專利名稱：一種奈達(dá)鉑凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，更具體的說(shuō)是通過高效液相色譜法檢測(cè)奈達(dá)鉬凍干粉針劑生產(chǎn)過程中或者是最終成品中雜質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
奈達(dá)鉬屬抗腫瘤藥，于1995年6月首次獲準(zhǔn)上市，用于治療頭頸部腫瘤、小細(xì)胞和 非小細(xì)胞肺癌、食道癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、子宮頸癌。奈達(dá)鉬(Nedaplatin)的毒性譜 與順鉬不同，其劑量限制性毒性為骨髓抑制所致的血小板減少。但其腎毒性和胃腸道副反 應(yīng)與順鉬比較有所降低，無(wú)交叉耐藥性，選擇性釋放藥物及良好的可溶性等優(yōu)點(diǎn)。臨床試驗(yàn) 中發(fā)現(xiàn)奈達(dá)鉬對(duì)廣泛實(shí)體瘤有效，對(duì)頭頸部腫瘤40%以上的有效率，優(yōu)于順鉬，對(duì)食道癌有 效率大于50%，較順鉬高約20%，對(duì)子宮頸癌也有40%以上的有效率，為這些腫瘤患者提供了 新的有效的臨床選擇。奈達(dá)鉬凍干粉針劑中活性成分峰在傳統(tǒng)的色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中保留時(shí)間很短，雜質(zhì)很 難分開，且色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定性差，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素的輕微變化就會(huì)對(duì) 于檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大影響，甚至不能適用于相關(guān)雜質(zhì)的檢出。同時(shí)，傳統(tǒng)的色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)需 要較長(zhǎng)的平衡時(shí)間，而且對(duì)傳統(tǒng)的色譜柱損傷很大，耗費(fèi)成本較大，必須摸索出一種合理的 色譜系統(tǒng)，制訂出簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定的雜質(zhì)檢驗(yàn)方法，以便有效地控制本品質(zhì)量。CN200910094394. 0公開了鉬類抗癌藥物順鉬、奧沙利鉬、奈達(dá)鉬等涉及產(chǎn)生碘化 銀沉淀鉬配合物制備過程中銀的控制方法，沒有對(duì)上述技術(shù)缺陷的改進(jìn)建議。CN200710020343. 4公開了一種含銀量極低的奈達(dá)鉬的制備方法，沒有對(duì)上述技術(shù) 缺陷的改進(jìn)建議。CN200710020326. 0公開了一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的制備方法，其中采用的色譜檢 驗(yàn)系統(tǒng)中保留時(shí)間較短，雜質(zhì)分離不理想，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定性不佳，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及 色譜柱等因素對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響較大。CN200710022407. 4公開了一種精制奈達(dá)鉬的方法，沒有對(duì)上述技術(shù)缺陷的改進(jìn)建 議。CN200810058604. 6 及 CN200910094048. 2 公開了抗腫瘤藥物奈達(dá)鉬 C2H8N2O3Pt 的 制備方法，沒有對(duì)上述技術(shù)缺陷的改進(jìn)建議?！稛o(wú)機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào)》2009年8期1375 1378頁(yè)報(bào)道了奈達(dá)鉬的新合成方法、晶體結(jié) 構(gòu)和熱穩(wěn)定性，沒有對(duì)上述技術(shù)缺陷的改進(jìn)建議。《藥物分析雜志》2008年1期131 133頁(yè)報(bào)道了用RP—HPLC法測(cè)定注射用奈達(dá) 鉬含量及有關(guān)物質(zhì)的方法，其中采用的色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中保留時(shí)間較短(4min左右)，雜質(zhì)分 離不夠理想，由于添加了較多量的枸櫞酸，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)需要較長(zhǎng)的平衡時(shí)間，且穩(wěn)定性不 佳，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響較大。《中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志》2000年31卷10期457 458頁(yè)報(bào)道了奈達(dá)鉬的HPLC測(cè)定 法，以高效液相色譜法測(cè)定奈達(dá)鉬的含量。采用SpherisorbNH2柱，以40mmol/L磷酸二氫鉀一乙腈(8:2)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。奈達(dá)鉬的保留時(shí)間雖有延長(zhǎng)，但奈達(dá)鉬與有 關(guān)物質(zhì)(即雜質(zhì))僅能初步分離，雜質(zhì)檢出個(gè)數(shù)較少，存在有害雜質(zhì)未檢出可能給患者臨床 用藥安全帶來(lái)的隱患。另外，使用了成本更高的NH2柱，同時(shí)以較高濃度的鹽溶液作為流動(dòng) 相，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)需要很長(zhǎng)的平衡時(shí)間，該流動(dòng)相而且對(duì)NH2柱損傷很大，耗費(fèi)成本較大。《BiomedicalResearchonTraceElements》1993 年 4 (2)期中 49 50 頁(yè) 《HPLC/ICP-AESmethodforthesimultaneousdeterminationofcis-diammine(glycolato) platinumanditsmetaboliteinurine))中報(bào)道了采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測(cè) 定順鉬及其代謝物的方法，沒有對(duì)上述技術(shù)缺陷的改進(jìn)建議?，F(xiàn)有公知技術(shù)均沒有對(duì)以上缺陷提出改善的建議。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)以上不足之處提供一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，通過該方法可以延長(zhǎng)奈達(dá)鉬凍干粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中的保留時(shí)間，將雜 質(zhì)更好的分開，減小流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響，縮短色 譜檢驗(yàn)系統(tǒng)平衡時(shí)間，提高色譜柱的耐用性，從而在降低檢測(cè)成本的同時(shí)可以簡(jiǎn)便、快速、 穩(wěn)定的檢測(cè)奈達(dá)鉬原料中的雜質(zhì)，以便有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，避免了有害雜質(zhì)未檢出可能 給患者臨床用藥安全帶來(lái)的隱患。奈達(dá)鉬的化學(xué)名稱為(Z) —二氨(羥基乙酸-01，-02，)鉬，結(jié)構(gòu)式為
