專利名稱：作為5－h(huán)t的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及適用作5-HT4受體激動劑的吲唑-甲酰胺化合物。本發(fā)明還涉及包含這類化合物的藥物組合物、使用這類化合物治療由5-HT4受體活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病癥的方法，以及適用于制備這類化合物的方法和中間體。
本領(lǐng)域的狀態(tài)5-羥色胺(5-羥色胺，5-HT)為廣泛分布在整個體內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，既分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，又分布在周圍系統(tǒng)中。已經(jīng)鑒定了至少7種5-羥色胺受體的亞型并且5-羥色胺與這些不同受體的相互作用與廣泛的生理功能相關(guān)。因此，在開發(fā)靶向特異性5-HT受體亞型的治療劑方面存在實際性的興趣。
特別地，表征5-HT4受體并且鑒定與其發(fā)生相互作用的藥物物質(zhì)已經(jīng)成為近來重要活動的焦點(例如，參見Langlois和Fischmeister的綜述，J.Med.Chem.2003，46，319-344.)。5-HT4受體激動劑適用于治療胃腸道運動性下降的障礙。這類障礙包括過敏性腸綜合征(IBS)、慢性便秘、機能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流疾病(GERD)、胃輕癱、術(shù)后腸梗阻、腸假性梗塞和藥物造成的延遲運輸。此外，已經(jīng)提示某些5-HT4受體激動劑化合物可以用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、情緒障礙和自主功能控制的障礙。
盡管調(diào)節(jié)5-HT4受體活性的藥物物質(zhì)的廣泛應(yīng)用，但是目前幾乎沒有5-HT4受體激動劑化合物處于臨床應(yīng)用中。廣泛用于治療胃腸道運動性障礙的一種藥劑西沙必利已經(jīng)退出了市場，據(jù)報導(dǎo)是因心臟副作用所致。對另一種藥劑普盧卡必利的后期臨床試驗已經(jīng)暫時停止。
因此，對實現(xiàn)其所期望的作用，而副作用最低的新5-HT4受體激動劑存在需求。優(yōu)選的藥劑除了其它的特性以外，可能具有改善的選擇性、效價、藥物動力學(xué)特性和/或作用的持續(xù)時間等特性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有5-HT4受體激動劑活性的新化合物。還發(fā)現(xiàn)除了其它的性質(zhì)以外，本發(fā)明的化合物為有效和選擇性的5-HT4受體激動劑。此外，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出有利的藥物動力學(xué)特性，預(yù)見它在口服給藥時具有良好的生物利用度。
因此，本發(fā)明提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1為氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R2為C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基；且W選自(i)式(II)的基團 其中X為NC(O)Ra，其中Ra為C1-3烷基或四氫呋喃基，其中C1-3烷基任選被-OH或C1-3烷氧基取代；S(O)2；或
NS(O)2Rb，其中Rb為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的甲基；(ii)式(III)的基團 其中Ry為-OH或C1-3烷氧基；p為0或1；n為1或2；且Y為N(Rc)C(O)Rd，其中Rc為氫或C1-3烷基和Rd為任選被-OH或C1-3烷氧基取代的C1-3烷基；或N(Re)S(O)2Rf，其中Re為氫且Rf為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的C1-3烷基；和(iii)式(IV)的基團 其中Rz為氫、C1-3烷基或被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基；m為1或2；q為1或2，條件是m與q之和不等于4；且Z為NC(O)Rg，其中Rg為任選被-OH或C1-3烷氧基取代的C1-3烷基；S(O)2；或NS(O)2Rh，其中Rh為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的甲基。
本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了治療哺乳動物中與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥，例如胃腸道運動性下降的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了治療哺乳動物中與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明的化合物還可以用作研究工具，即用于研究生物系統(tǒng)或樣品，或用于研究其它化學(xué)化合物的活性。因此，在本發(fā)明方法的另一個方面中提供了使用式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體作為研究生物系統(tǒng)或樣品或發(fā)現(xiàn)新5-HT4受體激動劑的研究工具的方法，該方法包括使生物系統(tǒng)或樣品接觸本發(fā)明的化合物并且測定由該化合物產(chǎn)生的對生物系統(tǒng)或樣品的作用。
在單獨和不同的方面，本發(fā)明還提供了本文所述適用于制備本發(fā)明化合物的合成方法和中間體。
本發(fā)明還提供了用于醫(yī)學(xué)療法中的如本文所述的本發(fā)明化合物以及本發(fā)明化合物在制備用于治療哺乳動物中與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥，例如胃腸道運動性下降的障礙的制劑或藥劑中的應(yīng)用。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了式(I)的新吲唑-甲酰胺5-HT4受體激動劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。下列取代基和值用以提供本發(fā)明不同方面的有代表性的實例。這些有代表性的值用以進一步定義這類方面并且不排除其它值或不用來限定本發(fā)明的范圍。
在本發(fā)明的一個具體的方面中，R1為氫、鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
在其它具體的方面中，R1為氫、鹵素或C1-4烷基；或R1為氫或鹵素；或R1為氟。
在另一個具體的方面中，R1為氫。
在一個具體的方面中，R2為C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
在另一個具體的方面中，R2為C3-4烷基。有代表性的R2基團包括正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基和叔-丁基。
在另一個具體的方面中，R2為異丙基。
在另一個具體的方面中，R2為環(huán)丁基或環(huán)戊基。
在一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中所有的變量均如式(II)中所定義。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中Ra為C1-3烷基且Rb為甲基。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NC(O)Ra，其中Ra如式(II)中所定義。在其它具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NC(O)Ra，其中Ra為C1-3烷基，具體地說，為甲基、乙基、正-丙基或異丙基或四氫呋喃-2-基或四氫呋喃-3-基；或Ra為C1-3烷基。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NC(O)CH3，它形成具有4-乙酰基-哌嗪-1-基值的W。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為S(O)2。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NS(O)2Rb，其中Rb如式(II)中所定義。在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NS(O)2Rb，其中Rb為任選被C5-6環(huán)烷基取代或被-S(O)2-C1-3烷基取代的CH3。在該方面中有代表性的Rb值包括甲基、-CH2環(huán)戊基、-CH2環(huán)己基、-CH2SO2CH3和-CH2SO2C2H5。
在另一個具體的方面中，W為式(II)的基團，其中X為NS(O)2CH3，它形成具有4-甲磺?；?哌嗪-1-基值的W。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Ry為-OH。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Ry為C1-3烷氧基，例如Ry為-OCH3、-OC2H5或-OC3H7。
在其它具體的方面中，W為式(III)的基團，其中p為0或其中p為1。
在其它具體的方面中，W為式(III)的基團，其中n為1，即W為任選取代的吡咯烷基環(huán)；或其中n為2，即W為任選取代的哌啶基環(huán)。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為N(Rc)C(O)Rd，其中Rc和Rd如式(III)中所定義。在其它具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為N(Rc)C(O)Rd，其中Rc為氫；且其中Rc為C1-3烷基。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為N(Rc)C(O)Rd，其中Rd為任選被-OH或C1-3烷氧基取代的C1-3烷基。在這一方面中Rd的有代表性的值包括甲基、乙基、-CH2OH、和-CH(OH)CH3。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為NCH3C(O)CH3。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為NHC(O)CH3。
在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為N(Re)S(O)2Rf，其中Re和Rf如式(III)中所定義。在另一個具體的方面中，W為式(III)的基團，其中Y為N(Re)S(O)2Rf，其中Rf為任選被C5-6環(huán)烷基或被-S(O)2-C1-3烷基取代的C1-3烷基。在該方面中Rf的有代表性的值包括甲基、-CH2環(huán)戊基、-CH2環(huán)己基、-CH2SO2CH3和-CH2SO2C2H5。
在另一個具體的方面中，式(I)的化合物為其中W為式(III)的基團的化合物，式(III)中p為0且n為1。在另一個具體的方面中，式(I)的化合物為其中W為式(III)的基團的化合物，式(III)中p為0，n為1，并且Y為N(Rc)C(O)Rd。
在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Rz為氫。
在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Rz為C1-3烷基，例如甲基、乙基等。在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Rz為被-OH或被C1-3烷氧基取代的C2-3烷基，例如Rz為羥乙基、甲氧基乙基等。在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Rz為甲基。
在一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中m為1。
在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中m為2。
在一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中q為1。
在另一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中q為2。
在一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為NC(O)Rg，其中Rg如式(Iv)中所定義。在其它具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為NC(O)Rg其中，Rg為任選被-OH取代的C1-3烷基；或Rg為甲基。
在一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為S(O)2。
在一個具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為NS(O)2Rh，其中Rh如式(IV)中所定義。在其它具體的方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為NS(O)2Rh，其中Rh為任選被C5-6環(huán)烷基或被-S(O)2-C1-3烷基取代的甲基。Rh的有代表性的值包括甲基、-CH2環(huán)戊基、-CH2環(huán)己基、-CH2SO2CH3和-CH2SO2C2H5。在另一個其它的具體方面中，W為式(IV)的基團，其中Z為NS(O)2CH3。
在另一個具體的方面中，式(I)的化合物為其中W為式(IV)的基團的化合物，式(IV)中m為1和q為1在另一個具體的方面中，式(I)的化合物為其中W為式(IV)的基團的化合物，式(IV)中m為1，q為1，并且Rz為甲基。
在一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R1為氫或鹵素；R2為異丙基或C4-5環(huán)烷基；且W如式(I)中所定義。
在另一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R1為氫或鹵素；R2為C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；且W選自(i)式(II)的基團，其中X為NC(O)CH3，S(O)2，或NS(O)2CH3；(ii)式(III)的基團，其中p為0，n為1并且Y為NCH3C(O)CH3；且
(iii)式(IV)的基團，其中Rz為甲基，m為1，q為1，并且Z為NC(O)CH3、S(O)2或NS(O)2CH3。
在另一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R1為氫或鹵素；R2為C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；且W為式(II)的基團，其中X為NC(O)CH3、S(O)2或NS(O)2CH3。
在另一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其為式(V)的化合物 其中R1、R2和X具有上述一般、具體或典型值的任意值。
在另一個方面，本發(fā)明提供了式(VI)的一組化合物 其中R1、R2和W具有表I中所示的值。
表I


就實施例1的化合物，說明本文所用的化學(xué)命名原則 根據(jù)MDL Information Systems，GmbH(Frankfurt，Germany)提供的AutoNom軟件將其命名為1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙?；?哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。符號(1S，3R，5R)描述了以實線和虛楔形線所示的雙環(huán)環(huán)系連接的鍵的相對方向。該化合物或者還可以稱作N-[(3-橋)-8-[2-(4-乙酰基-哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺。在上述表I中所示的所有化合物中，所述的吲唑甲酰胺與氮雜雙環(huán)辛基橋連。
特別提及如下化合物1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(1，1-二氧代-1λ6-硫代嗎啉-4-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)-乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[(1-乙?；?吡咯烷-3-基)-甲氨基]乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[((R)-1-乙?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[((S)-1-乙?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3-2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氟雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；和
1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。
如上所述，本發(fā)明的化合物可以含有手性中心。因此，除非另有說明，本發(fā)明包括外消旋混合物、純立體異構(gòu)體和這類異構(gòu)體的富含立體異構(gòu)體的混合物。當(dāng)顯示具體的立體異構(gòu)體時，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解除非另有說明，本發(fā)明組合物中可以存在少量的其它立體異構(gòu)體，只要該組合物作為整體的用途不會被這類其它異構(gòu)體的存在而消除。
定義當(dāng)描述本發(fā)明的化合物、組合物和方法時，除非另有說明，下列術(shù)語具有如下的含義。
術(shù)語“烷基”指的是可以為直鏈或支鏈或其組合的一價飽和烴基。除非另有定義，這類烷基一般含有1-10個碳原子。作為實例，有代表性的烷基包括甲基、乙基、正-丙基(n-Pr)、異丙基(i-Pr)、正-丁基(n-Bu)、仲-丁基、異丁基、叔-丁基、正-戊基、正-己基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。
術(shù)語″烷氧基″指的是一價基團-O-烷基，其中烷基如上所述。作為實例，有代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
