專(zhuān)利名稱(chēng)：用于選擇性增強(qiáng)心房收縮力以及治療心功能不全的kv1.5－阻滯劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Kv1.5阻滯劑、特別是式Ia和/或Ib的苯甲酰胺和/或其可藥用鹽的心房收縮力增強(qiáng)作用， 用于治療心房收縮力降低和心力衰竭，特別是舒張功能障礙引起的心力衰竭。
心房纖維性顫動(dòng)(AF)和心房撲動(dòng)是最常見(jiàn)的持續(xù)性心率失常。發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而增加并且經(jīng)常引起致命性后遺癥如中風(fēng)。心房纖維性顫動(dòng)每年影響約一百萬(wàn)美國(guó)人并且每年在美國(guó)導(dǎo)致多于80,000例的中風(fēng)。在老年人群和作為心房纖維性顫動(dòng)的后果會(huì)出現(xiàn)心房收縮損傷，即心房功能喪失。在這種情況下，有效的心房收縮減弱，心房增大以及心室充盈降低。心室充盈的減少導(dǎo)致心射血的減少，從而降低體育鍛煉的耐受力。
心房功能衰退引起綜合的血液動(dòng)力學(xué)作用、血栓形成前作用和致心律失常作用。它削弱心臟工作能力，特別是在體育鍛煉時(shí)。心房收縮力不足可導(dǎo)致心房血液的淤積，引起血栓形成和并發(fā)栓塞(中風(fēng))。心房功能喪失導(dǎo)致心房擴(kuò)張，這相當(dāng)大地增加了心房心律失常的趨勢(shì)。因此，通過(guò)增加心房收縮力來(lái)減小心房大小減小了心律失常的易感性，因此為避免心房纖維性顫動(dòng)的再次引發(fā)提供了保護(hù)。
增強(qiáng)心房收縮力除了對(duì)于心房本身的益處之外，選擇性增強(qiáng)心房收縮力對(duì)治療心力衰竭而言、特別是對(duì)基于舒張功能障礙的心力衰竭而言也有治療上的益處。這是因?yàn)樵谶@種情況下會(huì)出現(xiàn)基于心室伸展性和彈性降低的左心室充盈損傷。此種損傷經(jīng)常伴有心臟肥大或心肌疾病，其中心臟壁可能增厚或纖維化。伸展性受損還稱(chēng)為心室順應(yīng)性降低。該術(shù)語(yǔ)的含義為心室的伸展性除適當(dāng)?shù)纳煺怪庠瓌t上保持不變，因此心室的充盈能夠僅僅通過(guò)應(yīng)用較大的壓力(高充盈壓)而實(shí)現(xiàn)。有效的心房收縮產(chǎn)生心室所需的充盈壓?？赡芡ㄟ^(guò)增強(qiáng)心房的收縮力高于正常水平以改善受損的心室功能。增強(qiáng)收縮力的物質(zhì)如強(qiáng)心甙不適于此，因?yàn)樘貏e是它們直接增強(qiáng)了心室的收縮，并因此減小了心室的大小，以至于心室的充盈再次削弱，盡管可能同時(shí)發(fā)生心房收縮力增強(qiáng)作用。選擇性地增加心房收縮力對(duì)此而言是必要的。
從麻醉的豬的實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Kv1.5阻滯劑選擇性地增強(qiáng)心房收縮力而不直接影響心室收縮力。在豬身上同樣可能證明當(dāng)采用實(shí)驗(yàn)方法阻滯心室充盈(舒張功能障礙模型)時(shí)，心房收縮力增強(qiáng)作用導(dǎo)致循環(huán)狀況改善。用Kv1.5阻滯劑顯著改善心輸出量(心臟工作能力的一個(gè)重要參數(shù))的減少是可能的。這些實(shí)驗(yàn)證明了Kv1.5阻滯劑對(duì)心房收縮力的選擇性增強(qiáng)以及其對(duì)心力衰竭、特別是舒張性心力衰竭的有益作用。
本發(fā)明涉及式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽在生產(chǎn)治療或預(yù)防心力衰竭的藥物中的應(yīng)用，其中各符號(hào)的含義為R(1)具有3、4或5個(gè)碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4個(gè)碳原子的烷基或環(huán)丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；A-CnH2n-；n為0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相獨(dú)立地代表氫，F(xiàn)，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；
B-CmH2m-；m為1或2；R(8)具有2或3個(gè)碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；R(9)C(O)OR(10)或COR(10)；R(10)-CxH2x-R(11)；x為0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基。
