本發(fā)明涉及一種金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物，指的是利用金耳菌種采用固體發(fā)酵技術(shù)轉(zhuǎn)化山藥中活性成分山藥皂苷，同時(shí)降解山藥中淀粉等糖類(lèi)物質(zhì)，合成含有山藥皂苷、金耳皂苷和多糖類(lèi)發(fā)酵物，屬于生物工程
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人民生活水平的提高以及人們飲食結(jié)構(gòu)的變化，尤其是高脂膳食攝入的增多，高血壓、高血脂和高血糖等“三高”疾病的發(fā)病率逐年上升?！叭摺奔膊∫殉蔀橛绊憞?guó)民身體健康的頭號(hào)大敵，每年因“三高”疾病死亡的人數(shù)居各種疾病死亡人數(shù)的首位?？刂坪皖A(yù)防“三高”，西藥雖然效果較好,但因副作用大、價(jià)格相對(duì)較高，并非每個(gè)病人都能接受，因此開(kāi)發(fā)療效更好、副作用更小的藥品及保健食品有著良好的發(fā)展前景。山藥為薯預(yù)科薯蕷屬中能形成地下肉質(zhì)塊莖的栽培種,一年生或多年生纏繞性藤本植物，別名淮山、薯?yè)p、懷山藥等。山藥是一種藥食兼用的高產(chǎn)、高效經(jīng)濟(jì)作物，干制入藥為滋補(bǔ)強(qiáng)壯劑,對(duì)虛弱、慢性腸炎、糖尿病等有輔助療效。山藥富含蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及多糖、山藥皂苷(甾體皂苷)、維生素、尿囊素、多巴胺、山藥堿、多酚氧化酶等生物活性成分?！侗静菥V目》山藥治諸虛百損，療五勞七傷，止腰痛、除煩熱、補(bǔ)心氣不足，開(kāi)達(dá)心孔、多記事、強(qiáng)筋骨、益腎氣、健脾胃、止瀉痢、化痰涎、潤(rùn)皮毛等功效，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》記載山藥具有止消渴(糖尿病)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明山藥具有調(diào)節(jié)或增強(qiáng)機(jī)體免疫、降低血壓和血脂功效以及抗腫瘤、抗氧化、抗衰老和抗突變等作用。山藥最初食用方法是去皮、曬干、磨粉后長(zhǎng)期保藏，通常將山藥粉通過(guò)蒸煮做成各種食品或者將山藥直接煲成湯來(lái)食用。近些年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們對(duì)山藥的開(kāi)發(fā)也逐漸的向深層次發(fā)展，有關(guān)山藥產(chǎn)品研究開(kāi)發(fā)的報(bào)道很多：將山藥直接干燥制成全粉、精粉，將山藥直接打漿制成系列飲料，將山藥淀粉制成營(yíng)養(yǎng)米粉，將山藥和純奶、大米等復(fù)合發(fā)酵成山藥酸奶和山藥酒等。但質(zhì)量不穩(wěn)定，而且山藥還具有中藥的共性，見(jiàn)效慢。將山藥的有效成分直接提取出來(lái)開(kāi)發(fā)成具有保健功能的食品正逐漸成為山藥開(kāi)發(fā)利用的新思路。金耳(tremellaaurantialbaexfr)又稱(chēng)黃木耳、茂若色爾布(藏語(yǔ))。金耳屬于擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、銀耳目、銀耳科、銀耳屬的一個(gè)種。銀耳屬至今已報(bào)道的有80多個(gè)種，其中沒(méi)有一種報(bào)道有毒。民間對(duì)金耳及其藥用價(jià)值的認(rèn)識(shí)有著非常悠久的歷史。明朝時(shí)期的藥物學(xué)家李時(shí)珍所著《本草綱目》中也有“其金色著(當(dāng)指金耳)治癖積聚，腹痛金瘡”的記載。另外《中國(guó)藥用真菌》、《中國(guó)中藥大典宗旨》、《云南食用菌》對(duì)金耳的食用價(jià)值均有詳細(xì)記載。臨床上主治神經(jīng)衰弱，肺熱、哮喘、慢性支氣管炎、高血壓、肝炎等疾病。已有研究證明預(yù)防性服用金耳子實(shí)體浸提液有助于動(dòng)物的鎮(zhèn)咳祛痰使致痙的氣管松弛，提高氣管平滑肌的松弛率,對(duì)氣管平滑肌有松弛作用,并能延長(zhǎng)藥物引喘的潛伏期,故復(fù)方金耳具有較強(qiáng)的平喘作用。同時(shí)他們證明復(fù)方金耳可提高機(jī)體免疫功能和具有較強(qiáng)的止咳作用。毛述永等人用四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型研究了金耳子實(shí)體水溶性多糖的作用。結(jié)果證明金耳子實(shí)體多糖可有效的降低高血糖鼠的血清葡萄糖水平，同時(shí)改善血漿膽固醇、甘油三脂和糖化血漿蛋白等指標(biāo)。kiho等人研究了腹腔注射金耳子實(shí)體水溶性多糖和醇溶性多糖的降血糖作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金耳子實(shí)體多糖對(duì)正常小鼠、鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病小鼠以及基因缺陷型糖尿病小鼠均具有降血糖作用；并觀察了葡萄糖致高血糖連續(xù)喂飲30天金耳子實(shí)體多糖的影響，亦發(fā)現(xiàn)金耳多糖有明顯的降高血糖作用。