一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法及用圖
【專利摘要】本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種利用人參屬植物提取物生成珍貴稀有人參皂苷制備方法及用途。包括以下步驟：將人參屬植物切片或粉碎后采用溶劑回流提取，過濾提取液后，將提取液濃縮得到浸膏；對(duì)浸膏采用脫農(nóng)殘和脫重金屬處理；制取人參二醇組皂苷，濃縮干燥成粉末后滅菌，然后冷卻至一定溫度；將經(jīng)滅菌的人參二醇組皂苷粉末與發(fā)酵菌種混勻，用無菌液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，充分混勻后密封，置于恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵得到人參二醇組皂苷發(fā)酵產(chǎn)物。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，操作方便，大量獲得稀有并具有抗腫瘤和抗抑郁活性物質(zhì)珍貴稀有人參皂苷。
【專利說明】
一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法及用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)生物轉(zhuǎn)化領(lǐng)域，具體涉及一種利用人參屬植物發(fā)酵生成珍貴稀有人參皂苷的制備方法及抗腫瘤、提高免疫力、聯(lián)合放化療藥物增效減毒和抗抑郁方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]人參屬植物提取物中主要成分為人參皂苷，人參皂苷按照母核的不同分為三種類型:原人參二醇型、原人參三醇型和齊墩果酸型。
[0003]人參二醇組皂苷是以原人參二醇為母核的系列人參皂苷的統(tǒng)稱，是人參屬植物中抗腫瘤、提高免疫力和抗抑郁等生理活性最顯著的物質(zhì)。
[0004]現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷的抗腫瘤活性與人參皂苷分子側(cè)鏈糖基的結(jié)合位置和數(shù)量有關(guān)，并且抗腫瘤活性隨著糖基數(shù)量的減少而增加，短糖鏈的人參二醇皂苷發(fā)酵產(chǎn)物具有很強(qiáng)的抗腫瘤和抗抑郁活性。
[0005]珍貴稀有短糖鏈人參皂苷是在人參屬植物中含量極低，卻具顯著生理活性的一類皂苷，主要是:原人參二醇、人參皂苷Rg3、人參皂苷F2、人參皂苷Rh2和人參皂苷CK。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，珍貴稀有短糖鏈人參皂苷具有抑制多種癌細(xì)胞生長(zhǎng)、抗抑郁、激活氯離子通道、抑制被激活的鈉通道去極化、抑制人胚腎、HEK-293細(xì)胞伸張和幽門螺旋桿菌生長(zhǎng)等諸多活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種利用人參屬植物發(fā)酵生成珍貴稀有人參皂苷的制備方法及抗腫瘤、提高免疫力、聯(lián)合放化療藥物增效減毒和抗抑郁方面的應(yīng)用。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，操作方便，產(chǎn)品干燥容易，最重要的是在菌種發(fā)酵過程中實(shí)現(xiàn)人參二醇組皂苷的生物轉(zhuǎn)化，得到抗腫瘤和抗抑郁活性物質(zhì)珍貴稀有人參皂苷。
[0007]本發(fā)明的目的通過采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，包括以下步驟:
a.將人參屬植物切片或粉碎；
b.用有機(jī)提取溶劑回流提取，過濾，濾液減壓濃縮，得到人參屬植物浸膏；
c.對(duì)人參屬植物浸膏采用脫農(nóng)殘和脫重金屬工藝；
d.對(duì)人參屬植物浸膏進(jìn)行純化處理，制備人參二醇組皂苷，并干燥成粉末；
e.將人參二醇組皂苷粉末低溫滅菌，然后冷卻至一定溫度；
f.將經(jīng)滅菌的人參二醇組皂苷粉末與發(fā)酵菌種混勻，菌種添加量為1%-100%，用無菌液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，充分混勻后密封，置于恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵得到人參二醇組皂苷發(fā)酵產(chǎn)物。
[0008]進(jìn)一步地，所述的人參屬植物為人參，西洋參或者三七。
[0009]進(jìn)一步地，所述的有機(jī)提取溶劑是水、乙醇或者甲醇。
[0010]進(jìn)一步地，所述的脫農(nóng)殘工藝為超臨界萃取，脫重金屬工藝為螯合樹脂D751或D403o
[0011 ]進(jìn)一步地，所述的制備人參二醇組皂苷工藝為柱層析，層析材料為大孔樹脂。
[0012]進(jìn)一步地，所述的e步驟中人參屬植物提取物粉末滅菌溫度為40_100°C。