術(shù)語“環(huán)烷基”指的是可以為單環(huán)或多環(huán)的一價飽和碳環(huán)基。除非另有說明，這類環(huán)烷基一般含義3-10個碳原子。作為實例，有代表性的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。
術(shù)語“鹵素”指的是氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“治療有效量”指的是在對需要治療的患者給藥時足以實現(xiàn)治療的用量。
本文所用的術(shù)語“治療”指的是治療患者，諸如哺乳動物(特別是人)的疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥，包括(a)預(yù)防疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥發(fā)生，即預(yù)防性治療患者；
(b)改善疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥，即消除患者中的疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥或使其退化；(c)抑制疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥，即減緩或阻止患者中的疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥發(fā)展；或(d)減輕患者中的疾病、障礙或醫(yī)學(xué)病癥的癥狀。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是由對患者，諸如哺乳動物給藥可接受的酸或堿制備的鹽。這類鹽可以來源于藥學(xué)上可接受的無機酸或有機酸并且來源于藥學(xué)上可接受的堿。一般來說，本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽由酸制備。
來源于藥學(xué)上可接受的酸的鹽包括，但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、粘酸鹽、硝酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、昔萘酸(1-羥基-2-萘酸)鹽、萘-1，5-二磺酸鹽等。
術(shù)語“溶劑合物”指的是由一個或多個溶質(zhì)分子，即本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一個或多個溶劑分子形成的復(fù)合物或聚集物。這類溶劑合物一般為具有基本上固定摩爾比的溶質(zhì)與溶劑的結(jié)晶固體。有代表性的溶劑作為實例包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等。當(dāng)溶劑為水時，形成的溶劑合物為水合物。
可以理解術(shù)語“或其立體異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物”用以包括所有鹽、溶劑合物和立體異構(gòu)體的排列形式，諸如式(I)化合物的立體異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑合物。
術(shù)語“氨基保護基”指的是適合于防止氨基氮上發(fā)生不需要的反應(yīng)的保護基。有代表性的氨基保護基包括，但不限于甲?；?；乙酰基，例如烷?；?，諸如乙?；煌檠豸驶?，諸如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，諸如芐氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，諸如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)和1，1-二-(4’-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，諸如三甲代甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)等。
一般合成的操作步驟由輕易可獲得的原料，使用下列一般方法和操作步驟制備本發(fā)明的化合物。盡管下文的方案中解釋了本發(fā)明的具體方面，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，可以使用本文所述的方法或通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它方法、試劑和原料，制備本發(fā)明的所有方面。還將理解除非另有說明，當(dāng)給出典型或優(yōu)選的工藝條件(即反應(yīng)溫度、時間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時，也可以使用其它工藝條件。最佳反應(yīng)條件隨所用特定反應(yīng)物或溶劑的不同而改變，但這類條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)的優(yōu)化操作步驟確定。
另外，正如對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，為保護某些官能團以便它們不會發(fā)生不需要的反應(yīng)，常規(guī)的保護基可能是必需的。對特定官能團的合適的保護基的選擇以及合適的保護和脫保護條件為本領(lǐng)域眾所周知。例如，大量保護基及其引入和除去描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic synthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引述的參考文獻中。
在一種合成方法中，如方案A中所述制備式(I)的化合物。(除非另有說明，如下方案中所示的取代基和變量具有上述提供的定義)
方案A 其中P1表示氨基保護基，諸如叔丁氧羰基(Boc)或芐氧羰基(Cbz)。
正如方案A中所示，首先使被保護的氨基氮雜雙環(huán)辛烷或通常為氨基托烷1與取代的1H-吲唑甲酸2反應(yīng)。一般來說，通過首先將2轉(zhuǎn)化成?；冗M行該反應(yīng)，該轉(zhuǎn)化通過使2接觸至少1個當(dāng)量的，典型的約為1-約2個當(dāng)量的活化劑，諸如亞硫酰氯或草酰氯在芳族稀釋劑，諸如甲苯、苯、二甲苯等中進行。該反應(yīng)一般在約80℃-約120℃的溫度下進行約15分鐘-約2小時或直到反應(yīng)基本上完成。
一般將?；热芤杭尤氲郊s1當(dāng)量的氨基托烷1的兩相混合物中而形成被保護的中間體，通過標(biāo)準(zhǔn)操作步驟提取該中間體。一般通過將1溶于芳族稀釋劑，諸如上述使用的稀釋劑并且加入含有過量堿，諸如氫氧化鈉或氫氧化鉀，例如約2-5當(dāng)量的堿的水溶液，來制備1的兩相混合物。
或者，可以通過將2轉(zhuǎn)化成活化的酯，諸如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯或?qū)?硝基苯基酯或酸咪唑，然后使其與氨基托烷1反應(yīng)，進行中間體1與羧酸2的酰胺偶聯(lián)。在另一個備選的方案中，使羧酸2與中間體1在有偶聯(lián)試劑，諸如1，3二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)或苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷-磷鎓六氟磷酸鹽(PyBop)反應(yīng)，所述的偶聯(lián)試劑中可選地合并有1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)。
通過標(biāo)準(zhǔn)操作步驟除去保護基P1而得到式3的中間體。例如，一般通過用酸，諸如三氟乙酸處理，除去保護基Boc。例如，便利的是通過使用合適的金屬催化劑，諸如碳上鈀進行氫解除去保護基Cbz。
然后通過與二甲氧基乙醛反應(yīng)，使中間體3進行還原N-烷基化而得到式4的中間體。一般通過使3在約1-約2當(dāng)量的還原劑存在下，在惰性稀釋劑中接觸約1-約4當(dāng)量的二甲氧基乙醛，來進行該反應(yīng)。該反應(yīng)一般在環(huán)境溫度下進行約1-約2小時或直到反應(yīng)基本上完成。合適的惰性稀釋劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、1，1，2，2-四氯乙烷等。典型的還原劑包括三乙酰氧基硼氫化鈉、硼氫化鈉和氰基硼氫化鈉。通過標(biāo)準(zhǔn)操作步驟分離產(chǎn)物4。
接下來，在強酸水溶液，例如3N或6N HCl中水解二甲氧基乙基中間體4而得到二羥乙基中間體5。將要理解，盡管方案A中顯示了醛水合物形式的中間體5，但是同樣可以將中間體5描述為醛的形式。該反應(yīng)一般在約50℃-約100℃的溫度下進行約15分鐘-約2小時或直到反應(yīng)基本上完成?？梢詫a(chǎn)物5分離為鹽的形式，例如HCl鹽或在堿提取后分離為中性物?；蛘撸梢圆唤?jīng)進一步操作將中間體5的粗品用于最終的步驟。
最后，使中間體5與式H-W的伯或仲胺進行還原偶聯(lián)而得到式(I)的產(chǎn)物。一般來說，在惰性稀釋劑，諸如二氯甲烷中制備約1-約3當(dāng)量，例如約2當(dāng)量的胺和還原劑，諸如三乙酰氧基硼氫化鈉等溶液。將中間體5加入到胺混合物中。該反應(yīng)一般在環(huán)境溫度下進行約15分鐘-約2小時或直到反應(yīng)基本上完成。通過常規(guī)操作步驟提取式(I)的粗產(chǎn)物?？梢酝ㄟ^從惰性稀釋劑，例如乙醇、異丙醇、甲醇、乙腈、二氯乙烷或其混合物中結(jié)晶，來純化鹽形式的產(chǎn)物。
或者，可以通過使按照方案A制備的其中R2為氫的式(I)的化合物N-烷基化，來制備式(I)的化合物。N-烷基化反應(yīng)一般通過使其中R2為氫的式(I)的化合物接觸約1-約4當(dāng)量的式L-R2的化合物來進行，其中L為離去基，諸如碘或溴。該反應(yīng)一般在有約2-約4當(dāng)量的強堿，諸如叔丁醇鉀存在下在極性質(zhì)子惰性溶劑，諸如二甲基甲酰胺中進行。一般來說，該反應(yīng)在約60-約100℃下的溫度下進行約6-約24小時或直到反應(yīng)基本上完成。
由可輕易獲得的原料制備本申請中所述反應(yīng)中使用的保護的氨基托烷1。例如，當(dāng)保護基P1為Boc時，通過方案B中解釋的操作步驟制備被保護的橋連氨基托烷1′。
方案B 正如下文的實施例1a中詳細描述的，為了制備被保護的中間體1′，首先使2，5-二甲氧基四氫呋喃6與約1-2當(dāng)量，優(yōu)選約1.5當(dāng)量的芐胺和稍過量的，例如約1.1當(dāng)量的1，3-丙酮二羧酸7在有緩沖劑，諸如磷酸氫鈉存在下在酸性水溶液中接觸。將該反應(yīng)混合物加熱至約60-約100℃以確保產(chǎn)物8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-酮8，通常為N-芐基托烷酮(tropanone)中的任何羧化中間體脫羧。
一般在氫氣環(huán)境中和有過渡金屬催化劑存在下，使中間體8與稍過量的二碳酸二叔丁酯(通常為(Boc)2O)，例如，約1.1當(dāng)量反應(yīng)而得到Boc保護的中間體9，3-氧代-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯。該反應(yīng)一般在環(huán)境溫度下進行約12-約72小時。最終，使中間體9與顯著過量的，例如至少約25當(dāng)量的甲酸銨在有過渡金屬催化劑存在下在惰性稀釋劑，諸如甲醇中接觸而得到具有高度立體專一性的內(nèi)向構(gòu)型的產(chǎn)物1′，例如內(nèi)向與外向之比＞99。該反應(yīng)一般在環(huán)境溫度下進行約12-約72小時或直到反應(yīng)基本上完成。有利的是分部分加入甲酸銨試劑。例如，使中間體9接觸約15-約25當(dāng)量的起始部分的甲酸銨。在間隔約12-約36小時后，再加入約5-約10當(dāng)量的另外部分的甲酸銨?？梢栽陬愃频拈g隔后重復(fù)隨后的添加?？梢酝ㄟ^常規(guī)操作步驟，例如堿提取，來純化產(chǎn)物1′。
通過本領(lǐng)域中公知的，以及例如Harada等Chem.and Pharm Bull.1995，43，1912-30的文獻和下文實施例中所述操作步驟，可輕易制備1H-吲唑甲酸2。
胺類H-W為商購的或可通過標(biāo)準(zhǔn)操作步驟由常用原料輕易制備。
下文實施例中描述了有關(guān)制備本發(fā)明有代表性的化合物或其中間體的具體反應(yīng)條件和其它操作步驟的進一步的詳細內(nèi)容。
因此，在方法方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物或其鹽或立體異構(gòu)體或被保護的衍生物的方法，該方法包括使式5的化合物與式H-W的胺反應(yīng)而得到式(I)的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體或被保護的衍生物。
本發(fā)明進一步提供了式5的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體或被保護的衍生物，其中R1和R2如式(I)中所定義。
在備選的合成方法中，如方案C中所述，通過使取代的1H-吲唑甲酸2與式10的中間體偶聯(lián)制備式(I)的化合物。
方案C 方案C的反應(yīng)一般在如上對使羧酸2與中間體1反應(yīng)所述的酰胺偶聯(lián)條件下進行。
可以通過使式11的中間體脫保護制備式10的中間體 其中P1表示氨基保護基。
可以使用與烷基化、還原氨基化和上述其它反應(yīng)類似的操作步驟和/或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的備選反應(yīng)由易于獲得的原料制備式11的中間體。制備中間體11的典型方法途經(jīng)(i)-(v)如方案D中所述方案D 其中L表示離去基，諸如溴或碘。
在另一種備選的合成方法中，通過使方案A中所述的式3的中間體與式12的中間體偶聯(lián)制備式(I)的化合物?？梢岳斫獗M管方案D中顯示了醛形式的中間體12，但是同樣可以以醛水合物的形式描述中間體12。
藥物組合物一般以藥物組合物的形式對患者給予本發(fā)明的吲唑-甲酰胺化合物。可以通過任意可接受的給藥途徑給予這類藥物組合物，它包含，但不限于口服、直腸、陰道、鼻、吸入、局部(包括透皮)和胃腸外給藥方式。
因此，本發(fā)明在其組合物方面之一中涉及包含藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑和治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。如果需要，這類藥物組合物可以可選地含有其它治療劑和/或配制試劑。
本發(fā)明的藥物組合物一般含有治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。一般來說，這類藥物組合物含有約0.1-約95％重量的活性劑，包括約1-約70％重量，諸如約5-約60％重量的活性劑。
任意常用的載體或賦形劑可以用于本發(fā)明的藥物組合物中。對特定載體或賦形劑或載體或賦形劑的組合的選擇取決于所用的治療特定患者的給藥方式或醫(yī)學(xué)病癥的類型或疾病狀態(tài)。在這方面，用于特定給藥方式的合適的藥物組合物的制備充分屬于制藥領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍。另外，這類組合物中的組分購自例如Sigma，P.O.Box14508，St.Louis，MO 63178。作為進一步的解釋，常用的制劑技術(shù)描述在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，20thEdition，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，7thEdition，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)中。
可以用作藥學(xué)上可接受的載體的物質(zhì)的有代表性的實例包括，但不限于如下(1)糖類，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素，諸如微晶纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)西黃蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二元醇，諸如丙二醇；(11)多元醇類，諸如甘油、山梨醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯類，諸如乙酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它用于藥物組合物中的無毒性相容性物質(zhì)。
一般通過充分和緊密混合或摻合本發(fā)明的化合物與藥學(xué)上可接受的載體和一種或多種任選組分，制備本發(fā)明的藥物組合物。如果必要或需要，隨后使用常規(guī)操作步驟和設(shè)備將所得均勻摻合的混合物成形或裝載成片劑、膠囊、丸劑等。
優(yōu)選將本發(fā)明的藥物組合物包裝成單位劑型。術(shù)語″單位劑型″指的是適合于對患者給藥的物理分散單位，即含有單獨或與一種或多種其它單位組合產(chǎn)生所需治療作用計算的預(yù)定量活性劑的各單位。例如，這類單位劑型可以為膠囊、片劑、丸劑等。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適合于口服給藥。用于口服給藥的合適的藥物組合物可以為膠囊、片劑、丸劑、錠劑、扁囊劑、糖錠劑、粉劑、顆?；蛟谒曰蚍撬砸后w中的溶液或懸浮液或作為水包油或油包水型液體乳劑或作為酏劑或糖漿劑等形式；它們各自含有預(yù)定量的本發(fā)明化合物作為活性組分。
當(dāng)用于以固體劑型(即作為膠囊、片劑、丸劑等)給藥時，本發(fā)明的藥物組合物一般包含本發(fā)明的化合物作為活性組分和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。任選或備選地，這類固體劑型還可以包含(1)填料或填充劑，諸如淀粉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合劑，諸如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)濕潤劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和/或碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，諸如石蠟；(6)吸收促進劑，諸如季銨化合物；(7)濕潤劑，諸如鯨蠟醇和/或單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，諸如高嶺土和/或膨潤粘土；(9)潤滑劑，諸如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇類、十二烷基硫酸鈉和/或其混合物；(10)著色劑；和(11)緩沖劑。
