0，23.1，101.9，16.8，19.8，211.9，67.1，174.1，29.9，68.9，20.0 實施例3.醋酸倍他米松17-(5-硝基氧)戊酸酯
以醋酸倍他米松為原料，按照實施例1的方法與5-溴戊酰氯、AgNO3反應得到標題化合物。
元素分析計算值(％)C，60.09；H，6.61；F，3.28；N，2.42；O，27.60 元素分析測定值C29H38FNO10 C 60.00％，H 6.63％，N 2.33％，F(xiàn) 3.34 O 27.70％ 13C-NMR(CDCl3)1位至29位碳的數(shù)值 152.0，128.5，185.9，121.4，166.7，31.2，27.1，34.1，100.9，47.9，70.9，37.2，46.8，44.0，33.2，47.2，94.8，17.1，22.1，212.5，68.4，174.1，34.5，21.8，28.2，74.9，170.1，20.9，19.81 實施例4.莫米松(Momethasone)17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯
以莫米松(Momethasone)為原料，按照實施例1的方法與(4-氯甲基)苯甲酰氯、AgNO3反應得到標題化合物。
元素分析計算值(％)C，59.41；H，5.48；Cl，11.69；N，2.31；O，21.10 元素分析測定值C30H33Cl2NO8 C 59.56％，H 5.51％，N 2.27％，Cl 11.59，O 21.07％ 13C-NMR(CDCl3)1位至30位碳的數(shù)值 149.7，128.5，185.9，124.4，168.7，33.2，29.1，38.1，73.9，62.9，70.1，35.2，46.8，43.0，33.2，46.2，94.8，17.4，22.8，204.7，46.9，163.9，129.7，130.7，129.0，142.4，129.0，130.5，79.2，19.7 實施例5.醋酸潑尼松龍17-(2-硝基氧)乙基碳酸酯
以醋酸潑尼松龍為原料，按照實施例1的方法1與(2-氯)乙基碳酰氯(Cl-CH2-CH2-O-CO-Cl)、AgNO3反應得到標題化合物。
元素分析計算值(％)C，58.31；H，6.21；N，2.62；O，32.86 元素分析測定值C26H33NO11 C 58.82％，H 6.37％，N 2.41％，O 32.41％ 13C-NMR(CDCl3)1位至26位碳的數(shù)值 152.0，128.5，185.9，121.4，169.7，31.2，32.7，30.4，58.4，45.3，69.9，41.9，40.3，49.7，25.1，22.1，106.3，16.7，19.3，212.4，68.1，155.8，66.3，72.0，170.1，20.9 實施例6.醋酸潑尼松龍17-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯
元素分析計算值(％)C，59.27；H，5.66；N，2.38；O，27.23；S，5.46 元素分析測定值C29H33NO10S C 58.91％，H 5.51％，N 2.40％，S，5.49 O 27.69％ 13C-NMR(CDCl3)1位至29位碳的數(shù)值 152.0，128.5，185.9，121.4，169.7，31.2，32.7，30.4，58.4，45.3，69.9，41.9，40.3，49.7，25.1，22.1，106.3，，16.7，19.3，212.4，68.1，160.8，149.0，137.4，161.6，103.5，6.3，170.1，20.9 以醋酸潑尼松龍為原料，按照實施例1的方法與4-溴-3-甲基-2-噻吩甲酰氯、AgNO3反應得到標題化合物。
實施例7.外用制劑 活性成分醋酸甲潑尼龍17-(3-硝基氧)丙酸酯按甲潑尼龍計算1g 藥用輔料 羥丙基γ-環(huán)糊精 20g 羧甲基纖維素50g 丙二醇 200g 尼泊金乙酯 5g 尿素10g 蒸餾水 加至1000ml 制備工藝 將活性成分與羥丙基β-環(huán)糊精分別過100目篩，按照處方量稱取，混勻，加入適量無菌蒸餾水充分研磨；將羧甲基纖維素與丙二醇混勻，然后加入適量熱蒸餾水，放置待溶脹成凝膠后，再加入含有研磨后的活性成分和羥丙基γ-環(huán)糊精與尿素和尼泊金乙酯的水溶液，加水至足量即可，按10ml分裝。
其活性成分中還可以增加抗菌素如紅霉素、氟康唑等藥物 實施例8.吸入制劑 活性成分莫米松(Momethasone)17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯按莫米松計0.1g 藥用輔料 乳糖 100g(1000粒) 制備工藝 將活性成分和乳糖分別粉碎成99％粒徑為2-5μm的固體，混勻后，裝填入膠囊即可。每粒膠囊含活性成分100μg其活性成份還可以增加β2腎上腺素受體激動劑如馬來酸福美特羅、沙美特羅或羥萘甲酸沙美特羅。
