專利名稱：水稻耐逆性相關(guān)受體類蛋白OsSIK3及其編碼基因與應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種植物耐逆性相關(guān)蛋白及其編碼基因與應用，特別涉及來源于水稻的耐逆性相關(guān)受體類蛋白0SSIK3及其編碼基因與應用。
背景技術(shù)：
環(huán)境中物理化學因素的變化，如干旱、鹽堿、冷害、凍害、水澇等脅迫因素以及病蟲害等生物因素對植物的生長發(fā)育具有重要影響，嚴重時會造成農(nóng)作物大規(guī)模減產(chǎn)，培育耐逆性作物是種植業(yè)的主要目標之一。提高作物的耐逆性，可以利用傳統(tǒng)的育種方法和分子遺傳育種方法。目前，分子遺傳育種已經(jīng)成為科技工作者所關(guān)注的領域之一。在非生物或生物逆境的脅迫下，高等植物細胞有多種途徑感受和應答外界環(huán)境中物化參數(shù)的變化，將胞外信號變?yōu)榘麅?nèi)信號，經(jīng)過一系列磷酸化級聯(lián)反應將信號傳遞到細胞核，經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控相關(guān)的功能基因，可以啟動逆境應答基因的表達，提高植物的耐逆性。 植物耐非生物脅迫相關(guān)的基因已有很多報道，包括效應分子基因和調(diào)控基因。水稻中與耐非生物脅迫相關(guān)的調(diào)控基因方面，包括轉(zhuǎn)錄因子如本實驗室克隆的0sbHLH(專利號 ZL 03 I 23913. 7)、0sDREBL(專利號 ZL 02 I 29517.4)等和受體類激酶，如 OsSIKl (專利申請?zhí)?00710176995.7)及其它調(diào)控蛋白。上述基因轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥或水稻后，其聞表達均提聞了轉(zhuǎn)基因植株耐非生物脅迫的能力。水稻作為最重要的糧食作物之一，改善其耐逆性，具有重要的理論及現(xiàn)實意義。轉(zhuǎn)基因水稻植株的成功和水稻基因組測序工作的完成為研究發(fā)現(xiàn)新的耐逆境基因提供了有利條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供與植物耐逆性相關(guān)的蛋白及其編碼基因。本發(fā)明所提供的與植物耐逆性相關(guān)的蛋白，名稱為0sSIK3，來源于水稻(Oryzasativa),是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。序列表中的序列2由683個氨基酸殘基組成。所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因是如下I)或2)或3)的DNA分子I)序列表中序列I所示的DNA分子；2)在嚴格條件下與I)所不的DNA分子雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；3)與I)或2)所述的DNA分子具有90 %以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。上述嚴格條件可為用6XSSC，0. 5% SDS的溶液，在65°C下雜交，然后用2XSSC，O. I % SDS 和 I X SSC, O. I % SDS 各洗膜一次。序列表中的序列I由2052個脫氧核糖核苷酸組成，自5’末端的第I至2049位脫氧核糖核苷酸為0sSIK3的開放閱讀框(Open Reading Frame7ORF),自5’端的第I至3位脫氧核糖核苷酸為0sSIK3的起始密碼子ATG，自5’端的第2050至2052位脫氧核糖核苷酸為0sSIK3的終止密碼子TAG。含有所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因的表達盒、重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述重組表達載體是在pBin438載體的多克隆位點間插入所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因得到的重組表達載體。擴增所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因全長或其任一片段的引物對也屬于 本發(fā)明的保護范圍。所述引物對中，一條引物序列如序列表中序列3所示，另一條引物序列如序列表中序列4所示。本發(fā)明的另一個目的是提供一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。本發(fā)明所提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因?qū)肽康闹参镏?，得到耐逆性增強的轉(zhuǎn)基因植物。