在此基礎(chǔ)上kiho等人又觀察了子實(shí)體多糖對(duì)糖酵解關(guān)鍵酶活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金耳子實(shí)體多糖能顯著升高正常鼠和糖尿病鼠葡萄糖激酶和己糖激酶活性，降低6-磷酸葡萄糖酶的活性，對(duì)磷酸果糖激酶無(wú)顯著影響，與此同時(shí)金耳子實(shí)體多糖還提高了磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶：6-磷酸葡萄糖脫氫酶的活性。因葡萄糖激酶和己糖激酶是葡萄糖攝取和吸收的關(guān)鍵酶，而6-磷酸葡萄糖酶參與將葡萄糖運(yùn)出肝臟，這一結(jié)果說(shuō)明金耳子實(shí)體多糖通過(guò)促進(jìn)葡萄糖吸收和減少葡萄糖從肝臟輸出有效地降低血糖，kiho等人的結(jié)果證明金耳子實(shí)體多糖不論在正常鼠還是糖尿病鼠中，加速葡萄糖代謝是其降血糖機(jī)制之一。目前已經(jīng)公開(kāi)的有關(guān)金耳的報(bào)道主要是如何獲得金耳菌種、金耳的栽培或是金耳多糖的提取，以及金耳轉(zhuǎn)化銀杏白果。沒(méi)有利用其生產(chǎn)含有山藥皂苷、金耳皂苷和多糖的保健品或藥品的報(bào)道，而且都是實(shí)驗(yàn)室規(guī)模，其工藝技術(shù)能否用于工業(yè)化還不能確定。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于：提供一種金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物，將液體菌種擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)與固態(tài)生物轉(zhuǎn)化相結(jié)合，以金耳為菌種，大米山藥為主要原料，采用發(fā)酵與轉(zhuǎn)化相結(jié)合，生產(chǎn)具有降血糖功能的保健食品和中藥。技術(shù)方案本發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入的研究，摸索出一種以大米山藥為主要原料，通過(guò)金耳菌體液態(tài)搖瓶培養(yǎng)、液體種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)獲得含有金耳液體菌種。利用該液體菌種與滅過(guò)菌的大米山藥和輔料混合，平攤于固態(tài)發(fā)酵床上，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。具體方案如下：一種金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物，其由如下方法制備而成：a.試管擴(kuò)大培養(yǎng)：將金耳菌種接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基中，20-35℃下培養(yǎng)3-10d后，進(jìn)行1-10℃保藏，制得金耳斜面菌種；b.液體搖瓶培養(yǎng)：將步驟a制得的金耳斜面菌種切成3mm×3mm大小，挑取3-5塊接種到裝有液體搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，20-35℃下培養(yǎng)3-10d后，制得液體搖瓶菌種；其中，每1l液體搖瓶培養(yǎng)基組成為：葡萄糖10～60克，玉米粉10～50克，小麥麩皮5～20克，玉米皮5～25克，酵母浸膏5～30克，磷酸二氫鉀1-8克，硫酸鎂1～8克；c.種子罐種子培養(yǎng)：將步驟b制得的液體搖瓶菌種接種到種子罐培養(yǎng)基，在種子罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，制得種子罐菌種液體；其中，每1l種子罐培養(yǎng)基含有：葡萄糖10～60g，小麥麩皮5～20g,玉米皮5～80g，酵母浸膏5～30g，磷酸二氫鉀1-8g，硫酸鎂1～8g；d.固體發(fā)酵培養(yǎng)：將種子罐菌種液體和固體發(fā)酵培養(yǎng)基混合均勻，攤在固態(tài)發(fā)酵床上，厚度6-20cm，寬度60-120cm，在固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)室中培養(yǎng)3-15d后，干燥至恒重，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物；步驟d中，所述固體發(fā)酵培養(yǎng)基是通過(guò)將培養(yǎng)基原料進(jìn)行滅菌制得，培養(yǎng)基原料按重量份計(jì)包括：大米100份，山藥20～60份，玉米皮10～50份，水60～150份。進(jìn)一步，步驟c中，將液體搖瓶菌種接種到種子罐培養(yǎng)基的接種量為2-20v％。進(jìn)一步，種子罐中的培養(yǎng)條件為：溫度為20-35℃，攪拌轉(zhuǎn)速為50-160r/m，通氣量為0.2-1.8:1v/v/m，培養(yǎng)18-200h。進(jìn)一步，步驟d中，接種量為：每100g固體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種1-20ml種子罐菌種液體。進(jìn)一步，步驟d中，培養(yǎng)條件為：溫度20-35℃，通氣量為0.05-0.5:1v/v/m。上述金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物在降血糖中的應(yīng)用?？蓪⒈景l(fā)明的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物制備醇提物和水提物，用于腹腔注射途徑或口服途徑。