專利名稱：一種田基黃苷化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種田基黃苷化合物及其制備方法與治療用途背景技術(shù)病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起的流行較廣的常見(jiàn)傳染病，也是目前常見(jiàn)病、多發(fā)病之一。目前世界各國(guó)病毒性肝炎的流傳面廣、傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高，它不僅嚴(yán)重地危害患者的心身健康，而且影響著下一代。病毒性肝炎具有傳染性強(qiáng)，傳播途徑復(fù)雜，流行面廣泛，發(fā)病率較高，遷延時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，臨床上主要表現(xiàn)為乏力、食欲減遲、嘔吐、肝腫大及肝功能損害，部分病人可有黃疸和發(fā)熱，隱性感染較常見(jiàn)。肝臟的病變涉及眾多器官，對(duì)它的防治已成為世界各國(guó)的重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目。
田基黃，又名地耳草，為金絲桃屬植物地耳草(Hypercum japonicum Thunb.)的全草，田基黃具有消炎、解毒作用，民間用其全草治療肝炎，療效確切，且對(duì)各型肝炎均有顯著療效。田基黃的化學(xué)成分主要有兩大類，分別為黃酮、黃烷醇及其苷類和間苯三酚衍生物。其中黃酮、黃烷醇類主要有槲皮素(Quercetin)、槲皮甙(Quercetrin)、白前甙B(Vincetoxicoside B)、Sarothranol，Isojacareubin和Taxifolin7-0-L-rhamnoside等，研究表明田基黃總黃酮對(duì)病毒性肝炎具有良好的治療作用，田基黃注射液[WS-10078(ZD-0078)-2002]即是以田基黃總黃酮為主要成分的制劑，具有清熱利濕、散瘀消腫功效，是目前臨床上應(yīng)用于治療病毒性肝炎較多的藥物之一。專利(CN1528288A)“田基黃總黃酮粉針劑及其制備方法”公開(kāi)了一種用于治療病毒性肝炎的田基黃凍干粉針劑及其制備方法，該方法也是以田基黃總黃酮作為藥用成分。但是由于田基黃中成分復(fù)雜，上述制劑質(zhì)量不易控制，需遮光避光保存，長(zhǎng)時(shí)間放置的穩(wěn)定性和澄明度都有一定問(wèn)題，而且田基黃提取得到的不同批次總黃酮所含成分和含量也有很大差異，這些都影響了田基黃制劑的生產(chǎn)和應(yīng)用。
隨著對(duì)田基黃中化學(xué)成分的系統(tǒng)分離和深入研究，研究表明田基黃中的田基黃苷(白前甙B)是田基黃中一種治療肝炎的主要活性成分，該有效成分在田基黃中含量較高，且對(duì)急性、慢性及重癥肝炎，肝硬化均有較好的效果。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)以田基黃苷為主要有效成分的制劑的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的研究人員確定了田基黃苷分子式，根據(jù)田基黃苷的結(jié)構(gòu)及其主要性質(zhì)，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)研究，發(fā)明了從田基黃中提取、分離、純化得到田基黃苷純品的方法，采用該工藝得到的田基黃苷純度≥90％，本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，所用制備方法條件溫和，完全適合工業(yè)生產(chǎn)的需要。
本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種富含活性成分田基黃苷、療效好、方便使用、副作用小的用于治療病毒性肝炎的注射制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述注射制劑的制備方法。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥為田基黃；(2)取田基黃，切斷，加6-10倍量的水煎煮二至三次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至0.5-1g生藥/ml；(3)濃縮液上已處理好的大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用3-5倍柱體積水洗脫，再用4-6倍柱體積50％-70％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；
(4)乙醇濃縮液調(diào)pH值值至3-4，加醋酸乙酯萃取3-4次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至1-2g生藥/ml；(5)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(6)將上述沉淀以70％乙醇速洗1-2次，用甲醇或70％乙醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(7)母液重復(fù)步驟(4)(5)(6)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備(1)水針制劑的制備將上述田基黃苷2-10重量份用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉或葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑。
(2)輸液制劑的制備將上述田基黃2-10重量份苷用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉或葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑。
(3)粉針制劑的制備將上述田基黃苷2-10重量份用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入賦形劑40-48重量份，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑。
二.檢測(cè)分析1.田基黃苷結(jié)構(gòu)鑒定顯色反應(yīng)(1)鹽酸-鎂粉反應(yīng)紅色；(2)鹽酸-鋅粉反應(yīng)紫紅色；(3)四氫硼鈉反應(yīng)陰性。
絡(luò)合反應(yīng)(1)鋯鹽絡(luò)合反應(yīng)鮮黃色，說(shuō)明有3-OH；(2)氯化鍶反應(yīng)棕色，說(shuō)明有鄰二酚羥基。