[0013]進(jìn)一步地，所述的f步驟中發(fā)酵體系的水分為30%_90%，發(fā)酵時(shí)間為4_24h，發(fā)酵溫度為 20-80 °C。
[0014]進(jìn)一步地，所述發(fā)酵過程中，發(fā)酵菌種水解多糖鏈人參屬植物提取物皂苷的C-3和C-20位的糖基，轉(zhuǎn)化為部分無糖鏈的抗腫瘤活性物質(zhì)人參二醇組皂苷發(fā)酵產(chǎn)物。
[0015]進(jìn)一步地，所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷制備方法，其特征在于所述發(fā)酵過程中人參屬植物提取物發(fā)酵菌種來自真菌、細(xì)菌或放線菌如黑根霉Rhizopus sp菌種。
[0016]進(jìn)一步地，所述人參二醇組皂苷發(fā)酵產(chǎn)物包含原人參二醇、人參皂苷Rg3、人參皂苷F2、人參皂苷Rh2和人參皂苷CK等
本發(fā)明人參皂苷的菌種發(fā)酵是將人參屬植物提取物作為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，通過微生物的生化反應(yīng)過程對(duì)人參皂苷進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，產(chǎn)生新的活性成分。該方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，產(chǎn)品干燥容易，成本低廉，具有高專一性、高效性、環(huán)境友好，適合工業(yè)放大等特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了珍貴稀有人參皂苷的制備。
[0017]【附圖說明】:
以下圖可作為附件材料上報(bào)。
[0018]圖1、珍貴稀有人參皂苷制備流程圖【具體實(shí)施方式】:
為了更清楚的理解本發(fā)明，下面通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步做詳細(xì)描述這些實(shí)施例僅用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，二不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0019]實(shí)施例1
人參屬植物人參切片，用70%乙醇回流提取，過濾，濾液減壓濃縮，得到人參浸膏，對(duì)人參浸膏采用超臨界萃取脫農(nóng)殘，即選用10%乙醇作為夾帶劑，夾帶劑與原料的比為0.5:1，超臨界萃取的萃取為30MPa、萃取60攝氏度，采用超臨界萃取設(shè)備，C02循環(huán)使用，流速設(shè)定5kg/h，平均用量為15kg。對(duì)人參浸膏采用螯合樹脂脫農(nóng)殘，500g浸膏加水稀釋至5L，攪拌，靜置12h，取上清液過D751樹脂，95%乙醇洗脫，合并洗脫液，真空旋轉(zhuǎn)濃縮至無醇味，加水至2L，經(jīng)大孔樹脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脫流份，經(jīng)濃縮后得到干燥粉末，121°C滅菌15min，冷卻至室溫，低溫滅菌，滅菌溫度為40-100°C，然后冷卻至室溫;將1g滅菌后的人參屬植物提取物粉末與2.2g菌種混勻；加入液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，發(fā)酵體系的水分為30%-90% ；充分混勻后密封，置于30 0C恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵8d得到珍貴稀有人參皂苷。
[0020]實(shí)施例2
人參屬植物三七切片，用80%乙醇回流提取，過濾，濾液減壓濃縮，得到人參浸膏，對(duì)人參浸膏采用超臨界萃取脫農(nóng)殘，即選用15%乙醇作為夾帶劑，夾帶劑與原料的比為0.8:1，超臨界萃取的萃取為30MPa、萃取60攝氏度，采用超臨界萃取設(shè)備，C02循環(huán)使用，流速設(shè)定5kg/h，平均用量為15kg。對(duì)人參浸膏采用螯合樹脂脫農(nóng)殘，500g浸膏加水稀釋至5L，攪拌，靜置12h，取上清液過D403樹脂，95%乙醇洗脫，合并洗脫液，真空旋轉(zhuǎn)濃縮至無醇味，加水至2L，經(jīng)大孔樹脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脫流份，經(jīng)濃縮后得到干燥粉末，低溫滅菌，滅菌溫度為40-1OO °C，然后冷卻至室溫;配置液體培養(yǎng)基，121°C滅菌15min，冷卻至室溫;將1g滅菌后的人參屬植物提取物粉末與2.2g菌種混勻；加入液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，發(fā)酵體系的水分為30%-90%;充分混勻后密封，置于40°C恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵1d得到珍貴稀有人參皂苷；
[0021] 實(shí)施例3