所述與植物耐逆性相關(guān)蛋白的編碼基因是通過所述的重組表達載體導入目的植物中的。所述耐逆性為耐鹽性和/或耐旱性。所述目的植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述單子葉植物為水稻。本發(fā)明的實驗證明，將0sSIK3基因?qū)胨荆@得了過量表達0sSIK3基因的轉(zhuǎn)基因植株，在鹽脅迫后，轉(zhuǎn)0sSIK3基因植株的存活率和生長狀態(tài)都要明顯好于對照植株，而0sSIK3的突變體水稻表現(xiàn)出對鹽和旱脅迫的超敏感，說明0sSIK3基因能夠顯著提高植物的耐鹽、耐旱性。本發(fā)明對于培育耐逆植物品種，特別是培育耐非生物脅迫(耐鹽)的作物、林草等新品種具有重要價值，可用于農(nóng)牧業(yè)和生態(tài)環(huán)境治理所需的耐逆性植物品種的培育和鑒定，對提高農(nóng)作物產(chǎn)量具有重要意義。


圖I為0sSIK3在各種脅迫處理下的轉(zhuǎn)錄特征。圖2為植物表達載體pBin438_0sSIK3的示意圖。圖3為轉(zhuǎn)0sSIK3基因植株的Northern分析。圖4為轉(zhuǎn)0sSIK3基因株系及對照植株耐旱性比較。圖5為轉(zhuǎn)0sSIK3基因株系及對照植株在干旱處理時的水分損失率。圖6為轉(zhuǎn)0sSIK3基因株系在鹽池中的表現(xiàn)。圖7為轉(zhuǎn)0sSIK3基因植株在鹽脅迫下的相對離子滲透率。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
實施例I、水稻耐逆性相關(guān)蛋白0sSIK3編碼基因0sSIK3的篩選及其cDNA的克隆l、0sSIK3 的克隆對數(shù)據(jù)庫中的水稻全基因組序列進行BLAST檢索，得到受體類激酶(RLK)相關(guān)序列片段，經(jīng)過拼接，得到了 267個受體類蛋白基因，經(jīng)RT-PCR測定，其中一些基因受非生物脅迫誘導，從中選取一個基因作進一步研究。將水稻(Oryza sativa var. TP309)(公眾可從中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是Shou-Qiang Ouyang, Yun-Feng Liu, Peng Liu,Gang Lei, Si-Jie He, Biao Ma, Wan-Ke Zhang, Jin-Song Zhang and Shou-Yi Chen,Receptor-like kinase OsSIKl improves drought and salt stress tolerance inrice (Oryza sativa)plants, The Plant Journal, 2010,62 (2) :316-29)幼苗培養(yǎng)至兩周，采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提方法從冷凍的水稻苗中提取RNA。取5 μ g總RNA用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA —鏈。
以上述cDNA作為模板，所用引物如下，進行PCR擴增正向5’ -gtgagatctatggacacgccattgctgct-3’(序列表中序列 3)，反向5’ -gttggtacc tcacgctgtgcttcccggtg-3’(序列表中序列 4)。PCR反應體系為25 μ 1，包含PCR緩沖液、O. 2mmol/L dNTPs、兩個引物各O. 8mmol/L、5 μ I稀釋的cDNA混合液及I單位LA Taq DNA聚合酶(Takara)，PCR的條件為94°C，30s ；58°C, Imin ；72°C,3min ；35 個循環(huán)。將獲得的PCR產(chǎn)物與pGEM-T-easy載體(購自Promega)連接，得到的連接產(chǎn)物命名為PT-SIK3，測序，結(jié)果表明該PCR產(chǎn)物具有序列表中序列I所示的核苷酸序列，該PCR產(chǎn)物的基因命名為0sSIK3，該基因的編碼區(qū)為序列表中序列I自5’末端第1-2052位核苷酸，該基因編碼的蛋白命名為0sSIK3,該蛋白的氣基酸序列為序列表中的序列2所不。序列表中序列I由2052個核苷酸組成，序列表中序列2由683個氨基酸殘基組成。2、非生物脅迫和激素處理下水稻0sSIK3基因的表達模式由于0sSIK3基因在水稻幼苗中的豐度很低，因此選用Real Time PCR的方法研究了 0sSIK3在各種處理時的轉(zhuǎn)錄特征。將水稻(Oryza sativa TP309)種子種在含MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)室中生長至兩葉一心期時(2周)進行如下脅迫處理1)低溫處理將水稻苗置于4°C中；2)鹽處理將水稻苗移入200mM NaCl水溶液中；3)干旱處理將水稻苗置于20%聚乙二醇600中；