理化性質(zhì)為黃色結(jié)晶，mp 265～266℃；元素分析測(cè)得值(％)C56.45，H4.07；UVmaxMeOH256，269sh，374；AlCl3259sh，270，334，460；AlCl3/HCl266，303sh，365，430；NaOAc/H3BO3260，289sh，394；NaOAc256，269sh，374；(日本島津UV-260紫外可見(jiàn)分光光度計(jì))。
以上數(shù)據(jù)說(shuō)明本發(fā)明的化合物為典型的黃酮類化合物，在C3-，C5-及C3’-，C4’-位均有羥基，但C7-位應(yīng)無(wú)羥基或雖有羥基但已被保護(hù)。
IR(KBr)cm-13360，說(shuō)明有羥基；1652，說(shuō)明有α，β-不飽和酮；1615、1592、1498，說(shuō)明有苯環(huán)；ESI-MS448[M+]；NMR(三甲基硅醚衍生物，TMS內(nèi)標(biāo))δ6.72(1H，d，J＝2.5Hz，H-6)，6.74(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.84(1H，d，J＝8.5Hz，H-5’)，7.59(2H，質(zhì)子信號(hào)重疊)H-2’和H-6’，5.21(組峰)鼠李糖-H，3.5-4.0(4H)鼠李糖上的4個(gè)H，1.23鼠李糖6-CH3；由以上推出本發(fā)明化合物分子式為C21H20O11。
與以往資料對(duì)比，證明用本發(fā)明方法得到的結(jié)晶物質(zhì)為田基黃苷。
2.高效液相色譜法測(cè)定田基黃苷的純度。
(1)儀器與試藥高效液相色譜儀包括LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外可見(jiàn)檢測(cè)器(日本島津公司)；N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；KQ3200型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。色譜純乙腈(德國(guó)默克公司)；水為三蒸水(自制)；其它試劑均為分析純。田基黃苷標(biāo)準(zhǔn)品(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有效公司提供，含量為99.8％)。6批田基黃苷樣品(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有效公司提供)。
(2)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱迪馬公司C18柱(5μm，250mm×4.6mm，I.D)；流動(dòng)相乙腈-0.1％三氟乙酸(38∶72)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)300nm；理論板數(shù)按田基黃苷峰記算應(yīng)不低于3000。
(3)標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制稱取田基黃標(biāo)準(zhǔn)品適量；置量瓶中，加入上述流動(dòng)相配制成溶液，即得。
(4)供試品溶液的配制精密稱取本發(fā)明化合物5.0mg，置于20ml量瓶中，加入適量上述流動(dòng)相，超聲振蕩使溶解，再用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。
(5)測(cè)定法精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品、供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，用歸一化法計(jì)算含量。
結(jié)果供試品溶液在與田基黃苷標(biāo)準(zhǔn)品相同的保留時(shí)間上有峰出現(xiàn)；且當(dāng)供試品溶液中的田基黃苷的峰型接近“平頭峰”型時(shí)，用歸一化法計(jì)算田基黃苷的含量。結(jié)果見(jiàn)下表1。
表1 田基黃苷純度測(cè)定批號(hào) 含量(％)1 91.42 92.63 92.24 91.35 95.86 96.0以上含量測(cè)定結(jié)果可以看出，本發(fā)明制備方法得到的6批田基黃苷的純度均在90％以上。
三.藥理實(shí)施例實(shí)施例1對(duì)大鼠肝組織脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用實(shí)驗(yàn)藥物田基黃注射液(江西眾鑫藥業(yè)有限公司生產(chǎn))復(fù)方甘草酸單銨注射液(江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司)本發(fā)明水針劑、輸液劑、粉針劑(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)生理鹽水(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD雄性大鼠，體重200-250g。
實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，分為生理鹽水組、CCl4組、田基黃注射液組、復(fù)方甘草酸單銨注射液組、本發(fā)明水針劑組、粉針劑組、輸液組，給藥組給藥量為田基黃注射液給藥量15g生藥/kg，本發(fā)明注射劑給藥量為15g生藥/kg，復(fù)方甘草酸單銨注射液組6ml/kg，生理鹽水組給予等容量的生理鹽水，禁食16小時(shí)后，斷頭放血，迅速取出肝組織，加生理鹽水制成5％勻漿，每試管取勻漿1.5ml，勻漿于37±0.5℃恒溫振蕩反應(yīng)2小時(shí)，加入三氯醋酸1.5ml終止反應(yīng)，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液2ml，以改良的TBA法測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量，計(jì)算MDA生成抑制率，結(jié)果見(jiàn)表2表2對(duì)大鼠肝組織MDA生成的影響組別 MDA生成量 抑制率(nmol/g)(％)生理鹽水組 431.2±52.1 ——田基黃注射液組 357.9±41.6 83.2甘草酸單銨注射液組 410.1±49.2 94.1
本發(fā)明水針劑組 414.8±42.396.2本發(fā)明輸液組 413.5±38.995.9本發(fā)明粉針劑組 413.1±39.995.8結(jié)論本發(fā)明各組制劑對(duì)肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化均有很好的抑制作用，表明本發(fā)明本發(fā)明各組制劑具有一定的護(hù)肝作用。