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的醇提物的制備方法：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物加入10～60ml20～80wt％的乙醇溶液中，于85℃提取2～6h，然后離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次，三次提取濾液合并；然后真空濃縮至2-10ml，再加入10～20ml水，2℃沉淀；然后濾出濃縮沉淀物，用2℃水洗滌后烘干，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物的醇提物。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的水提物的制備方法：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物加入10～60ml水，煮沸提取2～6h，然后離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次，三次提取濾液合并；三次提取合并濾液真空濃縮至2-10ml；濃縮液加入4～10ml乙醇，2℃沉淀；濾出濃縮沉淀物，用乙醇洗滌后烘干，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物的水提物。有益效果：本發(fā)明的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物中，100克干的發(fā)酵物含有20～80毫克山藥皂苷，10～100毫克金耳皂苷，100～1000毫克多糖。本發(fā)明人經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)證實(shí)，金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物口服途徑及其醇提物和水提物腹腔注射途徑或口服途徑給予高血糖大鼠可以顯著降低其血糖。而且本發(fā)明的發(fā)酵物是一種純天然制劑，與現(xiàn)有降糖藥物相比不僅見(jiàn)效快、效果顯著，并且服用后不會(huì)導(dǎo)致低血糖、有益無(wú)害。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1a.試管擴(kuò)大培養(yǎng)：將金耳菌種接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基中，20℃下培養(yǎng)10d后，進(jìn)行10℃保藏，制得金耳斜面菌種；b.液體搖瓶培養(yǎng)：將步驟a制得的金耳斜面菌種切成3mm×3mm大小，挑取3-5塊接種到裝有液體搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，35℃下培養(yǎng)3d后，制得液體搖瓶菌種；其中，每1l液體搖瓶培養(yǎng)基組成為：葡萄糖60克，玉米粉50克，小麥麩皮20克，玉米皮25克，酵母浸膏30克，磷酸二氫鉀8克，硫酸鎂8克；c.種子罐種子培養(yǎng)：將步驟b制得的液體搖瓶菌種按照體積比20％接種到種子罐培養(yǎng)基，在溫度為35℃，攪拌轉(zhuǎn)速為50r/m，通氣量為0.2:1v/v/m的條件下，培養(yǎng)18h，制成種子罐菌種；其中，每1l種子罐培養(yǎng)基成分為：葡萄糖10克，小麥麩皮5克，玉米皮5克，酵母浸膏5克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克；d.固體發(fā)酵培養(yǎng)：將種子罐菌種和固體發(fā)酵培養(yǎng)基混合均勻(每100g固體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種20ml種子罐菌種液體)，攤在固態(tài)發(fā)酵床上，厚度20cm，寬度60cm，長(zhǎng)度不限。在溫度20℃，通氣量為0.05:1的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)室中培養(yǎng)15d后，干燥至恒重，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物；固體發(fā)酵培養(yǎng)基通過(guò)將培養(yǎng)基原料進(jìn)行滅菌制得，固體發(fā)酵培養(yǎng)基以每100kg大米添加的其他各成分的重量為：山藥20kg，玉米皮10kg，水60kg。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的醇提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例1烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入10ml80wt％乙醇溶液中，于85℃提取6h，離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次，三次提取濾液合并；真空濃縮至2ml后，加入10m水，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用2℃水洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得1克的發(fā)酵物的醇提物中含有10毫克山藥皂苷，10毫克金耳皂苷。