分子式=C2H8N2O3Pt 分子量303. 18。本發(fā)明通過高效液相色譜法檢測(cè)奈達(dá)鉬凍干粉針劑中的雜質(zhì)，采用辛烷基硅烷鍵 合硅膠為填充劑，可以延長(zhǎng)奈達(dá)鉬凍干粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中的保留時(shí) 間，將雜質(zhì)更好的分開。流動(dòng)相對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中雜質(zhì)的分離度及峰形有很大影響，在傳統(tǒng)色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中， 流動(dòng)相比例或PH值的輕微變化就會(huì)對(duì)于檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大影響，甚至不能適用于相關(guān)雜 質(zhì)的檢出。經(jīng)發(fā)明人研究實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以水與乙腈或甲醇的混合物(體積比例為60 40 99 1)為流動(dòng)相檢測(cè)奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)效果很好。更進(jìn)一步的研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)水與乙 腈或甲醇混合物的體積比例為70 30 99 1)為流動(dòng)相效果更好，在流動(dòng)相中加入二乙胺 或三乙胺可以提高雜質(zhì)的分離度并改善峰形，且以添加流動(dòng)相總體積0. 005% 0. 量 的二乙胺或三乙胺為佳。采用這樣的色譜條件，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對(duì) 于檢測(cè)結(jié)果的影響極小，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)平衡時(shí)間被大大縮短，同時(shí)提高了色譜柱的耐用性， 在降低檢測(cè)成本的同時(shí)可以簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定的檢測(cè)奈達(dá)鉬凍干粉針劑中的雜質(zhì)。奈達(dá)鉬溶液穩(wěn)定性較差，采用傳統(tǒng)色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)，不論是采用水還是流動(dòng)相作為 溶劑，隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)雜質(zhì)明顯增加，即便是在2 8°C的低溫條件下保存也是如此， 另外，奈達(dá)鉬凍干粉針劑中使用了右旋糖酐作為骨架劑，右旋糖酐是一定分子量范圍內(nèi)的混合聚合物，在色譜檢測(cè)系統(tǒng)中表現(xiàn)為多個(gè)雜峰，且不同批次的右旋糖酐出峰位置及大小 差異較大，很難與奈達(dá)鉬凍干粉針劑的主峰及雜質(zhì)峰分開，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，經(jīng) 發(fā)明人研究實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明的水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L 的磷酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成適當(dāng)濃度的奈達(dá)鉬溶液，具體的就 是含奈達(dá)鉬濃度為0. 5 2mg/ml的溶液，過濾并置2 8°C條件下避光保存，由于濾除了不 溶于該混合溶劑的輔料，可以很好的消除骨架劑右旋糖酐對(duì)雜質(zhì)檢測(cè)的干擾，同時(shí)顯著提 高了其穩(wěn)定性，雜質(zhì)無(wú)明顯增加，這給大量樣品的連續(xù)檢測(cè)提供了方便，比如可以采用可以 控制樣品溫度的自動(dòng)進(jìn)樣液相色譜系統(tǒng)，從而實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守下的大量樣品連續(xù)進(jìn)樣。本發(fā)明提供的一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，具體如下
1)采用高效液相色譜法，其色譜條件為以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為 添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物，水與乙腈或甲醇的體積比例為60 : 40 99 :1，二乙胺或三乙胺的添加量是水與乙腈或甲醇混合物總體積的0.005% 0. 1%； 檢測(cè)波長(zhǎng)為205 222nm ；柱溫為20 45°C ；流動(dòng)相流速為0. 5 2. Oml/min ；
2)樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0.05mol/L的磷酸 調(diào)節(jié)pH至5. 6)將樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 5 2mg/ml的溶液，過濾并置2 8°C條件下 避光保存；
