專利名稱：給予雌二醇代謝物治療或預(yù)防肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病以及血管和腎臟疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及用于預(yù)防或治療心血管疾病的危險(xiǎn)因素如肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、以及血管和腎臟疾病的方法和組合物。更具體說，本發(fā)明涉及雌激素活性很弱的雌二醇代謝物，例如，2-羥基雌二醇、4-羥基雌二醇、2-甲氧雌二醇、和4-甲氧雌二醇的用途。這類藥物可以控釋性制劑輸送來預(yù)防或治療這類疾病。
背景技術(shù)：
肥胖癥是發(fā)達(dá)國(guó)家中的流行病，并不斷惡化(例如，參見Mokdad，A.H.，等，美國(guó)醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)雜志2841650(2000)，其公開內(nèi)容摻入本文作為參考)。肥胖癥與代謝綜合征(例如，參見，Grundy，S.M.，內(nèi)分泌學(xué)13155(2000)(以下簡(jiǎn)稱“Grundy，2000”)；Bergman，R.N.，等，研究醫(yī)學(xué)雜志49119(2001)(以下簡(jiǎn)稱“Bergman，2001”)；其公開內(nèi)容摻入本文作為參考)、以及特征為高血壓、胰島素抗性和高脂血癥的疾病(Grundy，2000；Bergman，2001)有著重要影響。這種代謝綜合癥進(jìn)而又影響心血管疾病(例如，參見Colditz，G.A.，運(yùn)動(dòng)與鍛煉醫(yī)學(xué)科學(xué)31S663(1999)其公開內(nèi)容摻入本文供參考)，并可增加腎衰竭末期的流行(例如，參見Hall W.D.，等，美國(guó)醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)雜志313195(1997)；Hall，J.E.等，紐約科學(xué)院年刊89291，(1999)；其公開內(nèi)容摻入本文供參考)。不幸的是，肥胖癥的藥物治療引起了而不是緩減了心血管疾病。例如，一種常用的phentermine/phenfluramine組合物可引起瓣膜性心臟病(例如，參見Lepor，等，美國(guó)心臟病學(xué)雜志86107(2000)，其公開內(nèi)容摻入本文供參考)，而另一種常用治療藥物去甲麻黃素則可引起中風(fēng)(例如，參見Kernan，W.N.，等，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志3431826(2000)，其公開內(nèi)容摻入本文供參考)。因此，如今迫切需要預(yù)防或治療肥胖癥及其代謝性、血管性和腎臟性后遺癥，而對(duì)于心臟沒有不良作用的藥物。
據(jù)報(bào)道，有幾種化合物可導(dǎo)致體重減輕。例如，據(jù)Oparil，S.等(循環(huán)951301(1997)，其公開內(nèi)容摻入本文供參考)報(bào)道，17β雌二醇可引起大鼠體重減輕，以及保護(hù)血管。不過，使用17β雌二醇的不良作用，是由于17β雌二醇的雌激素作用，可引起男性女性化不良現(xiàn)象，并增加女性發(fā)生乳房和子宮癌的風(fēng)險(xiǎn)。
顯然肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、和血管與腎臟疾病之間存在著一種聯(lián)系，因此重要而理想的是，不論個(gè)體的性別能夠同時(shí)采用一種藥物，來治療數(shù)種或全部這些疾病。
發(fā)明概述本發(fā)明提供預(yù)防或治療心血管疾病的危險(xiǎn)因素的方法，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。這類風(fēng)險(xiǎn)因素包括肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、以及血管和腎臟疾病。優(yōu)選的雌二醇代謝物類包括，2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇、和4-羥基雌二醇。及其前體藥物。這類組合物也可制成控釋配方制劑。還提供用雌二醇的代謝物來治療或預(yù)防胰島素抗性、血管內(nèi)皮功能紊亂、高血脂癥、高血壓、糖尿病性腎病和蛋白尿癥的方法。此外，這類方法中還提供穩(wěn)定葡萄糖水平的方法。這類治療方法因?yàn)闆]有女性化雌激素作用，兩種性別都可采用。
本發(fā)明的其它特性和優(yōu)點(diǎn)，可從以下優(yōu)選實(shí)施例以及權(quán)利要求所述中得以明白。
插圖的簡(jiǎn)要說明

圖1顯示ZSF1大鼠用運(yùn)載體物質(zhì)(□)，或2-羥基雌二醇(■)治療的基線、12周和24周時(shí)的尿蛋白排出情況。其中，符號(hào)“a”表明與基線有明顯差異(組內(nèi))；符號(hào)“b”表明與運(yùn)載體有明顯差異(組間)(Fisher最小顯著性差異檢驗(yàn))。2-因子方差分析表明時(shí)間與治療有顯著性(p＜0.001)作用，以及時(shí)間與治療之間有顯著性(p＜0.001)相互作用。各數(shù)值表示為每組9-10只大鼠的均值±SEM。
圖2顯示ZSF1大鼠組用運(yùn)載體(□)或2-羥基雌二醇(■)治療26周時(shí)，乙酰膽堿對(duì)于腸系膜血管抗性的作用。2-因子方差分析表明，2-羥基雌二醇對(duì)乙酰膽堿的應(yīng)答反應(yīng)有顯著性作用(p＜0.006)。各數(shù)值表示為每組9-10只大鼠的均值±SEM。
圖3顯示ZSF1大鼠組用運(yùn)載體(□)或2-羥基雌二醇(■)治療26周時(shí)，硝普鈉對(duì)其腸系膜血管抗性的作用。方差的2-因子分析表明，對(duì)硝普鈉的應(yīng)答反應(yīng)，2-羥基雌二醇無顯著性作用(p＜0.201)。各數(shù)值表示為每組9-10只大鼠的均值±SEM。
圖4顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療24周時(shí)，對(duì)雄性或雌性ZSF1大鼠體重增長(zhǎng)的作用。與之相比較的是未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄大鼠”或“cont.male”)和未經(jīng)治療的雌性大鼠組(“對(duì)照雌大鼠”或“cont.female”)，以及未經(jīng)治療的配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量2-羥基雌二醇的雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)大鼠”或“contr male pair fed”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示雌鼠給予10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖5顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇(分別是“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”)或2-甲氧雌二醇(分別是“2-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”)治療24周時(shí)，對(duì)雄性ZSF1大鼠組體重增長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)的作用。與之相比較的是，未經(jīng)治療的雄性鼠(“對(duì)照雄鼠”或“control male”)和治療的配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量2-羥基雌二醇的雄性鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”或“controlpair-fed male”)。
