專利名稱：：甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶(gpat)同源物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請基于2007年6月18日申請的日本國專利申請2007-160042，主張優(yōu)先權(quán)。本發(fā)明涉及新型甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶基因。
背景技術(shù)：
：脂肪酸是構(gòu)成磷脂質(zhì)、三?；视偷戎|(zhì)的重要成分。含有2個以上不飽和鍵的脂肪酸總稱為高不飽和脂肪酸(PUFA)，已知有花生四烯酸、二高-Y-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等，并已報(bào)道了各種生理活性(非專利文獻(xiàn)1)。雖然在期待著這種高不飽和脂肪酸在各種領(lǐng)域的應(yīng)用，但其中也包括了在動物體內(nèi)不能合成的物質(zhì)。因此，開發(fā)出了培養(yǎng)各種微生物獲得高不飽和脂肪酸的方法。并且，也在嘗試?yán)弥参锷a(chǎn)高不飽和脂肪酸。已知在這種情況下，高不飽和脂肪酸例如作為三?；视偷葍Υ嬷|(zhì)的構(gòu)成成分，在微生物的菌體內(nèi)或植物種子中積累。更加詳細(xì)地說，三?；视驮谏矬w內(nèi)按以下方式生成。甘油一3—磷酸被甘油一3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶?；扇苎字?，該溶血磷脂酸被溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶?；闪字?，該磷脂酸被磷脂酸磷酸酯酶脫磷酸化生成二?；视停摱；视捅欢；视王；D(zhuǎn)移酶酰化生成三?；视?。并且已知?；鵆oA:膽甾醇酰基轉(zhuǎn)移酶、溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶等間接參與三?；视偷纳锖铣?。在上述三?；视蜕锖铣赏緩?、磷脂質(zhì)生物合成途徑中，通過甘油-3-磷酸的?；扇苎字?lysophosphatidicacid)的反應(yīng)中，已知有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶(以下有時記為"GPAT":EC2.3,1.15)的參與。對于GPAT基因，到目前為止已在幾種生物中報(bào)道。作為來自哺乳動物的GPAT基因，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)型(膜結(jié)合型)和線粒體型(膜結(jié)合型)這2種已被克隆(非專利文獻(xiàn)2)。此外，作為來自植物的GPAT基因，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)型(膜結(jié)合型)、線粒體型(膜結(jié)合型)及葉綠體型(游離型)這3種已被克隆(非專利文獻(xiàn)3)。另外，作為來自真菌釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的GPAT基因，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)型(膜結(jié)合型)的GPT2(GAT1)及SCT1(GAT2)這2種已被克隆(非專利文獻(xiàn)4)。因此，GPT2具有可將從棕櫚酸(16:0)至油酸(18:1)的廣泛范圍的脂肪酸作為底物利用的活性。而SCT1則顯示了將棕櫚酸(16:0)、棕櫚油酸(16:1)等碳原子數(shù)為16的脂肪酸作為底物的強(qiáng)效選擇性(非專利文獻(xiàn)4)。并且從大量其他生物中克隆了GPAT基因。已報(bào)道了來自作為脂質(zhì)生產(chǎn)菌的被孢霉屬(Mortierella)微生物的GPAT。對于來自Mortierellaramanniana的GPAT，已分離出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)型GPAT，顯示其選擇性地將比棕櫚酸(16:0)多5.4倍的油酸(18:1)作為?；w利用(非專利文獻(xiàn)5)。對于來自高山被孢霉(Mortierellaalpina)(以下簡寫為"M.alpina")的GPAT，報(bào)道微粒體組分中有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性(非專利文獻(xiàn)6)。此外，報(bào)道如果使存在于M.alpina的微粒體中的GPAT(與膜結(jié)合的狀態(tài))和各種?；鵆oA在體內(nèi)反應(yīng)，在維持高的活性的同時將油酸(18:1)、亞油酸(18:2)、二高-Y-亞麻酸(DGLA)(20:3)、花生四烯酸(20:4)等PUFA作為底物廣泛利用(專利文獻(xiàn)l)。進(jìn)而，使從M.alpina(ATCC#16266)中克隆的GPAT，在以可生物合成二十碳五烯酸(EPA)的方式發(fā)生轉(zhuǎn)化的Yarrowialipolytica中進(jìn)行表達(dá)，顯示總脂肪酸內(nèi)，二高-Y-亞麻酸(DGLA)(20:3)的組成增大，油酸(18:1)的組成減少。該結(jié)果表明長鏈、不飽和度高的PUFA更能被選擇性地利用(專利文獻(xiàn)2)。專利文獻(xiàn)1國際公開第W02004/087902號文本專利文獻(xiàn)2美國專利申請公開第2006/0094091號說明書非專利文獻(xiàn)lLipids,39,1147(2004)非專利文獻(xiàn)2BiochimicaetBiophysicaActa,1348，17-26,1997非專利文獻(xiàn)3BiochimicaetBiophysicaActa,1348，10-16,1997非專利文獻(xiàn)4TheJournalofBiologicalChemistry,276(45),41710-41716，2001非專利文獻(xiàn)5TheBiochemicalJournal,355，315-322，2001非專利文獻(xiàn)6BiochemicalSocietyTransactions,28，707-709,2000
發(fā)明內(nèi)容但是，至今為止已報(bào)道的GPAT基因，即使導(dǎo)入宿主細(xì)胞使其表達(dá)，因其底物特異性，宿主產(chǎn)生的脂肪酸組合物也受到局限。因此，希望鑒定出可產(chǎn)生與以往不同組成的脂肪酸組合物的新型基因。本發(fā)明的目的是提供通過在宿主細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入或表達(dá)，可制造目的脂肪酸組成的油脂、或可增加目的脂肪酸的含量的蛋白質(zhì)及核酸。本發(fā)明者為了解決上述課題進(jìn)行了精心研究，首先進(jìn)行脂質(zhì)生產(chǎn)菌高山被孢霉(Mortierellaalpina)的EST分析，從中提取出與已知GPAT基因同一性高的序列。進(jìn)而為了獲得編碼GPAT的開放閱讀框(0RF)的全長，進(jìn)行cDNA文庫篩選或通過PCR克隆基因。將其導(dǎo)入酵母等具有高增殖能力的宿主細(xì)胞內(nèi)，以試驗(yàn)產(chǎn)生期望脂肪酸組合物的發(fā)明者，成功克隆出可生產(chǎn)與以往GPAT表達(dá)的宿主所產(chǎn)生的脂肪酸組合物相比，不同的脂肪酸組合物的底物特異性不同的新型的與GPAT相關(guān)的基因，完成了本發(fā)明。即本發(fā)明如下所述。(1)核酸，其含有以下(a)(e)中任一項(xiàng)所述的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格的條件下雜交，且編碼具有甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(c)堿基序列，其由與序列號4所組成的堿基序列有70%以上同一性的堿基序列組成，且編碼具有甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(d)堿基序列，其編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(e)堿基序列，其與由編碼序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交、且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。2.如上述(1)所述的核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在2XSSC、5(TC的條件下雜交，且編碼具有甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(c)堿基序列，其編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。(3)核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)所述的堿基序列或其片段，(a)堿基序列，其由序列號4表示，(b)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，(C)堿基序列，其由序列號l表示。(4)核酸，其含有以下(a)(e)中任一項(xiàng)所述的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高_(dá)Y-亞麻酸含量的比率(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(c)堿基序列，其由與序列號4所組成的堿基序列有70%以上同一性的堿基序列組成，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高_(dá)Y-亞麻酸含量的比率(d)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(e)堿基序列，其與由編碼序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交、且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，O油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。(5)如上述(4)所述的核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由序列號2表示的氨基酸序列中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在2XSSC、50'C的條件下雜交，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(c)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由與序列號2所組成的氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。(6)蛋白質(zhì)，其為以下(a)或(b)中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)，(a)蛋白質(zhì)，其由序列號2中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性，(b)蛋白質(zhì)，其為由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性。(7)蛋白質(zhì)，其為以下(a)或(b)中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)，(a)蛋白質(zhì)，其由序列號2中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高_(dá)Y-亞麻酸含量的比率(b)蛋白質(zhì)，其由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。(8)蛋白質(zhì)，其由序列號2所示的氨基酸序列組成。(9)重組載體，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的核酸。(10)轉(zhuǎn)化體，其為上述(9)所述的重組載體轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化體。(11)脂肪酸組合物，其為培養(yǎng)上述(10)所述的轉(zhuǎn)化體而獲得的脂肪酸組合物，具有可形成在上述脂肪酸組合物的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。(12)上述(11)所述的脂肪酸組合物的制造方法，其特征在于，從培養(yǎng)上述(10)所述的轉(zhuǎn)化體而獲得的培養(yǎng)物中提取所述的脂肪酸組合物。(13)食品，其含有上述(11)所述的脂肪酸組合物。本發(fā)明的GPAT，與以往的GPAT的底物特異性不同，可在宿主中產(chǎn)生與以往GPAT表達(dá)的宿主產(chǎn)生的脂肪酸組成不同的脂肪酸組合物。因此可提供具有需要的特性、效果的脂質(zhì)，所以可有效適用于食品、化妝料、醫(yī)藥品、肥皂等中。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的GPAT可使脂肪酸、貯藏脂質(zhì)的生產(chǎn)能力提高，所以優(yōu)選作為使微生物、植物中的高不飽和脂肪酸的生產(chǎn)效率提高的酶。圖1表示本發(fā)明的GPAT2的cDNA序列(序列號1)和推定氨基酸序列(序列號2)。圖中*表示認(rèn)為對GPAT活性重要的氨基酸殘基，+表示認(rèn)為對與甘油-3-磷酸的鍵合重要的氨基酸殘基。具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及來自被孢霉(Mortierella)屬的新型甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶基因，該基因的特征在為使甘油-3-磷酸酰化生成溶血磷脂酸。本發(fā)明的甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶(GPAT),是催化使甘油-3-磷酸?；闪字岬姆磻?yīng)的酶。?；w通常為?；鵆oA，但不限于此。此外，在本發(fā)明涉及的蛋白質(zhì)的作用下發(fā)生的?