專利名稱：一種注射用益氣復(fù)脈制劑中人參總皂苷的含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥檢測方法，特別涉及一種注射用益氣復(fù)脈制劑中人參總皂苷的含量的測定方法。
背景技術(shù)：
注射用益氣復(fù)脈(凍干)是由紅參、麥冬、五味子制成的用于靜脈滴注的中藥復(fù)方制劑，具有益氣復(fù)脈，養(yǎng)陰生津的療效。主要用于冠心病勞累性心絞痛氣陰兩虛證，癥見胸痹心痛，心悸氣短、倦怠懶言、頭暈?zāi)垦?、面色少華、舌淡、少苔或剝苔，脈細弱或結(jié)代；冠心病所致慢性左心功能不全II、III級氣陰兩虛證，癥見心悸、氣短甚則氣急喘促，胸悶隱痛，時作時止，倦怠乏力，面色蒼白，動則汗出，舌淡、少苔或剝苔，脈細弱或結(jié)代。注射用益氣復(fù)脈(凍干)性狀本品為淺黃色的疏松塊狀物；有引濕性。取I瓶內(nèi)容物,加水2 3ml溶解后，為棕紅色澄明液體。用法用量靜脈滴注。每日I次，每次8瓶，用250ml 500ml 5%葡萄糖注射液或生理鹽水稀釋后靜脈滴注。每分鐘約40滴。療程2周。近紅外光譜分析技術(shù)簡便、快速，無須提取、稀釋和破壞樣品，且光纖漫反射技術(shù)可以直接測定固體樣品，是一種理想的質(zhì)量控制方法。近年來隨著計算機技術(shù)和化學(xué)計量學(xué)的快速發(fā)展，近紅外光譜技術(shù)已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于食品、石油化工、煙草和醫(yī)藥等行業(yè)。近紅外光譜技術(shù)在人參類植物鑒別過程中也得到了應(yīng)用，有文獻報道該法已經(jīng)成功地應(yīng)用于高麗參和紅參的鑒別及人參和紅參Μ的鑒別，并實現(xiàn)了人參中的總皂苷、總糖和水分的定量，樣品處理方便，分析精確度高，值得推廣?，F(xiàn)行的質(zhì)量標準中人參總皂苷的測定方法采用紫外分光光度法，該法前處理復(fù)雜耗時，顯色過程中對時間和溫度要求苛刻，易產(chǎn)生誤差，實際應(yīng)用中存在一定局限。本研究建立了用近紅外漫反射光譜技術(shù)測定注射用益氣復(fù)脈(凍干)中人參總皂苷含量的模型，并用于該樣品含量的預(yù)測，結(jié)果較為滿意。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的檢測注射用益氣復(fù)脈中人參總皂苷含量的方法，包括以下步驟I)對照品的制備分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，制得溶液。2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液。3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。優(yōu)選的檢測方法，包括以下步驟
I)對照品的制備分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，制得每Iml各含約O. Img的溶液。2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m),流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O(shè). 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次沖洗后，繼以用20 %甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m
膜，即可。3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。本發(fā)明方法的建立2實驗部分2. I實驗儀器和材料Matrix-F (SFDA版)型傅里葉變換近紅外漫反射光譜儀(德國布魯克公司)，光纖探頭，定量分析軟件為0PUS6. 5 ；HACH DR5000紫外分光光度計(美國哈希公司)；MettlerXS105電子天平；人參皂苷Re對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110754-200906);試劑均為分析純，水為超純水；注射用益氣復(fù)脈(凍干)樣品(天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提供，科研用樣品，60批,分別編號為I 60)。2.2實驗方法2. 2. I紫外分光光度法測定總皂苷60批樣品，按注射用益氣復(fù)脈(凍干)現(xiàn)行質(zhì)量標準測量其總皂苷含量。2. 2. 2近紅外光譜的采集60批樣品，用布擦拭干凈西林瓶底部，分別從西林瓶底部掃描其近紅外光譜。具體掃描參數(shù)為測量溫度26°C，濕度30%，開機預(yù)熱光譜儀I小時，漫反射檢測，掃描波長范圍為4000 12000CHT1，掃描次數(shù)32次，分辨率8CHT1，每份樣品掃描6張，取其平均光譜，如圖I所示。3結(jié)果與討論3. I總皂苷定量分析模型的建立3. I. I校正集和驗證集樣品的選擇根據(jù)其總皂苷的含量測定結(jié)果，從收集到的60份樣品中，選取前50批有代表性的樣品做校正集，用于建立校正模型；剩余10批樣品為驗證集，對模型進行外部檢驗。校正集和驗證集樣品中總皂苷的含量分布范圍見表I。表I校正集和驗證集中總皂苷的含量分布范圍表(mg/瓶)組成樣品數(shù)最小值最大值平均值校正集 50 5.3 12.5 7.3
驗證集 10 5.7 6.7 6.13. I. 2光譜預(yù)處理和波段的選擇光譜預(yù)處理和波段的選擇對近紅外實驗結(jié)果有一定的影響，值得注意。一般樣品的原始近紅外光譜中會含有基線漂移、光散射以及儀器噪音等干擾信號，選擇合適的光譜預(yù)處理技術(shù)能剔除干擾信號，提取有用的特征信息，從而消除儀器不穩(wěn)、環(huán)境變化和樣品不均等因素帶來的影響，提高模型預(yù)測的精度和穩(wěn)定性M。目前的近紅外分析軟件雖然能進行全譜的數(shù)據(jù)處理，但由于所測的指標成分結(jié)構(gòu)的特殊性，其在近紅外光譜上的信息只會包含在一段特定波長范圍內(nèi)，全譜處理會帶來冗余信息，影響預(yù)測模型的精度，故在建立模型時選取合理的波段也很重要[9]。運用0PUS6. 5數(shù)據(jù)分析軟件，分析數(shù)據(jù)，以模型的決定因子(R2)和內(nèi)部驗證均方差(RMSECV)為指標，R2越接近于100，RMSECV越小說明模型越好。參考儀器自動優(yōu)化條件，不斷調(diào)節(jié)，最終發(fā)現(xiàn)以一階導(dǎo)數(shù)加多元散射校正預(yù)處理技術(shù)在4246 4848CHT1及6098 7502cm-1波段范圍內(nèi)的效果最好。