優(yōu)選是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽在生產(chǎn)治療或預(yù)防心力衰竭的藥物中的應(yīng)用，其中式Ia和/或Ib化合物選自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟芐基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[環(huán)丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的鹽。
特別優(yōu)選是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽在生產(chǎn)治療或預(yù)防舒張性心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
烷基和亞烷基可以是直鏈或支鏈的。同樣適用于式CnH2n、CmH2m和CxH2x的亞烷基。如果它們是被取代的或出現(xiàn)在其它基如烷氧基中，烷基和亞烷基同樣可以是直鏈或支鏈的。烷基的實(shí)例為甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基或正-戊基。衍生子這些基團(tuán)的二價(jià)基團(tuán)，如亞甲基、1，1-亞乙基、1，2-亞乙基、1，1-亞丙基、1，2-亞丙基等等，是亞烷基的實(shí)例。
吡啶基是2-、3-或者4-吡啶基。
喹啉基包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，優(yōu)選為8-喹啉基。
被單取代的苯基可以在2、3或4位被取代，被二取代的苯基可以在2，3、2，4、2，5、2，6、3，4或3，5位被取代。相應(yīng)的說(shuō)明也類(lèi)似地用于吡啶基。
如果基團(tuán)被二取代，取代基可以是相同的或不同的。
如果式Ia或Ib化合物包含一個(gè)或多個(gè)酸性或堿性基團(tuán)或者一個(gè)或多個(gè)堿性雜環(huán)，則本發(fā)明還包括相應(yīng)的生理或毒理可接受的鹽，特別是可藥用鹽。因此，式Ia化合物可以在磺酰氨基上被脫質(zhì)子，用作例如堿金屬鹽，優(yōu)選是鈉鹽或鉀鹽，或者用作銨鹽，如與氨或有機(jī)胺或氨基酸的鹽。包含吡啶或喹啉取代基的式Ia或Ib化合物也可以以與無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的生理耐受的酸加成鹽的形式應(yīng)用，例如鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、葡糖酸鹽等等。
當(dāng)被適當(dāng)取代時(shí)，式Ia或Ib化合物可以以立體異構(gòu)形式存在。如果式Ia或Ib化合物包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心，則它們可以相互獨(dú)立地具有S構(gòu)型或R構(gòu)型。本發(fā)明包括所有可能的立體異構(gòu)體，例如對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體，以及兩種或更多種立體異構(gòu)形式如對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的任何比例的混合物。因此本發(fā)明包括例如純對(duì)映異構(gòu)體形式(左旋或右旋對(duì)映體)以及兩種對(duì)映異構(gòu)體的各種比例的混合物形式或外消旋物形式的對(duì)映異構(gòu)體。單一立體異構(gòu)體可以通過(guò)對(duì)混和物進(jìn)行常規(guī)的級(jí)分或例如采用同分異構(gòu)純的合成子按照預(yù)期進(jìn)行制備。
式Ia或Ib化合物可以依照WO 0125189、WO 02088073或WO02100825中描述的制備方法進(jìn)行制備。
根據(jù)本發(fā)明，式Ia或Ib化合物可以以本身、相互混合或藥物制劑的形式用于人或動(dòng)物來(lái)治療心力衰竭。
除常規(guī)的可藥用載體和賦形劑外，藥物制劑還包含有效量的至少一種式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽作為活性成分，并且還酌情包含一種或多種其它的藥理活性物質(zhì)。藥物制劑通常包含0.1-90％重量的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽。
藥物制劑可采用已知的方法生產(chǎn)。對(duì)于此目的，活性物質(zhì)和/或其生理可耐受的鹽可以與一種或多種固體或液體藥用載體和/或賦形劑一起轉(zhuǎn)化成適宜的形式或劑型，這些形式或劑型然后可作為人類(lèi)醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)的藥物應(yīng)用。