；D(zhuǎn)移反應(yīng)的?；荏w是甘油-3-磷酸，但并不限于此。編碼本發(fā)明的甘油-3-磯酸?；D(zhuǎn)移酶的核酸本發(fā)明的甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶(GPAT)中包含GPAT2。將編碼GPAT2的核酸的cDNA、CDS、0RF以及氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系整理記載于以下表1內(nèi)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>也就是說，作為與本發(fā)明的GPAT2相關(guān)的序列，可例舉GPAT2的氨基酸序列的序列號2、表示GPAT2的0RF區(qū)域序列的序列號4、表示其CDS區(qū)域序列的序列號3、以及其cDNA的堿基序列的序列號1。其中，序列號3相當(dāng)于序列號1的第1131891位堿基序列，序列號4相當(dāng)于序列號1的第1131888位堿基序列、以及序列號3的第11776位堿基序列。本發(fā)明的核酸，除單鏈及雙鏈DNA之外，還包括其RNA互補(bǔ)體，可以來自天然，也可以由人工制作。DNA中例如可例舉基因組DNA、與上述基因組DNA對應(yīng)的cDNA、化學(xué)合成的DNA、通過PCR擴(kuò)增的DNA、以及其組合物、DNA和RNA的雜交體等，但并不限于這些。作為本發(fā)明的核酸的優(yōu)選形態(tài)，可例舉(a)序列號4表示的堿基序列、(b)編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的堿基序列、(c)序列號l表示的堿基序列等。序列號4表示的堿基序列及編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的堿基序列、以及序列號l表示的堿基序列，如表1中記載。為了獲得上述堿基序列，也可從具有GPAT活性的生物的EST、基因組DNA的堿基序列數(shù)據(jù)中，搜索編碼與已知的具有GPAT活性的蛋白質(zhì)有高同一性的蛋白質(zhì)的堿基序列。作為具有GPAT活性的生物，優(yōu)選脂質(zhì)生產(chǎn)菌，作為脂質(zhì)生產(chǎn)菌，可例舉M.alpina，但并不限于此。進(jìn)行EST分析時，首先構(gòu)建cDNA文庫。對于cDNA文庫的構(gòu)建方法，可參考"MolecularCloning,ALaboratoryManual3rded.，，(ColdSpringHarborPress(2001))。并且也可用市售的cDNA文庫構(gòu)建試劑盒。作為適用于本發(fā)明的cDNA文庫的構(gòu)建方法，例如可例舉以下方法。g卩將脂質(zhì)生產(chǎn)菌M.alpina的適當(dāng)菌株接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)適當(dāng)時間。作為適合該預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件，可例舉例如培養(yǎng)基的組成為1.8%葡萄糖、1%酵母膏、pH為6.0，培養(yǎng)時間為3天，培養(yǎng)溫度為28'C的條件。然后將預(yù)培養(yǎng)物在適當(dāng)?shù)臈l件下供給本培養(yǎng)。作為適合本培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成，例如可例舉1.8%葡萄糖、1%大豆粉、0.1%橄欖油、0.01%Adecanol、0.3%KH2P04、0.1%Na2S04、0,05%CaCl2'2H20、0.05%MgCl2'6H20,pH為6.0。作為適合本培養(yǎng)的培養(yǎng)條件，例如可例舉300rpm、lvvm、26'C下通氣攪拌培養(yǎng)8天的條件。培養(yǎng)期間也可添加適當(dāng)量的葡萄糖。在本培養(yǎng)中適時提取培養(yǎng)物，從其中回收菌體，制備總RNA。制備總RNA時，可使用鹽酸胍/CsCl法等公知的方法。可使用市售的試劑盒從獲得的總RNA中純化poly(A)+RNA。并且可使用市售的試劑盒構(gòu)建cDNA文庫。然后將構(gòu)建的cDNA文庫的任意的克隆的堿基序列，使用按照可確定載體上插入部分的堿基序列的方式設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行確定，可獲得EST。例如用ZAP-cDNAGigapackIIIGoldCloningKit(STRATAGENE)構(gòu)建cDNA文庫時，可進(jìn)行定向克隆。用0RF的堿基序列進(jìn)行比較，本發(fā)明的GPAT2基因和公知的來自M.alpina(ATCCW6266)的GPAT1基因的同一性為42.0%。此外，對本發(fā)明的GPAT2基因進(jìn)行BLASTX分析的結(jié)果，與編碼E-value最低、即同一性最高的來自構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)的l一?；籹n—甘油一3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶樣的推定蛋白質(zhì)序列(GB注冊號No.EAA62242)的堿基序列、以及編碼功能明確的蛋白質(zhì)的同一性最高的來自釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的甘油一3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶的Sctlp(GB注冊號No.CAC85390)的堿基序列的同一性，分別為36.9%和36.6%。同樣，本發(fā)明的GPAT2與公知的來自M.alpina(ATCC#16266)的GPAT1之間的氨基酸序列的同一性為15.7%。此外，對本發(fā)明的GPAT2基因進(jìn)行BLASTX分析的結(jié)果，與E-value最低、即同一性最高的來自構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)的l一?；籹n—甘油一3一磷酸?；D(zhuǎn)移酶樣的推定蛋白質(zhì)的序列(GB注冊號No.EAA62242)、以及功能明確的蛋白質(zhì)的同一性最高的來自釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的甘油一3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶的Sctlp(GB注冊號No.CAC85390)的同一性，分別為17.0%和15.0%。本發(fā)明還包括與含有上述序列號4表示的堿基序列(有時記為"本發(fā)明的堿基序列")、以及編碼由序列號2表示的氨基酸序列(有時記為"本發(fā)明的氨基酸序列")組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的核酸具有同等功能的核酸。"具有同等功能"是指，本發(fā)明的堿基序列編碼的蛋白質(zhì)及由本發(fā)明的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)具有GPAT活性。此外，除具有這種GPAT活性之外，還包括具有下述活性的蛋白質(zhì)(以下，有時稱為"具有可形成本發(fā)明的GPAT的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)")的情況，該活性可形成在本發(fā)明的堿基序列編碼的蛋白質(zhì)或由本發(fā)明的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率中的至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成。具體為含有編碼具有以下活性的蛋白質(zhì)的堿基序列的核酸，該活性可形成滿足以下各項(xiàng)中的至少一項(xiàng)以上的數(shù)值的脂肪酸組成，將上述本發(fā)明的堿基序列等插入表達(dá)載體pYE22m(Biosci.Biotech.Biochem.，59,1221—1228，1995)中，以酵母SaccharomycescerevisiaeEH13-15株(Appl.Microbiol.Biotechnol.，30，515-520，1989)作為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化，培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)化體，回收菌體，用以下實(shí)施例6等記載的方法進(jìn)行脂肪酸分析時，上述本發(fā)明的GPAT的脂肪酸組成具體為i)油酸含量為47%以上，優(yōu)選48%以上、49%以上、50%以上、51%以上；ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率為8.0以上，優(yōu)選9.0以上、10.0以上、10.5以上；iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率為8.5以上、優(yōu)選9.0以上、10.0以上、ll.O以上、11.5以上；以及iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率為1.2以上、優(yōu)選1.3以上、1.4以上；以及v)花生四烯酸的含有率為0.47以上、優(yōu)選0.50以上、0.55以上、0.60以上、及/或二高-Y-亞麻酸的含有率為0.34以上、優(yōu)選0.40以上、0.50以上、0.55以上。更優(yōu)選本發(fā)明的堿基序列等是含有編碼具有GPAT活性及可形成上述本發(fā)明的GPAT脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)的堿基序列的核酸。作為本發(fā)明的脂肪酸組合物的特征之一，可例舉花生四烯酸的含有率高?；ㄉ南┧崾怯没瘜W(xué)式(:2晶202表示的分子量為304.47的物質(zhì)，是含有4個雙鍵的20個碳原子的碳鏈組成的羧酸((20:4(n-6)))，被分類為(n-6)系?；ㄉ南┧嶙鳛橹匾牧字|(zhì)而存在于動物的細(xì)胞膜中(特別是磷脂酰乙醇胺"磷脂酰膽堿"磷脂酰肌醇)，在腦中大量含有。而且，花生四烯酸是通過花生四烯酸級聯(lián)反應(yīng)生成的前列腺素"凝血黃素"白三烯等系列類二十垸酸的起始物質(zhì)，在細(xì)胞間傳遞信息方面，作為第二信使非常重要。另一方面，動物可以亞油酸為原料在體內(nèi)合成花生四烯酸。但是，由于動物的種類或年齡等不同，因該功能不充分而不能生產(chǎn)必要的量，或者因完全失去生產(chǎn)功能，所以必須從食物中攝取花生四烯酸，可以說花生四烯酸是必須脂肪酸。本發(fā)明的脂肪酸組合物中的花生四烯酸的含有率，例如可按以下方法測定。S卩將本發(fā)明的GPAT2的質(zhì)粒，例如通過實(shí)施例8所述的方法插入pDuraSC、pDura5MCS等載體內(nèi)，使在M.alpirm株中轉(zhuǎn)化獲得的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行表達(dá)，使用根據(jù)實(shí)施例8所述的培養(yǎng)方法等獲得的培養(yǎng)菌體，測定菌體內(nèi)的脂肪酸含有率、每單位培養(yǎng)基的花生四烯酸的含量等。作為花生四烯酸的含量等的分析方法，可例舉例如利用鹽酸甲醇法將獲得的培養(yǎng)菌體的脂肪酸衍生為脂肪酸甲酯后，用己烷提取，蒸餾除去己烷后，用氣相色譜法進(jìn)行測定的方法。由此顯示，使本發(fā)明的GPAT2在M.alpirm中轉(zhuǎn)化時，菌體內(nèi)的脂肪酸含有率、每單位培養(yǎng)基的花生四烯酸生產(chǎn)量均高。因此，花生四烯酸含有率高的本發(fā)明的脂肪酸組合物，因?yàn)榭筛咝z取花生四烯酸，所以優(yōu)選。此外，作為本發(fā)明的脂肪酸組合物的特征之一，可例舉二高-y-亞麻酸含有率高。二高-y-亞麻酸(DGLA)是用化學(xué)式C2。H3為表示的分子量為306.48的物質(zhì)，是由含有3個雙鍵的20個碳原子的碳鏈組成的羧酸(20:3(n-6)))，被分類為(n-6)系。DGLA通過y-亞麻酸(18:3(n-6))延伸而獲得。如果DGLA的雙鍵增加1個就變成花生四烯酸。作為與本發(fā)明的核酸具有同等功能的核酸，可例舉含有以下(a)(e)中任一項(xiàng)所述的堿基序列的核酸。此外，在以下例舉的堿基序列的記載中，"本發(fā)明的上述活性"是指，上述"GPAT活性及/或可形成上述本發(fā)明的GPAT的脂肪酸組成的活性"。(a)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，包括編碼由序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。具體為編碼由下述氨基酸序列組成、且具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列，(i)序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1180個、l150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))氨基酸發(fā)生缺失后的氨基酸序列，(ii)序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1180個、l150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))氨基酸用其他氨基酸取代后的氨基酸序列，(iii)序列號2表示的氨基酸序列中添加1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1180個、1150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))其他氨基酸后的氨基酸序列，或(iv)將(i)(iii)組合后的氨基酸序列。其中，取代優(yōu)選為保守取代。保守取代是指，將特定的氨基酸殘基用具有類似的物理化學(xué)特征的殘基取代，但只要不實(shí)質(zhì)性改變原來序列的結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征，也可為任意取代，例如，只要取代氨基酸不破壞原來序列中存在的螺旋結(jié)構(gòu)，或者不破壞賦予原來序列特征的其它種類的二級結(jié)構(gòu)，也可為任何取代。