圖6顯示采用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇治療24周時(shí)，對(duì)雌性ZSF1大鼠組體重增長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)的作用。與之相比的是，未經(jīng)治療的對(duì)照雌性大鼠。
圖7顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療24周時(shí)，對(duì)雄性或雌性ZSF1大鼠尿蛋白質(zhì)排出(“UPE”)的作用。與之相比較的是，未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”或“cont-male”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”或“cont-female”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量2-羥基雌二醇的未經(jīng)治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”或“control pair-fedmale”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。在雌鼠組方面，“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇。
圖8顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療14-15周后，對(duì)雄性或雌性ZSF1大鼠在120分鐘的口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)中血漿葡萄糖水平的作用。作為比較采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖9顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療14-15周后，對(duì)雄性或雌性ZSF1大鼠在120分鐘的口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)中，以葡萄糖濃度曲線下的面積表示的對(duì)血漿葡萄糖水平的作用。作為比較采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖10顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療24周后，對(duì)雄性或雌性ZSF1大鼠血液尿素氮水平的作用。作為比較的采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖11顯示采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療20周后，對(duì)于雄性或雌性ZSF1大鼠血漿leptin水平的作用。作為比較采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇。“2-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖12顯示在采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療24周后，雄性或雌性ZSF1大鼠24小時(shí)飲水量。作為比較采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖13顯示在采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療24周后，雄性或雌性ZSF1大鼠24小時(shí)的排尿量。作為比較采用了，未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的治療雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
圖14顯示在采用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧雌二醇治療28周后，雄性或雌性ZSF1大鼠糖化血紅蛋白(HbAlc)情況。作為比較采用了未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照雄鼠”)，未經(jīng)治療的雌性大鼠(“對(duì)照雌鼠”)，和配對(duì)飼喂10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇的未經(jīng)治療的雄性大鼠(“對(duì)照配對(duì)雄鼠”)。其中，“2-HE-1”、“2-HE-3”、和“2-HE-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇；“2-HE-F-10”表示給予雌鼠10微克/千克/小時(shí)劑量的2-羥基雌二醇?！?-ME-1”、“2-ME-3”、和“2-ME-10”分別表示雄鼠給予1、3或10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧雌二醇。
發(fā)明詳述I.定義術(shù)語“雌二醇代謝物”，指17β雌二醇的僅表現(xiàn)輕微雌激素活性，并對(duì)雌激素受體僅有微弱親和力的代謝物，例如，兒茶酚雌二醇類和甲氧雌二醇類，例子包括2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇、和4-羥基雌二醇等。
“可生物降解性物質(zhì)”，指在具體治療情況下，在體內(nèi)一定期限內(nèi)可溶解或降解的各種聚合物。在接觸生理性pH值和溫度后，這一期限通常小于5年，一般不到1年。例如，pH范圍在6-9，溫度為25℃-40℃時(shí)。
術(shù)語“個(gè)體”，指雄性或雌性的人或動(dòng)物。
術(shù)語“前體藥物”，指能夠釋放某種雌二醇代謝物的化合物。
術(shù)語“肥胖癥”，指?jìng)€(gè)體的體重指數(shù)大于25的狀態(tài)，體重指數(shù)定義為個(gè)體的重量(千克)除以該個(gè)體身高(米)的平方。
“代謝綜合征”，指具有如下任何一種或全部特征的疾病，例如，葡萄糖不耐受高胰島素血癥、胰島素抗性、高脂血癥、高血壓和肥胖癥。在肥胖個(gè)體中，代謝綜合征通常較為普遍。
“糖尿病”，指由多種致病因素造成的以血漿葡萄糖水平升高為特征的，或者在禁食狀態(tài)下或口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)時(shí)服用葡萄糖后發(fā)生高血糖癥的一種疾病過程。