包含本發(fā)明的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受鹽的藥物可以通過(guò)如口服、胃腸道外、靜脈內(nèi)、直腸、吸入或局部給藥，優(yōu)選依據(jù)個(gè)體情形給藥。
技術(shù)人員根據(jù)其專(zhuān)業(yè)知識(shí)熟悉哪些賦形劑適于預(yù)期的藥物制劑。除溶劑、膠凝劑、栓劑基質(zhì)、片劑賦形劑和其它活性物質(zhì)載體外，還可能使用例如抗氧化劑、分散劑、乳化劑、消泡劑、掩味劑、防腐劑、增溶劑、實(shí)現(xiàn)儲(chǔ)庫(kù)作用的物質(zhì)、緩沖物質(zhì)或著色劑。
對(duì)于口服應(yīng)用形式，將活性化合物與適于此目的的添加劑如載體、穩(wěn)定劑或惰性稀釋劑混合，通過(guò)常規(guī)方法轉(zhuǎn)化成適宜的形式，例如片劑、包衣片劑、兩節(jié)套合式膠囊以及水性、醇性或油性溶液?？梢詰?yīng)用的惰性載體的實(shí)例為阿拉伯膠、氧化鎂、碳酸鎂、磷酸鉀、乳糖、葡萄糖或淀粉，特別是玉米淀粉。制備可通過(guò)干顆?；驖耦w粒法進(jìn)行。適宜作為油性載體或溶劑的例如是植物油或動(dòng)物油，如葵花油或魚(yú)肝油。適用于水性或醇性溶液的溶劑是例如水、乙醇或糖溶液或它們的混合物。其它給藥形式的其它賦形劑的實(shí)例為聚乙二醇和聚丙二醇。
對(duì)于皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥，活性化合物可酌情與慣用于此目的的物質(zhì)如增溶劑、乳化劑或其它賦形劑一起轉(zhuǎn)化成溶液、混懸液或乳劑。適宜溶劑的實(shí)例為水、生理鹽水或醇，例如乙醇、丙醇、丙三醇，以及糖溶液如葡萄糖或甘露醇溶液，或者上述各種溶劑的混合物。
適于以氣霧劑或噴霧劑形式給藥的藥物制劑例如是活性物質(zhì)或其生理可耐受鹽在可藥用溶劑中的溶液、混懸液或乳劑，所述溶劑例如具體是乙醇或水或者所述溶劑的混合物。如果需要的話(huà)，制劑也可以包含其它藥用賦形劑如表面活性劑、乳化劑和穩(wěn)定劑，以及拋射氣體。這樣的制劑包含濃度通常為約0.1-10％重量、特別是約0.3-3％重量的活性物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明所施用的活性化合物或其生理可耐受鹽的劑量取決于個(gè)體情形，并且通常應(yīng)當(dāng)適應(yīng)個(gè)體條件以達(dá)到最佳效果。因此，這自然取決于給藥頻率和用于治療或預(yù)防的具體化合物作用的效力和持續(xù)時(shí)間，但也取決于所治療疾病的類(lèi)型和嚴(yán)重程度，取決于所治療的人或動(dòng)物的性別、年齡、體重和個(gè)體響應(yīng)，以及取決于治療是急性還是慢性的或者是為了預(yù)防。
式Ia和/或Ib Kv1.5阻滯劑的劑量通常在1mg-1g/天/人(體重約75kg)、優(yōu)選5-750mg/天/人之間變化。但是更高的劑量也可以是適合的。活性物質(zhì)的日劑量可以一次性給藥或?qū)⑵浞譃槎啻谓o藥，例如兩次、三次或四次。
實(shí)驗(yàn)部分縮略詞表DMAP4-二甲基氨基吡啶EDACN-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽HOBT1-羥基-1H-苯并三唑RT 室溫THF 四氫呋喃實(shí)施例1N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺 將15.5g(0.115mol)HOBT和21.9g(0.115mol)EDAC加入到37.8g(0.11mol)2’-(叔丁氧羰基氨基甲基)-聯(lián)苯基-2-甲酸(Brandmeier，V.；Sauer，W.H.B.；Feigel，M.；Helv.Chim.Acta 1994，77(1)，70-85)在550mL THF中的溶液中，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌45分鐘。然后加入14.0g(0.115mol)3-(2-氨基乙基)吡啶，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入400mL水和500mL乙酸乙酯并劇烈攪拌后，兩相分開(kāi)。有機(jī)相用400mL飽和氯化鈉溶液洗滌一次以及用每次各400mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌兩次。在活性炭存在下經(jīng)硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
將所得中間體(40.7g)溶于600mL二氯甲烷中，緩慢滴加100mL三氟乙酸。攪拌過(guò)夜后，將反應(yīng)混合物真空濃縮。殘留物與250mL乙酸乙酯混合并再次濃縮以蒸出過(guò)量的三氟乙酸。將所得粗產(chǎn)物溶于170mL二氯甲烷中，滴加72.8mL(530mmol)三乙胺，并加入1g DMAP。然后，在5-10℃下，歷經(jīng)30分鐘滴加18.7g(100mmol)4-甲氧基苯乙酰氯，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入150mL水并劇烈攪拌后，兩相分開(kāi)，有機(jī)相用100mL氯化鈉溶液洗滌一次，用25mL 1M鹽酸洗滌一次以及用每次各100mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌兩次。經(jīng)硫酸鎂和活性炭干燥，然后真空濃縮。將所得的油溶于熱乙腈中并放置使其緩慢析出結(jié)晶。