保守取代通常用生物學(xué)合成體系、化學(xué)肽合成來導(dǎo)入，優(yōu)選通過化學(xué)肽合成來進(jìn)行。此時，取代基中可含有非天然的氨基酸殘基，也含有肽模仿物、氨基酸序列中沒有被取代的區(qū)域發(fā)生倒位的倒位型或同區(qū)域發(fā)生反轉(zhuǎn)的反轉(zhuǎn)型。以下按照可取代氨基酸殘基的殘基分類例示，但可取代的氨基酸殘基并不限于以下記載的殘基。A組亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、丙氨酸、2—氨基丁酸、蛋氨酸、0-甲基絲氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸；B組天冬氨酸、谷氨酸、異天冬氨酸、異谷氨酸、2—氨基己二酸、2-氨基辛二酸；C組天冬酰胺、谷氨酰胺；D組賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、2，4一二氨基丁酸、2，3—二氨基丙酸；E組脯氨酸、3—羥基脯氨酸、4一羥基脯氨酸；F組絲氨酸、蘇氨酸、高絲氨酸；G組苯丙氨酸、酪氨酸。非保守性取代時，上述種類中的1種成分可以與其他種類的成分替換，此時為了保持本發(fā)明的蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能，優(yōu)選參考氨基酸的親水指數(shù)(親水性氨基酸指數(shù))(Kyte等，J.Mol.Biol.，157:105-131(1982))。此外，非保守性取代時，可根據(jù)親水性進(jìn)行氨基酸的取代。在本說明書及圖中，堿基、氨基酸及其縮略語，均遵照IUPAC-IUBCommissiononBiochemicalNomenclature的規(guī)定，或者基于例如Immunology--ASynthesis(第2版，E.S.Golub及D.R.Gren監(jiān)修，SinauerAssociates,馬薩諸塞州Sunderland(1991))等記載的本領(lǐng)域慣用的縮略語。此外，對于氨基酸，如果有光學(xué)異構(gòu)體時，如無特別標(biāo)示，均表示L體。D—氨基酸等上述氨基酸的立體異構(gòu)體、a，a—二取代氨基酸等非天然氨基酸、N—烷基氨基酸、乳酸、以及其它非慣用的氨基酸，也可作為構(gòu)成本發(fā)明的蛋白質(zhì)的要素。此外，本說明書中使用的蛋白質(zhì)的表示方法，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)用法及本領(lǐng)域常用的表示方法，左方是氨基末端方向，右方是羧基末端方向。同樣，在通常情況下如無特別說明，單鏈多核苷酸序列的左端為5'端，雙鏈多核苷酸序列的左方為5'方向。如果是本領(lǐng)域技術(shù)人員，使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，可設(shè)計(jì)并構(gòu)建本說明書中記載的蛋白質(zhì)的適當(dāng)?shù)耐蛔凅w。例如通過將認(rèn)為對本發(fā)明的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性不太重要的區(qū)域作為耙區(qū)，可鑒定不損壞本發(fā)明的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性而可改變其結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分子中適當(dāng)?shù)膮^(qū)域。并且也可鑒定在類似蛋白質(zhì)間保守的分子殘基及區(qū)域。進(jìn)而，在認(rèn)為對本發(fā)明蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性或結(jié)構(gòu)重要的區(qū)域中，在不損壞生物學(xué)活性、且對蛋白質(zhì)的多肽結(jié)構(gòu)不產(chǎn)生不良影響的情況下，也可導(dǎo)入保守性氨基酸取代。特別是，在本發(fā)明中，如圖1中的雙重下線所示，本發(fā)明的GPAT的氨基酸序列中的第8793殘基中，存在與甘油磷脂質(zhì)?；D(zhuǎn)移酶(Glycerolipidacyltransferase)中必需的保守基序(motif)"證XXD(HX,D)"(J.Bacteriology,180，1425-1430，1998)相類似的基序(保守組氨酸及天冬氨酸用*表示)。此外，在上述保守基序中，X表示可以為任何氨基酸殘基。認(rèn)為該基序?qū)τ诒景l(fā)明的GPAT來說，對于維持GPAT活性也很重要。此外，認(rèn)為圖1中用女表示的本發(fā)明的GPAT的氨基酸序列中的第87殘基、第93殘基、以及第172殘基，對于本發(fā)明的GPAT的活性重要。并且認(rèn)為第138殘基及第174殘基對于本發(fā)明的GPAT和甘油_3-磷酸的鍵合重要。因此，本發(fā)明的突變體，只要保存有上述保守基序及上述殘基，可以為任何突變體。只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員，通過鑒定對本發(fā)明的蛋白質(zhì)生物學(xué)活性或結(jié)構(gòu)重要、與該蛋白質(zhì)的肽相類似的肽殘基，比較這2個肽的氨基酸殘基，即可預(yù)測與本發(fā)明的蛋白質(zhì)類似的蛋白質(zhì)的哪個殘基是與對生物學(xué)活性或結(jié)構(gòu)重要的氨基酸殘基相對應(yīng)的氨基酸殘基，也就是說，可進(jìn)行結(jié)構(gòu)-功能研究。進(jìn)一步通過選擇與上述預(yù)測的氨基酸殘基的化學(xué)性質(zhì)類似的氨基酸取代，可選擇保持本發(fā)明蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性的突變體。此外，如果是本領(lǐng)域技術(shù)人員，也可對本蛋白質(zhì)的突變體的三維結(jié)構(gòu)及氨基酸序列進(jìn)行分析。并且從獲得的分析結(jié)果中，也可預(yù)測與蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸殘基的比對。預(yù)測在蛋白質(zhì)表面上的氨基酸殘基，有參與和其他分子的重要相互作用的可能性，如果是本領(lǐng)域技術(shù)人員，均可根據(jù)上述分析結(jié)果，構(gòu)建使預(yù)測在這種蛋白質(zhì)表面上的氨基酸殘基不變化的突變體。進(jìn)而如果是本領(lǐng)域技術(shù)人員，也可構(gòu)建在構(gòu)成本發(fā)明的蛋白質(zhì)的各種氨基酸殘基中，僅有一個氨基酸殘基發(fā)生取代的突變體。將這種突變體通過公知的分析方法進(jìn)行篩選，可收集各種突變體的信息。因此，通過對某種特定氨基酸殘基被取代的突變體的生物學(xué)活性與本發(fā)明的蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性相比降低時、不表現(xiàn)這種生物學(xué)活性時、或者產(chǎn)生阻礙本蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性的不適當(dāng)活性時的情況進(jìn)行比較，可評價構(gòu)成本發(fā)明的蛋白質(zhì)的各種氨基酸殘基的有用性。此外，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員，根據(jù)這種從日常實(shí)驗(yàn)中收集的信息，單獨(dú)或與其他突變組合，即可容易地分析作為本發(fā)明蛋白質(zhì)的突變體所不期望的氨基酸取代。如上所述，由序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，可根據(jù)《MolecularCloning,ALaboratoryManual3rded.》(ColdSpringHarborPress(2001))、《CurrentProtocolsinMolecularBiology》(JohnWiley&Sons(1987—1997))、Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-92、Kunkel(1988)Method.Enzymol.85:2763-6等記載的定點(diǎn)誘變法等方法進(jìn)行制備。這種氨基酸發(fā)生了缺失、取代或添加等突變的突變體的構(gòu)建，例如可使用通過Kunkel法、Gappedd叩lex法等公知的方法，使用利用了定點(diǎn)誘變法的突變引入用試劑盒，例如QuikChangeSite-DirectedMutagenesisKit(Stratagene公司制)、GeneTailorSite-DirectedMutagenesisSystem(Invitrogen公司制)、TaKaRaSite-DirectedMutagenesisSystem(Mutan-K、Mutan-SuperExpressKm等TaKaRaBio公司制)等進(jìn)行。此外，作為在蛋白質(zhì)的氨基酸序列中，在保持其活性的同時導(dǎo)入1個或多個氨基酸的缺失、取代、或添加的方法，除上述定點(diǎn)誘變之外，還可例舉用突變源處理基因的方法、以及使基因選擇性斷裂將選擇的核苷酸除去、取代或添加后進(jìn)行連接的方法。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，優(yōu)選為編碼由序列號2表示的氨基酸序列中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有GPAT活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。此外，本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列中，也包括編碼由序列號2中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。本發(fā)明的蛋白質(zhì)中氨基酸的突變或修飾的數(shù)量、或者突變或修飾的位點(diǎn)，只要保持GPAT活性、或本發(fā)明的可形成GPAT的脂肪酸組成的活性，沒有特別限定。本發(fā)明的GPAT活性、或本發(fā)明的可形成GPAT的脂肪酸組成的活性，可用公知的方法測定。例如可參照以下文獻(xiàn)Biochem.J.，355,315-322,2001。例如本發(fā)明的"GPAT活性"可按以下方法測定，從使本發(fā)明的GPAT表達(dá)的酵母中，通過J.Bacteriology,173,2026-2034(1991)記載的方法等制備微粒體組分。接著在反應(yīng)液0.44rnM甘油_3-磷酸、0.36rnM?；?CoA、0.5mMDTT、lmg/mlBSA、2mMMgCl2、50rnMTris-HCl(pH7.5)中添加上述微粒體組分，在28'C下反應(yīng)適當(dāng)時間，添加氯仿甲醇終止反應(yīng)后，進(jìn)行脂質(zhì)的提取，將獲得的脂質(zhì)通過薄層色譜法等進(jìn)行分離，可對生成的溶血磷脂酸的量進(jìn)行定量。此外，本發(fā)明的"可形成GPAT的脂肪酸組成的活性"，例如可按照以下方法測定。在通過本發(fā)明的脂肪酸組合物的制造方法獲得的冷凍干燥菌體中，添加以適當(dāng)比率調(diào)整的氯仿甲醇并攪拌后，加熱處理適當(dāng)時間。進(jìn)一步通過離心分離來分離菌體，回收溶劑，這樣重復(fù)數(shù)次。然后使用適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ怪|(zhì)干燥固化后，添加氯仿等溶劑溶解脂質(zhì)。將該試樣分取適量，利用鹽酸甲醇法將菌體的脂肪酸衍生為甲酯后，用己烷提取，蒸餾除去己烷后，用氣相色譜法進(jìn)行分析。(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，包括與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。對于序列號4以及GPAT活性，如上所述。上述堿基序列，用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法使用適當(dāng)?shù)钠螛?gòu)建探針，使用該探針通過菌落雜交法、噬菌斑雜交法、Southern印跡法等公知的雜交法，可從cDNA文庫及基因組文庫等中獲得。對于雜交法的詳細(xì)操作步驟，可參照《MolecularCloning,ALaboratoryManual3rded.》(ColdSpringHarborPress(2001);特另U是Section6-7)、《CurrentProtocolsinMolecularBiology》(JohnWiley&Sons(1987-1997);特別是Section6.3-6.4)、《DNACloning1:CoreTechniques,APracticalApproach2nded.》(OxfordUniversity(1995);雜交條件特別是Section2.10)等。雜交條件的強(qiáng)度，主要由雜交條件、更優(yōu)選由雜交條件及洗滌條件決定。在本說明書中"嚴(yán)格條件"包括中度或高度嚴(yán)格條件。具體來說，作為中度嚴(yán)格條件，例如雜交條件，可例舉1XSSC6XSSC、42°C55°C的條件，更優(yōu)選1XSSC3XSSC、45。C5(TC的條件，最優(yōu)選2XSSC、50'C的條件。雜交溶液中例如含有約50%甲酰胺時，采用比上述溫度低5至15'C的溫度。作為洗滌條件，可例舉O.5XSSC6XSSC、40。C60。C。在雜交及洗滌時，通?？杉尤?.05%0.2%SDS、優(yōu)選約0.1%SDS。作為高度嚴(yán)格(高嚴(yán)格)的條件，包括在比中度嚴(yán)格條件高的溫度及/或低的鹽濃度下的雜交及/或洗滌。例如雜交條件，可例舉0.1XSSC2XSSC、55'C65'C的條件，更優(yōu)選0.1XSSC1XSSC、6(TC65'C的條件，最優(yōu)選0.2XSSC、63'C的條件。作為洗滌條件，可例舉O.2XSSC2XSSC、50。C68。C，更優(yōu)選O.2XSSC、6065°C。特別是作為本發(fā)明使用的雜交條件，例如可例舉在5XSSC、1%SDS、50rnMTris-HCl(pH7.5)及50y。甲酰胺中，在42。C的條件下，進(jìn)行預(yù)雜交后添加探針，在42。C保溫過夜形成雜交體，然后在0.2XSSC、0.1%SDS中在65。C下進(jìn)行3次20分鐘的洗滌的條件。但并不限于此條件。此外，還可使用探針內(nèi)不使用放射性物質(zhì)的市售的雜交試劑盒。