術(shù)語“腎臟功能失調(diào)”，指腎臟的結(jié)構(gòu)和功能異常。腎臟功能失調(diào)的特征為腎病，表現(xiàn)為蛋白尿、腎臟組織病理學(xué)異常，例如，腎小球硬化和重度腎小管間質(zhì)性和血管性變化、或腎小球?yàn)V過率降低。
“胰島素抗性”或“胰島素耐受”，指作體內(nèi)血流葡萄糖廓法率(例如，流入胰島素敏感性組織，如肌肉、脂肪和肝臟)評(píng)估的個(gè)體中，胰島素的生物學(xué)活性降低。這種評(píng)估方法在臨床上是評(píng)估對(duì)口服或靜脈內(nèi)注射葡萄糖攻擊時(shí)的耐受性(例如，見Turner，R.等，糖尿病441(1995)中所述，其內(nèi)容納入本文供參考)?；加蠭I型糖尿病的個(gè)體都屬于“胰島素抗性”。
II.方法以下將對(duì)本發(fā)明包含的若干具體細(xì)節(jié)進(jìn)行詳細(xì)論述，以期對(duì)本發(fā)明有關(guān)內(nèi)容提供更全面的認(rèn)識(shí)。為了論述更加明確，對(duì)于可能已眾所周知的其他內(nèi)容作了刪節(jié)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道，其他這些內(nèi)容是實(shí)施本發(fā)明所必需和/或所要求的；不過，因?yàn)檫@此內(nèi)容是本領(lǐng)域眾所周知的，還因?yàn)檫@些內(nèi)容不能有助于更好理解本發(fā)明，因而對(duì)于這些內(nèi)容就不作敘述了。以下通過參見附圖進(jìn)行詳細(xì)論述。
本發(fā)明提供了采用雌二醇代謝物治療各種各樣健康問題的方法。具體說，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)因素(例如，肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、血管和腎臟疾病)的方法，本發(fā)明還具體提供給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物制劑來治療或預(yù)防肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、血管和腎臟疾病的方法。實(shí)施本發(fā)明方法所采用的雌二醇代謝物包括17β雌二醇的代謝物，例如兒茶酚雌二醇類和甲氧雌二醇類，其雌激素活性很微弱，并且對(duì)雌激素受體的親和力很低，例子中包括2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇、和4-羥基雌二醇等。這類雌二醇代謝物也可制成控釋性制劑。這類雌二醇代謝物也可由前體藥物釋放。
本發(fā)明還提供給予個(gè)體以控釋性配方給藥的雌二醇代謝物。具體說可將雌二醇代謝物加入到可生物降解的微粒、可生物降解的納米微粒、膏藥、結(jié)晶物、凝膠、水凝膠和脂質(zhì)體等中，以實(shí)施本發(fā)明的方法。也可將雌二醇代謝物放入到植入物、陰道環(huán)、滲透泵、擴(kuò)散裝置或皮內(nèi)輸注裝置中施用。
用于控釋性制劑中的可生物降解微米顆?；蚣{米顆粒，包括一種或多種聚合物，例如，聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酐、聚(氨基酸)、聚原酯、聚乙酰、聚丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)乙烷酮)、聚(烯化烷基化物)、聚乙二醇與聚原酯的共聚物、生物可降解性聚氨基甲酸酯、上述各物質(zhì)的混合物和共聚物類。
雌二醇代謝物用于本發(fā)明的雌二醇代謝物包括兒茶酚雌二醇類，例如，2-羥基雌二醇(estra-1，3，5(10)-triene-2，3，17-triol(17β)或4-羥基雌二醇(estra-1，3，5(10)-triene-3，4，17-triol(17β)；或者甲氧雌二醇，例如，2、甲氧雌二醇類(estra-1，3，5(10)-triene-2-甲氧-3，17-diol(17β)或4-甲氧雌二醇類(estra-1，3，5(10)-triene-4-甲氧-3，17-triol(17β)。所有上述這類化合物的商品化制劑都很容易購得。
也可將雌二醇代謝物加入控釋制劑中。這類控釋制劑可以是生物可降解性微米顆粒、生物可降解性納米顆粒、膏藥、結(jié)晶物、凝膠、水凝膠、脂質(zhì)體等。此外，可將雌二醇代謝物加入各種裝置，例如植入物、陰道環(huán)、滲透泵、擴(kuò)散裝置和經(jīng)皮輸注裝置中。按照本發(fā)明也可采用雌二醇代謝物的前體藥物。具體例子包括，羥基雌二醇和甲氧雌二醇的酯。
本領(lǐng)域技術(shù)人員都了解，上述化合物只是示范性的，可采用其許多變體，這取決于母體雌二醇化合物具體的羥基化或甲基化部位。例如，雌二醇可在很多部位被羥基化或甲基化，這類變體是本技術(shù)領(lǐng)域熟知的。
給藥方式可將本發(fā)明的治療性化合物與待治療個(gè)體能夠耐受的賦形劑一起配制。這類賦形劑的例子包括水、生理鹽水、林格氏溶液、右旋糖溶液、漢克斯溶液、以及其他生理平衡性鹽溶液。還可采用非水性運(yùn)載體，例如非揮發(fā)性油類、芝麻油、油酸乙酯、或甘油三酸酯。其他有用的配方包括含有粘性增強(qiáng)劑的懸浮液，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇、或葡聚糖。賦形劑內(nèi)還可含有微量添加劑，如，可增強(qiáng)等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)。
用于本發(fā)明治療組合物配制的緩沖劑例子包括磷酸鹽緩沖劑、重碳酸鹽緩沖劑以及三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖劑。而保存劑例子包括硫柳汞、甲酚、甲醛和苯甲醇。標(biāo)準(zhǔn)的制劑，可以是液態(tài)可注射制劑，或者是固體劑型，可用適宜的液體配制成供注射用的懸浮液或溶液。因而，在一種非液體制劑中，賦形劑可包括右旋糖、人血清白蛋白、保存劑等，在給藥前加入滅菌水或生理鹽水。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供本文所述藥物化合物的合適的局部、口服、全身、和非經(jīng)腸道給藥的制劑。這類制劑可采用各種常規(guī)運(yùn)載體制成各種各樣治療劑型以供給藥。例如，可將這類化合物配制成供口服給藥的劑型，例片劑、膠囊劑(分別包括定時(shí)釋放或持續(xù)釋放的劑型)、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、溶液、懸浮液、糖漿和乳劑。同樣，這類化合物也可在血管成形術(shù)/導(dǎo)管插入術(shù)時(shí)經(jīng)靜脈內(nèi)給藥(濃縮藥團(tuán)和灌注)，經(jīng)腹膜內(nèi)、皮下、經(jīng)開放或非開放性局部、或肌肉內(nèi)等給藥。所有這類制劑是制藥領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。
本發(fā)明的治療性組合物還包括載體。這類載體包括能增加治療性組合物在所治療個(gè)體中半壽期的化合物。適用的載體包括但不限于聚合型控釋運(yùn)載體、可生物降解性植入物、脂質(zhì)體、細(xì)菌、病毒、以及其他細(xì)胞和乙二醇。
