專利名稱：一種獨一味凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種獨一味凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
獨一味[Lamiophlomis Rotata(Benth.)Kudo]為唇形科獨一味屬植物，又名獨步通，是藏、蒙、納西等民族民間草藥，具有止血、鎮(zhèn)痛、活血化瘀、抗菌消炎、增強免疫力等作用。在我國一千多年前的藏醫(yī)學(xué)名著《四部醫(yī)典》和《晶珠本草》中就已有記載。藏醫(yī)將其用于骨髓炎、關(guān)節(jié)黃水病、骨折、跌傷、槍傷等。
近年來，隨著對民族藥開發(fā)的不斷深入，研制了獨一味的膠囊、片劑等劑型，臨床使用越來越廣泛。該藥在止血鎮(zhèn)痛消炎等方面的獨到療效，受到了廣大患者和醫(yī)務(wù)人員的歡迎。目前獨一味主要有以下兩方面的功效已得到證實和應(yīng)用一.止血、鎮(zhèn)痛和抗菌消炎。用于多種外科手術(shù)后的刀口疼痛出血，外傷骨折，筋骨扭傷，風(fēng)濕痹痛以及崩漏、痛經(jīng)、牙齦腫痛、出血等。臨床觀察亦表明，使用獨一味的患者無一例發(fā)生感染和任何不良反應(yīng)，說明該藥有一定的抗菌能力，使用安全。用于鎮(zhèn)痛的藥用植物主要是罌粟類、莨菪類、毛茛類原藥，其中罌粟類具有較強的成癮性，而莨菪類與毛茛類又具有明顯的毒副作用。獨一味屬于唇形科植物，唇形科植物的毒副作用一般較小，且兼有止血、鎮(zhèn)痛和抗感染作用，這在所有天然藥物中都是難得的。二.提高特異性和非特異性免疫。免疫功能的實驗表明，獨一味能顯著提高巨噬細胞吞噬率、巨噬細胞吞噬指數(shù)、E-花環(huán)形成率及酯酶染色陽性率，表明獨一味有顯著提高非特異性免疫和特異性細胞免疫的作用。臨床用此藥單味治療帶狀皰疹療效確切，有效率高。另外，也試用于腫瘤和血液病患者，發(fā)現(xiàn)有扶正固本和提高免疫功能。
獨一味膠囊和片劑都采用了傳統(tǒng)的水煎煮提取工藝，沒有對獨一味提取物進行純化處理，因而雜質(zhì)含量高，而且膠囊和片劑都是口服固體制劑，起效慢，生物利用度相對較低，另外對于一些剛做完外科手術(shù)的病人，往往吞咽困難，這些也限制了口服固體制劑的應(yīng)用。
專利檢索未發(fā)現(xiàn)任何有關(guān)獨一味凍干粉針劑的專利。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本發(fā)明采用乙醇回流提取、離心、超濾、并用大孔樹脂進行分離純化得到獨一味有效部位，獨一味有效部位與藥用輔料混合制備成凍干粉針劑。
本發(fā)明的目的是制備一種有效成分含量高、療效確切、方便使用的獨一味凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
一.工藝制法(1)原料藥獨一味；(2)取獨一味加8-12倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用2-4倍柱體積的水洗脫后，先用3-5倍柱體積40％-60％乙醇洗脫，再用2倍柱體積70％-80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位；(3)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位0.5-2.3重量份，藥用輔料3-18重量份；(4)取上述獨一味有效部位和藥用輔料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
超濾技術(shù)是指常溫下以一定壓力和流量，利用不對稱微孔結(jié)構(gòu)和半透膜分離介質(zhì)、以錯流方式進行過濾，使溶劑及小分子物質(zhì)通過，高分子物質(zhì)和微粒子如蛋白質(zhì)、水溶性高聚物、細菌等被濾膜阻留，從而達到分離、純化、濃縮的發(fā)展最快的新型膜分離技術(shù)，超濾膜通過分子選擇性截留除去藥液中的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和大分子的糖類等雜質(zhì)，同時能有效除細菌和熱源，改善注射液的澄明度、提高制劑質(zhì)量。本發(fā)明采取乙醇回流提取、離心、超濾和大孔樹脂分離純化得到獨一味有效部位，使得采用本發(fā)明制備的獨一味有效部位總黃酮含量以蘆丁計含量達到40％-50％，總皂苷含量達到30％-40％。本發(fā)明制得的凍干粉有效成分純度高且具有較好的穩(wěn)定性。藥理實驗表明本發(fā)明的獨一味凍干粉針劑具有更好的藥理作用。
二.制劑的檢測分析1.制劑中總黃酮的含量測定總黃酮的含量測定方法參照獨一味片(中國藥典2002增補本第5頁)質(zhì)量標(biāo)準中含量測定項下的方法進行測定。試藥本發(fā)明獨一味凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供，含生藥量同獨一味片)；獨一味片(廣州白云山制藥總廠)；獨一味膠囊(甘肅獨一味生物制藥有限責(zé)任公司)；結(jié)果見表1。
表1制劑中總黃酮(以無水蘆丁計)含量測定 2.制劑中總皂苷的含量測定
2.1儀器與試藥Hitach UV2400紫外分光光度計；本發(fā)明獨一味凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供，含生藥量同獨一味片)；獨一味片(廣州白云山制藥總廠)；獨一味膠囊(甘肅獨一味生物制藥有限責(zé)任公司)；獨一味苷對照品(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，純度經(jīng)HPLC歸一化法檢測為99.7％)。
2.2實驗方法總皂苷的含量測定參照文獻方法[宋玉成等.藏藥獨一味中總黃酮及總皂甙的含量測定，甘肅中醫(yī).16(3)，200342-43]進行測定，結(jié)果見表2。
表2制劑中總皂苷含量測定 結(jié)論以上含量測定結(jié)果說明，本發(fā)明的獨一味凍干粉針劑的有效成分總黃酮的含量明顯高于獨一味片和膠囊的總黃酮含量，總皂苷平均含量無顯著差異，但本發(fā)明凍干粉由于采用有效部位配制制劑，凍干粉的有效成分總黃酮和總皂苷含量批之間差異小，更能保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，說明本發(fā)明的制備方法更加科學(xué)合理。