具體可例舉使用DIG核酸檢測試劑盒(RocheDiagnostics公司)、ECLdirectlabeling&detectionsystem(Amersham公司制)的雜交等。作為本發(fā)明含有的堿基序列，優(yōu)選與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在2XSSC、5(TC的條件下雜交，且編碼具有GPAT活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。(c)堿基序列，其由與序列號4所組成的堿基序列有70%以上同一性的堿基序列組成、且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，包括由與序列號4表示的核酸序列有至少70%以上的堿基序列組成，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。優(yōu)選可例舉含有與序列號4表示的核酸序列有至少75%、更優(yōu)選80%(例如85%以上、更優(yōu)選90%以上、最優(yōu)選95%、98%或99%)同一性的堿基序列的核酸，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。2個核酸序列的同一性％，可通過視覺檢査、數(shù)學(xué)計(jì)算來決定，但優(yōu)選使用計(jì)算機(jī)程序通過比較2個核酸的序列信息來決定。作為序列比較的計(jì)算機(jī)程序，例如可例舉可利用美國國立醫(yī)學(xué)圖書館網(wǎng)站:http:〃麗.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls.html的BLASTN程序(Altschuletal.(1990)J.Mol.Biol.215:403-10):version2.2.7、或WU-BLAST2.0計(jì)算法等。對于WU-BLAST2.0的標(biāo)準(zhǔn)默認(rèn)參數(shù)的設(shè)定，可使用以下網(wǎng)站http:〃blast.wustl.edu記載的參數(shù)值。(d)堿基序列，其編碼與序列號2組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，包括編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。本發(fā)明的核酸編碼的蛋白質(zhì)，只要與具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)有同等功能，也可以是與GPAT2的氨基酸序列有同一性的蛋白質(zhì)。具體可例舉與序列號2表示的氨基酸序列有75%以上、優(yōu)選80%以上、更優(yōu)選85%、更進(jìn)一步優(yōu)選90%以上(例如95%、進(jìn)一步98%)以上同一性的氨基酸序列等。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，優(yōu)選為編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。進(jìn)一步優(yōu)選為編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有95%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。2個氨基酸序列的同一性百分?jǐn)?shù)，可通過視覺檢査、數(shù)學(xué)計(jì)算來決定。此外，可使用計(jì)算機(jī)程序來決定同一性百分?jǐn)?shù)。作為這種計(jì)算機(jī)程序，例如可例舉BLAST、FASTA(Altschul等、J.Mol.Biol.，215:403-410(1990))、及ClustalW等。特別是BLAST程序的同一性檢索的各種條件(參數(shù))，已由Altschul等(Nucl.Acids.Res.，25，p.3389-3402，1997)作了記載，所以可從美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)、日本DNA數(shù)據(jù)庫(DDBJ)的網(wǎng)站公開獲得(BLAST指南、Altschul等NCB/NLM/NIHBethesda，MD20894;Altschul等)。此外，也可使用遺傳信息處理軟件GENETYXVer.7(GENETYX)、DINASISPro(日立軟件)、VectorNTI(Infomax)等程序來決定。使多個氨基酸序列并列的特定的比對圖，因?yàn)橐部梢燥@示序列中特定的短區(qū)域的匹配,所以即使使用的序列的全長序列間沒有顯著性的關(guān)系，在這種區(qū)域，也可檢測出特定的序列同一性非常高的區(qū)域。并且，BLAST算法可使用BL0SUM62氨基酸打分矩陣，作為選擇參數(shù)，還可使用以下(A)包括將具有低組成復(fù)雜性的查詢序列的片段(由Wootton及Federhen的SEG程序(ComputersandChemistry,1993)決定；也可參照Wootton及Federhen，1996"序列數(shù)據(jù)庫組成偏向性區(qū)域的分析(Analysisofcompositionallybiasedregionsinsequencedatabases)",MethodsEnzymol.，266:544-71)、或短周期內(nèi)部重復(fù)序列組成的片段(Claverie及States(ComputersandChemistry,1993)的XNU程序決定)遮蔽的過濾器，以及(B)用于報(bào)告相對于數(shù)據(jù)庫序列的一致性的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性閾值、或根據(jù)E-score(Karlin及Altschul，1990)的統(tǒng)計(jì)學(xué)模型，僅偶然性發(fā)現(xiàn)的一致性期望概率，因某種一致性引起的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異大于E-score閾值時，不報(bào)告該一致性。(e)堿基序列，其與編碼由序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，包括與編碼由序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)及雜交條件如上所述。作為本發(fā)明的核酸中含有的堿基序列，可例舉與編碼由序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。此外，本發(fā)明的核酸還包括由序列號4組成的堿基序列中l(wèi)個或多個堿基發(fā)生缺失、取代或添加后的堿基序列組成，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列的核酸。具體可使用含有以下堿基序列，且編碼具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)的堿基序列的核酸，(i)序列號4表示的堿基序列中1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1540個、1500個、1400個、1300個、1200個、1150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))堿基發(fā)生缺失后的堿基序列，(ii)序列號4表示的堿基序列中1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1540個、l500個、卜400個、1300個、1200個、1150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))堿基用其他堿基取代后的堿基序列，(iii)序列號4表示的堿基序列中添加1個或多個(優(yōu)選1個或數(shù)個(例如1540個、1500個、1400個、1300個、1200個、1150個、1100個、150個、130個、125個、120個、115個、110個、更優(yōu)選15個))其他堿基后的堿基序列，(iv)將上述(i)(iii)組合后的堿基序列。作為本發(fā)明的核酸的優(yōu)選形態(tài)，也包括含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)所述的堿基序列的片段的核酸，(a)序列號4表示的堿基序列，(b)編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的堿基序列，(c)序列號l表示的堿基序列。對于(a)序列號4表示的堿基序列、(b)編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的堿基序列、(c)序列號1表示的堿基序列，如表1所述。上述序列的片段，包括上述堿基序列中含有的ORF、CDS、具有生物學(xué)活性的區(qū)域、作為以下記載的引物使用的區(qū)域、可作為探針的區(qū)域，可來自天然，也可由人工制作。本發(fā)明的甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶蛋白質(zhì)本發(fā)明的蛋白質(zhì)，包括由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)及具有與上述蛋白質(zhì)同等功能的蛋白質(zhì)，可來自天然，也可由人工制作。對于由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，如上所述。"具有同等功能的蛋白質(zhì)"，如上述"編碼本發(fā)明的甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶的核酸"項(xiàng)目中所述，是指具有「本發(fā)明的上述活性」的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明中，作為與由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)具有同等功能的蛋白質(zhì)，可例舉以下(a)或(b)中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)，(a)蛋白質(zhì)，其由序列號2中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有本發(fā)明的上述活性，(b)蛋白質(zhì)，其是由與序列號2組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，且具有本發(fā)明的上述活性。其中，對于序列號2中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列、或與序列號2組成的氨基酸序列的同一性為70%以上的氨基酸序列，如上述"編碼本發(fā)明的甘油_3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶的核酸"項(xiàng)目中所述。此外，上述"具有本發(fā)明的上述活性的蛋白質(zhì)"，是由含有序列號4的堿基序列的核酸編碼的蛋白質(zhì)的突變體，或序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生取代、缺失或添加等經(jīng)過多種修飾發(fā)生突變的蛋白質(zhì)、或氨基酸側(cè)鏈等被修飾的修飾蛋白質(zhì)、與其他蛋白質(zhì)融合的蛋白質(zhì)，且是具有GPAT活性的蛋白質(zhì)，及/或具有可形成本發(fā)明的GPAT的脂肪酸組成活性的蛋白質(zhì)。此外，本發(fā)明的蛋白質(zhì)，也可是人工制作的蛋白質(zhì)，此時可通過Fmoc法(9-莉甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等的化學(xué)合成法制造。也可利用AdvancedChemTech公司制、珀金埃爾默(PerkinElmer)公司制、Pharmacia公司制、ProteinTechnologyInstruments公司制、Synthecell-Vega公司制、PerS印tive公司制、島津制作所(島津製作所)制等的肽合成儀進(jìn)行化學(xué)合成。GPAT的核酸的克隆本發(fā)明的GPAT的核酸，例如可通過使用適當(dāng)?shù)奶结槒腸DNA文庫中篩選，進(jìn)行克隆。此外，可通過用適當(dāng)?shù)囊锿ㄟ^PCR反應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)增并和適當(dāng)?shù)妮d體連接進(jìn)行克隆。并且還可亞克隆到其他載體上。例如可使用pBlue-ScriptSK(+)(Stratagene)、pGEM-T(Promega)、pAmp(TM:Gibco-BRL)、p-Direct(Clontech)、pCR2.1-T0P0(Invitrogene)等市售的質(zhì)粒載體。此外，通過PCR反應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)增時，引物可使用上述序列號1等表示的堿基序列的任意部分。例如對于序列號l，可使用作為上游側(cè)用引物E-1:5'-CTGACTACCAAAACCAGCTGGACTTC-3'(序列號6)，作為下游側(cè)用引物E-2:5'-GGCAATTTCATCCAAGTTGTCCTCC-3'(序列號7)等。接著在由M.alpirm菌體制備的cDNA中，使上述引物及堿基序列聚合酶等作用進(jìn)行PCR反應(yīng)。上述方法，根據(jù)《MolecularCloning,ALaboratoryManual3rded.》(ColdSpringHarborPress(2001)"等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地實(shí)施。作為本發(fā)明的PCR反應(yīng)條件，例如可例舉以下條件變性溫度9095°C退火溫度4060。C延伸溫度6075"C循環(huán)數(shù)IO次以上將獲得的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化時，可使用公知的方法。例如有使用GENECLEAN(Funakoshi)、QIAquickPCRpurificationKits(QIAGEN)、ExoSAP-IT(GEHealthcareBio-Sciences)等試劑盒的方法、使用DEAE-纖維素濾紙的方法、使用透析管的方法等。