在本發(fā)明的藥物組合物中還可以存在釋放劑、濕潤劑、包衣劑、增甜劑、矯味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實例包括包括(1)水溶性的抗氧化劑，諸如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基茴香醚(BHA)，丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、棓酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。片劑、膠囊等的包衣劑包括那些用于腸溶衣的物質(zhì)，諸如乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、聚乙烯乙酸鄰苯二甲酸酯(PVAP)、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸偏苯三酸纖維素(CAT)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素(HPMCAS)等。
如果需要，作為實例，還可以使用不同比例的羥丙基甲基纖維素；或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球，配制本發(fā)明的藥物組合物以提供活性組分的緩釋或控釋。
此外，本發(fā)明的藥物組合物任以可選地含有遮光劑并且可以配制使得它們僅釋放活性組分或優(yōu)選在胃腸道的某些位置中任選地以延緩方式釋放活性組分?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟。如果合適，活性組分還可以為含有上述賦形劑中的一種或多種的微包囊形式。
舉例來說，口服給藥用的合適的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。這類液體劑型一般包含活性組分和惰性稀釋劑，諸如例如，水或其它溶劑。增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(尤其是棉子油、花生油、玉米油、胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃基醇、聚乙二醇類和失水山梨糖醇的脂肪酸酯類及其混合物。懸浮液除活性組分外還可以含有懸浮劑，諸如，例如乙氧基化異硬脂醇類、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯類、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠及其混合物。
或者，將本發(fā)明的藥物組合物配制成可吸入給藥。用于吸入給藥的合適的藥物組合物一般為氣溶膠或粉末形式。一般使用眾所周知的遞送裝置，諸如定量吸入器、噴霧器、干粉吸入裝置或類似的遞送裝置給予這類組合物。
當(dāng)使用加壓容器通過吸入給藥時，本發(fā)明的藥物組合物一般包含活性組分和合適的推進劑，諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。
另外，藥物組合物可以為包括本發(fā)明化合物和適用于干粉吸入裝置的粉末的膠囊或藥筒(例如由明膠制備)形式。作為實例，合適的粉末基質(zhì)包括乳糖或淀粉。
還可以使用公知透皮遞藥系統(tǒng)和賦形劑經(jīng)皮給予本發(fā)明的化合物。例如，可以將本發(fā)明的化合物與滲透促進劑混合，諸如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)烷-2-酮類等，并且將它們摻入貼劑或類似的遞藥系統(tǒng)。如果需要，可以將額外的賦形劑，包括膠凝劑、乳化劑和緩沖劑等用于這類透皮組合物中。
下列制劑舉例說明了本發(fā)明有代表性的藥物組合物制劑實施例A如下制備口服給藥用硬明膠膠囊組分 量本發(fā)明的化合物 50mg乳糖(噴霧干燥的) 200mg
硬脂酸鎂10mg有代表性的操作步驟充分摻合組分且然后裝入硬明膠膠囊(260mg組合物/膠囊)。
制劑實施例B如下制備口服給藥用硬明膠膠囊組分量本發(fā)明的合物20mg淀粉89mg微晶纖維素 89mg硬脂酸鎂2mg有代表性的操作步驟充分摻合組分且然后過45目美國篩并且裝入硬明膠膠囊(200mg組合物/膠囊)。
制劑實施例C如下制備口服給藥用膠囊組分 量本發(fā)明的化合物 10mg聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯 50mg淀粉粉末 250mg有代表性的操作步驟充分摻合組分且然后裝入明膠膠囊(310mg組合物/膠囊)。
制劑實施例D如下制備口服給藥用片劑組分量本發(fā)明的化合物 5mg淀粉50mg微晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(在水中10wt.％) 4mg羧甲基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石粉 1mg有代表性的操作步驟使活性組分、淀粉和纖維素通過45目美國篩并且充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮的溶液與所得粉末混合且然后將該混合物過14目美國篩。將如此產(chǎn)生的顆粒在50-60℃下干燥并且使其通過18目美國篩。然后向顆粒中加入羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉(預(yù)先通過60目美國篩)?；旌虾螅瑢⒃摶旌衔镌趬浩瑱C上壓制成重100mg的片劑。
制劑實施例E如下制備口服給藥用片劑組分量本發(fā)明的化合物 25mg微晶纖維素 400mg熱解法二氧化硅 10mg
硬脂酸5mg有代表性的操作步驟將組分充分摻合且然后壓制成片劑(440mg組合物/片)。
制劑實施例F如下制備口服給藥用單刻痕片組分 量本發(fā)明的化合物 15mg玉米淀粉 50mg交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 25mg乳糖 120mg硬脂酸鎂 5mg有代表性的操作步驟將組分充分摻合且然后壓制成單刻痕片(215mg組合物/片)。
制劑實施例G如下制備口服給藥用懸浮液組分量本發(fā)明的化合物 0.1g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g對羥基苯甲酸甲酯0.15g
對羥基苯甲酸丙酯0.05g砂糖25.5g山梨醇(70％溶液)12.85gVeegum k(Vanderbilt Co.)1.0g矯味劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水適量至100mL有代表性的操作步驟將組分混合成每10mL懸浮液含有10mg活性組分的懸浮液。
制劑實施例H如下制備吸入給藥用干粉組分 量本發(fā)明的化合物1.0mg乳糖 25mg有代表性的操作步驟使活性組分微粉化且然后與乳糖摻合。然后將這種摻合的混合物裝入明膠吸入藥筒。使用干粉吸入裝置給予藥筒的內(nèi)含物。
制劑實施例I如下制備使用定量吸入器進行吸入給藥的干粉有代表性的操作步驟通過將10g平均大小小于10μm的微粉化顆粒形式的活性化合物分散于由0.2g卵磷脂溶于200mL軟化水形成的溶液中，制備含有5wt.％本發(fā)明的化合物和0.1wt.％卵磷脂的懸浮液。將該懸浮液噴霧干燥并且將所得物質(zhì)微粉化成具有小于1.5μm平均直徑的顆粒。將該顆粒裝入具有加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的藥筒中。
制劑實施例J如下制備可注射的制劑組分量本發(fā)明的化合物 0.2g乙酸鈉緩沖液(0.4M) 40mLHCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 適量至pH 4水(蒸餾，無菌) 適量至20mL有代表性的操作步驟摻合上述組分并且使用0.5N HCl或0.5N NaOH將pH調(diào)節(jié)至4±0.5。
制劑實施例K如下制備口服給藥用膠囊組分 量本發(fā)明的化合物4.05mg微晶纖維素(Avicel PH 103) 259.2mg硬脂酸鎂 0.75mg有代表性的操作步驟充分摻合組分且然后裝入明膠膠囊(大小#1，白色，不透明)(264mg組合物/膠囊)。
制劑實施例L如下制備口服給藥用膠囊組分量本發(fā)明的化合物 8.2mg微晶纖維素(Avicel PH 103) 139.05mg硬脂酸鎂0.75mg有代表性的操作步驟充分摻合組分且然后裝入明膠膠囊(大小#1，白色，不透明)(148mg組合物/膠囊)。
可以理解，適合于特定給藥方式的本發(fā)明化合物的任意形式(即游離堿、藥物鹽或溶劑合物)可以用于上述藥物組合物中。
效用本發(fā)明的吲唑-甲酰胺化合物為5-HT4受體激動劑并且由此預(yù)計它們適用于治療由5-HT4受體介導(dǎo)或與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥，即通過用5-HT4受體激動劑治療而得到改善的醫(yī)學(xué)病癥。這類醫(yī)學(xué)病癥包括，但不限于過敏性腸綜合征(IBS)、慢性便秘、機能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流疾病(GERD)、胃輕癱、糖尿病性和特發(fā)性胃病、術(shù)后腸梗阻、腸假性梗塞和藥物造成的延緩運輸。此外，已經(jīng)提示某些5-HT4受體激動劑化合物可以用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，包括認(rèn)知障礙、情緒障礙和自主功能的控制障礙。
特別地，本發(fā)明的化合物增加胃腸(GI)道的運動性并且由此預(yù)期它們適用于治療因哺乳動物，包括人運動性下降導(dǎo)致的GI道障礙。舉例來說，這類GI運動性障礙包括慢性便秘、便秘為主的過敏性腸綜合征(C-IBS)、糖尿病性和特發(fā)性胃輕癱和機能性消化不良。
因此，在一個方面本發(fā)明提供了增加哺乳動物中胃腸道運動性的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的包含藥學(xué)上可接受的載體和本發(fā)明化合物的藥物組合物。
當(dāng)用于治療GI道運動性下降的障礙或5-HT4受體介導(dǎo)的其它病癥時，一般通過口服以單一每日劑量或每天多次劑量給予本發(fā)明的化合物，不過，可以使用其它給藥形式。每次劑量給予的活性劑的量或每天給予的總量一般由臨床醫(yī)師根據(jù)相關(guān)情況確定，包括待治療的病癥、選擇的給藥途徑、給予的實際化合物及其相對活性、個體患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重程度等。
用于治療GI道運動性下降或5-HT4受體介導(dǎo)的其它障礙的合適的劑量預(yù)計在約0.0007-約20mg/kg/天的活性劑，包括約0.0007-約1mg/kg/天。就平均70kg的人而言，該量為約0.05-約70mg/天的活性劑。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明的化合物用于治療慢性便秘。當(dāng)用于治療慢性便秘時，一般通過口服以單一每日劑量或每天多次劑量給予本發(fā)明的化合物。治療慢性便秘的劑量預(yù)計在約0.05-約70mg/天。
在本發(fā)明的另一個方面中，本發(fā)明的化合物用于治療過敏性腸綜合征。當(dāng)用于治療主要表現(xiàn)為便秘的過敏性腸綜合征時，一般通過口服以單一每日劑量或每天多次劑量給予本發(fā)明的化合物。治療主要表現(xiàn)為便秘的過敏性腸綜合征的劑量預(yù)計在約0.05-約70mg/天。
在本發(fā)明的另一個方面中，本發(fā)明的化合物用于治療糖尿病性胃輕癱。當(dāng)用于治療糖尿病性胃輕癱時，一般通過口服以單一每日劑量或每天多次劑量給予本發(fā)明的化合物。治療糖尿病性胃輕癱的劑量預(yù)計在約0.05-約70mg/天。
在本發(fā)明的另一個方面中，本發(fā)明的化合物用于治療機能性消化不良。當(dāng)用于治療機能性消化不良時，一般通過口服以單一每日劑量或每天多次劑量給予本發(fā)明的化合物。治療機能性消化不良的劑量預(yù)計在約0.05-約70mg/天。
本發(fā)明還提供了治療患有與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥的哺乳動物的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的化合物或包括本發(fā)明的化合物的藥物組合物。
如上所述，本發(fā)明的化合物為5-HT4受體激動劑。因此，本發(fā)明進一步提供了激動哺乳動物體內(nèi)的5-HT4受體的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予本發(fā)明的化合物。此外，本發(fā)明的化合物還適用作探索或研究含有5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品或發(fā)現(xiàn)新5-HT4受體激動劑的研究工具。此外，由于與結(jié)合其它5-HT亞型受體，特別是5-HT3受體相比，本發(fā)明的化合物對5-HT4受體表現(xiàn)出結(jié)合選擇性，所以這類化合物特別適用于研究生物系統(tǒng)或樣品中5-HT4受體的選擇性激動作用。任意合適的含有5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品均可以用于這類可在體外或體內(nèi)進行的研究中。適合于這類研究的有代表性的生物系統(tǒng)或樣品包括，但不限于細胞、細胞提取物、質(zhì)膜、組織樣品、哺乳動物(諸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等。
在本發(fā)明的該方面中，使包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品接觸5-HT4受體激動量的本發(fā)明化合物。然后使用常規(guī)操作步驟和設(shè)備，諸如放射配體結(jié)合試驗和功能試驗，測定激動5-HT4受體的作用。這類功能試驗包括配體介導(dǎo)的胞內(nèi)環(huán)腺苷酸(cAMP)改變，配體介導(dǎo)的酶腺苷酸環(huán)化酶(其合成cAMP)的活性改變，配體介導(dǎo)的通過受體催化的GTP類似物交換成GDP類似物而結(jié)合到分離的膜中的鳥苷三磷酸(GTP)類似物，諸如[35S]GTPγS(鳥苷5′-O-(γ-硫代)三磷酸)或GTP-Eu的改變，配體介導(dǎo)的游離胞內(nèi)鈣離子的改變(例如，使用連接熒光的成像平板讀出器或來自Molecular Devices，Inc.的FLIPR測定)，和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的測定。在上述任意功能試驗或類似性質(zhì)的試驗中，本發(fā)明的化合物可以激動或增加5-HT4受體活化。本發(fā)明的化合物的5-HT4受體激動的量通常在約1納摩爾-約500納摩爾。
另外，本發(fā)明的化合物可以用作發(fā)現(xiàn)新5-HT4受體激動劑的研究工具。在該實施方案中，將測試化合物或一組測試化合物的5-HT4受體結(jié)合或功能數(shù)據(jù)與本發(fā)明的化合物的5-HT4受體結(jié)合或功能數(shù)據(jù)進行比較，以鑒定具有優(yōu)良結(jié)合或功能活性的測試化合物(如果有的話)。本發(fā)明的該方面作為單獨的實施方案包括生成比較數(shù)據(jù)(使用合適的試驗)和分析測試數(shù)據(jù)，以鑒定目標(biāo)測試化合物。
除了其它性質(zhì)以外，在放射配體結(jié)合試驗中發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物為有效的5-HT4受體激動劑并且表現(xiàn)出對5-HT4受體亞型的實質(zhì)選擇性超過了對5-HT3受體亞型的選擇性。此外，本發(fā)明的化合物已經(jīng)在大鼠模型中表現(xiàn)出了優(yōu)良的藥物動力學(xué)特性。由此預(yù)計本發(fā)明的化合物在口服給藥時具有高生物利用度。此外，已經(jīng)使用表達hERG心臟鉀通道的分離的完整細胞在體外電壓鉗模型中證實這些化合物不會抑制鉀離子電流。電壓鉗試驗為可接受的評價藥物物質(zhì)改變與心律失常相關(guān)的心臟復(fù)極化模式，特別是產(chǎn)生所謂的QT延長的潛能的臨床前方法。(Cavero等，Opinion on Pharmacotherapy，2000，1，947-73，F(xiàn)ermini等，Nature Reviews Drug Discovery，2003，2，439-447)。因此，預(yù)計包含本發(fā)明化合物的藥物組合物無這類心臟副作用。
可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種體外和體內(nèi)試驗，證實本發(fā)明化合物的這些特性和效用。有代表性的試驗進一步在下列實施例中詳細描述。
實施例提供下列合成和生物學(xué)實施例是為了舉例說明本發(fā)明，但并不以任何方式來限定本發(fā)明的范圍。在下列實施例中，除非另有說明，下列縮寫具有如下含義。下文未定義的縮寫具有其一般可接受的含義。
Boc＝叔丁氧羰基(Boc)2O＝二碳酸二叔丁酯DCM＝二氯甲烷DMF＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO＝二甲亞砜
EtOAc＝乙酸乙酯mCPBA＝間-氯苯甲酸MeCN＝乙腈MTBE＝叔丁基甲基醚PyBop＝苯并三唑-1-基氧基吡咯烷-磷鎓六氟磷酸鹽Rf＝保留因子RT＝室溫TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃試劑(包括仲胺類)和溶劑購自商品供應(yīng)商(Aldrich，F(xiàn)luka，Sigma等)并且無需進一步純化使用。除非另有說明，反應(yīng)在氮氣環(huán)境中進行。通過在下文并且單獨在反應(yīng)的具體實施例中給出細節(jié)的薄層色譜法(TLC)、分析型高效液相色譜法(分析型HPLC)和質(zhì)譜法監(jiān)測反應(yīng)混合物的進展。如在每個反應(yīng)中具體描述的對反應(yīng)混合物進行后處理；通常通過提取和其它純化方法純化它們，諸如溫度-和溶劑-依賴性結(jié)晶法和沉淀法。此外，通常通過制備型HPLC純化反應(yīng)混合物一般方案如下所述。通常通過質(zhì)譜和1H-NMR光譜測定法對反應(yīng)產(chǎn)物進行表征。為了進行NMR測定，將樣品溶于氘化溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)，并且使用Varian Gemini 2000儀器(300MHz)在標(biāo)準(zhǔn)觀測條件下獲得1H-NMR光譜。通過電噴射離子化方法(ESMS)，使用Applied Biosystems(Foster City，CA)API 150 EX型儀器或Agilent(Palo Alto，CA)1100LC/MSD型儀器對化合物進行質(zhì)譜鑒定。