3)測(cè)定將5μ L 20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述流動(dòng)相水與乙腈或甲醇的體積比例 為 70 30 99 :1。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述流動(dòng)相添加了水與乙腈或甲醇混合 物總體積0. 01% 0. 的二乙胺或三乙胺。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述檢測(cè)波長(zhǎng)為210 222nm。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述柱溫為30 45°C。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述柱溫為40°C。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述流動(dòng)相流速為0. 8 1. 2ml/min。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，所述流動(dòng)相流速為1. Oml/min。一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制為含奈達(dá) 鉬lmg/ml的溶液，過濾并置2 8°C條件下避光保存。本發(fā)明一種奈達(dá)鉬凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，通過該方法可以延長(zhǎng)奈達(dá)鉬凍干 粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)中的保留時(shí)間，很好的消除骨架劑右旋糖酐對(duì)對(duì)雜質(zhì) 檢測(cè)的干擾，可以將雜質(zhì)更好的分開，減小流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對(duì)于檢 測(cè)結(jié)果的影響，縮短色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)平衡時(shí)間，提高色譜柱的耐用性，從而在降低檢測(cè)成本的 同時(shí)可以簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定的檢測(cè)奈達(dá)鉬凍干粉針劑中的雜質(zhì)，以便有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量， 避免了有害雜質(zhì)未檢出可能給患者臨床用藥安全帶來(lái)的隱患。


圖1 按照實(shí)施例1進(jìn)行奈達(dá)鉬凍干粉針劑雜質(zhì)檢測(cè)的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該正確理解的是本發(fā)明的實(shí)施例僅僅是用于說(shuō)明本發(fā)明而給出，而不是對(duì)本發(fā)明的限制，所以，在本發(fā)明的方法前提下對(duì)本發(fā)明 的簡(jiǎn)單改進(jìn)均屬本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。以下實(shí)施例中檢測(cè)所用奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品均由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提 供，批號(hào)為20080501S。實(shí)施例1
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比80 :20)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的二乙胺；
柱溫:45°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，色譜圖見圖 1。檢測(cè)結(jié)果表明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例2
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比90 10)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的三乙胺； 柱溫:40°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例3
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比70 30)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的二乙胺； 柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)205nm。
樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬2mg/ml的溶液，過濾并置 2 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例4
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比70 30)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的三乙胺； 柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)222nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬2mg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例5:
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比65 35)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的三乙胺； 柱溫:35°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例6
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比60 40)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的二乙胺； 柱溫:45°C ； 流速1. 2ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0.05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 6 °C條件下避光保存；
測(cè)定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例7
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比80 :20)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的三乙胺；
柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)222nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬1. 5mg/ml的溶液，過濾并置 4°C條件下避光保存；
測(cè)定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例8
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比60 :40)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的二乙胺；
柱溫:45°C ； 流速1. 2ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬2mg/ml的溶液，過濾并置 6 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例9