實(shí)施例2對(duì)CCl4急性肝損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物田基黃注射液(江西眾鑫藥業(yè)有限公司生產(chǎn))CCl4(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)復(fù)方甘草酸單銨注射液(江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司)本發(fā)明水針劑、輸液劑、粉針劑(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)生理鹽水(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)儀器日立7170型自動(dòng)生化分析儀(試劑由日立公司提供)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/C小鼠，體重20-22g，雌雄兼用。
統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)處理采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，并在Pems統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包下進(jìn)行計(jì)算。
實(shí)驗(yàn)方法將小鼠分為生理鹽水組、CCl4組、田基黃注射液組、復(fù)方甘草酸單銨注射液組、本發(fā)明水針劑組、粉針劑組、輸液組，小鼠每天腹腔給藥1次，生理鹽水組、CCl4組給予生理鹽水，給藥組給藥量為田基黃注射液給藥量20g生藥/kg，本發(fā)明注射劑給藥量為20g生藥/kg，復(fù)方甘草酸單銨注射液組9ml/kg，，連續(xù)給藥3天，于第三天除生理鹽水組外，每組均腹腔注射CCl4(20ul/kg)，16小時(shí)后血測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，并肝組織作常規(guī)組織病理學(xué)檢查，結(jié)果見(jiàn)表3表3不同制劑對(duì)CCl4肝損傷ALT和AST的影響動(dòng)物數(shù)組別ALTAST(只)生理鹽水組10 85.7±31.5**109.8±67.9**CCl4組 10 1703.2±981.2 601.2±249.6田基黃注射液組10 1021.8±485.9*369.8±198.6*甘草酸單銨注射液組10 876.3 ±320.6**231.6±55.8**本發(fā)明水針劑組10 806.3±298.3**213.8±50.7**本發(fā)明輸液組 10 811.2±301.9**211.4±48.2**本發(fā)明粉針劑組10 808.7±306.5**214.8±51.3**注與CCl4組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)論注射CCl416小時(shí)后，肝組織和肝功能明顯受損，血清ALT和AST顯著提高，數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明各組制劑均能較好的降低血清中的ALT和AST水平，減輕肝組織的變化和壞死。
實(shí)施例3對(duì)CCl4導(dǎo)致的肝纖維化的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物田基黃注射液(江西眾鑫藥業(yè)有限公司生產(chǎn))CCl4(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)復(fù)方甘草酸單銨注射液(江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司)本發(fā)明水針劑、輸液劑、粉針劑(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)生理鹽水(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)儀器日立7170型自動(dòng)生化分析儀(試劑由日立公司提供)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，體重200-240g，雌雄兼用。
實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，分為生理鹽水組、CCl4組、田基黃注射液組、復(fù)方甘草酸單銨注射液組、本發(fā)明水針劑組、粉針劑組、輸液組，大鼠每天腹腔給藥1次，生理鹽水組、CCl4組給予生理鹽水，給藥組給藥量為田基黃注射液給藥量15g生藥/kg，本發(fā)明注射劑給藥量為15g生藥/kg，復(fù)方甘草酸單銨注射液組6ml/kg，給藥第一天起皮下注射CCl4，每周兩次，每次300ul/kg，生理鹽水組給予等容量的生理鹽水，連續(xù)給藥和CCl48周，末次注射CCl424小時(shí)后，取血測(cè)定ALT、AST、血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量，同時(shí)取肝組織作病理組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4、表5表4不同制劑對(duì)大鼠肝纖維化ALT和AST的影響動(dòng)物數(shù)組別ALT AST(只)生理鹽水組 1050.1±8.7**90.2±14.1**CCl4組10506.3±264.7 241.9±111.8田基黃注射液組 10367.2±241.4*131.6±65.2*甘草酸單銨注射液組 10275.3±126.4**120.3±58.9本發(fā)明水針劑組 10249.8±106.3**105.2±41.3**本發(fā)明輸液組 10244.8±105.6**106.1±42.8**本發(fā)明粉針劑組 10245.7±108.3**103.9±41.1**注與CCl4組比較，*P＜0.05，**P＜0.01表5不同制劑對(duì)大鼠肝纖維化血漿蛋白的影響動(dòng)物數(shù)組別總蛋白白蛋白球蛋白(只)生理鹽水組 1079.97±9.56**40.69±9.01 39.28±8.72CCl4組1061.05±5.97 25.84±4.16 35.21±5.58田基黃注射液組 1067.21±6.16*30.54±5.83 34.67±4.85甘草酸單銨注射液組 1069.75±5.19**35.62±6.14 34.13±5.72本發(fā)明水針劑組 1071.38±5.42**36.12±7.23 34.26±6.81本發(fā)明輸液組 1071.63±5.66**36.49±7.05 34.14±6.55本發(fā)明粉針劑組 1072.42±5.71**36.89±6.98 34.53±5.46注與CCl4組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)論病理學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)大鼠有比較典型的肝纖維化，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明注射制劑可以明顯提高肝纖維化大鼠血漿總蛋白和白蛋白含量，降低球蛋白含量，減輕了肝纖維化程度和肝纖維化發(fā)生率。