使用瓊脂糖凝膠時，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，將堿基序列片段從瓊脂糖凝膠中切出，可通過GENECLEAN(Funakoshi)、QIAquickGelextractionKits(QIAGEN)、Freeze&Squeeze法等進(jìn)行純化。已克隆的核酸的堿基序列，用堿基序列測序儀來確定堿基序列。GPAT表達(dá)用載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化體的制作本發(fā)明還提供含有編碼本發(fā)明的GPAT2的核酸的重組載體。本發(fā)明還進(jìn)一步提供被上述重組載體轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化體。這種重組載體及轉(zhuǎn)化體可通過以下方法獲得。即將含有編碼本發(fā)明GPAT的核酸的質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切。作為使用的限制性內(nèi)切酶，例如可例舉EcoRI、Kpnl、BamHI及SalI等，但不限于這些。此外，也可通過T4聚合酶處理進(jìn)行末端平滑化。酶切后的堿基序列片段通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行純化。通過用公知的方法將該堿基序列片段重組到表達(dá)用載體內(nèi)，可獲得GPAT表達(dá)用載體。將該表達(dá)載體導(dǎo)入宿主內(nèi)制作轉(zhuǎn)化體，供給目的蛋白質(zhì)的表達(dá)。此時，表達(dá)載體及宿主，只要可使目的蛋白質(zhì)表達(dá)，沒有特別限定，例如作為宿主，可例舉真菌、細(xì)菌、植物、動物或其細(xì)胞等。作為真菌，可例舉脂質(zhì)生產(chǎn)菌M.alpina等絲狀菌、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)等酵母等。此外，作為細(xì)菌，可例舉大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)等。進(jìn)而作為植物，可例舉油菜子、大豆、棉花、紅花、亞麻等油料植物等。作為脂質(zhì)生產(chǎn)菌，例如可使用MYC0TAX0N，Vol.XLIV，NO.2，pp.257-265(1992)所記載的菌株，具體來說屬于被孢霉屬(Mortierella)的微生物，例如可例舉長孢被孢霉(Mortierellaelongate)IF08570、MortierellaexiguaIF08571、Mortierellahygr叩hilaIF05941、高山被孢霉(Mortierellaalpine)IF08568、ATCC16266、ATCC32221、ATCC42430、CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66、CBS527.72、CBS528.72、CBS529.72、CBS608.70、CBS754.68等屬于被孢霉亞屬(subgenusMortierella)的微生物，或者深黃被孢霉(Mortierellaisabellina)CBS194.28、IF06336、IF07824、IF07873、IF07874、IF08286、IF08308、IF07884、MortierellananaIF08190、拉曼被孢霉(Mortierellaramanniana)IF05426、IF08186、CBS112.08、CBS212.72、IF07825、IF08184、IF08185、IF08287、葡酒色被孢霉(Mortierellavinacea)CBS236.82等屬于Micromucor亞屬(subgenusMicromucor)的微生物等。特別優(yōu)選高山被孢霉(Mortierellaalpina)。將真菌類作為宿主使用時，優(yōu)選本發(fā)明的核酸可在宿主中自主復(fù)制，或者是可插入該菌的染色體上的結(jié)構(gòu)。與此同時，優(yōu)選為含有啟動子、終止子的組成。使用M.alpina作為宿主時，作為表達(dá)載體，例如可例舉pD4、pDuraSC、pDura5等。作為啟動子，只要能夠在宿主中表達(dá)，可使用任何啟動子，例如可使用histonH4.1基因啟動子、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)基因啟動子、TEF(翻譯延伸因子)基因啟動子等來自M.alpina的啟動子。作為向M.alpiria等絲狀菌內(nèi)導(dǎo)入重組載體的方法，例如可例舉電穿孔法、原生質(zhì)球法、粒子轟擊法(particledelivery)以及向核內(nèi)直接顯微注射DNA等。使用營養(yǎng)缺陷型的宿主株時，通過選擇在缺少其營養(yǎng)的選擇培養(yǎng)基上生長繁殖的菌株，可獲得轉(zhuǎn)化體。此外，轉(zhuǎn)化時使用抗藥性標(biāo)記基因時，在含有該藥劑的選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，可獲得顯示抗藥性的細(xì)胞菌落。使用酵母作為宿主時，作為表達(dá)載體，例如可例舉pYE22m等。此外，也可使用pYES(Invitrogen)、pESC(STRATAGENE)等市售的酵母表達(dá)用載體。此外，作為適合于本發(fā)明的宿主，可例舉釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)EH13-15株(trpl，MATa)等，但并不限于這些。作為啟動子，例如可使用GAPDH啟動子、gall啟動子、gallO啟動子等來自酵母的啟動子。作為向酵母內(nèi)導(dǎo)入重組載體的方法，例如可例舉乙酸鋰法、電穿孔法、原生質(zhì)球法、葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、聚凝胺介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、脂質(zhì)體中的多核苷酸(單數(shù)或復(fù)數(shù))的包裹、以及在核內(nèi)直接顯微注射DNA等。使用大腸桿菌等細(xì)菌作為宿主時，作為表達(dá)載體，例如可例舉Pharmacia公司的pGEX、pUC18等。作為啟動子，例如可使用trp啟動子、lac啟動子、PL啟動子、PR啟動子等來自大腸桿菌、噬菌體等的啟動子。作為向細(xì)菌內(nèi)導(dǎo)入重組載體的方法，例如可使用電穿孔法、氯化鈣法。本發(fā)明的脂肪酸組合物的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供從上述轉(zhuǎn)化體中制造脂肪酸組合物的方法。即培養(yǎng)上述轉(zhuǎn)化體，從獲得的培養(yǎng)物中制造脂肪酸組合物的方法。具體可用以下方法制造。但是，對于本制造方法來說，并不限于該方法，可采用通常公知的其他方法進(jìn)行。用于培養(yǎng)使GPAT表達(dá)的生物的培養(yǎng)基，只要是具有適當(dāng)?shù)膒H及滲透壓，含有各宿主增殖所必需的營養(yǎng)素、微量成分、血清、抗生素等生物材料的培養(yǎng)液(培養(yǎng)基)，可使用任意的培養(yǎng)液。例如轉(zhuǎn)化酵母使GPAT表達(dá)時，可使用SC-Trp培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基、YPD5培養(yǎng)基等，但并不限于這些。作為具體的培養(yǎng)基的組成，例示SC-Trp培養(yǎng)基每1L中，無氨基酸酵母氮源(Yeastnitrogenbasew/oaminoacids)(DIFC0)6.7g、葡萄糖20g、氨基酸粉(腺嘌呤硫酸鹽1.25g、精氨酸0.6g、天冬氨酸3g、谷氨酸3g、組氨酸0.6g、亮氨酸1.8g、賴氨酸0.9g、蛋氨酸0.6g、苯丙氨酸1.5g、絲氨酸11.25g、酪氨酸0.9g、纈氨酸4.5g、蘇氨酸6g、尿嘧啶0.6g的混合物)1.3g。培養(yǎng)條件，只要是適合宿主增殖、且適于生成的酶保持穩(wěn)定的條件，可以為任意的條件，具體可調(diào)節(jié)厭氧度、培養(yǎng)時間、溫度、濕度、靜置培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)等各種條件。培養(yǎng)方法，可以為同一條件下的培養(yǎng)(l段培養(yǎng))，也可以為使用2個以上不同培養(yǎng)條件即2段培養(yǎng)或3段培養(yǎng)，進(jìn)行大量培養(yǎng)時，優(yōu)選培養(yǎng)效率良好的2段培養(yǎng)等。以下，作為本發(fā)明的脂肪酸組合物的具體制造方法，以使用酵母作為宿主進(jìn)行2段培養(yǎng)為例進(jìn)行說明。即作為預(yù)培養(yǎng)，將上述獲得的菌落接種到如上述SC-Trp培養(yǎng)基等中，在3(TC下振蕩培養(yǎng)2天。然后，作為本培養(yǎng)，在YPD5(2%酵母膏、1%多聚蛋白胨、5%葡萄糖)培養(yǎng)基10ml中添加預(yù)培養(yǎng)液500u1，在30'C下振蕩培養(yǎng)2天。本發(fā)明的脂肪酸組合物本發(fā)明還提供在本發(fā)明的GPAT2巳表達(dá)的細(xì)胞中的1種或1種以上脂肪酸的集合體脂肪酸組合物。脂肪酸可以是游離脂肪酸，也可以是三甘油酯、磷脂質(zhì)等。特別是，本發(fā)明的脂肪酸組合物的特征在于，在其脂肪酸組成中，以下i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率Hi)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率，以及iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率中的至少一項(xiàng)以上比培養(yǎng)未用本發(fā)明的重組載體轉(zhuǎn)化的宿主而獲得的培養(yǎng)物的上述比率高。在此，"未用本發(fā)明的重組載體轉(zhuǎn)化的宿主"是指，例如使用未整合本說明書中的"編碼本發(fā)明的甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶的核酸"項(xiàng)目中所記載的核酸的載體(空載體)轉(zhuǎn)化的宿主。作為本發(fā)明脂肪酸組合物中含有的脂肪酸，是指長鏈烴的鏈狀或分支狀的單羧酸，例如可例舉肉豆蔻酸(myristicacid)(十四烷酸)(14:0)、肉豆蔻烯酸(myristoleicacid)(十四碳烯酸)(14:1)、棕櫚酸(十六烷酸)(16:0)、棕櫚油酸(9一十六碳烯酸)(16:1)、硬脂酸(十八垸酸)(18:0)、油酸(順式一9一十八碳烯酸)(18:1(9))、異油酸(ll一十八碳烯酸)(18:1(11))、亞油酸(順式，順式一9，12十八碳二烯酸)(18:2(9，12))、a_亞麻酸(9，12，15—十八碳三烯酸)(18:3(9，12，15))、Y_亞麻酸(6，9，12—十八碳三烯酸)(18:3(6，9，12))、亞麻油酸(Stearidonicacid)(6，9，12，15-十八碳四烯酸)(18:4(6，9，12，15))、花生酸(二十烷酸)(20:0)、(8，ll一二十碳二烯酸)(20:2(8，ll))、Mead酸(5,8，ll一二十碳三烯酸)(20:3(5，8，ll))、二高-Y-亞麻酸(8，11，14-二十碳三烯酸)(20:3(8，11，14))、花生四烯酸(5，8，11，14—二十碳四烯酸)(20:4(5，8，11，14))、二十碳四烯酸(5，11，14，17-二十碳四烯酸)(20:4(5，11，14，17)、二十碳五烯酸(5,8，11，14，17-二十碳五烯酸)(20:5(5，8，11，14，17))、山崳酸(二十二垸酸)(22:0)、(7，10，13，16-二十二碳四烯酸)(22:4(7，10，13，16))、(4，7，13，16，19-二十二碳五烯酸)(22:5(4，7，13，16，19))、(4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸)(22:5(4，7，10，13，16))、(4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸)(22:6(4，7，10，13，16，19))、木質(zhì)素酸(二十四垸酸)(24:0)、神經(jīng)酸(順式一15—二十四碳烯酸)(24:1)、蠟酸(二十六烷酸)(26:0)等，但并不限于這些。此外，上述物質(zhì)名稱是采用IUPAC生物化學(xué)命名法定義的通用名稱，括號內(nèi)記載了系統(tǒng)名稱以及表示碳原子數(shù)量和雙鍵位置的數(shù)值。本發(fā)明的脂肪酸組合物，只要是上述脂肪酸中的1種或1種以上的脂肪酸的組合，可以是由任意數(shù)量、任意種類的脂肪酸組成的組合物。為了證明已獲得了這種本發(fā)明的脂肪酸組合物，即證明本發(fā)明的GPAT2已表達(dá)，可使用公知的通常的方法進(jìn)行。例如用酵母表達(dá)GPAT時，可通過脂肪酸組成的變化來確認(rèn)。艮P:在通過上述本發(fā)明的脂肪酸組合物的制造方法獲得的冷凍干燥菌體中，添加以適當(dāng)比率調(diào)整的氯仿甲醇并攪拌后，加熱處理適當(dāng)時間，進(jìn)而通過離心分離將菌體分離，回收溶劑，這樣重復(fù)數(shù)次。然后使用適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ怪|(zhì)干燥固化，添加氯仿等溶劑使脂質(zhì)溶解。將該試樣分取適當(dāng)量，通過鹽酸甲醇法使菌體的脂肪酸衍生為甲酯后，用己烷提取，蒸餾除去己烷，用氣相色譜法進(jìn)行分析。其結(jié)果，在獲得了具有上述脂肪酸組成的脂肪酸組合物時，可判斷獲得了本發(fā)明的脂肪酸組合物。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的GPAT，與公知的GPAT脂肪酸組合物的脂肪酸組成在脂肪酸組成上不同，由此表明本發(fā)明的GPAT與公知的GPAT的底物特異性不同。含有本發(fā)明的脂肪酸組合物的食品等此外，本發(fā)明提供含有上述脂肪酸組合物的食品。本發(fā)明的脂肪酸組合物，根據(jù)通常方法，例如可利用于含有油脂的食品、工業(yè)原料(化妝料、醫(yī)藥(例如皮膚外用藥)、肥皂等的原料)的制造等用途中。作為化妝料(組合物)或醫(yī)藥(組合物)的劑型，可例舉溶液狀、糊狀、凝膠狀、固體狀、粉末狀等任意的劑型，但并不限于這些。