獲得21.5g N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺，熔點(diǎn)116℃。
實(shí)施例2N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺 該化合物通過(guò)WO 0125189中描述的合成方法獲得。
實(shí)施例3N-(2，4-二氟芐基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺 該化合物通過(guò)WO 0125189中描述的合成方法獲得。
實(shí)施例4N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺 該化合物通過(guò)WO 0125189中描述的合成方法獲得。
實(shí)施例52-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺 a)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸將20g(188mmol)碳酸鈉加入到20g(146mmol)2-氨基苯甲酸在250mL水中的混懸液中。然后滴加11.4g(72.8mmol)丁基磺酰氯，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。用濃鹽酸進(jìn)行酸化并在室溫下攪拌3小時(shí)，沉淀的產(chǎn)物進(jìn)行抽濾。真空干燥后得到9.6g2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸。
b)1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在-70℃下，將3mL(23.2mmol)5-溴-2-甲氧基吡啶加入到10.2mL丁基鋰(2.5M己烷溶液；25.5mmol)在50mL乙醚中溶液中。10分鐘后，加入1.4mL(19.5mmol)丙腈。于-70℃2小時(shí)后，使反應(yīng)混合物緩慢升至室溫。然后加入2.2g十水合硫酸鈉，將混合物攪拌1小時(shí)。隨后加入5g硫酸鎂和簡(jiǎn)短攪拌后，濾出鹽，濾液濃縮。殘留物溶于70mL甲醇中，于0℃加入1.1g(28mmol)硼氫化鈉。攪拌過(guò)夜后，將反應(yīng)混合物用濃鹽酸調(diào)節(jié)至pH2，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。將殘留物與10mL水混合并用乙醚萃取一次。然后，水相用碳酸氫鈉飽和并在真空下濃縮，殘留物用乙酸乙酯萃取。干燥并濃縮乙酸乙酯萃取液，獲得1.4g外消旋的1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺。
c)2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺將4.4g(32.7mmol)1-羥基-1H-苯并三唑和6.3g(32.7mmol)N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽加入到8.0g(31.1mmol)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸在250mL四氫呋喃中的溶液中，反應(yīng)混合物攪拌90分鐘。然后滴加5.4g(32.7mmol)外消旋1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在20mL四氫呋喃中的溶液，混合物攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物與250mL水混合并用300mL乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用每次各100mL飽和碳酸氫鈉溶液萃取5次，然后用硫酸鎂干燥。獲得9.0g2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺。
對(duì)映異構(gòu)體的分離在Chiralpak ADH柱(250×4.6mm)上通過(guò)制備型HPLC進(jìn)行；洗脫液己烷/乙醇/甲醇10∶1∶1；溫度30℃；流速1mL/min。在保留時(shí)間5.9分鐘時(shí)首先被洗脫的是4.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。一段混合級(jí)分后，在保留時(shí)間7.2分鐘時(shí)洗脫出3.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(S)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。