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比80 20)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的二乙胺； 柱溫:20V ； 流速0. 5ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例10
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比99 :1)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 01% 的三乙胺；
柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例11
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比70 30)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的二乙胺； 柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 4°C條件下避光保存；
測(cè)定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例12
儀器SHIMADZULC-10AT高效 液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比80 20)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的三乙胺； 柱溫:40°C ； 流速2. Oml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)222nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 8mg/ml的溶液，過濾并置 4°C條件下避光保存；
測(cè)定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例13
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_甲醇(體積比60 40)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的三乙胺； 柱溫:25°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 6 °C條件下避光保存；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例14
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比85 15)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的二乙胺； 柱溫:20°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)222nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 8mg/ml的溶液，過濾并置 6 °C條件下避光保存；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例I5
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水_乙腈(體積比60 :40)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的三乙胺；
柱溫:30°C ； 流速0. 5ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。
樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)PH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例16
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動(dòng)相以水-甲醇(體積比99 1)配制混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的二乙胺； 柱溫:30°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，并用0. 05mol/L的磷 酸調(diào)節(jié)pH至5. 6)將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬lmg/ml的溶液，過濾并置 8 °C條件下避光保存；
測(cè)定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果表 明各項(xiàng)雜質(zhì)分離良好。實(shí)施例17
CN200710020326. O提供的奈達(dá)鉬雜質(zhì)檢測(cè)方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀； 色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6 X 250mm，5 μ m)；
流動(dòng)相以甲醇一 O.Olmol/L枸櫞酸溶液(體積比30:70)(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.0) 為流動(dòng)相；
柱溫:40°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用流動(dòng)相將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬Img/ ml的溶液；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)中發(fā)現(xiàn) 奈達(dá)鉬保留時(shí)間較短，雜質(zhì)分離不理想，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定性不佳，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色 譜柱等因素對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響較大。實(shí)施例I8
《藥物分析雜志》2008年1期131 133頁(yè)提供的用RP—HPLC法測(cè)定奈達(dá)鉬雜質(zhì)的方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀；
色譜柱Shim-packCLC-0DS 不銹鋼柱(4. 6 X 150mm，5 μ m)；
流動(dòng)相以甲醇一 O.Olmol/L枸櫞酸溶液(體積比30:70)(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.0)為流動(dòng)相；