實(shí)施例4對(duì)大鼠全身免疫功能影響實(shí)驗(yàn)藥物田基黃注射液(江西眾鑫藥業(yè)有限公司生產(chǎn))復(fù)方甘草酸單銨注射液(江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司)本發(fā)明水針劑、輸液劑、粉針劑(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)生理鹽水(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)滅活金黃色葡萄球菌(廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，體重200-250g，雌雄兼用。
實(shí)驗(yàn)儀器日立7170型自動(dòng)生化分析儀(試劑由日立公司提供)實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，分為生理鹽水組、CCl4組、田基黃注射液組、復(fù)方甘草酸單銨注射液組、本發(fā)明水針劑組、粉針劑組、輸液組，大鼠每天腹腔給藥1次，生理鹽水組、給藥組給藥量為田基黃注射液給藥量15g生藥/kg，本發(fā)明注射劑給藥量為15g生藥/kg，復(fù)方甘草酸單銨注射液組6ml/kg，生理鹽水組給予等容量的生理鹽水，連續(xù)給藥7天，給藥第一天腹腔給滅活金黃色葡萄球菌0.5ml，使大鼠受到感染，第7天給藥后8小時(shí)，取血，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6表6不同制劑對(duì)大鼠全身免疫功能的影響動(dòng)物數(shù) PMN MIT ANAE(+)組別(只)(％)(移行抑制指數(shù))(％)生理鹽水組1075.3±5.7 0.461±0.16270.2±6.0田基黃注射液組1082.6±6.4* 0.431±0.15776.3±3.8*甘草酸單銨注射液組1085.6±7.1**0.452±0.16278.9±3.4**本發(fā)明水針劑組1088.1±7.8**0.453±0.16179.5±4.2**本發(fā)明輸液組 1088.7±8.2**0.456±0.15879.3±5.1**本發(fā)明粉針劑組1088.9±7.9**0.452±0.16579.5±4.8**注與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01PMN外周血中性粒細(xì)胞吞噬功能，計(jì)算油鏡下100個(gè)中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)。
MIT外周血白細(xì)胞移行抑制實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)機(jī)體T淋巴細(xì)胞的功能狀態(tài)。
ANME外周血T淋巴細(xì)胞酸性醋酸奈酯酶檢測(cè)，油鏡下記數(shù)100個(gè)淋巴細(xì)胞中呈ANAE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算百分率，可反映機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫。
結(jié)論從表中數(shù)據(jù)我們可以得到，本發(fā)明制劑均能作用于機(jī)體的免疫器官和免疫細(xì)胞，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化與成熟，從而增強(qiáng)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)作用；能夠增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的吞噬殺菌功能，從而提高機(jī)體抗細(xì)菌感染能力。
通過(guò)以上藥理實(shí)施例表明，本發(fā)明各組制劑與市售同類品種比較具有更好的藥理作用。
五、制備實(shí)施例實(shí)施例1(1)取田基黃10kg，切斷，加6倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至1g生藥/ml；(2)濃縮液上已處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用5倍柱體積水洗脫，再用4倍柱體積50％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(3)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至3，加醋酸乙酯萃取3次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至1g生藥/ml；(4)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(5)將上述沉淀以70％乙醇速洗2次，用甲醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(6)母液重復(fù)步驟(3)(4)(5)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備
(1)水針制劑的制備取田基黃苷2g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷2g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷2g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入甘露醇48g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例2(1)取田基黃10kg，切斷，加8倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至0.5g生藥/ml；(2)濃縮液上已處理好的D101大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用4倍柱體積水洗脫，再用5倍柱體積60％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(3)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至4，加醋酸乙酯萃取4次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至2g生藥/ml；(4)