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的水提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例1烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入10ml水，煮沸提取6h，離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次。三次提取濾液合并；然后真空濃縮至2ml，再加入4ml乙醇，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用乙醇洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得，1克的發(fā)酵物的水提物中含有103毫克多糖。實(shí)施例2a.試管擴(kuò)大培養(yǎng)：將金耳菌種接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基中，25℃下培養(yǎng)6d后，進(jìn)行5℃保藏，制得金耳斜面菌種；b.液體搖瓶培養(yǎng)：將步驟a制得的金耳斜面菌種切成3mm×3mm大小，挑取3塊接種到裝有液體搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，20℃下培養(yǎng)10d后，制得液體搖瓶菌種；其中，每1l液體搖瓶培養(yǎng)基組成為：葡萄糖10克；玉米粉10克；小麥麩皮5克；玉米皮5克；酵母浸膏5克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克；c.種子罐種子培養(yǎng)：將步驟b制得的液體搖瓶菌種按照體積比2％接種到種子罐培養(yǎng)基，在溫度為20℃，攪拌轉(zhuǎn)速為160r/m，通氣量為1.8:1v/v/m的條件下，培養(yǎng)200h，制成種子罐菌種；其中，每1l種子罐培養(yǎng)基成分為：葡萄糖60克，小麥麩皮20克，玉米皮80克，酵母浸膏30克，磷酸二氫鉀8克，硫酸鎂8克；d.固體發(fā)酵培養(yǎng)：將種子罐菌種和固體發(fā)酵培養(yǎng)基混合均勻(每100g固體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種1ml種子罐菌種液體)，攤在固態(tài)發(fā)酵床上，厚度6cm，寬度60cm，長(zhǎng)度不限。在溫度35℃，通氣量為0.05:1固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)室中培養(yǎng)10d后，干燥至恒重，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物；固體發(fā)酵培養(yǎng)基通過(guò)將培養(yǎng)基原料進(jìn)行滅菌制得，固體發(fā)酵培養(yǎng)基以每100kg大米添加的其他各成分的重量為：山藥60kg，玉米皮50kg，水150kg。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的醇提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例2烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入60ml20wt％乙醇溶液中，于85℃提取2h，用離心機(jī)離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次，三次提取濾液合并；真空濃縮至10ml后，加入20ml水，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用2℃水洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得1克的發(fā)酵物的醇提物含有25.6毫克山藥皂苷，38.3毫克金耳皂苷。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的水提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例1烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入60ml水，煮沸提取2h，離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次。三次提取濾液合并；然后真空濃縮至10ml，再加入10ml乙醇，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用乙醇洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得，1克的發(fā)酵物的水提物中含有274毫克多糖。實(shí)施例3a.試管擴(kuò)大培養(yǎng)：將金耳菌種接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基中，20-35℃下培養(yǎng)3d后，進(jìn)行1℃保藏，制得金耳斜面菌種；b.液體搖瓶培養(yǎng)：將步驟a制得的金耳斜面菌種切成3mm×3mm大小，挑取3-5塊接種到裝有液體搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，28℃下培養(yǎng)7d后，制得液體搖瓶菌種；其中，每1l液體搖瓶培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30克；玉米粉30克；小麥麩皮12.5克，玉米12.5克，酵母浸膏18克，磷酸二氫鉀5克，硫酸鎂4克；c.