4)ABA處理將水稻苗移入IOOym脫落酸(ABA)水溶液中；分別在上述各種處理后O小時、I小時、3小時、6小時和12小時分別收集新鮮葉片Ig提取總RNA，將每個樣品的總RNA (5 μ g)用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Gibco)在42°C下逆轉(zhuǎn)錄50min，取1/20的cDNA混合物用于Real TimePCR分析，引物同上，以檢測0sSIK3的轉(zhuǎn)錄豐度。實驗重復三次，得到相似的結(jié)果。結(jié)果具體如圖I所示,從圖中可見，0sSIK3基因的表達明顯受低溫、鹽、干旱和ABA誘導。實施例2、培育耐鹽和耐干旱脅迫的水稻一、0sSIK3超表達水稻植株的獲得和鑒定I、0sSIK3超表達水稻植株的獲得I) 0sSIK3 超表達載體 pBin438_0sSIK3 的構(gòu)建
以水稻(Oryza sativa TP309)的總RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，以正向BglII 5’ -agatct atggacacgccattgctgct-3’，反向 KpnI :5’ -gttggtacctcacgctgtgcttcccggtg-3’為引物，得到PCR產(chǎn)物，經(jīng)過測序，該PCR產(chǎn)物具有序列I的自Y末端第1-2052位脫氧核糖核苷酸，即為0sSIK3全長cDNA ;將該PCR產(chǎn)物經(jīng)過BglII和KpnI雙酶切，回收酶切后片段與經(jīng)過同樣酶切的PBin438載體(公眾可從中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是李太元，田穎川，秦曉峰，等.高效抗蟲轉(zhuǎn)基因煙草的研究，中國科學(B輯)，1994，24(3) =276-282.)片段連接，得到連接產(chǎn)物，轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，抗性篩選，挑取陽性克隆，將陽性克隆進行液體培養(yǎng)，提取陽性克隆質(zhì)粒進行測序驗證，測序結(jié)果表明在pBin438載體的BamHI和KpnI酶切位點之間正向插入序列表中序列I所示的0sSIK3基因片段，證明質(zhì)粒構(gòu)建正確，將得到的重組載體命名為PBin438-0sSIK3，該重組表達載體的結(jié)構(gòu)示意圖如圖2所示。2) 0sSIK3超表達載體PBin438_0sSIK3的轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)0sSIK3基因的水稻植株的獲得〈1>轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌 a、感受態(tài)細胞的制備參照 Sambrook 等(A Laboratory Manual. , Cold Spring Harbor LaboratoryPress)的方法挑取根癌農(nóng)桿菌AGLl (公眾可從中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是He Y, Jones HD, Chen S, Chen XM, Wang Dff, Li KX,Wang DS, Xia LQ, Agrobacterium-mediated transformation of durum wheat(Triticumturgidum L. var. durum cv Stewart)with improved efficiency, J Exp Bot. 2010,61(6)1567-81)單菌落于IOmlLB (lOg/L NaCl，5g/L酵母提取物，lOg/L胰蛋白胨)中，28°C振蕩培養(yǎng)至對數(shù)晚期；取O. 5ml菌液加入50ml新鮮LB液體培養(yǎng)基中，28 °C振蕩培養(yǎng)至0D600 ^ O. 5 ;轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，冰浴20分鐘；4°C,4000rpm離心10分鐘，收集菌體；沉淀用20ml預冷的10%甘油重懸；4°C，4000rpm離心10分鐘，迅速倒出上清液；用甘油重懸，即為感受細胞，按每管50 μ I體積分裝至1.5ml的離心管中，分裝后于_70°C保存待用。b、根癌農(nóng)桿菌電擊轉(zhuǎn)化取50 μ I感受態(tài)細胞，加入0.5yg重組質(zhì)粒pBin438_0sSIK3，輕輕混勻，冰上放置；2 500V電擊5秒，立刻加入800 μ I LB培養(yǎng)基；28°C，150rpm,恢復培養(yǎng)45分鐘；涂布細胞于篩選培養(yǎng)基平板上，超凈臺吹干表層液體；28°C培養(yǎng)兩天。