3. I. 3模型的建立運用偏最小二乘法(PLS)將50份校正集樣品的NIR光譜與紫外分光光度法測得的總皂苷值進行回歸關(guān)聯(lián)，建立總皂苷校正模型，圖2為總皂苷預(yù)測值和測定值的相關(guān)圖，可以看出樣品點比較均勻的分布在回歸線兩側(cè)，采用內(nèi)部交叉驗證，得R2為90. 04，RMSECV為O. 614，最佳回歸因子數(shù)(Rank)為9。校正集RMSECV與Rank之間的相關(guān)圖如圖3表示。3.2總皂苷定量分析模型的檢驗將10份驗證集樣品的近紅外光譜輸入校正模型，預(yù)測其總皂苷的含量，并與紫外分光光度法測定值進行比較。計算得模型預(yù)測均方差(RMSEP)為O. 517，10份樣品的預(yù)測值和真實值之間RSD平均值為4. I %，。3. 3分析與討論3.3.1因凍干粉針樣品是藥液直接放在西林瓶中減壓凍干成形的，西林瓶中的內(nèi)容物在顆粒的緊實度和厚度上有良好的一致性，且樣品的含水量低，僅為約O. 4%，打開測定易吸潮，故選擇用光纖探頭直接從西林瓶底部進行掃描。同時在掃描時以空西林瓶背景，每份樣品取6張光譜的平均值，用以消除西林瓶、樣品顆粒度、厚度等不一致引入的干擾。3. 3. 2作為一種非侵入性的二級分析方法，近紅外技術(shù)分析樣品時的預(yù)測準確度主要取決于建立模型時所采用的測定方法的準確度，還與儀器，測量環(huán)境、建模樣品的多少及代表性有關(guān)。因為注射用益氣復(fù)脈現(xiàn)行測總皂苷的紫外分光光度法存在一定的誤差，且建模樣品濃度分布不均，導(dǎo)致了本研究中近紅外預(yù)測模型的決定因子欠佳，10批樣品的模型預(yù)測值和真值之間的不能完全重合。有關(guān)總皂苷測定方法的優(yōu)化，將在以后不斷積累樣品，做進一步研究。4 結(jié)論本研究表明近紅外漫反射光譜法在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段范圍、內(nèi)，原始光譜經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)和多元散射校正技術(shù)預(yù)處理，結(jié)合偏最小二乘法回歸，可實現(xiàn)對注射用益氣復(fù)脈(凍干)中人參總皂苷的快速定量分析，適合于生產(chǎn)上大量樣品的快速測定。本發(fā)明效果好，操作簡單，易于推廣。


圖160批樣品的近紅外光譜2校正集NIR預(yù)測值與真值之間的相關(guān)3校正集RMSECV與Rank之間的相關(guān)圖
具體實施例方式
以下通過實施例，進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。實施例I包括以下步驟I)對照品的制備分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，制得每Iml各含約O. Img的溶液。2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m),流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O(shè). 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次沖洗后，繼以用20 %甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m
膜，即可。3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。
權(quán)利要求
1.一種注射用益氣復(fù)脈制劑中人參總皂苷的含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟 1)對照品的制備 分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，制得溶液。
2)供試品溶液的制備 取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液。
3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 1)對照品的制備 分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，制得每Iml各含約O. Img的溶液。
2)供試品溶液的制備 取注射用益氣復(fù)脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m)，流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O(shè). 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次沖洗后，繼以用20 %甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m膜，即可。
3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，該方法精密度良好。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
5.根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，該方法重復(fù)性良好。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，該方法回收試驗良好。
7.根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，近紅外漫反射光譜在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用益氣復(fù)脈制劑中人參總皂苷的含量的測定方法，該方法包括以下步驟1)對照品的制備分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，制得溶液，2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液，3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。
文檔編號G01N21/33GK102759514SQ20111010904
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者葉正良, 周大錚, 李德坤, 韓曉萍 申請人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司