種子罐種子培養(yǎng)：將步驟b制得的液體搖瓶菌種按照體積比10％接種到種子罐培養(yǎng)基，在溫度為28℃，攪拌轉(zhuǎn)速為110r/m，通氣量為1:1v/v/m的條件下，培養(yǎng)100h，制成種子罐菌種；其中，每1l種子罐培養(yǎng)基成分為：葡萄糖30克，小麥麩皮12.5克，玉米皮42克，酵母浸膏16克，磷酸二氫鉀5克，硫酸鎂5克；d.固體發(fā)酵培養(yǎng)：將種子罐菌種和固體發(fā)酵培養(yǎng)基混合均勻(每100g固體發(fā)酵培養(yǎng)基中接種10ml種子罐菌種液體)，攤在固態(tài)發(fā)酵床上，厚度13cm，寬度75cm，長(zhǎng)度不限。在溫度18℃，通氣量為0.3:1固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)室中培養(yǎng)9d后，干燥至恒重，得到金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物；固體發(fā)酵培養(yǎng)基通過(guò)將培養(yǎng)基原料進(jìn)行滅菌制得，固體發(fā)酵培養(yǎng)基以每100kg大米添加的其他各成分的重量為：山藥40kg，玉米皮30kg，水1000kg。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的醇提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例3烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入35ml50％乙醇溶液中，于85℃提取4h，用離心機(jī)離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次，三次提取濾液合并；真空濃縮至5ml后，加入15ml水，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用2℃水洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得1克的發(fā)酵物的醇提物含有39毫克山藥皂苷，58.9毫克金耳皂苷。金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物的水提物的制備：以1g金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物計(jì)算，將實(shí)施例1烘干的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥發(fā)酵物加入36ml水，煮沸提取4h，離心，濾渣重復(fù)此提取過(guò)程兩次。三次提取濾液合并；然后真空濃縮至6ml，再加入7ml乙醇，2℃沉淀，濾出濃縮沉淀物，用乙醇洗滌后烘干，即得。實(shí)驗(yàn)測(cè)得，1克的發(fā)酵物的水提物中含有782毫克多糖。試驗(yàn)測(cè)試：1、將實(shí)施例1-3制得的金耳固態(tài)轉(zhuǎn)化山藥的發(fā)酵物進(jìn)行金耳皂苷、山藥皂苷、多糖的含量測(cè)試，測(cè)試方法如下：1)金耳皂苷的含量測(cè)試(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35和0.40ml1mg/ml用無(wú)水乙醇配置的人參皂甙b1標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10ml具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，加入0.2ml的5％香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于60℃水浴中加熱20min，立即取出用流水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml，搖勻，于505nm處測(cè)定其吸光值od。繪制人參皂甙吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)金耳皂苷的提取：取經(jīng)80℃干燥至恒重的金耳轉(zhuǎn)化山藥樣品1.0g250ml三角瓶中，加入25ml1％氨水乙醇，于70℃的水浴中進(jìn)行振蕩提取，3h后過(guò)濾，濾渣用25ml二次70％乙醇二次重復(fù)提取取物。兩次濾液合并經(jīng)0.45微米濾膜過(guò)濾，獲得茶皂苷浸提液。浸提液減壓濃縮后至漿狀，然后30℃真空干燥至恒重，20％酒精復(fù)融，過(guò)濾，濾液即為金耳皂苷提取液。(3)樣品中金耳皂苷濃度的測(cè)定：準(zhǔn)確吸取金耳皂苷提取液1.0ml共3份，分別置10ml容量瓶，在每個(gè)容量瓶?jī)?nèi)分別加入5.0ml10％福林酚試劑搖勻，反應(yīng)8min內(nèi)，加入4.0ml7.5％na2co3溶液，加水定容至刻度、搖勻。室溫下放置60min。用10mm比色皿、在765nm波長(zhǎng)條件下，以水作空白對(duì)照，測(cè)定吸光度(a)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品金耳皂苷的含量。2)山藥皂苷的含量測(cè)試a.