人參屬植物西洋參切片，用75%乙醇回流提取，過濾，濾液減壓濃縮，得到人參浸膏，對(duì)人參浸膏采用超臨界萃取脫農(nóng)殘，即選用10%乙醇作為夾帶劑，夾帶劑與原料的比為0.8:1，超臨界萃取的萃取為30MPa、萃取60攝氏度，采用超臨界萃取設(shè)備，C02循環(huán)使用，流速設(shè)定5kg/h，平均用量為15kg。對(duì)人參浸膏采用螯合樹脂脫農(nóng)殘，500g浸膏加水稀釋至5L，攪拌，靜置12h，取上清液過D751樹脂，95%乙醇洗脫，合并洗脫液，真空旋轉(zhuǎn)濃縮至無醇味，加水至2L，經(jīng)大孔樹脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脫流份，經(jīng)濃縮后得到干燥粉末，低溫滅菌，滅菌溫度為40-100°C，然后冷卻至室溫;配置液體培養(yǎng)基，121°C滅菌15min，冷卻至室溫將8g滅菌后的二醇組皂苷粉末與2.5g菌種混勻；加入液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，發(fā)酵體系的水分為30%-90% ；充分混勻后密封，置于50 0C恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵12d得到珍貴稀有人參皂苷。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法及用途，包括以下步驟: a、將人參屬植物切片或粉碎； b、用有機(jī)提取溶劑溶液回流提取，過濾，濾液減壓濃縮，得到人參屬植物浸膏； C、對(duì)人參屬植物浸膏采用脫農(nóng)殘和脫重金屬工藝； d、對(duì)人參屬植物浸膏進(jìn)行純化處理，制備人參二醇組皂苷，并干燥成粉末； e、將人參二醇組皂苷粉末低溫滅菌，然后冷卻至一定溫度； f、將經(jīng)滅菌的人參二醇組皂苷粉末與發(fā)酵菌種混勻，菌種添加量為1%_100%，用無菌液體培養(yǎng)基和蒸餾水調(diào)節(jié)水分，充分混勻后密封，置于恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵得到人參二醇組皂苷發(fā)酵產(chǎn)物精制珍貴稀有人參皂苷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的人參屬植物為人參，西洋參或者三七的一種或幾種的混合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)提取溶劑是水、乙醇或甲醇。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的脫農(nóng)殘工藝為超臨界萃取，脫重金屬工藝為螯合樹脂D751或D403。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的制備人參二醇組皂苷純化工藝為柱層析，層析用材料為大孔樹脂。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的e步驟中人參屬植物提取物粉末滅菌溫度為40-100°C。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述的f步驟中發(fā)酵體系的水分為30%-90%，發(fā)酵時(shí)間為4-24h，發(fā)酵溫度為20-80 °C。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述發(fā)酵過程中，發(fā)酵菌種水解多糖鏈人參屬植物提取物皂苷的C-3和C-20位的糖，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物以無糖鏈皂苷原人參二醇為主，以短糖鏈皂苷人參皂苷Rg3、人參皂苷F2、人參皂苷Rh2、人參皂苷CK為輔的一類混合物。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述發(fā)酵過程中人參屬植物提取物發(fā)酵菌種來自真菌、細(xì)菌或放線菌如黑根霉Rhizopus sp菌種。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述精制珍貴稀有人參皂苷主要為原人參二醇、人參皂苷Rg3、人參皂苷F2、人參皂苷Rh2、人參皂苷CK等。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述用途主要是抗腫瘤、提高免疫力、聯(lián)合放療或化療藥物可增效減毒和抗抑郁。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精制珍貴稀有人參皂苷的制備方法，其特征在于所述用途，主要用于食品添加劑、保健品及藥品。
【文檔編號(hào)】C12P33/20GK106086146SQ201610501690
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】趙興增, 王相云, 單宇, 李龍柱, 馮煦
【申請(qǐng)人】江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所