柱溫:30°C ； 流速0. 7ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。樣品溶液的配制采用流動(dòng)相將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬Img/ ml的溶液；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)中發(fā)現(xiàn) 奈達(dá)鉬保留時(shí)間較短(4min左右)，雜質(zhì)分離不夠理想，由于添加了較多量的枸櫞酸，色譜檢 驗(yàn)系統(tǒng)需要較長(zhǎng)的平衡時(shí)間，平衡需要2個(gè)小時(shí)，且穩(wěn)定性不佳，流動(dòng)相、溶劑、柱溫及色譜 柱等因素對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響較大。
實(shí)施例19
《中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志》2000年31卷10期457 458提供的測(cè)定奈達(dá)鉬雜質(zhì)的方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀； 色譜柱:SpherisorbNH2 柱(4.0X300mm，10ym)；
流動(dòng)相以40mmol/L磷酸二氫鉀一乙腈(體積比8:2)為流動(dòng)相； 柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。樣品溶液的配制采用流動(dòng)相將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉬 20 μ g/ml的溶液；
測(cè)定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析，檢測(cè)中發(fā)現(xiàn) 奈達(dá)鉬的保留時(shí)間雖有延長(zhǎng)，但奈達(dá)鉬與有關(guān)物質(zhì)(即雜質(zhì))僅能初步分離，雜質(zhì)檢出個(gè)數(shù) 較少，色譜檢驗(yàn)系統(tǒng)需要很長(zhǎng)的平衡時(shí)間，平衡需要3個(gè)小時(shí)，該流動(dòng)相而且對(duì)ΝΗ2柱損傷 很大，耗費(fèi)成本較大。實(shí)施例20
實(shí)施例1 實(shí)施例20檢測(cè)結(jié)果比較，見表1。表1實(shí)施例1 實(shí)施例20檢測(cè)結(jié)果比較表^ttfftl 親迖桕扉留 雜.橫幢出個(gè) ^jff5fiti,, *大《個(gè)雜 色《.舉統(tǒng)平
從表1可以看出，本發(fā)明的技術(shù)方案(實(shí)施例1 16)較現(xiàn)有技術(shù)(實(shí)施例17 19)保 留時(shí)間更長(zhǎng)，從而更利于雜質(zhì)的分離，在雜質(zhì)檢出個(gè)數(shù)和檢出量的穩(wěn)定性上具有明顯優(yōu)勢(shì)。 從試驗(yàn)過程的時(shí)間統(tǒng)計(jì)來(lái)看，本發(fā)明的技術(shù)方案(實(shí)施例1 16)較現(xiàn)有技術(shù)(實(shí)施例17 19)色譜系統(tǒng)平衡時(shí)間短很多，更有利于快速穩(wěn)定檢測(cè)樣品。
權(quán)利要求
一種奈達(dá)鉑凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，具體如下1)采用高效液相色譜法，其色譜條件為以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物，水與乙腈或甲醇的體積比例為6040～991， 二乙胺或三乙胺的添加量是水與乙腈或甲醇混合物總體積的0.005％～0.1％；檢測(cè)波長(zhǎng)為205～222nm；柱溫為20～45℃；流動(dòng)相流速為0.5～2.0ml/min；2)樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑將奈達(dá)鉑凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉑0.5～2mg/ml的溶液，過濾并置2～8℃條件下避光保存，水與甲醇混合溶劑的體積比例為50:50，并用0.05mol/L的磷酸調(diào)節(jié)pH至5.6；3)測(cè)定將5μL～20μL的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述流動(dòng)相水與乙腈或甲醇的體積比例為 70 30 99 :1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述流動(dòng)相添加了混合物總體積0.01% 0. 的二乙胺或三乙胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于檢測(cè)波長(zhǎng)為210 222nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于柱溫為30 45°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于柱溫為40°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于流動(dòng)相流速為0.8 1. 2ml/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于流動(dòng)相流速為1.Oml/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于將奈達(dá)鉬凍干粉針劑樣品配制為含奈達(dá) 鉬lmg/ml的溶液，過濾并置2 8°C條件下避光保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種奈達(dá)鉑凍干粉針劑的雜質(zhì)檢測(cè)方法，具體為1)采用高效液相色譜法，以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物；檢測(cè)波長(zhǎng)為205～222nm；柱溫為20～45℃；流動(dòng)相流速為0.5～2.0ml/min；2)樣品溶液的配制采用水與甲醇混合溶劑將奈達(dá)鉑凍干粉針劑樣品配制成為含奈達(dá)鉑0.5～2mg/ml的溶液；3)測(cè)定將5μL～20μL的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行分析。本發(fā)明很好的消除了骨架劑右旋糖酐對(duì)雜質(zhì)檢測(cè)的干擾，并且在降低成本的同時(shí)可以簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定的檢測(cè)奈達(dá)鉑凍干粉針劑中的雜質(zhì)。
文檔編號(hào)G01N30/06GK101865894SQ20101021108
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月28日
發(fā)明者葉東, 張建義, 戴艷, 王長(zhǎng)斌, 趙小偉 申請(qǐng)人:江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司