將2g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺溶于9mL熱的異丙醇中，之后加入8mL熱水，反應(yīng)混合物緩慢冷卻過(guò)夜。在0℃抽濾后，獲得1.5g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，為無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)97℃。
實(shí)施例62-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[環(huán)丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺 該化合物通過(guò)WO 02088073中描述的合成方法獲得。
實(shí)施例7(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺 a)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸將10.0g(64mmol)5-氟-2-氨基苯甲酸、16.3g(193mmol)碳酸氫鈉和16.3g 8-喹啉磺酰氯在325mL水和325mL乙酸乙酯中的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。水相分離，用50mL乙酸乙酯萃取一次。然后水相用濃鹽酸酸化并攪拌2小時(shí)。分離出的沉淀進(jìn)行抽濾并真空干燥，獲得19.5g 5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸。
b)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺采用WO 02100825的方法，由5.5g(15.9mmol)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸和2.3g(16.7mmol)(S)-苯基丙基胺獲得5.7g標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)163℃。
實(shí)施例8(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺鈉鹽將2mL 30％的甲醇鈉溶液加入到5g實(shí)施例7的化合物在120mL乙酸乙酯中的溶液中。沉淀的鈉鹽進(jìn)行抽濾并用25mL乙醇重結(jié)晶，獲得3.3g標(biāo)題化合物。
藥理學(xué)研究對(duì)Kv1.5通道的活性的鑒定將人Kv1.5通道在爪蟾卵母細(xì)胞中表達(dá)。對(duì)于此目的，首先從非洲爪蟾中分離出卵母細(xì)胞并脫卵泡。然后，將體外合成的Kv1.5-編碼的RNA注射到卵母細(xì)胞中。在Kv1.5蛋白表達(dá)1-7天后，應(yīng)用雙微電極電壓鉗技術(shù)在卵母細(xì)胞上測(cè)定Kv1.5電流。在此種情況下，Kv1.5通道在電壓跳至0mV和40mV持續(xù)500ms時(shí)被激活。具有以下組成的溶液流動(dòng)穿過(guò)浴NaCl 96mM，KCl 2mM，CaCl21.8mM，MgCl21mM，HEPES 5mM(用NaOH滴定至pH7.4)。這些實(shí)驗(yàn)在室溫下進(jìn)行。下述用于數(shù)據(jù)采集和分析基因鉗放大器(Axon Instruments，F(xiàn)oster City，USA)和MacLab D/A轉(zhuǎn)換器和軟件(ADInstruments，Castle Hill，澳大利亞)。通過(guò)將本發(fā)明的物質(zhì)以多種濃度加入到浴溶液中對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。該物質(zhì)的作用以占Kv1.5空白電流抑制(當(dāng)溶液中未加入物質(zhì)時(shí)獲得)的百分比計(jì)算。然后，采用Hill等式外推數(shù)據(jù)，以確定各物質(zhì)的抑制濃度IC50。
用這種方法確定的以下所列化合物的IC50值如下
Kv1.5阻滯劑對(duì)豬左心房收縮力的直接作用如下文(A)所示。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(B)中，證明了心房收縮力改善對(duì)受阻的心室充盈的作用。
A)Kv1.5阻滯劑對(duì)麻醉豬的心室收縮力的作用測(cè)定材料和方法德國(guó)長(zhǎng)白豬術(shù)前肌內(nèi)注射包含賽拉嗪、替來(lái)他明和唑拉西泮各2.5-3.5mg/kg的混合注射液。麻醉由戊巴比妥(約30mg/kg靜注)產(chǎn)生并且通過(guò)連續(xù)輸注戊巴比妥(12-17mg/kg/h)來(lái)維持。