分析型HPLC的一般方案將化合物粗品溶于50％MeCN/H2O(含有0.1％TFA)，濃度為0.5-1.0mg/mL，并且使用下列條件進行分析柱Zorbax Bonus-RP(3.5μm顆粒大小，2.1×50mm)流速0.5mL/min檢測波長214、254和280nm。
制備型HPLC純化的一般方案將化合物粗品溶于50％在水中的乙酸，濃度為50-100mg/mL，過濾并且使用下列操作步驟分級分離柱YMC Pack-Pro C18(50a×20mm；ID＝5μm)流速40mL/min流動相A＝90％MeCN/10％H2O/0.1％TFAB＝98％H2O/2％MeCN/0.1％TFA梯度10％A/90％B至50％A/50％B，30分鐘內(nèi)(線性)檢測波長214nm。
仲胺類的制備通過下列步驟由硫代嗎啉制備硫代嗎啉-1，1-二氧化物將仲胺保護成N-Boc硫代嗎啉((Boc)2O，MeOH)，氧化成砜(mCPBA，CH2Cl2，0℃)并且使N-Boc基團脫保護而得到游離胺(CF3CO2H，CH2Cl2)。(m/z)C4H9NO2S[M+H]+計算值，136.04；測定值，135.9。
通過與各自磺酰氯(iPr2NEt，CH2Cl2，0℃)反應(yīng)并且使N-Boc基團脫保護(CF3CO2H，CH2Cl2)由N-Boc哌嗪制備哌嗪的N-磺?；苌铩?-甲磺酰基-哌嗪1H-NMR(CDCl3；中性)δ(ppm)3.1(t，4H)，2.9(t，4H)，2.7(s，3H)。1-(甲基磺?；?甲磺酰基-哌嗪1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)2.90(s，3H)，3.02(m，4H)，3.38(m，4H)，4.61(s，2H)。
通過用乙酰氯(iPr2NEt，CH2Cl2，0℃)處理N1-Boc-3-氨基吡咯烷(外消旋物，3R或3S)并且使N-Boc基團脫保護(CF3CO2H，CH2Cl2)，制備3-乙酰氨基吡咯烷的外消旋或單一手性異構(gòu)體。3-(乙酰氨基)吡咯烷1H-NMR(DMSO-d6；TFA鹽)δ(ppm)4.2(五重峰，1H)，3.3-3.1(m，3H)，2.9(m，1H)，2.0(m，1H)，1.8(br s，4H)。
在使N1-Boc-3-氨基吡咯烷酰胺化后，制備3-((R)-2-羥基丙酰氨基)吡咯烷(L-乳酸，PyBOP，DMF，RT)并且使N-Boc基團脫保護(CF3CO2H，CH2Cl2)。(m/z)C7H14N2O2[M+H]+計算值，159.11；測定值，159.0。1H-NMR(CD3OD；TFA鹽)δ(ppm)4.4(五重峰，1H)，4.1(q，1H)，3.5-3.4(m，2H)，3.3-3.2(m，2H)，2.3(m，1H)，2.0(m，1H)，1.3(d，3H)。
通過用丙?；酋Ｂ然颦h(huán)己基甲基磺酰氯(i-Pr2NEt，CH2Cl2，0℃)處理N1-Boc-(3R)-氨基吡咯烷并且使N-Boc基團脫保護(CF3CO2H，CH2Cl2)獲得(3R)-氨基吡咯烷的N3-烷磺?；苌?。
在如下四個合成步驟后由N3-Cbz保護的3-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制備3-(N-乙?；?N-甲基酰氨基)哌啶(De Costa，B.等J.Med.Chem.1992，35，4334-43)i)MeI，n-BuLi，THF，-78℃c至室溫；ii)H2(1atm)，10％Pd/C，EtOH；iii)AcCl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；iv)CF3CO2H，CH2Cl2。m/zC8H16N2O[M+H]+計算值157.13；測定值，157.2。
1H-NMR(CD3OD；TFA鹽)δ(ppm)4.6(m，1H)，3.3(m，1H)，3.2(m，1H)，3.0(m，1H)，2.9(s，3H)，2.8(m，1H)，2.0(s，3H)，1.9-1.7(m，4H)。
在N-乙?；⑶沂筃-Boc基團脫保護后，由3-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制備3-(N-乙?；?酰氨基)哌啶i)AcCl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；ii)CF3CO2H，CH2Cl2。1H-NMR(CD3OD；TFA鹽)δ(ppm)3.9(m，1H)，3.3(dd，1H)，3.2(m，1H)，2.9(dt，1H)，2.75(dt，1H)，2.0-1.9(m，2H)，1.9(s，3H)，1.8-1.4(m，2H)。
通過使3-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的手性或外消旋形式與相應(yīng)的烷磺酰氯反應(yīng)(i-Pr2NEt，CH2Cl2)并且使N-Boc基團脫保護(CF3CO2H，CH2Cl2)，合成3-氨基哌啶的N3-烷磺?；苌铩?3S)-3-(乙磺?；０被?哌啶1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)1.29(t，3H，J1＝7.4Hz)，1.50-1.80(m，2H)，1.90-2.10(m，2H)，2.89(m，2H)，3.05(q，2H，J1＝7.4Hz)，3.27(m，2H)，3.40(d of d(br)，1H)，3.52(m，1H)。3S-甲基磺?；谆酋；０被?哌啶1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)2.13-2.30(m，2H)，2.40-2.57(m，2H)，2.98(m，2H)，3.15(s，3H)，3.21(m，2H)，3.30(br d，1H)，3.74(m，1H)。
在如下四個步驟后由3-(甲氨基)-1-芐基吡咯烷(TCI America)制備3-(甲氨基)-1-乙?；量┩閕)(Boc)2O，MeOH，室溫；ii)H2(1atm)，10％Pd/C，EtOH；iii)AcCl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；iv)CF3CO2H，CH2Cl2。(m/z)[M+H]+C7H14N2O計算值143.12；測定值，143.0。
在如下四個步驟后由3-(甲氨基)-1-芐基吡咯烷制備3-(甲氨基)-1-(甲磺?；?吡咯烷i)(Boc)2O，MeOH，室溫；ii)H2(1atm)，10％Pd/C，EtOH；iii)CH3SO2Cl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；iv)CF3CO2H，CH2Cl2。(m/z)C6H14N2O2S[M+H]+計算值179.08；測定值，179.2。按照類似的方式由(3R)-(甲氨基)-1-芐基吡咯烷制備3R-甲氨基-1-(甲磺?；?吡咯烷。
按照Loev，B.J.Org.Chem.1961，26，4394-9的方案，通過使3-環(huán)丁烯砜與必需的伯胺在甲醇中反應(yīng)(催化劑KOH，室溫)，制備四氫-3-硫代非那明-1，1-二氧化物的衍生物。N-甲基-3-四氫噻吩胺-1，1-二氧化物(TFA鹽)1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.4(br s，2H)，4.0-3.8(五重峰，1H)，3.6-3.5(dd，1H)，3.4-3.3(m，1H)，3.2-3.1(m，2H)，2.5(s，3H)，2.4(m，1H)，2.1(m，1H)。N-2-(1-羥基)乙基-3-四氫噻吩胺-1，1-二氧化物(m/z)C6H13NO3S[M+H]+計算值180.07；測定值，180.2。
由四氫-4H-噻喃-4-酮制備N-甲基-四氫-2H-噻喃-4-胺-1，1-二氧化物i)MeNH2，NaBH4；ii)(Boc)2O，MeOH；iii)mCPBA，CH2Cl2，0℃；iv)CF3CO2H，CH2Cl2。(m/z)C6H13NO2S 164.07[M+H]+計算值；測定值，164.9。1H-NMR(CD3OD；TFA鹽)δ(ppm)3.4-3.1(m，5H)，2.7(s，3H)，2.4(br d，2H)，2.1(br m，2H)。
由N3-Cbz保護的3-甲氨基-哌啶制備1-乙酰基-3-(甲氨基)哌啶i)AcCl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；ii)H2(1atm)，10％Pd/C，EtOH。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)4.0(m，1H)，3.6(m，1H)，3.4-3.2(m，2H)，3.0(m，1H)，2.6(s，3H)，2.1(s，3H)，1.8-1.6(m，4H)。
由N3-Cbz保護的3-甲氨基-哌啶制備1-(甲磺?；?-3-(甲氨基)哌啶i)CH3SO2Cl，i-Pr2NEt，CH2Cl2；ii)H2(1atm)，10％Pd/C，EtOH。(m/z)C7H16N2O2S[M+H]+計算值193.10；測定值，193.0。
1H-NMR(DMSO-d6；TFA鹽)δ(ppm)3.4(dd，1H)，3.2(m，2H)，3.10(s，3H)，3.0-2.9(m，2H)，2.8(s，3H)，1.85-1.75(m，2H)，1.6-1.4(m，2H)。
實施例11-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成a.8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-酮的制備將濃鹽酸(30mL)加入到2，5-二甲氧基四氫呋喃(82.2g，0.622mol)在水(170mL)中的不均勻溶液中，同時攪拌。在冷卻至0℃(冰浴)的單獨的燒瓶中，將濃鹽酸(92mL)緩慢加入到芐胺(100g，0.933mol)在水(350mL)中的溶液中。將2，5-二甲氧基四氫呋喃溶液攪拌約20分鐘，用水(250mL)稀釋且然后加入芐胺溶液，隨后添加1，3-丙酮二羧酸(100g，0.684mol)在水(400mL)中的溶液且然后添加在水(200mL)中的磷酸氫鈉(44g，0.31mol)。使用40％NaOH將pH從pH 1調(diào)節(jié)至pH～4.5。將所得渾濁和淡黃色溶液攪拌過夜。然后使用50％鹽酸將該溶液從pH 7.5酸化至pH 3，加熱至85℃并且攪拌2小時。將該溶液冷卻至室溫，使用40％NaOH堿化至pH 12并且用二氯甲烷提取(3×500mL)提取。用鹽水洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)，過濾并且在減壓下濃縮而得到標(biāo)題中間體粗品，為粘稠的棕色油狀物(52g)。
在0℃下向中間體粗品在甲醇中的溶液(1000mL)中加入二碳酸二叔丁酯(74.6g，0.342mol)。將該溶液溫至室溫并且攪拌過夜。在減壓下除去甲醇并且將所得油狀物溶于二氯甲烷(1000mL)。將中間體提取入1M H3PO4(1000mL)并且用二氯甲烷洗滌(3×250mL)洗滌。使用NaOH水溶液將水層堿化至pH 12并且用二氯甲烷提取(3×500mL)提取。干燥合(MgSO4)合并的有機層，過濾并且在減壓下濃縮而得到標(biāo)題中間體，為粘性淡棕色油狀物(54g)。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.5-7.2(m，5H，C6H5)，3.7(s，2H，CH2Ph)，3.45(寬峰s，2H，CH-NBn)，2.7-2.6(dd，2H，CH2CO)，2.2-2.1(dd，2H，CH2CO)，2.1-2.0(m，2H，CH2CH2)，1.6(m，2H，CH2CH2).(m/z)[M+H]+C14H17NO計算值216.14；測定值，216.0。
b.3-氧代-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制備向8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-酮(75g，0.348mol)在EtOAc(300mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(83.6g，0.383mol，1.1eq)在EtOAc(300mL)中的溶液。在氮氣流中將所得溶液和沖洗液(100mLEtOAc)加入到1L含有23g氫氧化鈀(20wt.％Pd，干基重，在碳上，～50％水濕重；例如Pearlman’s催化劑)的帕爾氫化容器。給反應(yīng)容器脫氣(使真空和N2交替5次)并且加壓至60psi H2氣。將該反應(yīng)溶液攪拌2天并且根據(jù)需要重新充入H2以保持H2氣壓力在60psi，直到通過二氧化硅薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)完成。然后將黑色溶液通過Celite墊過濾并且在減壓下濃縮而定量地得到標(biāo)題中間體，為濃稠黃色至橙色油狀物(51g)。將其不經(jīng)進一步處理用于下一步。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)4.5(寬峰，2H，CH-NBoc)，2.7(寬峰，2H，CH2CO)，2.4-2.3(dd，2H，CH2CH2)，2.1(寬峰m，2H，CH2CO)，1.7-1.6(dd，2H，CH2CH2)，1.5(s，9H，(CH3)3COCON))。
c.(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制備在N2氣流中向上述步驟的產(chǎn)物(75.4g，0.335mol)在甲醇(1L)中的溶液中加入甲酸銨(422.5g，6.7mol)、水(115mL)和65g活性炭上鈀(10％干基重，～50％水濕重；Degussa類E101NE/W)，同時通過機械攪拌器攪拌。24和48小時后，每次再加入部分甲酸銨(132g，2.1mol)。一旦如分析型HPLC監(jiān)測的反應(yīng)進程停止，就加入Celite(＞500g)并且過濾所得濃稠懸浮液且然后用甲醇(～500mL)沖洗收集的固體。合并濾液并且在減壓下濃縮，直到除去全部甲醇。然后用1M磷酸將渾濁的兩相溶液稀釋至pH 2的終體積～1.5-2.0L并且用二氯甲烷(3×700mL)洗滌。使用40％NaOH水溶液將水層堿化至pH 12并且用二氯甲烷(3×700mL)提取。用MgSO4干燥合并的有機層，過濾并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，然后在高度真空中濃縮而得到52g(70％)標(biāo)題中間體，通常為N-Boc-內(nèi)向-3-氨基托烷，為白色-淡黃色固體?；?br> 1H-NMR分析，產(chǎn)物的內(nèi)向與外向的異構(gòu)體之比＞99(通過分析型HPLC＞96％純度)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)4.2-4.0(寬峰d，2H，CHNBoc)，3.25(t，1H，CHNH2)，2.1-2.05(m，4H)，1.9(m，2H)，1.4(s，9H，(CH3)3OCON)，1.2-1.1(寬峰，2H).(m/z)C12H22N2O2[M+H]+計算值227.18；測定值，227.2。分析型HPLC(等度方法；2∶98(A∶B)-90∶10(A∶B)，5分鐘內(nèi))保留時間＝2.14分鐘。
d.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸的制備向懸浮于甲醇(700mL)中的吲唑-3-甲酸(40g，247mmol)中緩慢加入濃H2SO4(10mL)，同時攪拌該混合物。攪拌該混合物并且在80℃下回流24h。冷卻該混合物，過濾并且在減壓下濃縮而得到淡黃色固體。將該固體懸浮于水(700mL)中，壓碎成細粉，通過過濾收集并且用水(～400mL)沖洗。將產(chǎn)物懸浮于甲苯中并且在減壓下蒸發(fā)至干，得到吲唑-3-甲酸甲酯，為淡黃色固體(45g，＞95％純度)。(m/z)C9H8N2O2[M+H]+計算值177.07；測定值，177.0。1H-NMR(CD3OD，300MHz)δ(ppm)8.0(1H，d)，7.5(1H，d)，7.4(1H，t)，7.2(1H，t)，3.9(3H，s)。
向在冰浴中冷卻的吲唑-3-甲酸甲酯(40.7g，231mmol)在無水四氫呋喃(700mL)中的溶液中緩慢加入叔丁醇鉀固體(28.3g，252mmol)。將該混合物在相同溫度下攪拌1小時，此后添加2-碘丙烷(34.4mL，367mmol)。將最終混合物在環(huán)境溫度下攪拌12h并且回流12h。在冷卻至室溫后，過濾該混合物并且用四氫呋喃(100mL)沖洗收集的固體。合并濾液并且在減壓下濃縮至干，得到1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸甲酯粗品(49.7g)，為淡黃色油狀物。通過快速硅膠色譜法純化粗物質(zhì)，用己烷/乙酸乙酯(9/1-3/1)洗脫而得到1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸甲酯(43g，197mmol，＞99％純度)。1H-NMR(CD3OD，300MHz)δ(ppm)8.1-8.0(1H，d)，7.6(1H，d)，7.4(1H，t)，7.2(1H，t)，5.0(1H，五重峰)，3.9(s，3H)，1.5(6H，d)。
向所述甲酯溶于四氫呋喃(400mL)中的溶液中加入1MNaOH(400mL)。將該混合物在環(huán)境溫度下攪拌24h。通過用乙酸乙酯(2×400mL)洗滌終止反應(yīng)，保留水層。通過在冰浴中添加濃HCl(～40mL)緩慢酸化水層，使得淡黃色油狀產(chǎn)物分離。用乙酸乙酯(1000mL)提取產(chǎn)物并且用MgSO4干燥有機層且在減壓下蒸發(fā)而得到標(biāo)題中間體，為淡黃色-白色固體(34g，＞98％純度)，通過從乙酸乙酯中結(jié)晶進一步純化而得到標(biāo)題中間體，為無色針狀體。(m/z)C11H12N2O2[M+Na]+計算值226.07；測定值，226.6。1H-NMR(CD3OD，300MHz))δ(ppm)8.1-8.0(1H，d)，7.6(1H，d)，7.4(1H，t)，7.2(1H，t)，5.0(1H，五重峰)，1.5(6H，d)。
e.(1S，3R，5R)-3-[1-異丙基-1H-吲唑-3-羰基)氨基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制備攪拌1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸(56.35g；0.276mol)在甲苯(500mL)中的懸浮液并且加熱5分鐘，此后添加亞硫酰氯(30.2mL；0.414mol)。在100℃下加熱15分鐘后，該混合物變成均勻溶液，在相同溫度下將其再持續(xù)攪拌90分鐘。在單獨的反應(yīng)燒瓶中將如步驟c中所述制備的(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(62.43g；0.276mol)溶于250mL甲苯中，并且隨后添加溶于250mL水中的NaOH(66.3g)。在冰浴中冷卻該兩相混合物。將上述制備的吲唑?；鹊娜芤簠s至室溫并且在15分鐘內(nèi)添加到所述的兩相溶液中，將該體系在冰浴中劇烈攪拌。在攪拌1.5h后，將該反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)入分液漏斗。首先從甲苯層中分離水層(保留)并且用EtOAc(2×500mL)提取。在減壓下濃縮甲苯層并且將獲得的殘余物溶于有機提取物(1L；EtOAc)。用1M H3PO4(400mL)、飽和NaHCO3(400mL)且然后用鹽水溶液(400mL)洗滌該溶液。在用MgSO4干燥后，在減壓下蒸發(fā)有機溶液至干而得到119.2g標(biāo)題中間體。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.41(s，9H)，1.51(d，6H)，1.82(m，2H)，1.97(bs，4H)，2.09(m，2H)，4.10(m，3H)，5.10(sept，1H)，7.23(t，1H)，7.42(t，1H)，7.79(d，1H)，7.82(d，1H)，8.18(d，1H)。(m/z)C23H32N4O3[M+H]+計算值，413.26；測定值，413.1。保留時間(分析型HPLC2-95％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝4.85分鐘。