控釋性制劑本發(fā)明的方法中還采用能在個(gè)體體內(nèi)緩慢釋放出本發(fā)明組合物的控釋性制劑。本文所用的控釋性制劑可包括將本發(fā)明的組合物裝入控釋性運(yùn)載體內(nèi)。這類控釋性制劑，是本領(lǐng)域眾所周知的。適用的控釋性配方包括但不限于，生物相容性聚合物、其他聚合性基質(zhì)、膠囊、微型膠囊、微米顆粒、納米顆粒、膏藥(參見美國(guó)專利號(hào)6,238,184和5,736,154，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；結(jié)晶物(參見美國(guó)專利號(hào)5,827,531，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；濃縮藥團(tuán)制劑、脂質(zhì)體(參見美國(guó)專利號(hào)6,339,069和6,143,716，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；脂質(zhì)球、凝膠(參見美國(guó)專利號(hào)5,830,506，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；和水凝膠(參見美國(guó)專利號(hào)6,372,813、6,372,248和6,367,929，其公開內(nèi)容納入本文供參考)。這類控釋性運(yùn)載體還包括各種裝置，例如，陰道環(huán)(參見美國(guó)專利號(hào)6,103,256和5,788,980，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；植入體(參見美國(guó)專利號(hào)6,251,418和5,874,098，其公開內(nèi)容納入本文供參考)；滲透泵、輸液裝置和經(jīng)皮輸注系統(tǒng)。本發(fā)明的其他控釋性制劑包括給予個(gè)體時(shí)，可在施用部位形成固體或凝膠的液體。優(yōu)選的控釋性制劑是可生物降解的。這類化合物是本領(lǐng)域熟知的。
本發(fā)明的一種優(yōu)選的控釋性制劑在個(gè)體體內(nèi)，能夠以充分維持本發(fā)明組合物治療劑量水平的恒定速度釋放本發(fā)明組合物。此治療用性組合物優(yōu)選的釋放期間范圍從1天到大約12個(gè)月。更好優(yōu)選，此治療性組合物的釋放期時(shí)間圍為、2、3、4、5、6、7天、到30天。
用藥劑量以有效方式給予本發(fā)明治療性組合物的可接受方案，包括單劑量大小，給藥次數(shù)、給藥頻度和給藥方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定此類方案。適宜的單次劑量，在適宜的時(shí)間內(nèi)一次或多次給藥時(shí)，應(yīng)能夠保護(hù)(即，預(yù)防或治療)個(gè)體不發(fā)生疾病。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)患者的具體情況可確定是否需要增加給予此性組合物。
健康疾病的預(yù)防或治療據(jù)估計(jì)，60％的美國(guó)人的體重指數(shù)超過25。然而，肥胖癥不僅是人類的一個(gè)問題，許多動(dòng)物也要有與肥胖癥相關(guān)的不良后果。例如，據(jù)報(bào)道，接受獸醫(yī)照料的約10-40％的貓和25-50％的狗都超重。造成肥胖癥的因素，包括，久坐不動(dòng)的生活方式、限于戶內(nèi)活動(dòng)、以及遭受閹割。肥胖動(dòng)物對(duì)某些疾病具有更大風(fēng)險(xiǎn)，包括骨關(guān)節(jié)炎、韌帶損傷、會(huì)陰部皮炎、糖尿病、心肌病、以及泌尿系綜合征。因此為了最大程度降低患病風(fēng)險(xiǎn)，關(guān)鍵是保持健康的體重(參見美國(guó)專利號(hào)6,071,544，其公開內(nèi)容納入本文供參考)。
本發(fā)明提供了給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物，以預(yù)防或治療肥胖癥的方法?？蓪⑦@種雌二醇代謝物加入控釋制劑中，也可作為前體藥物來使用。
本發(fā)明還提供了給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物，以預(yù)防或治療代謝綜合征的方法。本發(fā)明還提供給予代謝綜合征患者這種雌二醇代謝物預(yù)防以下疾病的發(fā)生糖尿病、腎臟病、葡萄糖耐受性、高胰島素血癥、胰島素抗性、高脂血癥、高血壓以及肥胖癥。在另外一項(xiàng)實(shí)施例中，可給予代謝綜合征患者這種雌二醇代謝物以治療糖尿病、腎臟病、葡萄糖耐受性、高胰島素血癥、胰島素抗性、高脂血癥、高血壓以及肥胖癥。在本發(fā)明的還有一項(xiàng)實(shí)施例中，可給予個(gè)體這種雌二醇代謝物以預(yù)防或治療高膽固醇血癥。在另一項(xiàng)實(shí)施例中，可給予個(gè)體這種雌二醇代謝物以控制葡萄糖水平。多尿、煩渴以及糖化血紅蛋白水平的減少，可證實(shí)這種效果。此外，還可改善口服葡萄糖的耐受性?？蓪⑦@種雌二醇代謝物加入控釋性制劑中，或也可作為前體藥物給予。
持續(xù)性或失去控制的高血糖癥，可伴有成年前發(fā)病率和死亡率的增高。葡萄糖動(dòng)態(tài)平衡的經(jīng)常異常直接和間接地與脂質(zhì)、脂蛋白、和脫輔基脂蛋白的代謝以及其他代謝性和血液動(dòng)力學(xué)性疾病相關(guān)聯(lián)。因而，II型糖尿病患者得大血管性和小血管性并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)特別高，包括冠心病、中風(fēng)、外周血管病、高血壓、腎臟病、神經(jīng)疾病和視網(wǎng)膜病。因而，糖尿病的臨床管理和治療至關(guān)重要的是治療性控制葡萄糖的動(dòng)態(tài)平衡、脂質(zhì)代謝和高血壓。
對(duì)處于發(fā)生II型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的早期醫(yī)療干預(yù)，著重于減少病理性高血糖癥或受損的葡萄糖耐受性，有可能預(yù)防或延緩II型糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥和/或代謝綜合征的發(fā)生。因而，通過對(duì)受損口服葡萄糖耐受性和/或血液葡萄糖水平增高的有效治療，可預(yù)防或抑制II型糖尿病或代謝綜合征的發(fā)生。
本發(fā)明還提供給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物，以預(yù)防或治療糖尿病的方法?；蛘撸蓪⑦@種雌二醇代謝物給予處于發(fā)生糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。這類個(gè)體可出現(xiàn)高血糖癥，或葡萄糖耐受性受損，給予本發(fā)明的雌二醇代謝物能夠控制葡萄糖水平。另外，可將這種雌二醇代謝物給予II型糖尿病患者，以預(yù)防或治療外周血管疾病、高血壓、腎臟病、神經(jīng)疾病、和視網(wǎng)膜病。可將雌二醇代謝物給予II型糖尿病患者，以控制葡萄糖水平。給予這種雌二醇代謝物能夠減少多尿、煩渴和糖化血紅蛋白水平。還可提高口服葡萄糖耐受性?？蓪⑺羞@些雌二醇代謝物加入控釋性制劑中，或可作為前體藥物給藥。
本發(fā)明還提供了給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物，以預(yù)防或治療腎臟病的方法。在另一些實(shí)施例中，可將這種雌二醇代謝物給予代謝綜合癥患者以預(yù)防發(fā)生腎病?？蓪⑦@種雌二醇代謝物給予介體以預(yù)防或治療糖尿病腎病改善血管內(nèi)皮功能?？山o予雌二醇代謝物來預(yù)防或治療蛋白尿。可將所有這些雌二醇代謝物加入控釋性制劑中，或可作為前體藥物給藥。