此外，作為食品的形態(tài)，可例舉膠囊等醫(yī)藥制劑的形態(tài)，或在蛋白質(zhì)、糖類、脂肪、微量元素、維生素類、乳化劑、香料等中配合了本發(fā)明的脂肪酸組合物的自然流食、半消化狀態(tài)營養(yǎng)食品、以及成分營養(yǎng)食品、保健飲料、經(jīng)腸營養(yǎng)劑等加工形態(tài)。進(jìn)而，作為本發(fā)明的食品例，可例舉營養(yǎng)輔助食品、保健食品、功能性食品、幼兒用食品、嬰兒用配方乳、早產(chǎn)兒用配方乳、老人用食品等，但不限于這些。在本說明書中，食品是固體、流體、及液體及其混合物，是可攝取食用的物質(zhì)的總稱。營養(yǎng)輔助食品是指強(qiáng)化了特定營養(yǎng)成分的食品，保健食品是指被認(rèn)為是健康的或?qū)】涤幸娴氖称?，包括營養(yǎng)輔助食品、天然食品、減肥食品等。功能性食品是指用來補(bǔ)充發(fā)揮身體的調(diào)節(jié)功能的營養(yǎng)成分的食品，與特定保健用途食品含義相同。幼兒用食品是指供給約6歲以下的兒童用的食品，老人用食品是指處理成與無處理的食品相比，容易消化吸收的食品。嬰兒用配方乳是指供給大約1歲以下的兒童用的配方乳。早產(chǎn)兒用配方乳是指供給早產(chǎn)兒出生后到約6個月為止所用的配方乳。作為這些食品，可例舉肉、魚、果仁等天然食品(用油脂處理過的食品)；中華料理、拉面、湯等制作時加入油脂的食品；天麩羅、油炸食品、油炸豆腐、炒飯、炸面圈、油炸糖點(diǎn)心等用油脂作熱介質(zhì)的食品；黃油、人造黃油、蛋黃醬、調(diào)味料、巧克力、方便面、奶糖、餅干、曲奇、蛋糕、冰淇淋等油脂食品或加工時加入油脂的加工食品；(烤)年糕片、硬餅干、豆沙面包等加工完成時用油脂噴霧或涂布的食品等。但是，本發(fā)明的食品并不限于含油脂的食品，例如可例舉面包、面條類、米飯、點(diǎn)心類(糖果、口香糖、橡皮糖、壓片糖、日式點(diǎn)心)、豆腐及其加工品等農(nóng)產(chǎn)食品；清酒、藥用酒、甜料酒、食用醋、醬油、黃醬等發(fā)酵食品；酸奶、火腿、培根、香腸等畜產(chǎn)食品；魚糕、炸魚糕、魚肉山芋餅等水產(chǎn)食品；果汁飲料、清涼飲料、運(yùn)動飲料、酒精飲料、茶等。使用編碼本發(fā)明的GPAT的核酸或GPAT蛋白質(zhì)的菌株的評價"選擇方法本發(fā)明還提供使用編碼本發(fā)明的GPAT的核酸或GPAT蛋白質(zhì)，進(jìn)行評價、選擇脂質(zhì)生產(chǎn)菌的方法。具體如下所示。(l)評價方法作為本發(fā)明的一個實(shí)施方式，可例舉使用編碼本發(fā)明的GPAT的核酸或GPAT蛋白質(zhì)，進(jìn)行評價脂質(zhì)生產(chǎn)菌的方法。作為本發(fā)明的上述評價方法，首先例舉使用根據(jù)本發(fā)明的堿基序列設(shè)計(jì)的引物或探針，對作為被測菌株的脂質(zhì)生產(chǎn)菌株的本發(fā)明的上述活性進(jìn)行評價的方法。這種評價方法的通常方法是公知的，例如在國際專利申請文本W(wǎng)001/040514號、日本特開平8-205900號公報(bào)等中均有記載。以下對該評價方法進(jìn)行簡單說明。首先制備被測菌株的基因組。制備方法可使用Hereford法、乙酸鉀法等任何公知的方法(例如參照MethodsinYeastGenetics,ColdSpringHarborLaboratoryPress,pl30(1990))。根據(jù)本發(fā)明的堿基序列，優(yōu)選根據(jù)序列號4設(shè)計(jì)引物或探針。上述引物或探針可使用本發(fā)明的堿基序列的任意部分，并且可使用公知的方法進(jìn)行其設(shè)計(jì)。作為引物使用的多核苷酸的堿基數(shù)，通常為IO個堿基以上，優(yōu)選為1525個堿基。此外，夾在兩引物間的堿基數(shù)通常以3002000個堿基為宜。使用上述構(gòu)建的引物或探針，檢測上述被測菌體的基因組中是否存在本發(fā)明的堿基序列的特異性序列。本發(fā)明的堿基序列的特異性序列的檢測可采用公知的方法進(jìn)行。例如，用含有本發(fā)明的堿基序列的特異性序列的一部分或全部的多核苷酸或者含有上述堿基序列的互補(bǔ)堿基序列的多核苷酸作為一個引物，用含有該序列的上游或下游序列的一部分或全部的多核苷酸或者含有上述堿基序列的互補(bǔ)堿基序列的多核苷酸作為另一個引物，例如通過PCR法等擴(kuò)增被測菌株的核酸，可以測定擴(kuò)增產(chǎn)物的有無、擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量大小等。適合本發(fā)明方法的PCR法的反應(yīng)條件，沒有特別限定，例如可例舉以下條件，變性溫度9095°C退火溫度4060°C延伸溫度6075°C循環(huán)數(shù)IO次以上等條件。將獲得的反應(yīng)生成物，通過使用瓊脂糖凝膠等的電泳法等進(jìn)行分離，可以測定擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量。因此通過確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量是否是含有相當(dāng)于本發(fā)明的堿基序列的特異區(qū)域的核酸分子的大小，可以預(yù)測或評價被測菌株的本發(fā)明的上述活性。此外，通過用上述方法等分析上述擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列，可以進(jìn)一步更正確地預(yù)測或評價本發(fā)明的上述活性。此外，本發(fā)明的上述活性的評價方法如上所述。此外，作為本發(fā)明的上述評價方法，通過培養(yǎng)被測菌株，測定序列號4等本發(fā)明的堿基序列編碼的GPAT的表達(dá)量，可以評價被測菌株的本發(fā)明的上述活性。此外，GPAT的表達(dá)量，可以通過在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)被測菌株，對GPAT的mRNA或蛋白質(zhì)定量來測定。mRNA或蛋白質(zhì)的定量，可使用公知的方法進(jìn)行。mRNA的定量，例如可通過Northern雜交法、定量RT-PCR進(jìn)行，蛋白質(zhì)的定量例如可通過Western印跡法進(jìn)行(CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons1994-2003)。此外，作為上述活性的評價方法，可例舉測定本發(fā)明的GPAT產(chǎn)生的脂肪酸組合物的組成的方法。脂肪酸組合物的組成的測定方法如上所述。(2)選擇方法作為本發(fā)明的其他實(shí)施方式，可例舉使用編碼本發(fā)明的GPAT的核酸或GPAT蛋白質(zhì)進(jìn)行選擇脂質(zhì)生產(chǎn)菌的方法。作為本發(fā)明的上述選擇方法，通過培養(yǎng)被測菌株，測定序列號4等本發(fā)明的堿基序列編碼的GPAT的表達(dá)量，選擇目的表達(dá)量的菌株，可以選擇出具有期望活性的菌株。此外，設(shè)定作為標(biāo)準(zhǔn)的菌株，分別培養(yǎng)該標(biāo)準(zhǔn)菌株和被測菌株，測定各菌株的上述表達(dá)量，比較標(biāo)準(zhǔn)菌株和被測菌株的表達(dá)量，也可以選擇出期望的菌株。具體來說，例如將標(biāo)準(zhǔn)菌株和被測菌株在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)，測定各菌株的表達(dá)量，通過選擇與標(biāo)準(zhǔn)菌株相比較，被測菌株為高表達(dá)、或低表達(dá)的被測菌株，可以選擇具有期望活性的菌株。對于期望的活性，如上所述可例舉測定GPAT的表達(dá)量及GPAT產(chǎn)生的脂肪酸組合物的組成的方法。此外，作為本發(fā)明的上述選擇方法，通過培養(yǎng)被測菌株，選擇本發(fā)明的上述活性高或低的菌株，可以選擇具有期望活性的被測菌株。對于期望活性，如上所述，可例舉測定GPAT的表達(dá)量及GPAT產(chǎn)生的脂肪酸組合物的組成的方法。作為被測菌株或標(biāo)準(zhǔn)菌株，例如可使用導(dǎo)入上述本發(fā)明的載體的菌株、上述本發(fā)明的核酸的表達(dá)受到抑制的菌株、實(shí)施突變處理的菌株、發(fā)生自然突變的菌株等，但并不限于這些。此外，本發(fā)明的GPAT活性及可形成GPAT的脂肪酸組合物的活性，例如可通過本說明書中的"編碼本發(fā)明的甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶的核酸"、"本發(fā)明的脂肪酸組合物"項(xiàng)目中記載的方法進(jìn)行測定。作為突變處理，例如可例舉紫外線照射、放射線照射等物理方法，EMS(甲基磺酸乙酯)、N-甲基-N-亞硝基胍等試劑處理的化學(xué)方法等(如參照大嶋泰治編著、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)法39酵母分子遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)法、p67-75、學(xué)會出版中心等)(日語原名大嶋泰治編著、生物化學(xué)実験法39酵母分子遺伝學(xué)実験法、p67-75、學(xué)會出版"t>々一)。但不限于這些。此外，作為本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)菌株、被測菌株使用的菌株，可例舉上述脂質(zhì)生產(chǎn)菌或酵母等，但并不限于這些。具體來說，標(biāo)準(zhǔn)菌株、被測菌株，可將屬于不同屬、種的任意菌株組合使用，被測菌株也可同時使用1個或1個以上的菌株。實(shí)施例以下根據(jù)實(shí)施例更加具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1(l)EST分析將M.alpinaIS-4株接種到100ml的培養(yǎng)基(1.8%葡萄糖、1%酵母膏、pH6.0)中，在28。C預(yù)培養(yǎng)3天。在1QL培養(yǎng)槽(AbleCo.，東京)中加入5L培養(yǎng)基(l.8%葡萄糖、1%大豆粉、0.1%橄欖油、0.O服decanol、0.3%KH2P04、0.l%Na2S04、0.05%CaCl2'2H20、0.05%MgCl2■6H20、pH6.0)，接種全部預(yù)培養(yǎng)物，在300rpm、lvvm、26。C的條件下通氣攪拌培養(yǎng)8天。在培養(yǎng)的第l、2、及3天分別添加相當(dāng)于2%、2%、及1.5%的葡萄糖。在培養(yǎng)的第l、2、3、6、及8天的各階段回收菌體，用鹽酸胍/氯化銫法制備總RNA。使用Oligotex-dT30〈S叩er〉mRNAPurificationKit(TaKaRaBio)，從總RNA中純化poly(a)+RNA。使用ZAP-cDNASynthesisKit(STRATAGENE),構(gòu)建各階段的cDNA文庫，進(jìn)行cDNA的5'端一步法序列分析(8000克隆X5步)。將獲得的序列進(jìn)行聚類。其結(jié)果，獲得約5000序列。(2)GPAT基因同源物的檢索將通過EST分析獲得的堿基序列，相對于在GENEBANK注冊的氨基酸序列使用同源性檢索程序BLASTX進(jìn)行檢索，提取出GPAT基因的同源物。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)1個GPAT同源物的序列(序列號5)。在上述檢索中，同一性最高的蛋白質(zhì)是來自釀酒酵母S.cerevisiae的甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶的Sctlp(由YBL011w編碼的蛋白質(zhì))。對于M.alpina的GPAT同源物，早已在美國專利申請公開第US2006/0094091號說明書中記載，將該已知的來自M.alpirm的序列(稱為GPAT1)和上述獲得的序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)與序列號5沒有顯著同一性。因此，認(rèn)為序列號5和M.alpina的公知的GPAT是其它同源物的EST,將該GPAT同源物稱為GPAT2。實(shí)施例2(1)GPAT同源物的克隆因?yàn)樾蛄刑?中不存在認(rèn)為是編碼GPAT同源物的CDS,因此為了克隆編碼這些基因的全長的cDNA，根據(jù)序列號5的序列構(gòu)建以下引物。根據(jù)序列號5設(shè)計(jì)的引物引物E-1:CTGACTACCAAAACCAGCTGGACTTC(序列號6)引物E-2:GGCAATTTCATCCAAGTTGTCCTCC(序列號7)使用該引物對，將含有構(gòu)成序列號5的EST的第8天的cDNA文庫作為模板，使用ExTaq(TaKaRaBio)進(jìn)行PCR反應(yīng)。將獲得的DNA片段用TOPO-TAcloningKit(INVITROGENCORPORATION)進(jìn)行TA—克隆，確定插入部分的堿基序列。其結(jié)果，確認(rèn)含有序列號5的第5位到第243位的堿基序列的DNA片段己被克隆，將該質(zhì)粒作為pCR-E-P。接著，將該質(zhì)粒作為模板，使用上述引物進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)中雖然使用了ExTaq(TaKaRaBio)，但用PCR標(biāo)記用混合物(RocheDiagnostics公司)代替添附的dNTP混合物，將擴(kuò)增的DNA用地高辛(DIG)標(biāo)記，構(gòu)建用于篩選cDNA文庫的探針。使用該探針，對用EST分析獲得的構(gòu)成序列號5的EST的cDNA文庫進(jìn)行篩選。雜交條件如下所示。緩沖液5XSSC、1%SDS、50mMTris-HCl(pH7.5)、50%甲酰胺;溫度42。C(一夜)；洗漆在O.2XSSC、0.1%SDS溶液中(65°C)，20分鐘X3次；檢測，使用DIG核酸檢測試劑盒(RocheDiagnostics公司)進(jìn)行。從經(jīng)過篩選獲得的噬菌體克隆中，通過體內(nèi)切割，切出質(zhì)粒，獲得質(zhì)粒DNA。篩選含有序列號5的cDNA，獲得的克隆的插入堿基序列用序列號1表示。序列號1中含有從第113位到第1891位的1779bp所組成的CDS,所以認(rèn)為獲得了編碼GPAT同源物(GPAT2)全長的序列。由該基因編碼的蛋白質(zhì)的推定氨基酸序列用序列號2表示。將含有序列號1的質(zhì)粒作為pB-GPAT2。另一方面，為了克隆來自M.alpina1S-4株的GPAT1，根據(jù)美國專利申請公開第2006/0094091號說明書的序列號1所示的GPAT同源物的0RF序列，構(gòu)建以下引物。