在產(chǎn)生麻醉和氣管切開(kāi)之后，動(dòng)物被插管并用含有40％氧氣的環(huán)境空氣混合物通氣。通氣率和體積由常規(guī)測(cè)定的血?dú)馑胶蚿H水平?jīng)Q定。連續(xù)記錄體溫，并通過(guò)加熱墊和/或紅光燈和/或呼吸氣的加熱來(lái)控制，使其保持恒定(約37-38℃)。
豬的下述血管被暴露和插管頸外靜脈(麻醉輸注)、頸動(dòng)脈(引入測(cè)壓導(dǎo)管探針于左心室以記錄此處的血壓)、外側(cè)隱靜脈(施用檢測(cè)物質(zhì))、上腹部顱側(cè)淺表靜脈(液體輸注)、股動(dòng)脈(外周血壓記錄)和股靜脈(引入MAP導(dǎo)管于右心房)。
收縮力的相應(yīng)參數(shù)通過(guò)置于左心房的兩個(gè)超聲傳感器測(cè)定(P/N JP5-2，Triton Technology)[參考文獻(xiàn)1和2]。這兩個(gè)壓電傳感器以頭尾方向值入穿過(guò)心房極邊緣的點(diǎn)切口。切口各用U形針(2-0 Vicryl)封住。然后，兩個(gè)超聲傳感器被連接到評(píng)價(jià)裝置上。另外，壓力測(cè)定導(dǎo)管被值入到心房前側(cè)邊緣以記錄左心房壓力。
左心房收縮期縮短(LASS)通過(guò)有效心房壓力曲線起始時(shí)的心房直徑和最小直徑來(lái)測(cè)定。因?yàn)樾姆渴湛s力取決于初始的伸展，所以將左心房收縮期縮短除以有效心房收縮的起始值(LASS指數(shù))。收縮曲線的最大斜率通過(guò)將原始數(shù)據(jù)點(diǎn)輸入Microsoft Excel以計(jì)算曲線的最大斜率。為了排除呼吸相關(guān)的變異，至少分析10個(gè)心臟循環(huán)。該參數(shù)(同樣表明收縮力改善)稱(chēng)為L(zhǎng)ASS斜率。
記錄初始值，然后輸注稍后所用的溶媒10分鐘，所述溶媒由0.5mLDMSO、2.5mLPEG和2.0mL葡萄糖G20組成。隨后，在竇性節(jié)律時(shí)，靜脈內(nèi)施用(i.v.)1mg/kg溶于上述溶媒中的檢測(cè)物質(zhì)。
在進(jìn)一步的一系列實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)物質(zhì)僅在右心房連續(xù)高頻刺激(1200擊/分鐘)誘導(dǎo)的心房纖維性顫動(dòng)一小時(shí)之后給藥。在這種情況下，在纖維性顫動(dòng)之前/之后以及在施用檢測(cè)物質(zhì)后記錄心房收縮力的參數(shù)，并與施用溶媒對(duì)照后進(jìn)行比較。
實(shí)施例1化合物在豬中對(duì)正常竇性節(jié)律中(表1)和心房纖維性顫動(dòng)后1小時(shí)(表2)的心房功能有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義的改善。心房功能改善同樣由參數(shù)——LASS指數(shù)和LACC斜率來(lái)看也是顯然的。應(yīng)當(dāng)特別強(qiáng)調(diào)實(shí)施例1化合物在心房纖維性顫動(dòng)1小時(shí)后的作用，因?yàn)槭湛s力降至初始值的57-69％。在這種情況下，實(shí)施例1化合物能夠改善收縮力至高于基線水平(心房纖維性顫動(dòng)之前)。
實(shí)施例1化合物能相當(dāng)大程度地改善竇性節(jié)律中和心房纖維性顫動(dòng)后的心房收縮力，其中心房收縮力通過(guò)稱(chēng)為電重塑的方法以病理生理上顯著的程度被降低。
表1實(shí)施例1化合物(1mg/kg靜注)對(duì)竇性節(jié)律中心房收縮力的參數(shù)的作用。
*p＜0.05；**p＜0.01。
表2實(shí)施例1化合物(1mg/kg靜注)在心房纖維性顫動(dòng)(AF)1小時(shí)后對(duì)心房收縮力的參數(shù)的作用。*p＜0.05；**p＜0.01。
在竇性節(jié)律時(shí)的同樣實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，實(shí)施例5同樣顯示出左心房收縮力改善。靜注1mg/kg后，心房收縮力(LASS)在竇性節(jié)律時(shí)改善68％(表3)。
表3實(shí)施例5化合物(1mg/kg靜注)對(duì)竇性節(jié)律中心房收縮力的參數(shù)的作用。*p＜0.05；n＝8。
B)在舒張功能障礙模型中施用Kv1.5阻滯劑后左心室射血的改善方法將豬如A)中所述進(jìn)行麻醉，并進(jìn)行開(kāi)胸術(shù)。將流速傳感器放于大動(dòng)脈以測(cè)定心輸出量。在穩(wěn)定的血液動(dòng)力學(xué)條件下，采用套管將空氣(約30mL)灌輸?shù)叫陌?。心包灌輸空氣的目的是阻止心室充盈，這最終將導(dǎo)致心輸出量降低(舒張性心力衰竭)。實(shí)驗(yàn)的目的是證明減少的心輸出量可通過(guò)增強(qiáng)心房收縮力而增加，通過(guò)Kv1.5阻滯劑增強(qiáng)的心房收縮力使受阻的心室充盈改善。