本發(fā)明還提供給予個(gè)體治療有效量的雌二醇代謝物來預(yù)防和治療胰島素抗性?？蓪⑦@類雌二醇代謝物給予II型糖尿病個(gè)體。或者，可將這類雌二醇代謝物給予處于發(fā)生II型糖尿病危險(xiǎn)中的個(gè)體?？蓪⒋祟惔贫即x物給予代謝綜合征患者或者可將這類雌二醇代謝物給予處理發(fā)生代謝綜合征危險(xiǎn)中的個(gè)體?？蓪⑺羞@類雌二醇代謝物加入可控制制劑中或可作前藥給予。
現(xiàn)將通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不意味限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員都會(huì)明白，實(shí)例中所述的技術(shù)代表了本發(fā)明所公開的實(shí)施本發(fā)明工作良好的技術(shù)技術(shù)，因而可以認(rèn)為，這些技術(shù)構(gòu)成了實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選方式。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，可不背離本發(fā)明的思路和范圍對(duì)具體實(shí)施例中的材料和方法許多改進(jìn)。
實(shí)施例實(shí)施例1采用2-羥基雌二醇治療ZSF 1雄性大鼠26周，評(píng)估定其抗肥胖癥、抗糖尿病、降低膽固醇和腎臟功能的作用。
大鼠模型的建立采用20只12周齡雄性肥胖性ZSF 1大鼠(遺傳性模型公司，印第安納波利斯，印第安納州)。肥胖性ZSF 1大鼠，是用瘦削型雌性Zuker糖尿病肥脂大鼠(ZDF+/fa)與瘦削型雄性自發(fā)性高血壓心衰竭大鼠(SHHF/Mcc-facp，+/cp)交配培育而成。據(jù)新近Tofovic，S.P.等，腎臟衰竭22387(2000)(其公開內(nèi)容摻入本文供參考)中的論述，與幾個(gè)不同品系大鼠包括Wisrar-Kyoto血壓正常型大鼠、自發(fā)性高血壓型大鼠、以及肥胖型SHHF/Mcc-facp大鼠等品系相比較，肥胖型ZSF1大鼠具有以下代謝綜合征(即，高血壓、糖尿病以及高血脂癥)，并可生以大量蛋白尿、腎臟組織病理學(xué)異常(腎小球硬化癥和腎小管間質(zhì)和血管重度變化)、以及腎小球過濾降低為特征的腎病。因而，該大鼠品系可發(fā)展為肥胖癥、代謝綜合征以及與代謝綜合征相關(guān)的終未器官后遺癥。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在基線上，將大鼠分別置于代謝籠內(nèi)關(guān)養(yǎng)，檢測(cè)記錄其采食量、飲水量、排尿量、尿蛋白排出量(重喹啉甲酸法)、以及葡萄糖水平(InfinifyTMGlucose Reageut，Sigma Diagnostics，圣路易斯，密蘇里州)。然后，將灌注運(yùn)載體聚乙二醇(400，2.5微升/小時(shí))或2-羥基雌二醇(10微克/千克/小時(shí))的微型滲透泵植入皮下(隨機(jī)操作)。每隔33天更換微型泵。治療開始后12周和24周重復(fù)進(jìn)行代謝籠試驗(yàn)。治療后9周和25周，令大鼠禁食過夜，采取(尾靜脈)血液樣品，測(cè)定膽固醇含量。一式二份分析血漿樣品的膽固醇水平禁食(Sigma Diagnostics，圣路易斯，密蘇里州)。治療26周后，再使大鼠禁食過夜。進(jìn)行口服葡萄糖耐受性測(cè)試，和測(cè)定糖化血紅蛋白總水平(Sigma Diagnostics)。采用精密每天四次血液葡萄糖測(cè)試紙條試劑盒(Medisense Iuc.Bedford，MA)測(cè)定血漿葡萄糖水平。
經(jīng)26周治療之后，麻醉大鼠并測(cè)試，以評(píng)估心臟性能、腎臟血液動(dòng)力學(xué)和腸系膜血管反應(yīng)性。通過頸動(dòng)脈插入一支PE-50導(dǎo)管抵達(dá)右心室，并與心臟性能分析儀(Micro-Med，Inc.，Louisville，KY)相連接。連續(xù)測(cè)定10次/血壓變化。在股動(dòng)脈中插入一支PE-50導(dǎo)管，并連接血壓分析儀(Micro-Med，Inc.)以測(cè)定動(dòng)脈血壓。將一支PE-10導(dǎo)管插入左側(cè)輸尿管內(nèi)采集尿液，并在左腎動(dòng)脈內(nèi)置入一流量探頭(Transonic Systems，Inc.，Ithaca，NY)，以測(cè)定腎臟血流。開始灌注14C-菊糖(0.035微居里/20微升鹽水/分鐘)，60分鐘后，進(jìn)行2次30分鐘的廓清期。采集中點(diǎn)血液樣品(300微升)，測(cè)定其放射活性。測(cè)定血漿和尿液的14C-菊糖的放射活性，并計(jì)算腎臟的14C-土木香粉的廓清率。在腸系膜動(dòng)脈內(nèi)置入一流量探頭，測(cè)定腸系膜血流，并將32號(hào)針頭插入腸系膜動(dòng)脈內(nèi)連接于一Y-形接管，進(jìn)行雙重腸系膜動(dòng)脈灌注(分別為25微升/分鐘)。經(jīng)其中一條腸系膜動(dòng)脈灌注線路，將血管緊張肽II(30納克/分鐘)加甲氧胺(3微克/分鐘)輸注入腸系膜血管床，使腸系膜血管床預(yù)先收縮。接著，經(jīng)另一條腸系膜灌注線路，向腸系膜血管床輸注遞增劑量的乙酰膽堿(0.3、1.0和3.0微克/分鐘，各劑量5分鐘)和硝普鈉鹽(0.5、1.5和5.0微克/分鐘，各劑量5分鐘)，以激發(fā)其血管反應(yīng)。將動(dòng)脈血壓除以血流量計(jì)算血管抵抗力。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組中所有數(shù)值是9-10只大鼠的均值±SEM。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性計(jì)算采用非配對(duì)Student t-檢驗(yàn)或方差2-因素分析(重復(fù)測(cè)定)，如適當(dāng)，然后用Fisher最低顯著性差異檢驗(yàn)分析。顯著性標(biāo)準(zhǔn)是p＜0.05。
結(jié)果在基線上，對(duì)照組和2-羥基雌二醇組的體重分別是，484±4和483±9克。用2-羥基雌二醇治療12和26周后大鼠體重下降(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，12周時(shí)分別是611±9對(duì)545±13克，26周時(shí)分別是768±14對(duì)571±13克)。在基線上，對(duì)照組和2-羥基雌二醇組的攝食量相似(分別是，41.4±1.6和43.9±1.4克/天)。用2-羥基雌二醇治療12和24周后大鼠的攝食量都有下降(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，12周時(shí)分別是35.2±1.9對(duì)26.4±1.3克/天，24周時(shí)分別是44.6±1.0對(duì)36.6±0.9克/天)。