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(5)將上述沉淀以70％乙醇速洗2次，用70％乙醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(6)母液重復(fù)步驟(3)(4)(5)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷4g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷4g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷4g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入甘露醇46g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例3(1)取田基黃10kg，切斷，加10倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至0.5g生藥/ml；(2)濃縮液上已處理好的NKA-9大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用3倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積70％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(3)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至3.5，加醋酸乙酯萃取3次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至1.5g生藥/ml；(4)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(5)將上述沉淀以70％乙醇速洗1次，用70％乙醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(6)母液重復(fù)步驟(3)(4)(5)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷5g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷5g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷5g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入乳糖45g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例4(1)取田基黃10kg，切斷，加8倍量的水煎煮三次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至1g生藥/ml；(2)濃縮液上已處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用4倍柱體積水洗脫，再用5倍柱體積55％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(3)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至4，加醋酸乙酯萃取4次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至2g生藥/ml；(4)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(5)將上述沉淀以70％乙醇速洗2次，用甲醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(6)母液重復(fù)步驟(3)(4)(5)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷8g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷8g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷8g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入葡聚糖42g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例5(1)取田基黃10kg，切斷，加10倍量的水煎煮三次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至1g生藥/ml；(2)濃縮液上已處理好的D101大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用3倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積65％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(3)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至3，加醋酸乙酯萃取4次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至1g生藥/ml；(4)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH3，放置沉淀，濾取沉淀；(5)將上述沉淀以70％乙醇速洗2次，用70％乙醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
(6)母液重復(fù)步驟(3)(4)(5)，分離結(jié)晶，得田基黃苷化合物。
制劑的制備水針制劑的制備取田基黃苷10g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
輸液制劑的制備取田基黃苷10g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