從轉(zhuǎn)化后的平板挑取單菌落接種至2ml LB YEB液體培養(yǎng)基(含抗生素終濃度為50 μ g/ml的卡那霉素和25 μ g/ml的利福平)中，28°C振蕩過夜，堿裂解法抽提質(zhì)粒，分別進行PCR和酶切鑒定。PCR鑒定的引物同上，得到2052bp的片段為陽性質(zhì)粒。將上述PCR鑒定的陽性質(zhì)粒送去測序，結(jié)果為該質(zhì)粒為pBin438_0sSIK3，將含有該質(zhì)粒的菌株命名為AGLl/pBin438-0sSIK3。〈2>農(nóng)桿菌介導的水稻轉(zhuǎn)化A、幼胚愈傷組織的誘導取水稻(Oryza sativa TP309)種子，70%乙醇水溶液消毒I分鐘，無菌水沖洗2-3遍；再用2%有效氯的次氯酸鈉溶液振蕩消毒60分鐘以上，無菌水沖洗4-5遍，然后在無菌條件下分離出幼胚，接在N6D2培養(yǎng)基(N6鹽分和維生素，500g/L水解酪蛋白，30g/L蔗糖，2mg/L 2，4-D，2. 5g/L 固化劑(gelrite)，pH5. 8)上，于 28°C 暗培養(yǎng) 4 天，得到水稻 TP309 幼胚的愈傷組織。B、農(nóng)桿菌的培養(yǎng)從LB固體培養(yǎng)基上挑取AGLl/pBin438-0sSIK3接種至20ml含終濃度為50 μ g/ml的卡那霉素和25 μ g/ml的利福平的LB液體培養(yǎng)基中，28°C搖菌培養(yǎng)至對數(shù)生長晚期；再從中取O. 5ml轉(zhuǎn)接至50ml同樣的LB培養(yǎng)基中，同樣條件下培養(yǎng)至0D_為O. 5左右。C、共培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化、篩選、分化將OD6tltl為O. 5的AGLl/pBin438-0sSIK3于4 OOOg離心10分鐘后，沉淀用等體積的 AAM_AS(AA 鹽分和氛基酸，MS 維生素，IOOmM 乙酸丁香麗(Acetosyringone, AS), pH5. 2)培養(yǎng)基重懸，得到AAM-AS菌液；將預培養(yǎng)4天的來源于水稻TP309幼胚的愈傷組織浸入此 AAM-AS菌液中侵染20分鐘，用無菌濾紙吸干后轉(zhuǎn)移到N6D2C培養(yǎng)基(N6D2,10g/L葡萄糖，IOOmM乙酰丁香酮，pH5. 2)上(在培養(yǎng)基表面鋪一張無菌濾紙)，25°C暗培養(yǎng)3天。 將愈傷組織用含300mg/L的頭孢霉素(cef)的無菌水洗滌4-5遍，無菌濾紙吸干后轉(zhuǎn)至N6D2S1培養(yǎng)基(N6D2, 25mg/L潮霉素(Hygromycine)，600mg/L頭孢霉素(cefotaxime), pH5. 8)上，篩選一代；兩周后，轉(zhuǎn)移至 N6D2S2 (N6D2, 50mg/L潮霉素，300mg/L 頭孢霉素，PH5. 8)培養(yǎng)基上篩第二代(2周/代)。取出經(jīng)過兩次篩選生長旺盛的抗性愈傷組織，轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基(MS鹽分和維生素，300g/L 水解酪蛋白，50mg/L 潮霉素，3g/L 6_BA，2.5mg/L KT, O. 2mg/L ZT，2. 5g/L 固化劑(gelrite), pH5. 8)上，在分化培養(yǎng)箱(12小時光照/12小時黑暗，白天28°C，夜晚25°C )中培養(yǎng)7天；然后移至分化培養(yǎng)基上，在分化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至產(chǎn)生再生苗；再生的植株在生根壯苗培養(yǎng)基(1/4MS鹽分，MS維生素，lmg/L多效唑，O. 5mg/L NAA, 6. 5g/L瓊脂粉，pH5. 8)上生根壯苗；待小苗長至IOcm左右時打開容器封口膜，煉苗2-3天，將陽性小苗移至人工氣候室栽培，共得到了 541株篩選陽性Ttl代轉(zhuǎn)0sSIK3水稻，篩選抗生素為終濃度為50yg/ml的卡那酶素和25 μ g/ml的利福平。按照獲得轉(zhuǎn)0sSIK3基因水稻的方法，用空載體pBin438轉(zhuǎn)化水稻植株，得到轉(zhuǎn)空載體對照水稻TO代植株。同時，設水稻(Oryza sativa TP309)為野生型對照。T1代表示Ttl代自交產(chǎn)生的種子及由它所長成的植株。2、轉(zhuǎn)0sSIK3水稻植株的鑒定分別提取水稻(Oryza sativa TP309)植株(野生型對照)、TO代轉(zhuǎn)0sSIK3水稻的總RNA進行Northern鑒定分析，所用探針為全長0sSIK3。結(jié)果如圖3所示，從圖中可見，TO代轉(zhuǎn)0sSIK3水稻中，0sSIK3基因表達量遠高于野生型對照水稻(CK)，野生型對照水稻在正常生長條件下難以經(jīng)Northern分析檢測到0sSIK3的轉(zhuǎn)錄。挑選出18-3、18-4、20-1、15-2和15-4五個株系進一步繁殖，獲得Fl代種子。TO代轉(zhuǎn)空載體對照水稻中0sSIK3基因表達量與野生型對照水稻中一致。三、轉(zhuǎn)0sSIK3基因水稻耐逆性檢測I、耐旱性試驗將過量表達0sSIK3的轉(zhuǎn)基因水稻株系18-4、20_1和15_4株系的T1代2周齡苗、野生型對照水稻2周齡苗及轉(zhuǎn)空載體對照水稻2周齡苗停止?jié)菜?4天后，復水10天，觀察并照相并統(tǒng)計存活率。實驗重復三次，每次重復中，所有被測試株系均為30株。結(jié)果取平均值土標準差。