三.獨一味有效部位的檢測分析1.實驗藥物提取物1(按中國藥典2002增補本獨一味片的提取方法制備)獨一味有效部位(按本發(fā)明制備工藝備，廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供)2.實驗方法總黃酮的含量測定方法參照獨一味片(中國藥典2002增補本第5頁)質(zhì)量標(biāo)準中含量測定項下的方法進行測定，總皂苷的含量測定方法參照文獻方法[宋玉成等.藏藥獨一味中總黃酮及總皂甙的含量測定，甘肅中醫(yī).16(3)，200342-43]進行測定，結(jié)果見表3。
表3各組提取物的總黃酮和總皂苷含量比較提取物1 獨一味有效部位組別1 2 3 1 2 3總黃酮百分含量(％) 12.7 14.5 17.945.4 44.8 43.0總皂苷百分含量(％) 16.4 13.0 19.234.6 36.3 35.5結(jié)論通過上述檢測分析實驗我們可以得知本發(fā)明獨一味有效部位中有效成分百分含量顯著提高，提取物中其它雜質(zhì)顯著減少，說明本發(fā)明具有實際意義，更加符合藥物劑型發(fā)展的需要。
四.藥理實施例試藥與動物本發(fā)明獨一味凍干粉(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供)；獨一味膠囊(甘肅獨一味生物制藥有限責(zé)任公司)；昆明種小鼠，體重20±2g。
1.抗炎作用1.1對小鼠耳二甲苯致炎的影響取體重20±2g小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，即空白對照組(0.5ml蒸餾水灌胃)、獨一味膠囊組(10g生藥/kg，5g生藥/kg)，本發(fā)明凍干粉組(10g生藥/kg，5g生藥/kg)，每組10只，連續(xù)給藥3天(膠囊組灌胃給藥，凍干粉組腹腔注射給藥)，于末次給藥后30min，將二甲苯0.02ml涂于小鼠左耳，1h后脫臼處死小鼠，剪下二耳，打孔稱重，以左耳與右耳片重量差值為腫脹度，結(jié)果見表4。
表4對小鼠耳二甲苯致炎的影響結(jié)果(X±SD)組別 劑量 腫脹度差值(mg)對照組 7.8±1.4獨一味膠囊組 10g生藥/kg3.8±1.2*獨一味膠囊組 5g生藥/kg 5.2±1.6本發(fā)明獨一味凍干粉10g生藥/kg3.9±1.2*本發(fā)明獨一味凍干粉5g生藥/kg 3.1±0.9*注*與對照組比較*P＜0.01結(jié)果表明獨一味制劑具有良好的抗炎作用，其中本發(fā)明凍干粉針劑的效果明顯好于獨一味膠囊組。
2.鎮(zhèn)痛試驗2.1對小鼠熱板致痛作用的影響取體重20±2g雌性小鼠50只，隨機分為5組，即空白對照組(0.5ml蒸餾水灌胃)、獨一味膠囊組(10g生藥/kg，5g生藥/kg)，本發(fā)明凍干粉組(10g生藥/kg，5g生藥/kg)，每組10只，連續(xù)給藥3天(膠囊組灌胃給藥，凍干粉組腹腔注射給藥)，末次給藥后1h將各鼠分別固定于55±0.5℃的熱板儀中，以舔后足作為“疼痛”的反應(yīng)指標(biāo)，觀察給藥后小鼠對熱板痛的反應(yīng)時間，結(jié)果見表52.2對醋酸引起的扭體反應(yīng)的影響取體重20±2g小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同1.1，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1h，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g體重，觀察10min內(nèi)的小鼠扭體次數(shù)，結(jié)果見表5表5鎮(zhèn)痛試驗結(jié)果(X±SD)痛閾值(s)組別 劑量熱板痛反應(yīng)時間(s)扭體次數(shù)對照組11.7±4.328.5±40獨一味膠囊組 10g生藥/kg 16.8±4.718.5±33獨一味膠囊組 5g生藥/kg 15.0±3.821.0±2.6本發(fā)明獨一味凍干粉10g生藥/kg 19.1±3.1*13.4±2.1*本發(fā)明獨一味凍干粉5g生藥/kg 17.3±2.215.0±2.5*注與對照組比較*P＜0.01
試驗結(jié)果表明獨一味制劑具有較好的鎮(zhèn)痛作用，其中本發(fā)明凍干粉針劑的鎮(zhèn)痛作用比獨一味膠囊的作用更為顯著。
3.止血作用3.1對小鼠出血時間的影響取體重20±2g小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同1.1，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30min將小鼠尾尖端3mm處剪斷，待血液自行流出開始計時，每隔30s用濾紙吸去血滴1次，直至血流自行停止(濾紙吸無血)為止，計算出血時間，結(jié)果見表6。
表6對小鼠出血時間的影響(X±SD)組別 劑量 出血時間(s)對照組 12.6±3.4獨一味膠囊組 10g生藥/kg7.9±1.7*獨一味膠囊組 5g生藥/kg 8.2±2.0*本發(fā)明獨一味凍干粉10g生藥/kg6.5±1.5*本發(fā)明獨一味凍干粉5g生藥/kg 7.7±1.8*注與對照組比較*P＜0.01試驗結(jié)果表明獨一味制劑具有顯著的止血作用，其中本發(fā)明凍干粉的止血效果好于獨一味膠囊組。
六、制備實施例實施例1(1)取獨一味1000g加10倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為1000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用3倍柱體積的水洗脫后，先用4倍柱體積50％乙醇洗脫，再用2倍柱體積70％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位11.2g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位11.2重量份，甘露醇90重量份；(3)取上述獨一味有效部位和甘露醇混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例2(1)取獨一味1000g加12倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為3000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