弓l物GPATl-lgg§i￡￡atggcccttcagatctacga(序列號8)弓I物GPAT1-2gtcgacctaaatgtcUttgacttggc(序列號9)上述引物的下劃線部分，是附加的限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)。使用上述引物，以cDNA文庫為模板，通過KOD-Plus-(東洋紡織)進(jìn)行PCR。將擴(kuò)增的片段亞克隆到pCR4Blunt-T0P0(Invitrogen)上，確定堿基序列，將認(rèn)為是該基因的正確堿基序列的克隆作為pCR4-GPAT1。將這樣被克隆的來自M.alpina1S-4株的GPAT1的cDNA的堿基序列用序列號10表示，而且將被該cDNA編碼的GPAT1的推定氨基酸序列用序列號11表示。(2)序列分析將上述獲得的來自M.alpina的GPAT同源物(GPAT2)的cDNA序列，相對于在GENEBANK注冊的氨基酸序列，使用BLASTX進(jìn)行同源性分析。其結(jié)果是，相對于該同源物的序列E-value最低、即同一性最高的氨基酸序列是來自構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)的1一酰基一sn—甘油一3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶樣的推定蛋白質(zhì)的序列(GB注冊號No，EAA62242)。功能明確的蛋白質(zhì)中同一性最高的是來自釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的甘油3—磷酸?；D(zhuǎn)移酶Sctlp(GB注冊號No.CAC85390)。將該同源物序列的0RF和上述同一性高的序列相關(guān)的堿基序列的同一性、以及氨基酸序列的同一性用clustalW計(jì)算。其結(jié)果，0RF的堿基序列的同一性分別為36.9%和36.6%，氨基酸序列的同一性分別為17.0%和15.0%?？寺〉男蛄刑?的堿基序列及其推定氨基酸序列的序列號2，與已知的堿基序列及氨基酸序列比較，同一性并不顯著高，認(rèn)為是來自M.alpina的新型GPAT。另一方面，將上述克隆化的來自M.alpina1S-4株的GPAT1(cDNA序列用序列號10表示，其推定氨基酸序列用序列號ll表示)和來自M.alpina(ATCC證66)的GPAT1(美國專利申請公開第2006/0094091號說明書)進(jìn)行比較，確認(rèn)堿基序列同一性為90.4%、氨基酸序列同一性為97.9%。實(shí)施例3酵母表達(dá)載體的構(gòu)建為了使GPAT2在酵母中表達(dá)，如下所述構(gòu)建酵母表達(dá)載體。S卩將質(zhì)粒pB-GPAT2用限制性內(nèi)切酶Kpnl酶切后，用限制性內(nèi)切酶Sacl部分酶切獲得約2kb的DNA片段，將該DNA片段插入酵母用表達(dá)載體pYE22m(Biosci,Biotech.Biochem.,59，1221-1228，1995)的Sacl-Kpnl位點(diǎn)，構(gòu)建質(zhì)粒pYE-MAGPAT2。另一方面，為了使GPATl在酵母中表達(dá)，如下所述構(gòu)建酵母表達(dá)載體。將質(zhì)粒pCR4-GPAT1用限制性內(nèi)切酶BamHI和SalI酶切獲得約2.2kb的DNA片段，將該DNA片段插入酵母用表達(dá)載體pYE22m(Biosci.Biotech.Biochem.，59，1221-1228，1995)的BamHI-SalI位點(diǎn)，構(gòu)建質(zhì)粒pYE-MAGPAT1。實(shí)施例4酵母的轉(zhuǎn)化用質(zhì)粒pYE22m、pYE-MAGPAT1或pYE-MAGPAT2，通過乙酸鋰法轉(zhuǎn)化入酵母釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)EH13-15株(trpl，MATa)(Appl.Microbiol.Biotechnol.，30，515-520，1989)中。轉(zhuǎn)化株選擇在SC-Trp(每1升中，無氨基酸酵母氮源(Yeastnitrogenbasew/oaminoacids)(DIFC0)為6.7g、葡萄糖為20g、氨基酸粉(腺嘌呤硫酸鹽1.25g、精氨酸0.6g、天冬氨酸3g、谷氨酸3g、組氨酸0.6g、亮氨酸1.8g、賴氨酸0.9g、蛋氨酸0.6g、苯丙氨酸1.5g、絲氨酸11.25g、酪氨酸0.9g、纈氨酸4.5g、蘇氨酸6g、尿嘧啶0.6g的混合物)為1.3g)瓊脂培養(yǎng)基(^瓊脂)上生長繁殖的菌株。實(shí)施例5酵母的培養(yǎng)分別選擇使用酵母表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化株中的任意2株(c-1株、c-2株、GPAT1-1株及GPATl-2株、以及GPAT2-1株、GPAT2-2株)，在以下條件下培養(yǎng)。艮P:作為預(yù)培養(yǎng)，從平板上取l白金耳酵母接種到SC-Trp培養(yǎng)基10ml中，在3(TC下振蕩培養(yǎng)2天。本培養(yǎng)是在YPD5(酵母膏29/。、多聚蛋白胨1%、葡萄糖5y。)培養(yǎng)基10ml中添加預(yù)培養(yǎng)液500u1，30'C下振蕩培養(yǎng)2天。實(shí)施例6酵母的脂肪酸分析通過離心分離酵母的培養(yǎng)液，回收菌體。用10ml滅菌水洗漆，通過離心分離再回收菌體，進(jìn)行冷凍干燥。在冷凍干燥菌體中添加氯仿甲醇(2:l)4ml，劇烈攪拌后，7(TC下處理l小時。通過離心分離分離菌體，回收溶劑。在殘留的菌體中再次添加氯仿甲醇(2:l)4ml，同樣回收溶劑。在離心濃縮儀中使脂質(zhì)干燥固化后，添加2ml氯仿溶解脂質(zhì)。從該試樣中分取200yl，通過鹽酸甲醇法使菌體的脂肪酸衍生為甲酯后，用己垸提取，蒸餾除去己烷，通過氣相色譜法進(jìn)行分析。其結(jié)果如表2所示。表2轉(zhuǎn)化株的脂肪酸組成(宿主EH13-15)試樣名c-1c-2GPAT1-1GPAT1-2GPAT2-1GPAT2-216:06.146.167.377.284.774.8216:139.7539.4937,5937.7733.6234.5318:04.504.514.855.095.735.3018:145.7046.0845.8746.2651,7651.09otlw3.913.774.333.604.124.27試樣名c-1c-2GPAT1-1GPAT1-2GPAT2-1GPAT2-216:1/16:06.476.415.105.t97.047.1618:1/16:07.447.486,236.3610.8410.60(18:0+18:1)/16:08.178.216.897.0612.0411.70(18:0+18:1)/(16:0+16:1)1.091.111.131.141.501.43比較導(dǎo)入來自M.alpina的2個GPAT同源物的酵母和對照酵母的脂肪酸組成。導(dǎo)入GPAT1的酵母的脂肪酸組成，棕櫚酸的比例與對照株相比升高，而棕櫚油酸的比例降低。此外，硬脂酸和油酸的比例與對照株為同等程度。因此，棕櫚油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率、油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率、以及硬脂酸和油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率，均低于對照株。另一方面，導(dǎo)入GPAT2的酵母中，油酸的比例與對照株相比升高10%以上。棕櫚酸、棕櫚油酸的比例與對照株相比均減少，而棕櫚油酸含量相對于棕櫚酸含量的比例與對照株相比有一些升高。此外，導(dǎo)入GPAT2的酵母中油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率、以及硬脂酸和油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率，與對照株相比均升高。此外，導(dǎo)入GPAT2的酵母中碳原子數(shù)18的脂肪酸相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸的比例升高，生成了更長鏈的脂肪酸。以上結(jié)果表明，來自M.alpina的2個GPAT同源物，因?yàn)槠涞孜秕；禺愋圆煌?，所以?dǎo)入這些基因的酵母中各同源物的脂肪酸組成不同。并且表明，通過將上述同源物適時分開使用，能夠育種目的脂肪酸組成的生物。實(shí)施例7花生四烯酸生產(chǎn)酵母中的表達(dá)分析(l)花生四烯酸生產(chǎn)酵母的育種為了育種花生四烯酸生產(chǎn)酵母釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，構(gòu)建以下質(zhì)粒。首先，將從M.alpina1S-4株中制備的cDNA作為模板，使用A12-f和A12_r、△6_f和A6-r、GLELO-f和GLELO-r或A5-f和A5_r的引物組合，使用ExTaq進(jìn)行PCR，擴(kuò)增M.alpina1S_4株的A12脂肪酸去飽和酶基因、A6脂肪酸去飽和酶基因、GLELO脂肪酸鏈延長酶基因以及A5脂肪酸去飽和酶基因?！?2-f:TCTAGAatggcacctcccaacactattg(序列號12)△12-r:AAGCTTTTACTTCTTGAAAAAGACCACGTC(序列號13)A6-f:TCTAGAatggctgctgctcccagtgtgag(序列號14)A6-r:AAGCTTTTACTGTGCCTTGCCCATCTTGG(序列號15)GLEL0-f:TCTAGAatggagtcgattgcgcaattcc(序列號16)GLEL0-r:GAGCTCTTACTGCAACTTCCTTGCCTTCTC(序列號17)A5_f:TCTAGAatgggtgcggacacaggaaaaacc(序列號18)△5-r:AAGCTTTTACTCTTCCTTGGGACGAAGACC(序列號19)將這些通過T0P0-TA-cloningKit進(jìn)行克隆。確認(rèn)堿基序列，將含有序列號2023的堿基序列的克隆，分別作為質(zhì)粒pCR-MAA12DS(含有序列號20的堿基序列)、pCR-MAA6DS(含有序列號21的堿基序列)、pCR-MAGLELO(含有序列號22的堿基序列)、pCR-MAA5DS(含有序列號23的堿基序列)。另一方面，將用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切質(zhì)粒pURA34(日本特開2001-120276號公報(bào))后獲得的約1.2kb的DNA片段，插入用限制性內(nèi)切酶EcoRI和Sphl酶切載體pUC18后進(jìn)行末端平滑化，通過自我連接作用獲得的載體的HindIII位點(diǎn)，將載體的EcoRI位點(diǎn)側(cè)為URA3的5'端的克隆作為pUC-URA3。并且，將用限制性內(nèi)切酶Sail和Xhol酶切YEpl3獲得的約2.2kb的DNA片段插入載體pUC18的Sail位點(diǎn)，將載體的EcoRI側(cè)為LUE2的5'端的克隆作為pUC-LEU2。接著，將用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切質(zhì)粒pCR-MAA12DS并且進(jìn)行末端平滑化后用限制性內(nèi)切酶Xbal酶切獲得的約1.2kbp的DNA片段，與用限制性內(nèi)切酶Sacl酶切載體pESC-URA(STRATAGENE)并且進(jìn)行末端平滑化后，用限制性內(nèi)切酶Spel酶切后的約6.6kbp的DNA片段連接，獲得質(zhì)粒pESC-U-A12。將用限制性內(nèi)切酶Xbal酶切質(zhì)粒pCR-MAA6DS并且進(jìn)行末端平滑化后用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切獲得的約1.6kbp的DNA片段，與用限制性內(nèi)切酶SalI酶切質(zhì)粒pESC-U-A12并且進(jìn)行末端平滑化后用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切后的約8kbp的DNA片段連接，獲得質(zhì)粒pESC-U-A12:A6。將其用限制性內(nèi)切酶PvuII部分酶切獲得的約4.2kb的片段插入pUC-URA3的Smal位點(diǎn)，獲得質(zhì)粒pUC-URA-A12:A6。此外，將用限制性內(nèi)切酶Xbal和Sacl酶切質(zhì)粒pCR-MAGLELO獲得的約0.95kbp的DNA片段，與用限制性內(nèi)切酶Xbal和Sacl酶切載體pESC-LEU(STRATAGENE)獲得的約7.7kbp的DNA片段連接，獲得質(zhì)粒pESC-L-GLEL0。將用限制性內(nèi)切酶Xbal酶切質(zhì)粒pCR-MAA5DS并且進(jìn)行末端平滑化后用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切獲得的約1.3kbp的DNA片段，與用限制性內(nèi)切酶Apal酶切質(zhì)粒pESC-L-GLEL0并且進(jìn)行末端平滑化后用限制性內(nèi)切酶HindIII酶切后獲得的約8.7kbp的DNA片段連接，獲得質(zhì)粒pESC-L-GLELO:A5。將其用限制性內(nèi)切酶PvuII酶切獲得的約3.2kb片段插入pUC-LEU2的Smal位點(diǎn)，獲得質(zhì)粒pUC-LEU-GLEL0:A5。將S.cerevisiaeYPH499株(STRATAGENE)用質(zhì)粒pUC-URA-A12:△6和質(zhì)粒pUC-LEU-GLELO:A5進(jìn)行共轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化株選擇在SC-Leu，Ura(每1升中，無氨基酸酵母氮源(Yeastnitrogenbasew/oaminoacids)(DIFCO)為6.7g、葡萄糖為20g、氨基酸粉(腺嘌呤硫酸鹽1.25g、精氨酸0.6g、天冬氨酸3g、谷氨酸3g、組氨酸0.6g、賴氨酸0.9g、蛋氨酸0.6g、苯丙氨酸1.5g、絲氨酸11.25g、酪氨酸0.9g、纈氨酸4.5g、蘇氨酸6g、色氨酸1.2g的混合物)為1.3g)瓊脂培養(yǎng)基(2y。瓊脂)上生長繁殖的菌株。將這樣獲得的菌株中的任意一株作為ARA3-1株。