在基線上，兩組大鼠都出現(xiàn)了糖尿癥(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組分別是9.8±0.2和8.5±1.0克葡萄糖/天)。用2-羥基雌二醇治療12和24周后，糖尿癥減退(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，12周時(shí)分別是5.5±0.8對(duì)0.2±0.2克葡萄糖/天，24周時(shí)分別是6.5±0.4對(duì)1.7±0.5克葡萄糖/天)。另外，采用2-羥基雌二醇治療26周，改善了(P＜0.01)口服葡萄糖耐受性試驗(yàn)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，口服2克葡萄糖/千克體重劑量后2小時(shí)，其血漿葡萄糖分別是326±12對(duì)265±13毫克/100毫升)。而且，試驗(yàn)進(jìn)行26周時(shí)，對(duì)照組和用2-羥基雌二醇治療組大鼠的糖化血紅蛋白含量(葡萄糖控制的時(shí)間-平均指數(shù))分別是12.5±1.7％對(duì)3.8±0.7％。在基線上，兩組大鼠都出現(xiàn)多尿癥(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組分別是94.8±8.2和102±9.2毫升尿量/天)，以及煩渴現(xiàn)象(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組的飲水量分別是115±10對(duì)135±10毫升/天)。用2-羥基雌二醇治療12和24周后，多尿癥減退(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，排尿量在12周時(shí)分別是57.6±7.5對(duì)23.6±2.4毫升/天，24周時(shí)分別是86.5±3.0對(duì)45.6±3.8毫升/天)。用2-羥基雌二醇治療12和24周后，煩渴現(xiàn)象減退(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，飲水量12周時(shí)分別是67.0±7.2對(duì)40.1±4.0毫升/天，24周時(shí)分別是131.8±7.0對(duì)67.4±4.5毫升/天)。
用2-羥基雌二醇治療降低了膽固醇血癥(P＜0.001)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，9周時(shí)膽固醇含量分別是205±11對(duì)151±9毫克/100毫升，25周時(shí)分別是399±24對(duì)247±28毫克/100毫升)。
用2-羥基雌二醇治療26周降低了平均動(dòng)脈血壓(P＜0.05)(對(duì)照組與2-羥基雌二醇治療組大鼠相比較，分別是133±6對(duì)122±5毫米汞柱)。盡管用2-羥基雌二醇治療26周不影響腎臟血流、腎血管阻力或腎小球?yàn)V過率(見下表1所示)，但2-羥基雌二醇對(duì)于尿蛋白排出量有著明顯作用。在基線(12周齡時(shí))上，對(duì)照大鼠可排出大量蛋白質(zhì)(227±29毫克蛋白質(zhì)/天)，并且其蛋白尿隨年齡而持續(xù)增加(P＜0.001)。重要的是，2-羥基雌二醇顯著緩解了蛋白尿癥的進(jìn)展(圖1)。
表1治療大約6個(gè)月后，對(duì)照和2-羥基雌二醇治療ZDF 1大鼠的體重、攝食量代謝參數(shù)和腎功能參數(shù)
當(dāng)治療進(jìn)入26周時(shí)，評(píng)估了腸系膜血管舒張反應(yīng)。用2-羥基雌二醇治療的大鼠與對(duì)照大鼠相比，乙酰膽堿誘導(dǎo)的腸系膜血管阻力減少程度更高(圖2)。2-羥基雌二醇僅略微增加了硝普鈉鹽誘導(dǎo)的血管舒張(圖3)，表明其對(duì)乙酰膽堿反應(yīng)的增強(qiáng)大多是由血管內(nèi)皮依賴性舒張因子釋放的增加所介導(dǎo)。
采用2-羥基雌二醇長(zhǎng)期治療(26周)對(duì)心臟性能本身并無影響。治療組與對(duì)照組之間就心室舒張和收縮功能，包括心律、心室收縮壓峰值、心室收縮時(shí)血壓最大變化速率、心室舒張時(shí)血壓最大變化速率、心室終末舒張壓、心室最小舒張壓、心室收縮時(shí)限、心室舒張時(shí)限、至1/2心室舒張時(shí)間、心室舒張時(shí)間常數(shù)、或心律壓力產(chǎn)物等指數(shù)而言，均未測(cè)到差別(見下表2所示)。
表2治療大約6個(gè)月后，對(duì)照與2-羥基雌二醇治療ZDF 1大鼠的血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)和心臟性能參數(shù)。
實(shí)施例2采用2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療雄性和雌性ZSF 1大鼠24周，評(píng)價(jià)其抗肥胖癥、抗糖尿病、降低膽固醇以及對(duì)腎臟的影響。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)雄性ZSF 1大鼠采用聚乙二醇400(PEG 400)(Sigma，St.Louis，MO)或3種劑量之一的溶于聚乙二醇400中的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇(Steraloids，Inc.Newport，RI)連續(xù)治療24周。三種劑量是1微克/千克/小時(shí)、3微克/千克/小時(shí)、或10微克/千克/小時(shí)。雌性ZSF 1大鼠采用PEG 400或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基聚二醇連續(xù)治療24周。雌性ZSF 1大鼠在11周齡時(shí)施行了卵巢摘除術(shù)。所有雄性和雌性大鼠，都在大約13周齡時(shí)開始用雌二醇代謝物進(jìn)行治療。一組雄性ZSF 1大鼠只用PEG 400治療，但進(jìn)行配對(duì)飼養(yǎng)，每天的攝食量與用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基聚二醇治療的雄性ZSF 1大鼠相同。處理藥物通過皮下植入泵(2ML4型Alzet滲透泵，Alza Corporation，Palo Alto，CA)給予。設(shè)計(jì)此研究來評(píng)價(jià)對(duì)體重、攝食量、飲水量、排尿量、尿蛋白質(zhì)排出量、膽固醇水平、血漿葡萄糖水平、以及葡萄糖耐受性的治療效應(yīng)和劑量反應(yīng)。
治療方法將所需量的雌二醇代謝物溶于PEG400中，制備2-羥基雌二醇和2-甲氧基雌二醇的儲(chǔ)備溶液。該儲(chǔ)備溶液用PEG 400稀釋，根據(jù)各治療組的平均體重和該研究中每批滲透泵聲稱的容量輸送速率輸注3種所需劑量；在各組每一個(gè)滲透泵植入之前，新鮮配制此儲(chǔ)備溶液。PEG 400的對(duì)照溶液以同樣方式制備。
微型滲透泵所有治療藥物通過皮下植入的滲透泵(2ML4型Alzet滲透泵，Alza Corporation，Palo Alto，CA)給予。每批滲透泵以聲稱的輸注速度進(jìn)行輸送，并根據(jù)各批泵聲稱的輸注速度調(diào)整制劑濃度，以保證其輸注量為1、3、或10微克/千克/小時(shí)。在植入微型滲透泵前24小時(shí)，按治療組大鼠的平均體重調(diào)整劑量。
在植入微型滲透泵之前，用Fluotec 3型麻醉機(jī)(Ohmeda，Steeton，UK)輸送三氟溴氯乙烷和氧氣(2.5升/分鐘)麻醉大鼠。每只大鼠輕度麻醉后，背部剃毛，作半英寸切口，植入微型滲透泵。用數(shù)枚創(chuàng)口夾封閉切口，7之后拆除。微型滲透泵隔33天更換一次，每只大鼠每次改變位置植入一個(gè)微型滲透泵。
植入前，按生產(chǎn)廠商的說明書充填微型滲透泵。記錄每一批的批號(hào)和灌注速度。一旦取出微型滲透泵，置于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，貯存在-80℃，以備進(jìn)一步分析。