用2倍柱體積的水洗脫后，先用3倍柱體積40％乙醇洗脫，再用2倍柱體積75％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位12g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位12g，乳糖88g；(3)取上述獨一味有效部位和乳糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例3(1)取獨一味500g加8倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為1000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用4倍柱體積的水洗脫后，先用3倍柱體積60％乙醇水溶液洗脫，再用2倍柱體積80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位5g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位5g，葡萄糖50g；
(3)取上述獨一味有效部位和葡萄糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例4(1)取獨一味500g加10倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為3000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用3倍柱體積的水洗脫后，先用5倍柱體積50％乙醇洗脫，再用2倍柱體積75％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位6.3g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位6.3g，甘露醇30g；(3)取上述獨一味有效部位和藥用輔料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例5(1)取獨一味1500g加10倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為1000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用4倍柱體積的水洗脫后，先用3倍柱體積45％乙醇洗脫，再用2倍柱體積70％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位17.5g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位17.5g，葡聚糖125g；(3)取上述獨一味有效部位和葡聚糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例6(1)取獨一味2000g加12倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，離心液過截留分子量為3000的中空纖維柱超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用2倍柱體積的水洗脫后，先用5倍柱體積55％乙醇水溶液洗脫，再用2倍柱體積80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位23g；(2)本發(fā)明的制劑的處方為獨一味有效部位23g，乳糖180g；(3)取上述獨一味有效部位和乳糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
權(quán)利要求
1.一種獨一味凍干粉針劑，其特征在于它是由獨一味經(jīng)醇提，超濾、和大孔吸附樹脂柱純化得到的有效部位0.5-2.3重量份和藥用輔料3-18重量份制備而成，其中獨一味有效部位的總黃酮和總皂苷含量分別為40％-50％和30％-40％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨一味凍干粉針劑，其制備方法包括以下步驟(1)取獨一味加8-12倍量70％乙醇回流提取二次，每次1h，合并乙醇回流液，減壓回收乙醇并濃縮至0.5g生藥/ml，高速離心，超濾，超濾液上已處理好的大孔吸附樹脂柱吸附，用2-4倍柱體積的水洗脫后，先用3-5倍柱體積40％-60％乙醇洗脫，再用2倍柱體積70％-80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到獨一味有效部位；(2)取上述獨一味有效部位和藥用輔料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，過濾，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的獨一味凍干粉針劑，凍干填充劑為甘露醇或乳糖或葡聚糖或葡萄糖中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的獨一味凍干粉針劑，其中大孔吸附樹脂為非極性或弱極性。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的獨一味凍干粉針劑，其中大孔吸附樹脂洗脫的乙醇濃度依次為45％-55％和70％-75％。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的獨一味凍干粉針劑，其中超濾膜截留分子量為10000-30000。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種獨一味凍干粉針劑及其制備方法，其特征在于獨一味用乙醇回流提取，高速離心、超濾、上大孔樹脂分離純化得到獨一味有效部位，其中獨一味有效部位中總黃酮和總皂苷的含量分別為40％－50％和30％－40％，將獨一味有效部位與藥用輔料混合，制備成凍干粉針劑。藥理實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的凍干粉針劑具有較好的藥理作用。
文檔編號A61P7/00GK1634457SQ20041009139
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月25日
發(fā)明者張平 申請人:張平