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35和0.40ml1mg/ml用無(wú)水乙醇配置的薯蕷皂甙標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10ml具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，加入0.2ml的5％香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于60℃水浴中加熱20min，立即取出用流水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml，搖勻，于505nm處測(cè)定其吸光值od。繪制薯蕷皂甙吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。b.樣品山藥皂苷的提取:取經(jīng)80℃干燥至恒重的金耳轉(zhuǎn)化山藥樣品2.5g，用乙醚經(jīng)索氏提取器脫脂風(fēng)干。準(zhǔn)確稱(chēng)取脫脂風(fēng)干的金耳山藥粉0.2g于10ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入4ml含1％氨水乙醇，加塞后放入超聲波儀中超聲1h，然后取出試管，置于離心機(jī)中以3000轉(zhuǎn)/分離心15min，上清液作為待測(cè)液。浸提液減壓濃縮后至漿狀，然后30℃真空干燥至恒重，95％酒精復(fù)融，過(guò)濾，濾液即為山藥皂苷提取液。c.樣品中山藥皂苷濃度的測(cè)定：吸取上述樣品山藥皂苷提取液各0.4ml，3個(gè)重復(fù)，分別置于10ml具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，加入0.2ml的5％香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于60℃水浴中加熱20min，立即取出用流水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml，搖勻，于505nm處測(cè)定其吸光值od。3)多糖的含量測(cè)試(1)多糖準(zhǔn)曲線測(cè)定：準(zhǔn)確量取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和0.7ml1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液于定量刻度試管中，蒸餾水定容到2ml，分別加入1.0ml5％的苯酚溶液，快速加入5.0ml濃硫酸并搖勻，沸水浴15min，流動(dòng)水冷卻至室溫，以2ml蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)液，冷卻后，用水代替標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液作為空白對(duì)照。于波長(zhǎng)490nm處測(cè)量吸光值，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度-吸光度曲線圖。(2)多糖的提取：稱(chēng)取1g樣品，放入試管，加入10ml蒸餾水，塞入試管塞，在80℃下水浴3h，轉(zhuǎn)入離心管離心，殘?jiān)偌尤?0ml蒸餾水，沸水浴1h，取上清液，蒸餾水定容至10ml保存在4℃冰箱中，用于分析多糖含量。(3)樣品中多糖測(cè)定：準(zhǔn)確量取多糖提取液2ml，快速加入5.0ml濃硫酸并搖勻，沸水浴15min，流動(dòng)水冷卻至室溫，以2ml蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)液，冷卻后，用水代替標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液作為空白對(duì)照。于波長(zhǎng)490nm處測(cè)量吸光值。測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表：實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3金耳皂苷，mg/100g發(fā)酵物10.0299.658.7山藥皂苷，mg/100g發(fā)酵物20.144.679.9多糖，mg/100g發(fā)酵物1024499982、降血糖功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)方法：100只小鼠以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)喂養(yǎng)5d后，腹腔注射180mg/kg體重的四氧嘧啶，飼喂普通小鼠飼料(12％酪蛋白，60.98％玉米淀粉，15％蔗糖，7％玉米油，1％維生素糖粉，4％礦物鹽，0.02％魚(yú)肝油)五天后，取尾血用血糖試劑盒測(cè)定血糖含量，以血糖含量高于13mmol/ml的模型鼠隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組、高血糖對(duì)照組、實(shí)施例1樣品組、實(shí)施例2樣品組和實(shí)施例3樣品組，所有實(shí)驗(yàn)鼠都飼喂基礎(chǔ)飼料。各組小鼠均自由攝食和飲水，動(dòng)物室溫度18～22℃。連續(xù)給藥四周后，每隔七天尾部靜脈取血，分析血糖含量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期間，正常組和陽(yáng)性對(duì)照組血糖值基本不變，而實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3組血糖值顯著降低。當(dāng)前第1頁(yè)12