粉針制劑的制備取田基黃苷10g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入乳糖40g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例6(1)取田基黃10kg，切斷，加6倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至4g生藥/ml，加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得乙醇濃縮液；(2)將濃縮液加水稀釋至1g生藥/ml，高速離心，離心液用截留分子量1000的超濾膜超濾，超濾液過(guò)已處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，先用4柱體積的水洗，再換用4倍柱體積的60％醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用水溶解，，用填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠(C-8)，微粒直徑為15μm的制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，用水-無(wú)水乙醇(30∶70)溶液洗脫，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，收集富含田基黃苷的洗脫液，回收乙醇并濃縮，以70％乙醇重結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷純品，測(cè)得田基黃苷含量≥97％。
(4)制劑的制備水針制劑的制備取田基黃苷純品2g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
輸液制劑的制備取田基黃苷純品2g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
粉針制劑的制備取田基黃苷純品2g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入甘露醇48g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例7(1)取田基黃10kg，切斷，加8倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至4g生藥/ml，加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得乙醇濃縮液；(2)將濃縮液加水稀釋至1g生藥/ml，高速離心，離心液用截留分子量3000的超濾膜超濾，超濾液過(guò)已處理好的D101大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積的水洗，再換用5倍柱體積的50％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用水溶解，，用填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠(C-8)，微粒直徑為15μm的制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，用水-無(wú)水乙醇(20∶80)溶液洗脫，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，收集富含田基黃苷的洗脫液，回收乙醇并濃縮，以70％乙醇重結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷純品，測(cè)得田基黃苷含量≥97％。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷純品5g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷純品5g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷純品5g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入乳糖45g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例8(1)取田基黃10kg，切斷，加6倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至4g生藥/ml，加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得乙醇濃縮液；(2)將濃縮液加水稀釋至1g生藥/ml，高速離心，離心液用截留分子量1000的超濾膜超濾，超濾液過(guò)已處理好的NKA大孔吸附樹(shù)脂柱，先用5倍柱體積的水洗，再換用3倍柱體積的70％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用水溶解，，用填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠(C-8)，微粒直徑為15μm的制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，用水-無(wú)水乙醇(40∶60)溶液洗脫，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，用制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，收集富含田基黃苷的洗脫液，濃縮。回收乙醇并濃縮，以70％乙醇重結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷純品，測(cè)得田基黃苷含量≥97％。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷純品10g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷純品10g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷純品10g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入葡聚糖40g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例9(1)取田基黃10kg，切斷，加6倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至4g生藥/ml，加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得乙醇濃縮液；(2)將濃縮液加水稀釋至1g生藥/ml，高速離心，離心液用截留分子量3000的超濾膜超濾，超濾液過(guò)已處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3柱體積的水洗，再換用4倍柱體積的60％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用水溶解，，用填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠(C-8)，微粒直徑為15μm的制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，用水-無(wú)水乙醇(50∶50)溶液洗脫，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，收集富含田基黃苷的洗脫液，濃縮?；厥找掖疾饪s，以70％乙醇重結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷純品，測(cè)得田基黃苷含量≥97％。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷純品8g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷純品8g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷純品8g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入甘露醇42g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