f.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備將上述步驟的產(chǎn)物溶于二氯甲烷(200mL)，在冰浴中冷卻且然后與200mL三氟乙酸混合。將該反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌1h。然后在燒瓶中將該體系滴加到乙醚(2L)中，同時攪拌，得到標(biāo)題中間體，為其單(三氟乙酸)鹽(干燥后102.7g，兩步產(chǎn)率87％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)1.54(d，6H)，2.05(m，2H)，2.24(m，6H)，4.03(s，2H)，4.12(q，1H)，5.09(七重峰，1H)，7.28(t，1H)，7.45(t，1H)，7.81(d，1H)，8.00(d，1H)，8.11(d，1H)，8.54(bd，2H).(m/z)C18H24N4O[M+H]+計算值，313.20；測定值，313.1。保留時間(分析型HPLC2-95％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.65分鐘。
g.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二甲氧基乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備向1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(52.7g；0.124mol)溶于500mL二氯甲烷的溶液中加入二異丙基乙胺(43.1mL)和在叔丁基甲基醚中的二甲氧基乙醛(濃45％；44.5mL，0.173mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌35分鐘后，向該混合物中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(36.7g；0.173mol)。90分鐘后通過在冰浴中緩慢添加水(50mL)和飽和NaHCO3溶液(100mL)使反應(yīng)猝滅。用500mL二氯甲烷稀釋該混合物并且轉(zhuǎn)入分液漏斗。收集有機層并且用飽和NaHCO3(250mL)和鹽水溶液(350mL)洗滌。用MgSO4干燥該體系并且在減壓下蒸發(fā)，得到標(biāo)題中間體(58.8g)。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.60(d，6H)，1.77(m，2H)，1.96-2.09(m，4H)，2.29(m，2H)，2.55(m，2H)，3.33(m，2H)，3.41(s，6H)，4.33(q，1H)，4.47(m，1H)，4.87(sept，1H)，7.26(t，1H)，7.37-7.46(m，2H)，7.56(d，1H)，8.36(d，1H).(m/z)C22H32N4O3[M+H]+計算值401.26；測定值，401.3。保留時間(分析型HPLC2-50％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝4.20分鐘。
h.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二羥乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備將上述步驟中的產(chǎn)物(55.2g)懸浮于500mL 6M鹽酸中并且在70℃下加熱1h。將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃并且用二氯甲烷(500mL)稀釋，此后通過緩慢添加6M NaOH(800mL)堿化水層。將其進一步與800mL二氯甲烷混合并且轉(zhuǎn)入分液漏斗。收集有機層，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥并且在減壓下蒸發(fā)至得到標(biāo)題中間體(45.1g)。(m/z)C20H28N4O3[M+H]+計算值，373.22；測定值373.2。保留時間(分析型HPLC2-50％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝3.77分鐘。
i.合成1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙?；?哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺，或者N-[(3-內(nèi)向)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺向含有450mL二氯甲烷的燒瓶中加入1-乙?；哙?19.3g；0.151mol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(34.4g)。將該體系攪拌5分鐘，此后添加上述步驟的產(chǎn)物(45.1g)。將最終混合物攪拌1h，此時基于HPLC和質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完成。緩慢加入水(200mL)并且用600mL二氯甲烷稀釋該混合物且在漏斗中振搖，此后收集有機層。將其用1MNaOH(400mL)和鹽水(500mL)洗滌。用MgSO4干燥并且蒸發(fā)而得到標(biāo)題化合物，為無色固體(47.6g)。通過從乙醇中結(jié)晶純化粗產(chǎn)物，為HCl鹽(＞30g；純度＞98％)。1H-NMR(DMSO-d6；游離堿)δ(ppm)1.52(d，6H)，1.69(m，2H)，1.83(m，2H)，1.97(s，3H)，1.92-2.10(m，4H)，2.33(t，2H)，2.42(m，6H)，2.50(m，2H)，3.21(bs，2H)，3.38(m，4H)，4.09(q，1H)，5.07(sept，1H)，7.26(t，1H)，7.43(t，1H)，7.79(d，1H)，8.12(d，1H).(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，467.31；測定值，467.5。保留時間(分析型HPLC2-50％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝3.52分鐘。
實施例21-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-(四氫呋喃-2-羰基)哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成向N-[2-四氫糠?；鵠哌嗪氫溴酸鹽(40mg，0.15mmol)和N，N-二異丙基乙胺(12μL，0.3mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(64mg，0.3mmol)且然后加入1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二羥乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(HCl鹽)(39mg，0.1mmol)。將該混合物在環(huán)境溫度下振搖15分鐘。在減壓下濃縮后，將該反應(yīng)混合物溶于50％乙酸水溶液并且通過制備型HPLC純化而得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(97％純度)。(m/z)C29H42N6O3[M+H]+計算值，523.34；測定值523.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.7分鐘。
實施例3-20使用與實施例2類似的方法，但用適合的仲胺取代N-[2-四氫糠?；鵠哌嗪氫溴酸鹽制備了實施例3-20的化合物。
實施例3 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(1，1-二氧代-1λ6-硫代嗎啉-4-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C24H35N5O3S[M+H]+計算值，474.25；測定值474.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.20分鐘。
實施例4 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺?；哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C25H38N6O3S[M+H]+計算值，503.28；測定值503.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，4分鐘內(nèi))＝2.12分鐘。
實施例5 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-環(huán)己基甲磺?；哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C31H48N6O3S[M+H]+計算值，585.35；測定值585.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.67分鐘。
實施例6 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺?；谆酋；哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H40N6O5S2[M+H]+計算值，581.26；測定值581.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.22分鐘。
實施例7 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H40N6O2[M+H]+計算值，481.32；測定值481.3。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.07分鐘。
實施例8 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，467.31；測定值467.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝1.89分鐘。
實施例9 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，467.31；測定值467.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.04分鐘。
實施例10 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，467.31；測定值467.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.07分鐘。
實施例11 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[3-((S)-2-羥基丙酰氨基)吡咯烷-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C27H40N6O3[M+H]+計算值，497.32；測定值497.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.07分鐘。
實施例12 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(3S，4S)-3-(乙酰基甲氨基)-4-羥基吡咯烷-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C27H40N6O3[M+H]+計算值，497.32；測定值497.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.15分鐘。
實施例13 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-乙磺酰氨基吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H40N6O3S[M+H]+計算值，517.30；測定值517.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.12分鐘。
實施例14 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-環(huán)己基甲磺酰氨基吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C31H48N6O3S[M+H]+計算值，585.36；測定值585.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.52分鐘。
實施例15 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[3-(乙酰基-甲氨基)哌啶-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C28H42N6O2[M+H]+計算值，495.34；測定值495.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝1.94分鐘。
實施例16 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-乙酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H40N6O2[M+H]+計算值，481.33；測定值481.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.01分鐘。
實施例17 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-甲磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H40N6O3S[M+H]+計算值，517.30；測定值517.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝1.97分鐘。
實施例18 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-甲磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C26H40N6O3S[M+H]+計算值，517.30；測定值517.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝1.99分鐘。
實施例19 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-乙磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H42N6O3S[M+H]+計算值，531.31；測定值531.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.04分鐘。
實施例20 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-甲磺?；谆酋０被哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H42N6O5S2[M+H]+計算值，595.27；測定值595.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.07分鐘。
實施例211-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺的合成向3-(甲氨基)-1-乙酰基吡咯烷(43mg，0.3mmol)和N，N-二異丙基乙胺(12μL，0.3mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(128mg，0.6mmol)且然后加入1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二羥乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(HCl鹽)(78mg，0.2mmol)。將該混合物在環(huán)境溫度下振搖15分鐘。在減壓下濃縮后，將該反應(yīng)混合物溶于50％乙酸水溶液并且通過制備型HPLC純化而得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(56mg，99％純度)。(m/z)[M+H]+C27H40N6O2計算值，481.33；測定值481.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.00分鐘。
實施例22-30使用與實施例21類似的方法，但用合適的仲胺取代3-(甲氨基)-1-乙?；量┩橹苽淞藢嵤├?2-30的化合物。
實施例22 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)[M+H]+C27H40N6O2計算值，481.33；測定值481.4。保留時間(分析型HPLC10-50％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.52分鐘。
實施例23 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)[M+H]+C27H40N6O2計算值，481.33；測定值481.4。保留時間(分析型HPLC10-50％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.52分鐘。
實施例24 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)[M+H]+C26H40N6O3S計算值，517.30；測定值517.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.04分鐘。