代謝籠具在本項(xiàng)研究中采用了代謝籠具(Nalgene，Rochester，NY)。大鼠關(guān)養(yǎng)在代謝籠中48小時(shí)。前24小時(shí)是適應(yīng)期，其次的24小時(shí)內(nèi)測(cè)定攝食量、飲水量、排尿量。此外，采集尾靜脈血液樣品，以供測(cè)定血液葡萄糖、鈉、鉀、白蛋白以及肌酸含量。還分析了血液樣品評(píng)估肌酸廓清率、鈉分級(jí)排出量、鉀分級(jí)排出量和白蛋白分級(jí)排出量。此外，在大鼠代謝籠關(guān)養(yǎng)期內(nèi)，還評(píng)估了以下標(biāo)準(zhǔn)體重、攝食量、飲水量、排尿量、尿蛋白量、尿白蛋白量、尿葡萄糖量、以及尿鈉和尿鉀含量。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析在微型泵植入前24小時(shí)進(jìn)行體重評(píng)估，并根據(jù)每組的平均體重計(jì)算給予每只大鼠的藥物或運(yùn)載體劑量。在代謝籠內(nèi)關(guān)養(yǎng)之前，大約每2個(gè)月稱一次動(dòng)物體重。
攝食量通過裝滿總量為250克標(biāo)準(zhǔn)粉狀實(shí)驗(yàn)用飼料的食物容器來測(cè)定。在24小時(shí)內(nèi)再次稱量食物容器，通過計(jì)算兩次稱重的差額評(píng)估攝食量。
飲水量通過在刻度水瓶?jī)?nèi)將水裝滿至250毫升標(biāo)記處來測(cè)定，24小時(shí)后估計(jì)其中的水量水平，根據(jù)兩次測(cè)定的水量差額計(jì)算出飲水量。
排尿量通過采集24小時(shí)的尿液，稱取其重量測(cè)定。
尿蛋白排出量采用重喹啉甲酸試劑(Pierce，Rockford，IL)進(jìn)行分光光度試驗(yàn)測(cè)定。以24小時(shí)排尿量和尿蛋白濃度的乘積，計(jì)算出24小時(shí)尿蛋白排出量。
尿葡萄糖排出量采用“IntinityTM Glucose Reagent”牌葡萄糖試劑(SigmaDiagnostics)按廠商說明書進(jìn)行分光光度試驗(yàn)測(cè)定。以24小時(shí)排尿量和尿葡萄糖濃度的乘積，計(jì)算出24小時(shí)尿葡萄糖排出量。
血葡萄糖含量通過從尾靜脈采集一滴血液，滴在葡萄糖試驗(yàn)紙條上(PrecisionQID Blood Glucose Test Strips試劑盒)進(jìn)行測(cè)定，用Precision QID測(cè)糖儀(Medisense，Inc.)讀取結(jié)果。
對(duì)口服葡萄糖給藥的反應(yīng)通過令大鼠禁食6小時(shí)，然后從其尾靜脈采集一滴血液來測(cè)定。然后每只大鼠經(jīng)口飼法給予口服葡萄糖水溶液2克/4毫升/千克，30、60和120分鐘后采集血液樣品。按前述方法評(píng)仨血葡萄糖水平。
Leptin水平通過小鼠leptin ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定(Crystal Chem，Inc.，Chicago，IL)。
糖化血紅蛋白(HbAlc)水平采用AlcMowTM監(jiān)測(cè)儀(Metrika，Sunnyvale，CA)進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果證實(shí)實(shí)施例2中用2-甲氧基雌二醇治療的ZSF 1大鼠與上述實(shí)施例1中用2-羥基雌二醇治療的大鼠所得的結(jié)果相似。
在基線上，治療組或?qū)φ战M雄性大鼠的體重?zé)o差別(見圖4)。用2-甲氧基雌二醇或2-羥基雌二醇治療導(dǎo)致體重增長(zhǎng)減少和攝食量降低(見圖4和5)。用10微克/千克/小時(shí)2-羥基雌二醇治療后雌性大鼠試呈現(xiàn)同樣的結(jié)果(見圖6)。
還有，所有的雄性大鼠組中，基線尿蛋白排出量相似。用1、3、或10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療24周后，與對(duì)照大鼠相比較，用雌二醇代謝物治療的雄性大鼠尿蛋白排出量下降(見圖7)。雌性大鼠顯示起始的尿蛋白排出量較低，因而給予雌二醇代謝物后，幾乎沒有改善。此外雌性大鼠尿蛋白排出量無顯著增加。
此外，用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療14-15周，給予2克/4ml/kg葡萄糖后，雄性大鼠清晰地顯示其血漿葡萄糖水平(毫克％)低于對(duì)照組大鼠(見圖8和9)。雌性大鼠組顯示的基線血漿葡萄糖水平低于雄性大鼠。給予葡萄糖可引起血漿葡萄糖水平先升高，隨后迅速下降至顯著低于雄性大鼠所見水平。由于起先血漿葡萄糖水平低已處在可接受水平，因而給予雌二醇代謝物，對(duì)于血漿葡萄糖水平幾乎無作用。
用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療24周，雄性或雌性大鼠均顯示血液尿素氮水平低于對(duì)照組(見圖10)。
雄性大鼠10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療20周后，其leptin水平明顯低于照組大鼠(見圖11)。同樣，用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇治療的雌性大鼠leptin水平也比對(duì)照大鼠低(見圖11)。
還有，用10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧基雌二醇或2-羥基雌二醇治療的雄性大鼠24小時(shí)飲水量低于對(duì)照大鼠(見圖12)。
用10微克/千克/小時(shí)的2-甲氧基雌二醇或2-羥基雌二醇治療的雄性大鼠24小時(shí)排尿量低于對(duì)照大鼠(見圖13)。
用10微克/千克/小時(shí)的2-羥基雌二醇或2-甲氧基雌二醇治療的雄性大鼠糖化血紅蛋白(HbAlc)含量低于對(duì)照大鼠。
雖然通過本發(fā)明的具體實(shí)施例描述了公開的方法和組合物，但本領(lǐng)域一般技術(shù)人員知道可以不背離本發(fā)明權(quán)利要求所述的觀念、思路和范圍而采用其各種變化。更具體說，雖然化學(xué)和生理學(xué)相關(guān)的可得到相同或相似結(jié)果的某些制劑可用以替代本文所述的制劑。如本文所附權(quán)利要求所明確的那樣，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，所有這些相似的替代或修改都應(yīng)認(rèn)為屬于本發(fā)明范疇。相應(yīng)地，應(yīng)理解本文中插圖和論述的內(nèi)容只是為了便于理解本發(fā)明而不意味著限制本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.預(yù)防或治療個(gè)體心血管疾病危險(xiǎn)因素的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的心血管疾病的危險(xiǎn)因素選自肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、血管疾病和腎臟疾病。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
