專利名稱：一枝蒿有效部位制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一枝蒿有效部位制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
病毒性肝炎、肝損傷是損害人類健康的疾病，其中病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人類健康的全球性傳染病，病人預(yù)后差，大多數(shù)病人轉(zhuǎn)為慢性，可能發(fā)展成肝硬化等。病毒性肝炎引起的肝損傷主要由機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)所介導(dǎo)，當(dāng)病毒激活機(jī)體免疫系統(tǒng)后，產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞和特異性抗體，特別是病毒特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞。它們不但能與體內(nèi)病毒起反應(yīng)而加以殺滅，而且也因受病毒感染的肝細(xì)胞表面帶有病毒抗原而引起肝損傷，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性腫脹和壞死。目前，對于這類病中西醫(yī)療效不十分令人滿意。例如，西藥干擾素對肝炎病毒消除有一定療效，但經(jīng)臨床效果不理想，不能殺滅病毒，而且用藥時間長，藥費較高。中成藥類在治療病毒性肝炎和保肝方面各有所不同，有的中藥偏重于清熱解毒，有的著重于活血化淤，有的滋補肝腎等，這些藥物都各有其不足。臨床久服苦寒藥物，可傷脾腎，減少食欲、消化及吸收。另外，許多藥物必須在肝臟內(nèi)進(jìn)行氧化、分解、排泄，有的也可直接導(dǎo)致肝臟損害，反而對肝病痊愈不利。
本發(fā)明針對目前在藥物治療肝病中存在的不足，結(jié)合中醫(yī)藥和民族醫(yī)藥理論兩者之長，并在中國專利CN021182566的基礎(chǔ)上，提供了一枝蒿有效部位制劑的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，研制的一枝蒿有效部位制劑的制備方法，是以一枝蒿為原料，將一枝蒿全草粉碎、用乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，用二氯甲烷溶解；或?qū)⒁恢镆掖冀嘀苯佑枚燃淄槿芙猓蝗缓髮⑺萌芙馕镉锰妓釟溻c萃取，用鹽酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I；將其殘留物用氫氧化鈉萃取，用鹽酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥，用常規(guī)方法制成口服固體劑型和液體劑型。該制劑用于治療病毒性肝炎和各類肝損傷的口服藥，具有劑量小，療效高，經(jīng)動物試驗及臨床觀察無毒副作用，治療總有效率為91.0％。
本發(fā)明所述的一枝蒿有效部位制劑的制備方法，該方法按下列步驟進(jìn)行a、首先將一枝蒿全草粉碎成粉末，用60％-95％的乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，用二氯甲烷溶解，得到二氯甲烷部位；或?qū)⒁恢镆掖冀嘀苯佑枚燃淄槿芙猓玫蕉燃淄椴课?；b、再將二氯甲烷部位用2％-20％碳酸氫鈉萃取，得到碳酸氫鈉部位，然后用鹽酸或硫酸或乙酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取或乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I，其殘留物待用；c、將二氯甲烷部位的殘留物用2％-15％氫氧化鈉萃取，得到氫氧化鈉部位，然后用鹽酸或硫酸或乙酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取或乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；d、然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥，按常規(guī)方法制成口服固體劑型和液體劑型。
本發(fā)明所述的一枝蒿有效部位及其制劑，其中一枝蒿的藥理性能為一枝蒿Artemisia rupestris L.的干燥全草。七、八月采割、曬干。本品全長10-50厘米。根和根莖圓柱形，土黃色至灰褐色，長帶少數(shù)短須根，斷面淺黃色。莖單一或數(shù)個，于根莖處彎曲，直徑1.5-3厘米，幼枝和花枝上部密被短絨毛，老枝或枝的下部光滑，又不顯著的細(xì)條紋，表面常為紫紅色，斷面白色，中空。功能與主治清熱解毒，健胃消食，祛風(fēng)活血。用于感冒、過敏、食積、蛇傷、瘡癤。