實施例25 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-甲磺酰基吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C26H40N6O3S[M+H]+計算值，517.30；測定值517.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.20分鐘。
實施例26 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C25H37N5O3S[M+H]+計算值，488.27；測定值488.2。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.22分鐘。
實施例27 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)-(2-羥乙基)氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C26H39N5O4S[M+H]+計算值，518.28；測定值518.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.25分鐘。
實施例28 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-乙?；?哌啶-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，495.34；測定值495.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝1.95分鐘。
實施例29 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-六氫-1λ6-噻喃-4-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C26H39N5O3S[M+H]+計算值，502.29測定值502.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.12分鐘。
實施例30 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；哙?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；(m/z)C27H42N6O3S[M+H]+計算值，531.31；測定值531.4。保留時間(分析型HPLC5-75％MeCN/H2O，5分鐘內(nèi))＝2.07分鐘。
實施例315-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成a.5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸的制備按照(Buu-Hoi，N.P.等J.Hetereocyclic Chem.1964，1，239-41所述的方案制備5-氟-1H-吲唑-3-甲酸甲酯。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.8(dd，2H)，7.35(dt，1H)，3.8(s，3H)。用異丙基碘在有叔丁醇鉀存在下在回流THF中使所述的甲酯在N1上烷基化。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.8(dd，1H)，7.6(dd，1H)，7.1(dt，1H)，4.8(七重峰，1H)，1.6(d，6H)。然后使異丙基甲酯水解(1M NaOH/THF，RT)而得到標(biāo)題中間體。
b.5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備按照實施例1部分e和f的操作步驟，使用前一步驟的中間體取代1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸制備標(biāo)題中間體。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.9(br，1H)，7.7(dd，1H)，7.6(dd，1H)，7.2(dt，1H)，4.9(m，1H)，4.2(br，1H)，4.0(br，2H)，2.3-2.1(br m，8H)，1.5(d，6H).(m/z)C18H23FN4O[M+H]+計算值，331.19；測定值，331.4。保留時間(分析型HPLC10-40％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝3.43分鐘。
c.5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二甲氧基乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備使前一步驟的產(chǎn)物與二甲氧基乙醛按照實施例1步驟g的方法反應(yīng)而得到標(biāo)題中間體。(m/z)C22H31FN4O3[M+H]+計算值419.25；測定值，419.3。
d.5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二羥乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備將前一步驟的中間體(1.0g)懸浮于10mL 6M鹽酸中并且在70℃下加熱1h。冷卻該反應(yīng)混合物并且在減壓下蒸發(fā)至干而得到標(biāo)題中間體的鹽酸鹽。(m/z)C20H27FN4O3[M+H]+計算值，391.21；測定值，391.4。
e.5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成向含有40mL二氯甲烷的燒瓶中加入1-乙酰基哌嗪(613mg；4.78mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.01g)。將該體系攪拌5分鐘，此后添加前一步驟的產(chǎn)物(～1g)。將最終混合物攪拌1h，此時基于HPLC和質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)反應(yīng)完成。緩慢加入水(20mL)并且用300mL二氯甲烷稀釋該混合物且在漏斗中振搖，此后收集有機層。將其用1MNaOH(100mL)和鹽水(100mL)洗滌。用MgSO4干燥并且蒸發(fā)而得到標(biāo)題化合物，將其通過制備型HPLC純化而得到380mg純產(chǎn)物，為TFA鹽。1H-NMR(DMSO-d6；游離堿)δ(ppm)8.0(br，1H)，7.8(dd，1H)，7.6(dd，1H)，7.23(dt，1H)，5.0(hept，1H)，4.0-3.9(br，3H)，3.5(br，2H)，3.2-2.8(br，10H)，2.2(br m，8H)，1.9(s，3H)，1.4(d，6H).(m/z)C26H37FN6O2[M+H]+計算值，485.30；測定值，485.5。保留時間(分析型HPLC10-70％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.28分鐘。
實施例321-丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成a.1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備按照實施例1的操作步驟，使用1H-吲唑-3-甲酸取代步驟e中的1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸制備標(biāo)題中間體。(m/z)C23H32N6O2[M+H]+計算值，425.27；測定值，425.4。保留時間(分析型HPLC10-40％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝1.47分鐘。
b.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的備選合成向含有前一步驟的中間體的TFA鹽(80mg，0.123mmol)的無水DMF(2mL)中的溶液中加入叔丁醇鉀(48mg，0.43mmol)和異丙基碘(37μL，0.368mmol)。將該混合物在85℃下振搖12h且然后蒸發(fā)至干。得到淡棕色殘余物，將其溶于50％乙酸水溶液并且通過制備型HPLC分級分離而得到標(biāo)題化合物。(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，467.31；測定值467.2[M+H}+。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.09分鐘。
c.1-丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的合成使用與步驟b類似的方法，但用正丙基碘取代異丙基碘，制備標(biāo)題化合物。(m/z)C26H38N6O2[M+H]+計算值，計算值467.31；測定值467.4[M+H]+。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.05分鐘。
實施例33-35使用與實施例32類似的方法，但用合適的烷基鹵取代異丙基碘制備了實施例33-35的化合物。
實施例33 1-丁基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H40N6O2[M+H]+計算值，481.33；測定值481.4。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.26分鐘。
實施例34 1-環(huán)丁基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C27H38N6O2[M+H]+計算值，479.31；測定值479.4。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.20分鐘。
實施例35 1-環(huán)戊基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；(m/z)C28H40N6O2[M+H]+計算值，493.33；測定值493.2。保留時間(分析型HPLC5-65％MeCN/H2O，6分鐘內(nèi))＝2.34分鐘。
實施例36-40使用與上述類似的方法，可以制備實施例36-40的化合物。
實施例36 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。
實施例37 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。
實施例38 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺。
實施例39 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(R)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺。
實施例40 1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(S)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺。
實施例411-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺二鹽酸鹽的合成a.(1S，3R，5R)-3-[1-異丙基-1H-吲唑-3-羰基)氨基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制備給安裝了磁性攪拌棒、回流冷凝器、加液漏斗、氮氣入口和溫度計的5L三頸圓底燒瓶中加入1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸(250g，1.224mol，1.1eq)和2.5L甲苯。攪拌所得懸浮液并且在70-80℃下加熱。在40分鐘期限內(nèi)向該懸浮液中加入亞硫酰氯(218.4g，1.836mol，1.65eq)。將該混合物在90-100℃下加熱1h并且冷卻至25℃。
給安裝了機械攪拌器、加液漏斗、氮氣入口和溫度計的單獨的12L三頸圓底燒瓶中加入2.5L甲苯和3N NaOH(通過用水將356g 50％NaOH稀釋至1.48L制備)和(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(251.9g，1.113mol，1eq)。將所得懸浮液在23℃下攪拌10分鐘并且冷卻至5℃。在90分鐘內(nèi)向該懸浮液中加入在甲苯中的酰基氯溶液，在整個添加期限過程中保持內(nèi)部溫度在～5℃。將該混合物攪拌30分鐘。將該反應(yīng)體系溫至25℃；棄去水層(1.58L，pH＞13)。用1L 20wt％鹽水洗滌有機層并且棄去水層(1.005L，～pH8)。收集有機層(5.3L)并且濃縮至一半體積(～2.6L)。且不經(jīng)純化用于下一步。
b.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備給安裝了機械攪拌器、加液漏斗、氮氣入口和溫度計的12L三頸圓底燒瓶中加入前一步驟的產(chǎn)物。在10分鐘內(nèi)向該溶液中加入三氟乙酸(0.65L)。在環(huán)境溫度下將所得混合物攪拌1h。
向該反應(yīng)混合物中加入水(3.3L)。將所得懸浮液在23℃下攪拌10分鐘并且使其沉降以得到三層混合物。棄去上面的兩層并且收集底層(820mL)且在90分鐘內(nèi)加入到MTBE(6560mL)中。將所得懸浮液冷卻至5℃并且攪拌1h。過濾該懸浮液；用MTBE(500mL)洗滌濕濾餅并且在減壓下干燥(80mmHg)60h而得到標(biāo)題中間體(386g，81％產(chǎn)率，通過HPLC測定純度為99.2％)，為黃白色砂質(zhì)固體。
c.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二甲氧基乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備給安裝了磁性攪拌器、氮氣入口和溫度計的3L三頸圓底燒瓶中加入前一步驟的中間體(84g，0.197mol)、二氯甲烷(840mL)和三乙酰氧基硼氫化鈉(62.6g，0.295mol)。將所得懸浮液攪拌10分鐘，冷卻至10℃并且加入60wt％二甲氧基乙醛水溶液(51.3g，0.295mol)。將該溶液攪拌30分鐘，溫至25℃并且攪拌1h。將該混合物通過C鹽過濾，用二氯甲烷(150mL)且然后用5wt％鹽水溶液(400g)洗滌。分離水層和有機層并且將有機層濃縮至得到深色油狀物(～150mL)，將其不經(jīng)純化用于下一步。
d.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-(2，2-二羥乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的制備給安裝了磁性攪拌器、氮氣入口和溫度計的1L三頸圓底燒瓶中加入前一步驟的產(chǎn)物和水(250mL)并且加熱至50-55℃。向該溶液中加入3N HCl(82mL，0.985mol)。將所得混合物在75℃下攪拌1h。將該反應(yīng)混合物冷卻至25℃并且用25wt％NaOH(159g，0.99mol)中和至pH 3.51。約20分鐘后，收集下層(～120mL)而得到標(biāo)題中間體，將其不經(jīng)純化用于下一步。
e.1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺二鹽酸鹽的合成給安裝了磁性攪拌器、氮氣入口和溫度計的3L三頸圓底燒瓶中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(84g，0.349mol)和二氯甲烷(800mL)。在25℃下攪拌所得混合物并且加入1-乙?；哙?51g，0.394mol)。用二氯甲烷(20mL)沖洗添加部件。將該混合物攪拌5分鐘并且在15分鐘內(nèi)加入前一步驟的產(chǎn)物(～120mL)，維持內(nèi)部溫度低于25℃。將該混合物攪拌15分鐘，通過C鹽過濾并且用二氯甲烷(2×100mL)洗滌。用1N NaOH(500mL)洗滌濾液。分離各層并且收集下部有機層且濃縮至～150mL。
加入無水乙醇(250mL)并且將該混合物濃縮至～200mL。向該混合物中加入無水乙醇(800mL)并且將該混合物加熱至40℃。在3分鐘內(nèi)向該混合物中加入3N HCl(33mL，0.396mol)。將該混合物攪拌10分鐘并且開始結(jié)晶。將所得懸浮液在55℃下攪拌2h并且冷卻至25℃。將該混合物通過Whatman#2濾紙過濾并且用無水乙醇(2×100mL)洗滌濕濾餅。在氮氣環(huán)境中將產(chǎn)物干燥30分鐘且然后在40-50℃下干燥24h而得到標(biāo)題化合物(82g)。
實施例421-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺二氫溴酸鹽的合成給安裝了磁性攪拌器、氮氣入口和溫度計的500mL三頸圓底燒瓶中加入水(120mL)和1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺二鹽酸鹽(12g，22.2mmol)。攪拌所得混合物而得到淡黃澄清溶液。在2分鐘內(nèi)向該溶液中加入25wt％NaOH(7.83g，24.4mmol)而得到白色乳狀懸浮液。加入二氯甲烷(120mL)并且將該混合物攪拌30分鐘而得到澄清的兩層溶液。分離各層而得到水層(113mL)和有機層(125mL)，用10％NaBr水溶液(120mL)洗滌有機層。分離各層而得到有機層(120mL)，將其濃縮至約四分之一體積。加入無水乙醇(250mL)并且將該混合物蒸餾至得到～200mL總體積。在58℃下攪拌該溶液并且在2分鐘內(nèi)加入48wt％HBr水溶液(8.2g，49mmol)。當(dāng)加入一半以上的HBr時，觀察到沉淀。將該混合物在55℃-62℃下攪拌1h且然后冷卻至環(huán)境溫度并且過濾。用無水乙醇(40mL)洗滌濾液，在氮氣環(huán)境中干燥20分鐘并且在45℃下和真空中干燥48h而得到標(biāo)題化合物(13.42g)，為白色固體。
實施例431-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的富馬酸鹽的合成向1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(0.1g，0.21mmol)在50％乙腈/水(1mL)中的溶液中加入1M富馬酸乙醇溶液(0.44mL 0.42mmol)。將所得溶液凍干過夜且然后與乙酸乙酯(1mL)混合。向該混合物中加入熱乙醇，同時加熱直到獲得均勻溶液(0.4mL)。然后使所得澄清溶液在室溫下結(jié)晶。過濾所得固體，用乙醇洗滌并且在真空中干燥而得到標(biāo)題化合物，為固體(0.13g)。