6.預(yù)防或治療個(gè)體肥胖癥的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述組合物包括所述組合物的控釋性制劑。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物一種的前體藥物。
10.預(yù)防或治療個(gè)體代謝綜合征的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療量有效的含雌二醇代謝物的一種組合物。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述組合物包括所述組合物的控釋性制劑。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
14.預(yù)防或治療個(gè)體糖尿病的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
17.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
18.預(yù)防或治療個(gè)體腎臟疾病的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
20.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
21.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
22.預(yù)防或治療個(gè)體胰島素抵抗性的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
25.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
26.預(yù)防或治療個(gè)體血管內(nèi)皮功能紊亂的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述全體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
29.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
30.預(yù)防或治療個(gè)體高脂血癥的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
32.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
33.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
34.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述高脂血癥是高膽固醇血癥。
35.預(yù)防或治療個(gè)體高血壓的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
37.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
38.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
39.預(yù)防或治療個(gè)體糖尿病性腎病的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
40.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
41.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
42.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
43.預(yù)防或治療個(gè)體蛋白尿癥的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的包含雌二醇代謝物的一種組合物。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
45.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
46.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物前體藥物。
47.控制個(gè)體葡萄糖水平的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
49.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述組合物包括所述組合物的控釋性制劑。
50.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
51.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物可減少所述個(gè)體的多尿現(xiàn)象。
52.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物可減少所述個(gè)體的煩渴現(xiàn)象。
53.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物可減少所述個(gè)體的糖化血紅蛋白水平。
54.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物可改善所述個(gè)體的口服葡萄糖耐受能力。
55.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物可減少所述個(gè)體的糖尿現(xiàn)象。
56.減少個(gè)體leptin水平的一種方法，其特征在于，該方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其特征在于，所述雌二醇代謝物選自2-甲氧雌二醇、4-甲氧雌二醇、2-羥基雌二醇以及4-羥基雌二醇。
58.如權(quán)利要求56所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述組合物的控釋性制劑。
59.如權(quán)利要求56所述的方法，其特征在于，所述組合物包含所述雌二醇代謝物的前體藥物。
全文摘要
本發(fā)明對(duì)個(gè)體的心血管疾病危險(xiǎn)因素提供了預(yù)防或治療方法，此方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的含雌二醇代謝物的一種組合物。這類危險(xiǎn)因素包括肥胖癥、代謝綜合征、糖尿病、血管疾病和腎臟疾病。優(yōu)選的雌二醇代謝物有2－甲氧雌二醇、4－甲氧雌二醇、2－羥基雌二醇、和4－羥基雌二醇，或其前體藥物。該組合物也可制成控釋性劑型。還提供了采用雌二醇代謝物治療或預(yù)防胰島素抗性、血管內(nèi)皮層功能紊亂、高脂血癥、高血壓、糖尿病性腎病、蛋白尿癥、以及l(fā)eptin含量減少的方法。另外，這類方法中還提供了穩(wěn)定葡萄糖含量的一種方法。這類治療方法可用于不同性別，因?yàn)檫@些制劑并無女性化雌激素作用。
文檔編號(hào)A61P3/12GK1571672SQ02820658
公開日2005年1月26日 申請(qǐng)日期2002年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月17日
發(fā)明者E·K·杰克遜, S·P·托弗維克, R·K·杜比 申請(qǐng)人:匹茲堡大學(xué)