一枝蒿是維吾爾醫(yī)常用藥材，文獻(xiàn)報道一枝蒿全草含有黃酮類、酮酸類、氨基酸、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽、生物堿等化合物。我們分析了一枝蒿有效成分，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了一枝蒿有效部位制劑的保肝作用、治療免疫性肝炎、抗氧化、抗過敏作用研究及誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡時p53與Bcl基因的表達(dá)等實驗研究，并采用電子順磁共振方法檢測一枝蒿有效部位制劑對O2-°、OH°的抑制作用，旨在闡明該藥防治疾病的科學(xué)內(nèi)涵。
本發(fā)明所述的一枝蒿有效部位制劑的制備方法，利用該方法研制出的一枝蒿有效部位制劑進(jìn)行的體外試驗如下一枝蒿有效部2.15細(xì)胞對HbsAg、HbeAg及HBV DNA的抑制作用(1)一枝蒿有效部對2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)的毒性一枝蒿有效部加入2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，以細(xì)胞病變?yōu)橹笜?biāo)，兩批實驗平均半數(shù)中毒濃度TC50為426ug/ml，最大無毒濃度TC0為5ug/ml。
(2)一枝蒿有效部在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HBsAg和HBeAg分泌的抑制作用一枝蒿有效部在2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，最大無毒濃度5ug/ml對HBsAg無明顯抑制作用，對HBeAg無抑制作用。
(3)一枝蒿有效部在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HBV DNA的抑制作用一枝蒿有效部在2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，最大無毒濃度5ug/ml對HBV DNA的平均抑制率為43.9±8.7％；陽性藥1μM的拉米夫定(3TC)對HBV DNA的抑制率為63.9±0.8％。
表1.一枝蒿有效部對2.2.15細(xì)胞對HBsAg、HBeAg及HBV DAN的抑制作用細(xì)胞毒性(ug/ml)HBeAg HBsAg HBV DNATC50TC01C50(ug/ml) IC50(ug/ml) IC50(ug/ml)426 125＞125 ＞125 ＞125體內(nèi)試驗如下一枝蒿有效部位在鴨體內(nèi)對鴨乙型肝炎病毒感染的治療效果一枝蒿AR是由新疆藥物研究所研制的抗肝炎藥物，為驗證其效果，在鴨乙型肝炎病毒感染鴨體內(nèi)進(jìn)行治療試驗，觀察其是否抑制鴨乙型肝炎病毒。實驗采用一日齡北京鴨靜脈注射鴨乙型肝炎病毒，7天后開始給鴨口服一枝蒿AR3個劑量組，第一批試驗0.25、0.5、1.0g/kg，1天2次，給藥10天(Bid×10)，第二批和第三批試驗提高劑量，為1.0、2.0、4.0g/kg，1天2次，給藥10天(Bid×10)。觀察藥物對鴨的毒性和鴨血清鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影響，以拉米夫定為陽性對照藥。
實驗表明，一枝蒿AR大劑量組4.0g/kg口服，1天2次10天，無毒性。按配對統(tǒng)計分析，T10顯示可重復(fù)的統(tǒng)計意義差別；成組抑制率統(tǒng)計分析，在第二批實驗中，T5，T10及P3均有統(tǒng)計學(xué)意義差別，但第三批實驗中，T10之P值＜10％未能達(dá)＜5％的顯著意義。4.0g/kg組，配對統(tǒng)計分析，在第一批實驗，給藥后第5，10天，均顯示統(tǒng)計學(xué)意義差別；按成組抑制率統(tǒng)計分析，T10有統(tǒng)計學(xué)意義差別。但在第二批及第三批實驗中兩種統(tǒng)計分析方法，均未能顯示統(tǒng)計學(xué)意義差別。2.0g/kg組，第二批實驗中，第10天(T10)的配對統(tǒng)計分析，有顯著意義差別，但未能重復(fù)。1.0g/kg組，無抑制作用。拉米夫定對照組，有顯著效果，說明實驗可信。
提示一枝蒿AR在4.0g/kg組對鴨乙型肝炎病毒感染有治療效果。
結(jié)論1.一枝蒿有效部位在2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，結(jié)果，一枝蒿有效部位，在最大無毒濃度5ug/ml對HBV DNA的平均抑制率為43.9±8.7％，陽性藥1μM的拉米夫定(3TC)對HBV DNA的抑制率為63.8±08％.