實施例441-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的磷酸鹽的合成向1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(0.2g，0.43mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中加入1M磷酸乙醇溶液(0.43mL，0.43mmol)。然后將得到的不均勻溶液加熱至溶解，過濾并且冷卻過夜。過濾所得固體，用甲醇洗滌并且在真空中干燥而得到標(biāo)題化合物，為固體(0.08g)。
實施例451-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的對-甲苯磺酸鹽的合成將1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(38.7mg，0.08mmol)在異丙醇(2mL)中的溶液在75℃的水浴中加熱并且添加對-甲苯磺酸一水合物固體(32.3mg，0.17mmol)。加熱所得溶液，直到固體溶解且然后將其冷卻至室溫。標(biāo)題化合物結(jié)晶形成過夜。
實施例461-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的酸鹽的合成使用與實施例43-45類似的操作步驟，使用圓括號中所示當(dāng)量數(shù)的酸制備固體形式的1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的下列酸鹽乙酸鹽(2)；苯甲酸鹽(2)；硝酸鹽(2)；丙酸鹽(1)；酒石酸鹽(2)；磷酸鹽(0.5)。
實施例47對5-HT4(c)人受體的放射配體結(jié)合試驗a.膜制備5-HT4(c)在37℃下和5％CO2濕潤保溫箱中，使利用人5-HT4(c)受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細胞(Bmax＝～6.0pmol/mg蛋白，如使用[3H]-GR113808膜放射配體結(jié)合試驗測定的)生長在T-225燒瓶中的Dulbecco改進的Eagles培養(yǎng)基(DMEM)中，該培養(yǎng)基中含有4,500mg/L D-葡萄糖和鹽酸吡哆醇(GIBCO-Invitrogen Corp.，Carlsbad CACat#11965)并且補充了10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#10437)、2mM L-谷氨酰胺和(100個單位)青霉素-(100μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#15140)。通過將800μg/mL遺傳霉素(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#10131)加到所述培養(yǎng)基中，使細胞在連續(xù)選擇壓力下生長。
使細胞生長至約60-80％的匯合(＜35傳代培養(yǎng)傳代)。在收集前20-22小時，將細胞洗滌兩次并且補充不含血清的DMEM。膜制備的所有步驟均在冰上進行。通過溫和的機械攪拌并且用25mL移液管研磨提起細胞單層。通過以1000rpm離心(5分鐘)收集細胞。
為了進行膜制備，將細胞沉淀重新懸浮于冰冷的50mM 4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)，pH 7.4(膜制備緩沖液)(40mL/30-40T225燒瓶中的總細胞產(chǎn)量)中并且在冰上使用polytron破碎機(設(shè)定19，2×10秒)勻化。在4℃下將所得勻漿以1200g離心5分鐘。棄去沉淀并且以40,000g離心(20分鐘)上清液。通過用膜制備緩沖液重新懸浮并且以40,000g離心(20分鐘)，將沉淀洗滌一次。將最終沉淀重新懸浮于50mM HEPES，pH 7.4(試驗緩沖液)(相當(dāng)于1T225燒瓶/1mL)中。通過Bradford的方法(Bradford，1976)測定膜懸浮液的蛋白質(zhì)濃度。將膜以等分樣貯存在-80℃下。
b.放射配體結(jié)合試驗在1.1mL 96-深孔聚丙烯測定板(Axygen)中進行放射配體結(jié)合試驗，總試驗體積為400μL，在50mM HEPES pH 7.4中含有2μg膜蛋白，在50mM HEPES pH 7.4中含有0.025％牛血清清蛋白(BSA)。使用0.001nM-5.0nM范圍內(nèi)的8-12個不同濃度的[3H]-GR113808(Amersham Inc.，Bucks，UKCat#TRK944；比活性～82Ci/mmol)，進行測定放射配體的Kd值的飽和結(jié)合研究。使用0.15nM[3H]-GR113808和10pM-100μM范圍內(nèi)11個不同化合物濃度，進行測定化合物的pKi值的置換試驗。
以10mM在DMSO中的儲備溶液接收測試化合物并且在25℃下在含有0.1％BSA的50mM HEPES pH 7.4中將其稀釋至400μM，然后在相同的緩沖液中進行連續(xù)稀釋(1∶5)。在有1μM未標(biāo)記的GR113808存在下測定非特異性結(jié)合。在室溫下將試驗體系培育60分鐘，然后通過在預(yù)先浸漬在0.3％聚乙烯亞胺中的96-孔GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)上快速過濾，來終止結(jié)合反應(yīng)。用過濾緩沖液(冰冷的50mM HEPES，pH7.4)將濾板洗滌三次，以除去未結(jié)合的放射性。干燥所述板，向各孔中加入35μLMicroscint-20液體閃爍液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)并且將所述板在Packard Topcount液體閃爍計數(shù)器(Packard BioScienceCo.，Meriden，CT)中進行計數(shù)。
利用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，SanDiego，CA)，使用一位點競爭的3-參數(shù)模型，通過非線性回歸分析來分析結(jié)合數(shù)據(jù)。將BOTTOM(曲線最低值)固定為非特異性結(jié)合的值，如在有1μM GR113808存在下測定的。在Prism中由最佳擬合的IC50值計算測試化合物的Ki值，并且使用Cheng-Prusoff方程式(Cheng和Prusoff，Biochemical Pharmacology，1973，22，3099-108)Ki＝IC50/(1+[L]/Kd)，其中[L]＝濃度[3H]-GR113808，計算放射配體的Kd值。將結(jié)果表示為Ki值的負十對數(shù)，即pKi。
在本試驗中具有較高pKi值的測試化合物對5-HT4受體具有較高的結(jié)合親和力。在本試驗中測試的化合物具有約6.3至約9.0范圍內(nèi)的pKi值，一般在約7.0至約8.6。
實施例48對5-HT3A人受體的放射配體結(jié)合試驗受體亞型選擇性的測定a.膜制備5-HT3A從Dr.Michael Bruess (University of Bonn，GDR)獲得用人5-HT3A受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細胞(Bmax＝～9.0pmol/mg蛋白，如使用[3H]-GR65630膜放射配體結(jié)合試驗測定的)。在37℃下和5％CO2濕潤培育箱中，使細胞生長在T-225燒瓶或細胞工廠中的50％ Dulbecco改進的Eagles培養(yǎng)基(DMEM)(GIBCO-invitrogen Corp.，Carlsbad，CACat#11965)和50％Ham′s F12(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#11765)中，其中補充了10％加熱失活的胎牛血清(FBS)(Hyclone，Logan，UTCat#SH30070.03)和(50個單位)青霉素-(50μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#15140)。
使細胞生長至約70-80％的匯合(＜35傳代培養(yǎng)傳代)。膜制備的所有步驟均在冰上進行。為了收集細胞，抽吸培養(yǎng)基并且用不含Ca2+、Mg2+的Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水(dPBS)沖洗細胞。通過溫和的機械攪拌提起細胞單層。通過以1000rpm離心(5分鐘)收集細胞。在膜制備的后續(xù)步驟按照如上關(guān)于表達5-HT4(c)受體的膜所述的方案進行。
b.放射配體結(jié)合試驗在96深孔聚丙烯測定板中進行放射配體結(jié)合試驗，總試驗體積為200μL，在50mM HEPES pH 7.4中含有1.5-2μg膜蛋白，在50mMHEPES pH 7.4中含有0.025％BSA試驗緩沖液。使用0.005nM-20nM范圍內(nèi)的12個不同濃度的[3H]-GR65630(PerkinElmer Life SciencesInc.，Boston，MACat#NET1011，比活性～85Ci/mmol)，進行測定放射配體的Kd值的飽和結(jié)合研究。使用0.50nM的[3H]-GR65630和10pM-100μM范圍內(nèi)的11個不同化合物濃度，進行測定化合物pKi值的置換試驗。以在DMSO中的10mM儲備溶液接收化合物(參見3.1部分)，在25℃下在含有0.1％BSA的50mM HEPES pH 7.4中將其稀釋至400μM，然后在相同的緩沖液中進行連續(xù)稀釋(1∶5)。在有10μM未標(biāo)記的MDL72222存在下測定非特異性結(jié)合。在室溫下將試驗體系培育60分鐘，然后通過在預(yù)先浸漬在0.3％聚乙烯亞胺中的96-孔GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)上快速過濾，來終止結(jié)合反應(yīng)。用過濾緩沖液(冰冷的50mM HEPES，pH7.4)將濾板洗滌三次，以除去未結(jié)合的放射性。干燥所述板，向各孔中加入35μL Microscint-20液體閃爍液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)并且將所述板在Packard Topcount液體閃爍計數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中進行計數(shù)。
使用上述非線性回歸分析操作步驟分析結(jié)合數(shù)據(jù)，以測定Ki值。將BOTTOM(曲線最低值)固定為非特異性結(jié)合的值，如在有10μMMDL72222存在下所測定的。將Cheng-Prusoff方程式中的量[L]定義為[3H]-GR65630濃度。
將對5-HT4受體亞型與對5-HT3受體亞型的選擇性計算為比率Ki(5-HT3A)/Ki(5-HT4(c))。在本試驗中測試的本發(fā)明化合物具有的5-HT4/5-HT3受體亞型選擇性在約25至約4000的范圍內(nèi)，一般在約100至約4000范圍。
實施例49使用表達人5-HT4(c)受體的HEK-293細胞進行的全細胞cAMP蓄積快速板(flashplate)試驗在本試驗中，通過測量當(dāng)表達5-HT4受體的HEK-293細胞接觸不同濃度的測試化合物時產(chǎn)生的環(huán)AMP的量，來測定測試化合物的功能效價。
a.細胞培養(yǎng)制備了以兩種不同密度表達受體的用克隆的人5-HT4(c)受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人HEK-293(人胚腎)細胞(1)約0.5-0.6pmol/mg蛋白的密度，如使用[3H]-GR113808膜放射配體結(jié)合試驗測定的；和(2)約6.0pmol/mg蛋白的密度。在37℃下和5％CO2中在濕潤的培育箱中，使細胞生長在T-225燒瓶中的含有4,500mg/L D-葡萄糖的Dulbecco改進的Eagles培養(yǎng)基(DMEM)(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#11965)中，其中補充了10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-InvitrogenCorp.Cat#10437)和(100個單位)青霉素-(100μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#15140)。通過向培養(yǎng)基中添加遺傳霉素(800μg/mLGIBCO-Invitrogen Corp.Cat#10131)，使細胞生長在連續(xù)選擇壓力下。
b.細胞制備使細胞生長至約60-80％匯合。在試驗前20-22小時，將細胞洗滌兩次，并且添加不含血清的含有4,500mg/L D-葡萄糖的DMEM(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#11965)。為了收集細胞，抽吸培養(yǎng)基并且將10mLVersene(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#15040)加到各T-225燒瓶中。將細胞在RT下培育5分鐘然后通過機械攪拌從燒瓶中取出。將細胞懸浮液轉(zhuǎn)入含有等體積預(yù)溫?zé)?37℃)的dPBS的離心管中，并且以1000rpm離心5分鐘。棄去上清液并且將沉淀重新懸浮于預(yù)溫?zé)?37℃)的刺激緩沖液(10mL，相當(dāng)于每2-3個T-225燒瓶)中。記錄這一時間并且將其標(biāo)記為0。用Coulter計數(shù)器對細胞計數(shù)(計數(shù)高于8μm，燒瓶產(chǎn)量為1-2×107個細胞/燒瓶)。將細胞以5×105個細胞/毫升重新懸浮于預(yù)溫?zé)?37℃)的刺激緩沖液中(如在快速板試劑盒中提供的)并且在37℃預(yù)培育10分鐘。
使用具有125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶活化測定系統(tǒng)(SMP004B，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)，按照制造商的說明以放射免疫測定格式進行cAMP測定。
如上所述使細胞生長并且制備。在本試驗中最終的細胞濃度為25×103個細胞/孔并且最終試驗體積為100μL。以DMSO中的10mM儲備溶液接收測試化合物，在25℃在含有0.1％BSA的50mM HEPESpH 7.4中將其稀釋至400μM，然后在相同的緩沖液中進行連續(xù)(1∶5)稀釋。使用10pM至100μM范圍內(nèi)的11個不同化合物濃度(最終試驗濃度)進行環(huán)AMP蓄積測定。對每個板均包含5-HT濃度-響應(yīng)曲線(10pM至100μM)。在37℃下振搖的同時將細胞培育15分鐘并且通過向各孔中添加100μl冰冷的檢測緩沖液(如在快速板試劑盒中提供的)，來終止反應(yīng)。封閉所述板并且在4℃下培育過夜。通過使用Topcount(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)的閃爍親近光譜法對結(jié)合放射性進行定量。
按照制造商的用戶手冊中提供的用法說明，從cAMP標(biāo)準(zhǔn)曲線外推每毫升反應(yīng)產(chǎn)生的cAMP的量。利用GraphPad Prism軟件包，使用3-參數(shù)S形劑量-響應(yīng)模型(限定于單位元素的斜率)，通過非線性回歸分析來分析數(shù)據(jù)。將效價數(shù)據(jù)報道為pEC50值，即EC50值的負十對數(shù)，其中EC50為50％最大響應(yīng)的有效濃度。
在本試驗中表現(xiàn)出較高pEC50值的測試化合物具有較高的激動5-HT4受體的效價。例如，在本試驗中測試的本發(fā)明化合物在具有約0.5-0.6pmol/mg蛋白的密度的細胞系(1)中具有約6.3至約9.0范圍內(nèi)的pEC50值，一般在約7.5至約8.5的范圍內(nèi)。
實施例50抑制表達hERG心臟鉀通道的全細胞中鉀離子電流的體外電壓鉗試驗從University of Wisconsin的Gail Robertson獲得用hERG cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO-K1細胞。將細胞保持在低溫貯存中直到需要為止。鋪展細胞并且使其在補充了10％胎牛血清和200μg/mL遺傳霉素的Dulbecco改進的Eagles培養(yǎng)基/F12中傳代。將細胞接種在35mm2皿(含有2mL培養(yǎng)基)中的聚-D-賴氨酸(100μg/mL)包被的玻璃蓋玻片上，接種密度能夠使分離的細胞得到選擇以用于全細胞電壓鉗研究。將所述皿維持在加濕的5％CO2環(huán)境中和37℃下。
至少每7天制備一次胞外溶液并且在未使用時貯存在4℃下。胞外溶液含有(mM)NaCl(137)、KCl(4)、CaCl2(1.8)、MgCl2(1)、葡萄糖(10)、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)(10)，用NaOH調(diào)至pH7.4。使在沒有或有測試化合物存在下將胞外溶液包含在貯器中，它從其中以約0.5mL/min流入記錄室。制備胞內(nèi)溶液，等分并且貯存在-20℃下，直到使用的當(dāng)天為止。胞內(nèi)溶液含有(mM)KCl(130)、MgCl2(1)、乙二醇雙(β-氨基乙醚)N，N，N′，N′-四乙酸鹽(EGTA)(5)、MgATP(5)、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)(10)，用KOH調(diào)至pH 7.2。所有實驗均在室溫(20-22℃)下進行。
將其上接種了細胞的蓋玻片轉(zhuǎn)入記錄室并且持續(xù)灌注。在細胞與膜片電極之間形成Gigaohm密封物。一旦獲得了穩(wěn)定的膜片，記錄就以電壓鉗模式開始，其中起始保持電位在-80mV。在獲得穩(wěn)定的全細胞電流后，使細胞接觸測試化合物。標(biāo)準(zhǔn)電壓方案為從-80mV至+20mV的保持電位4.8秒，復(fù)極化至-50mV 5秒且然后返回至起始保持電位(-80mV)的步驟。將該電壓方案每15秒進行一次(0.067Hz)。使用pClamp軟件測定復(fù)極化期過程中的峰電流振幅。在細胞上灌流3μM濃度的測試化合物5分鐘，隨后是沒有化合物存在下的5-分鐘清除期。最終將陽性對照(西沙必利，20nM)加入到灌注液中以便測試細胞功能。從-80mV至+20mV的步驟激活了hERG通道，產(chǎn)生外向電流。返回到-50mV的步驟產(chǎn)生外向尾電流，因為通道從失活和去活化中恢復(fù)。
使用pClamp軟件測定復(fù)極化期過程中的峰電流振幅。將對照品和測試品數(shù)據(jù)輸入Origin(OriginLab Corp.，Northampton MA)，其中將各電流振幅相對于在沒有測試化合物存在下的起始電流振幅標(biāo)準(zhǔn)化。計算每種條件下的標(biāo)準(zhǔn)化的電流平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差并且對實驗的時間過程作圖。
在接觸測試品或載體對照品(通常為0.3％DMSO)5分鐘后觀測到的K+電流抑制之間進行比較。使用兩-群體、獨立t-檢驗(MicrocalOrigin v.6.0)進行實驗組之間的統(tǒng)計學(xué)比較。p＜0.05時認(rèn)為差異顯著。