實(shí)施例10(1)取田基黃10kg，切斷，加8倍量的水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至4g生藥/ml，加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得乙醇濃縮液；(2)將濃縮液加水稀釋至1g生藥/ml，高速離心，離心液用截留分子量3000的超濾膜超濾，超濾液過(guò)已處理好的D101大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積的水洗，再換用5倍柱體積的50％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用水溶解，，用填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠(C-8)，微粒直徑為15μm的制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離，用水-無(wú)水乙醇(30∶70)溶液洗脫，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，并用HPLC對(duì)洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，收集富含田基黃苷的洗脫液，濃回收乙醇并濃縮，以70％乙醇重結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷純品，測(cè)得田基黃苷含量≥97％。
制劑的制備(1)水針制劑的制備取田基黃苷純品4g用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑1000支。
(2)輸液制劑的制備取田基黃苷純品4g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑100瓶。
(3)粉針制劑的制備取田基黃苷純品4g用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入乳糖46g，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑1000瓶。
權(quán)利要求
1.一種分子式為(I)的田基黃苷化合物， R1＝鼠李糖并以田基黃苷化合物為活性成分制備的藥物制劑，其劑型包括水針劑、輸液劑、粉針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的田基黃苷化合物的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥為田基黃；(2)取田基黃，切斷，加6-10倍量的水煎煮二至三次，每次1小時(shí)，合并煎液，減壓濃縮至0.5-1g生藥/ml；(3)濃縮液上已處理好的大孔吸附樹(shù)脂吸附，先用3-5倍柱體積水洗脫，再用4-6倍柱體積50％-70％乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓回收乙醇并濃縮至2g生藥/ml；(4)乙醇濃縮液加酸調(diào)pH值至3-4，加醋酸乙酯萃取3-4次，分取醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至1-2g生藥/ml；(5)醋酸乙酯濃縮液加5％碳酸鈉溶液萃取二次，分取碳酸鈉溶液，加酸酸化至pH 3，放置沉淀，濾取沉淀；(6)沉淀以70％乙醇速洗1-2次，用甲醇或70％乙醇熱溶，放置結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶低溫干燥，得田基黃苷化合物，測(cè)得田基黃苷含量≥90％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以田基黃苷化合物為活性成分制備的藥物制劑，其特征在于制備方法包括如下步驟(1)水針制劑的制備將上述田基黃苷2-10重量份用少量注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉或葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成水針制劑；(2)輸液制劑的制備將上述田基黃2-10重量份苷用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，用碳酸鈉或葡甲胺調(diào)pH值為5.5-6.5，過(guò)濾，滅菌，制備成輸液制劑；(3)粉針制劑的制備將上述田基黃苷2-10重量份用注射用水溶解，再加注射用水至規(guī)定量，加入賦形劑40-48重量份，調(diào)pH值為5.5-6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，包裝得到粉針制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑在制備治療肝炎的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種田基黃苷化合物及其制備方法與應(yīng)用，其特征在于從中藥田基黃中分離、純化得到有效成分田基黃苷，將田基黃苷與藥用輔料混合，制備成注射制劑，包括水針劑、輸液劑、粉針劑；其特征還在于所得到的田基黃苷純度不低于90％；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的田基黃苷制劑，對(duì)病毒性肝炎具有良好的治療作用。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1634956SQ20041009139
公開(kāi)日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2004年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月25日
發(fā)明者張平 申請(qǐng)人:張平