2.一枝蒿有效部4.0g/kg組，配對統(tǒng)計分析，在第一批實驗，給藥后第5，10天，均顯示統(tǒng)計學(xué)意義差別；2.0g/kg組，第二批實驗中，第10天(T10)的配對統(tǒng)計分析，有顯著意義差別，但未能重復(fù)。1.0g/kg組，無抑制作用。拉米夫定對照組，有顯著效果，說明實驗可信。提示一枝蒿AR在4.0g/kg組對鴨乙型肝炎病毒感染有治療效果。
具體實施例方式
實施例1a、首先將一枝蒿全草粉碎成粉末，用60％的乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，再用二氯甲烷溶解，得到二氯甲烷部位；b、再將二氯甲烷部位用2％碳酸氫鈉萃取，得到碳酸氫鈉部位，然后用鹽酸調(diào)pH4-5，用二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I，其殘留物待用；c、將二氯甲烷部位的殘留物用2％氫氧化鈉萃取，得到氫氧化鈉部位，然后用鹽酸調(diào)pH4-5，用二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；d、然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥后，按常規(guī)方法即可制成口服固體劑型和液體劑型。
實施例2a、首先將一枝蒿全草粉碎成粉末，用95％的乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將一枝蒿乙醇浸膏直接用二氯甲烷溶解，得到二氯甲烷部位；b、再將二氯甲烷部位用20％碳酸氫鈉萃取，得到碳酸氫鈉部位，然后用硫酸調(diào)pH4-5，用乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I，其殘留物待用；c、將二氯甲烷部位的殘留物用15％氫氧化鈉萃取，得到氫氧化鈉部位，然后用硫酸調(diào)pH4-5，用乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；d、然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥后，按常規(guī)方法即可制成口服固體劑型和液體劑型。
實施例3a、首先將一枝蒿全草粉碎成粉末，用80％的乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，再用二氯甲烷溶解，得到二氯甲烷部位；b、再將二氯甲烷部位用12％碳酸氫鈉萃取，得到碳酸氫鈉部位，然后用乙酸調(diào)pH4-5，用二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I，其殘留物待用；c、將二氯甲烷部位的殘留物用10％氫氧化鈉萃取，得到氫氧化鈉部位，然后用乙酸調(diào)pH4-5，用二氯甲烷萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；d、然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥后，按常規(guī)方法即可制成口服固體劑型和液體劑型。
權(quán)利要求
1.一種一枝蒿有效部位制劑的制備方法，其特征在于按下例步驟進(jìn)行a、首先將一枝蒿全草粉碎成粉末，用60％-95％的乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，再用二氯甲烷溶解，得到二氯甲烷部位；或?qū)⒁恢镆掖冀嘀苯佑枚燃淄槿芙?，得到二氯甲烷部位；b、再將二氯甲烷部位用2％-20％碳酸氫鈉萃取，得到碳酸氫鈉部位，然后用鹽酸或硫酸或乙酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取或乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I，其殘留物待用；c、將二氯甲烷部位的殘留物用2％-15％氫氧化鈉萃取，得到氫氧化鈉部位，然后用鹽酸或硫酸或乙酸調(diào)pH4-5，二氯甲烷萃取或乙酸乙酯萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；d、然后將所得到的有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥后，按常規(guī)方法即可制成口服固體劑型和液體劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種一枝蒿有效部位制劑的制備方法，該方法是以一枝蒿為原料，將一枝蒿全草粉碎、用乙醇提取，即得一枝蒿乙醇浸膏，將浸膏用乙酸乙酯萃取，濃縮后得到乙酸乙酯部位，用二氯甲烷溶解；或?qū)⒁恢镆掖冀嘀苯佑枚燃淄槿芙?；然后將所得溶解物用碳酸氫鈉萃取，調(diào)pH，萃取，濃縮，即可得到以酮酸為主的有效部位I；溶解物的殘留物用氫氧化鈉萃取，調(diào)pH，萃取，濃縮，即可得到以黃酮為主的有效部位II；然后將有效部位I或II或I和II經(jīng)真空干燥，制成口服固體劑型和液體劑型。利用該方法研制出的一枝蒿有效部位制劑，用于治療病毒性肝炎和各類肝損傷的口服藥，具有劑量小，療效高，經(jīng)動物試驗及臨床觀察無毒副作用，治療總有效率為91.0％。
文檔編號A61P1/16GK1559482SQ20041000837
公開日2005年1月5日 申請日期2004年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月11日
發(fā)明者斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫爾, 阿吉艾克拜爾, 阿不都熱依木·玉蘇甫, 古力娜·達(dá)吾提, 達(dá)吾提, 克拜爾, 提 吾甫爾, 斯拉甫 艾白, 熱依木 玉蘇甫 申請人:斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫爾, 斯拉甫 艾白