在本試驗中鉀離子電流的抑制百分比越小，那么測試化合物用作治療劑時改變心臟復(fù)極化模式的可能性越小。在本試驗中濃度為3μM的本發(fā)明化合物表現(xiàn)出對鉀離子電流的抑制小于約20％，一般小于約15％。
實施例51口服生物利用度的體外模型Caco-2滲透試驗進行Caco-2滲透試驗以便生成測試化合物在口服給藥后通過腸并且進入-血-流的能力的模型。測定了在溶液中的測試化合物透入設(shè)計為模擬人小腸單層的緊密連接的細胞單層的速率。
Caco-2(結(jié)腸，腺癌；人)細胞獲自ATCC(American Type CultureCollection；Rockville，MD)。為了進行滲透研究，將細胞以63,000個細胞/cm2的密度接種在預(yù)濕潤的transwells聚碳酸酯濾器(Costar；Cambridge，MA)上。在培養(yǎng)21天后形成細胞單層。在transwell平板中進行細胞培養(yǎng)后，從transwell平板中分離含有細胞單層的膜并且將期插入擴散室(Costar；Cambridge，MA)。將擴散室插入配有用于溫控的循環(huán)外部恒溫調(diào)節(jié)37℃的水的加熱部件中。空氣歧管將95％O2/5％CO2遞送至擴散室的每一半并且產(chǎn)生通過細胞單層的層流模式，它可有效地減少未攪拌的界面層。
使用100μM濃度的測試化合物和14C-甘露糖醇進行滲透研究以便監(jiān)測單層的完整性。所有實驗均在37℃下進行60分鐘。在0、30和60分鐘時從供體中和室的接收器側(cè)面取樣。對于測試化合物和甘露糖醇濃度，通過HPLC或液體閃爍計數(shù)分析樣品。計算滲透系數(shù)(Kp)，以厘米/秒表示。
在本試驗中，將大于約10×10-6厘米/秒的Kp值看作是表示有利的生物利用度。在本試驗中測試的本發(fā)明化合物表現(xiàn)出約15×10-6厘米/秒至約50×10-6厘米/秒，一般約為20×10-6厘米/秒至約40×10-6厘米/秒的Kp值。
實施例52大鼠中的藥物動力學(xué)研究制備在0.1％乳酸中pH約為5-約6的測試化合物的水溶液制劑。以2.5mg/kg劑量通過靜脈內(nèi)給予(IV)或以5mg/kg劑量通過口腔管飼法(PO)給予雄性Sprague-Dawley大鼠(CD品系，Charles RiverLaboratories，Wilmington，MA)測試化合物。用于IV給藥的給藥體積為1mL/kg且用于PO給藥的給藥體積為2mL/kg。在給藥前以及在給藥后第2(僅IV)、5、15和30分鐘和第1、2、4、8和24小時，從動物中采集順序血樣。通過液相色譜法-質(zhì)譜分析(LC-MS/MS)(MDSSCIEX，API 4000，Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)，用1ng/mL定量的下限測定血漿中測試化合物的濃度。
通過非房室分析(對于IVModel 201；對于POModel 200)使用WinNonlin(Version 4.0.1，Pharsight，Mountain View，CA)評估標(biāo)準(zhǔn)藥物動力學(xué)參數(shù)。在血漿中測試化合物的濃度與時間的曲線中的最大值稱作Cmax。通過線性梯形規(guī)則計算從給藥時間到最后可測量濃度之間的濃度與時間曲線下的面積(AUC(0-t))。將口服生物利用度(F(％))，即劑量標(biāo)準(zhǔn)化的PO給藥的AUC(0-t)與IV給藥的AUC(0-t)之比計算為
F(％)＝AUCPO/AUCIV×劑量IV/劑量PO×100％預(yù)計在本試驗中表現(xiàn)出參數(shù)Cmax、AUC(0-t)和F(％)較大值的測試化合物在口服給藥時具有較大的生物利用度。在本試驗中測試的本發(fā)明化合物具有的Cmax值在約0.05-約0.35μg/mL的范圍內(nèi)，一般在約0.1-約0.35μg/mL的范圍內(nèi)，并且AUC(0-t)值在約0.15-約0.8μg·hr/mL的范圍內(nèi)，一般在約0.25-約0.8μg·hr/mL的范圍內(nèi)。舉例來說，實施例1的化合物具有的Cmax值為0.25μg/mL，AUC(0-t)值為0.73μg·hr/mL且在大鼠模型中的口服生物利用度(F(％))為約100％。
盡管已經(jīng)參照具體實施方案描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，可以在不脫離本發(fā)明實質(zhì)和范圍的情況下進行各種改變和等同技術(shù)方案的替換。此外，就本發(fā)明的目的、實質(zhì)和范圍而言，可以進行許多修改以便適應(yīng)于具體情況、物質(zhì)、物質(zhì)的組合物、方法、方法步驟或多個方法步驟。所有這類修改均屬于待批權(quán)利要求的范圍。另外，將上文引述的所有公開文獻、專利和專利對比文件完整地引入本文作為參考，就如同將分別將它們引入作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1為氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R2為C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基；且W選自(i)式(II)的基團 其中X為NC(O)Ra，其中Ra為C1-3烷基或四氫呋喃基，其中C1-3烷基任選被-OH或C1-3烷氧基取代；S(O)2；或NS(O)2Rb，其中Rb為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的甲基；(ii)式(III)的基團 其中Ry為-OH或C1-3烷氧基；p為0或1；n為1或2；且Y為NRcC(O)Rd，其中Rc為氫或C1-3烷基且Rd為任選被-OH或C1-3烷氧基取代的C1-3烷基；或NReS(O)2Rf，其中Re為氫且Rf為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的C1-3烷基；和(iii)式(IV)的基團 其中Rz為氫、C1-3烷基或被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基；m為1或2；q為1或2，條件是m與q之和不等于4；且Z為NC(O)Rg，其中Rg為任選被-OH或C1-3烷氧基取代的C1-3烷基；S(O)2；或NS(O)2Rh，其中Rh為任選被-OH、C1-3烷氧基、C5-6環(huán)烷基或-S(O)2-C1-3烷基取代的甲基。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為氫或鹵素。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2為異丙基或C4-5環(huán)烷基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W為式(II)的基團。
5.權(quán)利要求4所述的化合物，其中Ra為C1-3烷基且Rb為甲基。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W為式(III)的基團。
7.權(quán)利要求6所述的化合物，其中p為0。
8.權(quán)利要求6所述的化合物，其中n為1。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W為式(IV)的基團。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中m為1且q為1。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為氫或鹵素；R2為C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；且W選自由下列基團組成的組(i)式(II)的基團，其中X為NC(O)CH3、S(O)2或NS(O)2CH3；(ii)式(III)的基團，其中p為0，n為1，并且Y為NCH3C(O)CH3；且(iii)式(IV)的基團，其中Rz為甲基，m為1，q為1，并且Z為NC(O)CH3、S(O)2，或NS(O)2CH3。
12.權(quán)利要求11所述的化合物，其中W為式(II)的基團，其中X為NC(O)CH3、S(O)2或NS(O)2CH3.
13.權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物選自1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)-乙基]8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-(四氫呋喃-2-羰基)哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(1，1-二氧代-1λ6-硫代嗎啉-4-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-環(huán)己基甲磺酰基哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺?；谆酋；哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙酰基-甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙酰氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[3-((S)-2-羥基丙酰氨基)吡咯烷-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(3S，4S)-3-(乙酰基甲氨基)-4-羥基吡咯烷-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-乙磺酰氨基吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-環(huán)己基甲磺酰氨基吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[3-(乙酰基-甲氨基)哌啶-1-基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-乙酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-甲磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-甲磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-乙磺酰氨基哌啶-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-甲磺?；谆酋０被哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-甲磺酰基吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)-(2-羥乙基)氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-乙酰基哌啶-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1，1-二氧代-六氫-1λ6-噻喃-4-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；哙?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；5-氟-1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-丁基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-環(huán)丁基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-環(huán)戊基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙酰基-甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-甲磺?；量┩?3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(R)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(S)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物和立體異構(gòu)體。
14.權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物選自1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)-乙基]8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(1，1-二氧代-1λ6-硫代嗎啉-4-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(3-(乙酰基甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-3-(乙?；?甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-3-(乙酰基-甲氨基)吡咯烷-1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[(1-乙?；量┩?3-基)甲氨基]乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[((R)-1-乙?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-[((S)-1-乙?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[(1-甲磺?；?吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸((1S，3R，5R)-8-{2-[((S)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基)甲氨基]乙基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((R)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-((S)-(1，1-二氧代-四氫-1λ6-噻吩-3-基)甲氨基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物和立體異構(gòu)體。
15.化學(xué)名稱為1-異丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰哌嗪-1-基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的權(quán)利要求1所述的化合物；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
16.藥物組合物，它包含治療有效量的權(quán)利要求1至15任意一項所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
17.用于療法中的權(quán)利要求1至15任意一項所述的化合物。
18.權(quán)利要求1至15任意一項的化合物在制備藥物中的應(yīng)用。
19.權(quán)利要求18所述的應(yīng)用，其中所述藥物用于治療哺乳動物中與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥。
20.權(quán)利要求19所述的應(yīng)用，其中所述的疾病或病癥為胃腸道運動性減少的障礙。
21.治療患有與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥的哺乳動物的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1至15任意一項的化合物。
22.治療哺乳動物中胃腸道運動性減少的障礙的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1至15任意一項的化合物。
23.權(quán)利要求22所述的方法，其中所述運動性減少的障礙選自慢性便秘、便秘為主的過敏性腸綜合征、糖尿病性和特發(fā)性胃輕癱，以及機能性消化不良。
24.制備權(quán)利要求1至15任意一項的化合物的方法，該方法包括使式5的化合物 或其鹽或立體異構(gòu)體或被保護的衍生物與式H-W的胺在有還原劑存在下反應(yīng)，以得到式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
25.通過權(quán)利要求24所述的方法制備的產(chǎn)物。
26.式5的化合物或者其鹽或立體異構(gòu)體或被保護的衍生物 其中R1為氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，并且R2為C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
27.制備權(quán)利要求1至15任意一項的化合物的方法，該方法包括使式2的化合物 與式10的化合物 在酰胺偶聯(lián)條件下反應(yīng)，以得到式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
28.制備(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的方法，該方法包括使3-氧代-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯與至少25當(dāng)量的甲酸銨在有過渡金屬催化劑存在下反應(yīng)，以得到(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯。
29.研究包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品的方法，該方法包括(a)使所述的生物系統(tǒng)或樣品接觸權(quán)利要求1至15任意一項的化合物；并且(b)測定所述化合物對所述生物系統(tǒng)或樣品產(chǎn)生的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的吲唑－甲酰胺5－HT
文檔編號A61K31/541GK1922175SQ200580005307
公開日2007年2月28日 申請日期2005年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月18日
發(fā)明者D·馬克斯, 崔錫基, P·R·法瑟里, R·讓德龍, A·A·戈德布盧姆, D·D·隆, S·D·特納, 劉健偉 申請人:施萬制藥