心包空氣灌輸導(dǎo)致心輸出量明顯減少(表3)。有可能通過(guò)施用實(shí)施例1化合物(3mg/kg)、輸注30分鐘(n＝11)來(lái)相當(dāng)大程度地增加心輸出量。實(shí)施例1化合物使減少的心輸出量最大增加25％。
實(shí)施例1化合物阻滯Kv1.5在心室充盈受阻時(shí)增加心輸出量。該結(jié)果說(shuō)明Kv1.5阻滯對(duì)舒張性心力衰竭特別有效。
表3實(shí)施例1化合物給藥(3mg/kg，i.v.30min)前后，心包灌輸空氣以阻止心室充盈(舒張性功能障礙或心力衰竭)的豬(n＝11)的心輸出量(L/min)。
參考文獻(xiàn)Leistad E，Aksnes G，Verburg E，Christensen G.短期心房纖維性顫動(dòng)后的心房收縮功能障礙可被維拉帕米減少但被BAY K8644增加，Circulation 1996；931747-1754。
Recordati G，Lombardi F，Malliani A，Brown AM.貓右心房的瞬時(shí)大小改變，J Appl Physiol 1974；36686-692。
權(quán)利要求
1.式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽在生產(chǎn)治療或預(yù)防心力衰竭的藥物中的應(yīng)用， 其中各符號(hào)的含義為R(1)具有3、4或5個(gè)碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4個(gè)碳原子的烷基或環(huán)丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；A -CnH2n-；n為0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相獨(dú)立地代表氫，F(xiàn)，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；B -CmH2m-；m為1或2；R(8)具有2或3個(gè)碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基，和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基；R(9) C(O)OR(10)或COR(10)；R(10) -CxH2x-R(11)；x為0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2個(gè)選自如下基團(tuán)的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3個(gè)碳原子的烷基和具有1、2或3個(gè)碳原子的烷氧基。
2.如權(quán)利要求1中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽的應(yīng)用，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防心力衰竭的藥物，其中式Ia和/或Ib化合物選自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟芐基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}聯(lián)苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基芐氧羰基氨基甲基)聯(lián)苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[環(huán)丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的鹽。
3.如權(quán)利要求1或2中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的鹽的應(yīng)用，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防舒張性心力衰竭的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及Kv1.5阻滯劑、特別是式Ia和/或Ib(I，II)的苯甲酰胺和/或其可藥用鹽的收縮力增強(qiáng)作用，用于治療心房收縮力降低和心功能不全，特別是舒張功能障礙引起的心功能不全。
文檔編號(hào)A61K31/44GK1921855SQ200580005486
公開(kāi)日2007年2月28日 申請(qǐng)日期2005年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月26日
發(fā)明者K·維爾特 申請(qǐng)人:塞諾菲-安萬(wàn)特德國(guó)有限公司