圖4中A為未處理苗，轉(zhuǎn)0sSIK3基因苗較對照苗矮，停止?jié)菜?4天后，對照明顯萎蔫，而三個轉(zhuǎn)0sSIK3基因株系生長受到抑制，但萎蔫不明顯(圖4中B)。復水10天后，野生型對照和轉(zhuǎn)0sSIK3基因苗的生長差異更趨明顯，對照基本枯死，轉(zhuǎn)基因苗開始復壯(圖4 中 C)。干旱處理14天恢復10天后的存活率如表I所示，野生型對照(對照TP309)、轉(zhuǎn)0sSIK3基因水稻株系18-4、20-1和15_41\代植株的存活率分別為0、90± 11 %、88± 19%和73±27%。此結(jié)果說明0sSIK3的過量表達提高了轉(zhuǎn)基因植株的耐旱性。Tl代轉(zhuǎn)空載體對照水稻耐旱性結(jié)果與野生型對照水稻一致。表I轉(zhuǎn)0sSIK3基因及野生型對照植株經(jīng)干旱處理恢復后的存活率
權(quán)利要求
1.一種蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì) (a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。
2.權(quán)利要求I所述蛋白的編碼基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述蛋白的編碼基因是如下I)或2)或3)的DNA分子 1)序列表中序列I所不的DNA分子； 2)在嚴格條件下與I)所示的DNA分子雜交且編碼所述蛋白的DNA分子； 3)與I)或2)所述的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。
4.含有權(quán)利要求2或3所述編碼基因的表達盒、重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細胞系或重組菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體是在pBin438載體的多克隆位點間插入權(quán)利要求2或3所述的編碼基因得到的重組表達載體。
6.擴增權(quán)利要求2或3所述編碼基因全長或其任一片段的引物對，所述引物對中，一條引物序列如序列表中序列3所示，另一條引物序列如序列表中序列4所示。
7.一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將權(quán)利要求2或3所述的編碼基因?qū)肽康闹参镏校玫侥湍嫘栽鰪姷霓D(zhuǎn)基因植物。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于權(quán)利要求2或3所述的編碼基因是通過權(quán)利要求4或5所述的重組表達載體導入目的植物中的。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于所述耐逆性為耐鹽性和/或耐旱性。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于所述目的植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述單子葉植物為水稻。
全文摘要
本發(fā)明公開了水稻耐逆性相關(guān)受體類蛋白OsSIK3及其編碼基因與應用。本發(fā)明所提供的水稻耐逆性相關(guān)受體類蛋白OsSIK3是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明所提供的OsSIK3基因能夠顯著提高植物的耐鹽、耐旱性。本發(fā)明對于培育耐逆植物品種，特別是培育耐非生物脅迫(耐鹽)的作物、林草等新品種具有重要價值，可用于農(nóng)牧業(yè)和生態(tài)環(huán)境治理所需的耐逆性植物品種的培育和鑒定，對提高農(nóng)作物產(chǎn)量具有重要意義。
文檔編號C12N15/54GK102899296SQ20111021413
公開日2013年1月30日 申請日期2011年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月28日
發(fā)明者張勁松, 陳受宜, 陳麗娟, 張萬科, 馬彪, 林晴, 何鍶潔 申請人:中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所