實施例9.口服制劑-分散片 活性成分醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯按甲基潑尼松龍計算1g 藥用輔料(以250片計，每片活性成分4mg) 羥丙基-環(huán)糊精 10g 預膠化淀粉 300g 制備工藝主藥過100目篩，羥丙基γ-環(huán)糊精和預膠化淀粉過80目篩，稱取處方量的主藥，與羥丙基γ—環(huán)糊精充分混勻后研磨，再與預膠化淀粉混合均勻，直接壓片即得。
實施例10.口服制劑-膠囊 活性成分甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯按甲基潑尼松龍計算10g 藥用輔料 二甲基β-環(huán)糊精 40g 羥乙基纖維素 300g 瓜耳膠 50g 10％淀粉漿適量 制備工藝 先將所有的固體輔料過100目篩，按處方量稱取，將活性成分和二甲基β-環(huán)糊精混勻，加入適量蒸餾水充分研磨后，加入羥乙基纖維素、瓜耳膠和10％淀粉漿適量制粒，60℃以下烘干，18目篩整粒，膠套充填即可，每粒膠囊含活性成分以甲基潑尼松龍計算為4mg。
實施例11.口服制劑-膠囊 活性成分醋酸倍他米松17-(5-硝基氧)戊酸酯按倍他米松計算10g 藥用輔料 二甲基β-環(huán)糊精40g 羥乙酸纖維素 300g 瓜耳膠50g 10％淀粉漿適量 制備工藝 先將所有的固體輔料過100目篩，按處方量稱取，將活性成分和二甲基β-環(huán)糊精混勻，加入適量蒸餾水充分研磨后，加入經(jīng)乙酸纖維素、瓜耳膠和10％淀粉漿適量制粒，60℃以下烘干，18目篩整粒，膠套充填即可，每粒膠囊含活性成分以倍他米松計算為4mg。
實施例12.口服制劑-膠囊 活性成分 醋酸潑尼松龍17-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯按計算潑尼松龍10g 藥用輔料 二甲基β-環(huán)糊精 40g 羥乙基纖維素300g 瓜耳膠 50g 10％淀粉漿適量 制備工藝 先將所有的固體輔料過100目篩，按處方量稱取，將活性成分和二甲基β-環(huán)糊精混勻，加入適量蒸餾水充分研磨后，加入羥乙基纖維素、瓜耳膠和10％淀粉漿適量制粒，60℃以下烘干，18目篩整粒，膠套充填即可，每粒膠囊含活性成分以潑尼松龍計算為4mg。
實施例13.口服制劑-膠囊 以甲基潑尼松龍10g為活性成分，按照實施例10的配方和方法制備膠囊，每粒膠囊含活性成分為4mg。
實施例14.口服制劑-膠囊 以倍他米松10g為活性成分，按照實施例10的配方和方法制備膠囊，每粒膠囊含活性成分為4mg。
實施例15.口服制劑-膠囊 以潑尼松龍10g為活性成分，按照實施例10的配方和方法制備膠囊，每粒膠囊含活性成分為4mg。
藥理實驗 1.皮質(zhì)激素藥理活性 藥理活性可以采用糖皮質(zhì)激素激動劑活性的功能體外試驗進行評價。
依據(jù)K.P.Ray等(Biochem J.(1997)，328，707—715)描述的功能試驗，給出一種糖皮質(zhì)激素激動劑的反式抑制活性測試方法。在37℃下，用適當劑量的受試化合物處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有報告基因的A549細胞1小時，該報告基因含來自ELAM啟動子連接sPAP(分泌性磷酸脂酶)基因的響應NF_КB元件。然后用腫瘤壞死因子(TNF，10ng/ml)刺激該細胞16小時，并用標準的比色法測試此時產(chǎn)生的堿性磷酸酶含量。構(gòu)建劑量響應曲線，并可通過曲線估算EC50值。
實施例1到7的化合物的EC50值小于10nM。
實施例1、3、4，5的EC50值小于1nM。
依據(jù)R.J.H.Austin等(Eur Resp J.(2002)，20，1386-1392)描述的功能試驗，測試化合物立接反式激活基因表達的能力。在37℃下，用適當劑量的受試化合物處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有報告基因的A549細胞6個小時，該報告基因含小鼠乳腺瘤病毒長末端重復系列(MMTV-LTR)的糖皮質(zhì)激素響應區(qū)連接renilla熒光素酶基因。通過將細胞酶與適合的底物一起孵育后，通過測量所發(fā)出的光來測定熒光素酶活性。構(gòu)建劑量響應曲線，并通過曲線估算EC50值，其中最大響應值是相對于地塞米松值(100％)來計算的。
實施例1到7的化合物在該試驗中的最大響應值小于50％。
實施例1、3，5、4的化合物在該試驗中的最大響應值小于20％。
實施例3、4的化合物在該試驗中的最大響應值小于10％。
孕酮受體活性的篩選 已經(jīng)有報道稱人乳癌細胞系T47D對孕酮有上調(diào)內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的反應(Di Lorenzo等人，Cancer Research(1991)51，4470—4475)。將T47D細胞以每孔1 X 105個細胞的密度接種到96孔板中并使其在37℃下生長一夜。將甾族化合物溶解于DMSO中，將其加入到細胞中(最終DMSO濃度為0.7％)，然后將其在37℃下培養(yǎng)24小時。然后將該細胞用PBS洗滌并用RIPA緩沖劑(在磷酸鹽緩沖液中包含1％IGEPAL，0.5％脫氧膽酸鈉，0.1％SDS)進行溶解。用溶解于1M二乙醇胺、0.28M NaCl、0.5mMMgCl2中的作為底物的對-硝基苯磷酸酯(1.5mg/ml)用分光光度法(405nm)來對堿性磷酸酯酶的活性進行測定。劑量響應曲線是由所評估的EC50值得出的。