(2)花生四烯酸生產(chǎn)酵母的轉(zhuǎn)化株的獲得與分析將ARA3-1株用質(zhì)粒pYE22m、pYE-MAGPATl、pYE-MAGPAT2分別轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化株選擇在SC-Trp、Leu、Ura(每l升中，無氨基酸酵母氮源(Yeastnitrogenbasew/oaminoacids)(DIFCO)為6.7g、葡萄糖為20g、氨基酸粉(腺嘌呤硫酸鹽1.25g、精氨酸0.6g、天冬氨酸3g、谷氨酸3g、組氨酸0.6g、賴氨酸0.9g、蛋氨酸0.6g、苯丙氨酸1.5g、絲氨酸11.25g、酪氨酸0.9g、纈氨酸4.5g、蘇氨酸6g的混合物)為1.3g)瓊脂培養(yǎng)基(2n/。瓊脂)上生長繁殖的菌株。從導(dǎo)入各質(zhì)粒的菌株中分別選擇任意4株。將這些菌株在上述SC-T卬、Leu、Ura液體培養(yǎng)基10ml中30°C、培養(yǎng)1天，取其中l(wèi)ml在SG-Trp、Leu、Ura(每1升中，無氨基酸酵母氮源(Yeastnitrogenbasew/oaminoacids)(DIFCO)為6.7g、半乳糖為20g、氨基酸粉(腺嘌呤硫酸鹽1.25g、精氨酸0，6g、天冬氨酸3g、谷氨酸3g、組氨酸0.6g、賴氨酸0.9g、蛋氨酸0.6g、苯丙氨酸1.5g、絲氨酸11.25g、酪氨酸0.9g、纈氨酸4.5g、蘇氨酸6g的混合物)為1.3g)液體培養(yǎng)基10ml中15。C、培養(yǎng)7天，進(jìn)行菌體的脂肪酸分析。菌體的脂肪酸組成如表3所示，菌體內(nèi)的油脂含有率如表4所示。表3菌體內(nèi)脂肪酸含有率(％)control_GPAT1_GPAT2_6.32±0,596.50±0.318.08±0.38平均土SD表4DGLA和AKA在總脂肪酸中占有的比率(％)controlGPAT1GPAT2DGLAARA0.33±0.44±0.020.030.32±0.46±0.070.090.50±0.55±0.050.06平均士SD在花生四烯酸生產(chǎn)酵母中使來自M.alpina的GPAT23表達(dá)時，與對照相比較，DGLA、花生四烯酸等PUFA的比率增高。并且，菌體內(nèi)的脂肪酸含有率增高。實(shí)施例8M.alpina表達(dá)用載體的構(gòu)建作為M.alpina表達(dá)用載體，使用由GAPDH啟動子使目的基因表達(dá)的pDuraSC和由組蛋白啟動子使目的基因表達(dá)的pDuraMCS。為了使GPAT2在M.alpina中表達(dá)，按以下所述構(gòu)建載體。用限制性內(nèi)切酶Pstl酶切質(zhì)粒pB-GPAT2，接著用限制性內(nèi)切酶Xhol部分分解，從獲得的DNA片段中切出約1.7kb的片段，插入載體pDuraSC或載體pDura5MCS的多克隆位點(diǎn)的Pstl位點(diǎn)、Xhol位點(diǎn)，分別將這些作為質(zhì)粒pDuraSC-GPAT2、質(zhì)粒pDura5MCS-GPAT2。M.alpina轉(zhuǎn)化株的獲得使用這些質(zhì)粒，利用M.alpina,將根據(jù)專利文獻(xiàn)(W02005/019437"脂質(zhì)生產(chǎn)菌的育種方法")中記載的方法誘導(dǎo)的尿嘧啶缺陷型株Aura-3作為宿主，利用粒子轟擊法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。選擇轉(zhuǎn)化株時，使用SC瓊脂培養(yǎng)基(無氨基酸酵母氮源(不含硫酸胺)(YeastNitrogenBasew/oAminoAcidsandAmmoniumSulfate](Difco)0.5%、硫酸銨0.17%、葡萄糖2%、腺嘌呤0.002%、酪氨酸0.003%、蛋氨酸0.0001%、精氨酸0.0002%、組氨酸0.0002%、賴氨酸0.0004%、色氨酸0.0004%、蘇氨酸0.0005%、異亮氨酸0.0006%、亮氨酸0.0006%、苯丙氨酸0.0006%、瓊脂2%)。轉(zhuǎn)化M.alpina的評價將獲得的轉(zhuǎn)化株，接種到GY培養(yǎng)基(葡萄糖2。/。、酵母膏P/。)4ml中，28'C下振蕩培養(yǎng)3天或4天。通過過濾回收菌體，使用RNeasyplantkit(QIAGEN)提取RNA。通過SuperscriptFirst-StrandSynthesisSystemforRT-PCR(Invitrogen)合成cDNA。為了確認(rèn)導(dǎo)入的構(gòu)建物中的各基因的表達(dá)、總的各基因的表達(dá)，用以下引物的組合進(jìn)行RT-PCR。O質(zhì)粒pDuraSC-GPAT2導(dǎo)入株從導(dǎo)入構(gòu)建物中確認(rèn)表達(dá)時使用的引物MaGAPDHpfw:CACACCACACATTCAACATC(序列號24)E2:GGCAATTTCATCCAAGTTGTCCTCC(序列號25)確認(rèn)總的GPAT2表達(dá)時使用的引物E1:CTGACTACCAAAACCAGCTGGACTTC(序列號26)E2〇質(zhì)粒pDura5MCS-GPAT2導(dǎo)入株從導(dǎo)入的構(gòu)建物中確認(rèn)表達(dá)時使用的引物PD4P:CGCATCCCGCAAACACACAC(序列號27)和引物E2、確認(rèn)總的GPAT2的表達(dá)時使用的引物引物E1和引物E2根據(jù)上述RT-PCR的結(jié)果，作為各基因?qū)霕?gòu)建物中的表達(dá)及總表達(dá)高的菌株，從質(zhì)粒pDuraSC-GPAT2導(dǎo)入株中篩選出Gp-GPAT2-30株，從質(zhì)粒pDura5MCS-GPAT2導(dǎo)入株中篩選出Hp-GPAT2-9株。將這些菌株接種于GY培養(yǎng)基4ml中，28'C、125rpm下振蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)第3天，添加20。/。葡萄糖400p1，并繼續(xù)培養(yǎng)?；蛟谂囵B(yǎng)的第6天將全部菌體過濾回收，進(jìn)行冷凍干燥。取部分干燥菌體(約10-20mg左右)，通過鹽酸甲醇法將菌體的脂肪酸衍生為甲酯后，用己烷提取，蒸餾除去己烷，用氣相色譜法進(jìn)行分析。菌體內(nèi)的脂肪酸含有率和每單位培養(yǎng)基的花生四烯酸生產(chǎn)量總結(jié)于以下表5-6中。表5菌體內(nèi)脂肪酸含有率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表6每單位培養(yǎng)基的花生四烯酸生產(chǎn)量(g/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>由此可見，通過使GPAT2基因在M.alpina中進(jìn)行高表達(dá)，菌體內(nèi)的脂肪酸含有率升高，也可使每單位培養(yǎng)基的花生四烯酸的生產(chǎn)量增加。序列表FREETEXT序列號6:引物序列號7:引物序列號8:引物序列號9:引物序列號12:引物序列號13:引物序列號14:引物序列號15:引物序列號16:引物序列號17:引物序列號18:引物序列號19:引物序列號24:引物序列號25:引物序列號26:引物序列號27:引物權(quán)利要求1.核酸，其含有以下(a)～(e)中任一項(xiàng)所述的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼具有甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(c)堿基序列，其由與序列號4所組成的堿基序列有70％以上同一性的堿基序列組成，且編碼具有甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(d)堿基序列，其編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有70％以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(e)堿基序列，其與由編碼序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交、且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。2.如權(quán)利要求l所述的核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成、且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在2XSSC、5(TC的條件下雜交，且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，(c)堿基序列，其編碼與由序列號2組成的氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列，且編碼具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。3.核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)所述的堿基序列或其片段，(a)堿基序列，其由序列號4表示，(b)堿基序列，其編碼由序列號2表示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，(c)堿基序列，其由序列號l表示。4.核酸，其含有以下(a)(e)中任一項(xiàng)所述的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由序列號2表示的氨基酸序列中1個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(c)堿基序列，其由與序列號4所組成的堿基序列有70%以上同一性的堿基序列組成，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(d)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(e)堿基序列，其與由編碼序列號2表示的氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在嚴(yán)格條件下雜交、且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原T數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。5.如權(quán)利要求4所述的核酸，其含有以下(a)(c)中任一項(xiàng)的堿基序列，(a)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由序列號2表示的氨基酸序列中110個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(b)堿基序列，其與由序列號4所組成的堿基序列的互補(bǔ)堿基序列組成的核酸在2XSSC、50'C的條件下雜交，且編碼以下蛋白質(zhì)，具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(c)堿基序列，其編碼以下蛋白質(zhì)，由與序列號2所組成的氨基酸序列有90%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性的蛋白質(zhì)，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。6.蛋白質(zhì)，其為以下(a)或(b)中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)，(a)蛋白質(zhì)，其由序列號2中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性，(b)蛋白質(zhì)，其為由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，且具有甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶活性。7.蛋白質(zhì)，其為以下(a)或(b)中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)，(a)蛋白質(zhì)，其由序列號2中l(wèi)個或多個氨基酸發(fā)生缺失、取代或添加后的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率(b)蛋白質(zhì)，其由與序列號2所組成的氨基酸序列有70%以上同一性的氨基酸序列組成，且具有可形成在上述氨基酸序列所組成的蛋白質(zhì)已表達(dá)的宿主的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上與未表達(dá)上述蛋白質(zhì)的宿主的脂肪酸組成相比均為高比率的脂肪酸組成的活性，i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率m)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高-Y-亞麻酸含量的比率。8.蛋白質(zhì)，其由序列號2所示的氨基酸序列組成。9.重組載體，其含有權(quán)利要求15中任一項(xiàng)所述的核酸。10.轉(zhuǎn)化體，其為被權(quán)利要求9所述的重組載體轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化體。11.脂肪酸組合物，其為培養(yǎng)權(quán)利要求10所述的轉(zhuǎn)化體而獲得的脂肪酸組合物，其特征在于，在上述脂肪酸組合物的脂肪酸組成中，以下i)v)中至少一項(xiàng)以上，比培養(yǎng)未用權(quán)利要求9所述的重組載體轉(zhuǎn)化的宿主獲得的培養(yǎng)物的上述比率高。i)油酸含量ii)油酸含量相對于棕櫚酸含量的比率iii)硬脂酸及油酸的合計(jì)含量相對于棕櫚酸含量的比率iv)碳原子數(shù)18的脂肪酸含量相對于碳原子數(shù)16的脂肪酸含量的比率，以及v)花生四烯酸及/或二高_(dá)y-亞麻酸含量的比率。12.權(quán)利要求ll所述脂肪酸組合物的制造方法，其特征在于，從培養(yǎng)權(quán)利要求10所述的轉(zhuǎn)化體而獲得的培養(yǎng)物中提取所述的脂肪酸組合物。13.食品，其含有權(quán)利要求ll所述的脂肪酸組合物。全文摘要本發(fā)明提供新型甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶基因。其為含有序列號1或4表示的堿基序列或其片段的核酸。文檔編號C12N1/19GK101578366SQ20088000156公開日2009年11月11日申請日期2008年6月12日優(yōu)先權(quán)日2007年6月18日發(fā)明者得田久敬,落合美佐申請人:三得利控股株式會社