實施例4的化合物在該試驗中的EC50值大于100nM。
通過以上實驗證明，實施例1到7的化合物具有明顯的藥理活性。
2.對骨質(zhì)、血壓的影響 2.1 材料和方法 2.1.1 材料4月齡雌性SD大鼠100只，重量200±10g。隨機分為10組，每組10只，對照組10只和服藥組90組。
2.1.2 飼養(yǎng)各組任其自由活動，統(tǒng)一條件喂養(yǎng)。
2.1.3 給藥方法情況如下表對照組給與安慰劑(按照實施例10的方法得到的不含活性成分的膠囊內(nèi)容物)，服藥組分別給與的情況如下。
安慰劑按照實施例10的方法得到的不含活性成分的組合物。
2.2 觀察指標30天后進行血壓、血清NO、骨檢驗的測定 (1)全身BMD(骨密度)XR-36型雙能x線骨密度儀掃描測量各組大鼠BMD(美國Norland公司)； (2)大鼠股骨干重、灰重含量測定采用陶永輝等(陶永輝，譚成，蔡剛明.去勢雌性大鼠骨質(zhì)疏松癥的藥物干預療效的評價.中國骨質(zhì)疏松雜志，2002，847-50)的方法。
(3)血壓測量切開頸部皮膚，分離出左頸總動脈后，行插管固定，連接八導生理記錄儀，穩(wěn)定10min后，記錄血壓，測出收縮壓、舒張壓。
(4)硝酸還原酶法測定血清NO水平NO試劑盒(南京建成生物工程研究所)，按說明書使用。按照沈偉哉，郭國慶，梁一鳴，自發(fā)性高血壓大鼠血漿一氧化氮濃度的變化(解剖學研究，2001，23(1)22-24)中涉及的方法測定。
2.3 統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)用x±s表示，在SPSS10.0軟件下處理，所有數(shù)據(jù)方差分析兩兩比較t檢驗。
2.4 結(jié)論 2.4.1 各組收縮壓、舒張壓的變化(x±s) 1-3組與其它組血壓的分析結(jié)果 通過上述實驗證明，1-3組的化合物與安慰組對血壓的影響類似，與相應的皮質(zhì)激素及其21位NO衍生物對血壓的影響有顯著性差異。
2.4.2 各組骨的生理數(shù)據(jù)的變化(x±s) 1-3組與其它組BMD的分析結(jié)果 通過上述實驗證明，1-3組的化合物與安慰組對BMD的影響類似，與相應的皮質(zhì)激素及其21位NO衍生物對BMD的不良影響有顯著性差異。
1-3組與其它組股骨干重的分析結(jié)果 通過上述實驗證明，1-3組的化合物與安慰組對股骨干重的影響類似，與相應的皮質(zhì)激素及其21位NO衍生物對股骨干重的不良影響有顯著性差異。
1-3組與其它組股骨灰重的分析結(jié)果 通過上述實驗證明，1-3組的化合物與安慰組對股骨灰重的影響類似，與相應的皮質(zhì)激素及其21位NO衍生物對股骨灰重的不良影響有顯著性差異。
2.4.3 硝酸還原酶法測定血清NO水平的結(jié)果 大鼠血清NO水平比較結(jié)果(x±s) 1-3組與其它組血清NO分析結(jié)果統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)用x±s表示，在SPSS10.0軟件下處理，所有數(shù)據(jù)方差分析兩兩比較t檢驗。
過上述實驗證明，1-3組的化合物與安慰組和相應的皮質(zhì)激素相比血清NO水平顯著差異，與及其21位NO衍生物對血清NO水平的影響不具有顯著性差異。
3.穩(wěn)定性考察 試驗方法準備實施例10，11，12，對照品1，2，3的膠囊各60粒，將在不同的條件下，分別在常溫(25℃±2℃/60％RH±10％)下放置0天，1個月，3個月，分別在高溫(60℃±2℃)下放置5天，10天，每次分別取實施例10，11，12，對照品1，2，3的膠囊各10粒，進行含量分析。其中不同的條件，參考中國藥典2005原料藥和藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則，RH代表相對濕度，±后面的數(shù)代表可以浮動的數(shù)值范圍。
HPLC含量的測定 實施例10，對照品1按照醋酸甲潑尼龍的分析方法 實施例11，對照品2按照醋酸倍他米松的分析方法 實施例12，對照品3按照醋酸潑尼松龍的分析方法 分析結(jié)果統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)用x±s表示。
表1 穩(wěn)定性數(shù)據(jù)對比(x±s)

從表1的數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明實施例10，11，12與對照品1，2，3在使用穩(wěn)定性中優(yōu)勢明顯。
權(quán)利要求
1.一種如下通式的化合物1或其酯或鹽
T-B-O-NO2，T為化合物1除去B-O-NO2的甾體殘基
其中，1的取代通式中所示的CH基中的H或CH2基中的H2可以不存在取代基，也可以存在的取代基，各位置的取代基可為
在第1-2位可以是雙鍵；
在第2-3位可以是如下取代基
在第2位可以是Cl，Br；OCH3
在第3位可以是酮基(＝O)，-O-CH2-CH2-Cl，OH；
在第4-5位可以是雙健；
在第5-6位可以是雙鍵；
在第6位可以是Cl，F(xiàn)，CH3，-CHO；
在第7位可以是Cl；
在第6-7位可以是雙鍵；
在第9位可以是α-F，α-Cl；
在第11位可以是酮基，OH，Cl；
在第16位可以是CH3，OH，＝CH2；
R1，R2可以相同或彼此不同，可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基R3可為(-CO-L)b-Q，
L為(CR4R5)b1(O)b2(CR4R5)b2(CO)b3(O)b4(CO)b5(CR4R5)b6Q為H，OH，CH3，Cl，OCH2CN，SCH2CN，SH，SCH2F，1至16碳的碳氫化合物b為1，b1，b2，b3，b4，b5，b6可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，
B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”-
a為0或1，b’，b”可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至兩個雜原子的1至8碳的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種，B與TH上17位的羥基以酯鍵形式相連。
R3和B中所述的任一R4，R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
R3和B中所述的任一R4取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
R3和B中所述的任一R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。
2.如權(quán)利要求1所述的式1化合物為
醋酸甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯
甲基潑尼松龍17-(3-硝基氧)丙酸酯
醋酸倍他米松17-(5-硝基氧)戊酸酯
莫米松(Momethasone)17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯
醋酸潑尼松龍17-(2-硝基氧)乙基碳酸酯
醋酸潑尼松龍17-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯
3.權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物中的應用。
4.一種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物。
5.一種權(quán)利要求4的藥用組合物，權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物與一種或多種生理學上可接受的藥物輔料混合。
6.如權(quán)利要求4的藥用組合物，該組合物還包含另一種治療炎性、變應性或過敏性疾病的藥物。
7.如權(quán)利要求4的藥用組合物，該組合物還包含抑制或殺死微生物的藥物。
8.一種制備權(quán)利要求1-2的式1化合物的方法，其包括
(1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr反應形成TBY；催化劑可以存在或不存在，Y為溴或氯原子，然后
(2)將上述反應中得到的產(chǎn)物TBY通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應得到T-B-O-NO2。
9.如權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物，在治療哺乳動物的疾病中的劑量以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天。
10.權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)治療炎性、變應性或過敏性疾病中的劑量以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型硝酸酯類甾體化合物和它們的制備方法。本發(fā)明也涉及含有該化合物的藥用制劑以及該化合物的治療用途，特別是對炎性疾病、變應性疾病或過敏性疾病的治療。
文檔編號A61K47/48GK101397317SQ20071005979
公開日2009年4月1日 申請日期2007年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者盧彥昌, 靜 李, 亮 孫, 陳立營 申請人:天津藥業(yè)研究院有限公司