專利名稱：含(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏乃幤返闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有選自(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物及其藥學(xué)上許可的鹽的至少1種有效成分的藥品。
背景技術(shù)：
眾所周知，在藻類、高等植物等天然物質(zhì)所含有的硫糖脂質(zhì)中，含有具有生理活性的物質(zhì)。
例如，太田等的文章(Chemical & Pharmaceutical Bulletin，46(4)，(1998))中記載著從紅藻杉藻中得到的特定的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锞哂幸种聘叩壬铴痢ⅵ滦虳NA合成酶的活性以及從HIV得到的逆轉(zhuǎn)錄酶的活性。太田等的文章中公開的(磺基奎諾糖基)二酰基甘油衍生物，其以酯鏈結(jié)合在甘油的1位碳原子上的脂肪酸為含有5個(gè)雙鍵的20個(gè)碳原子的不飽和脂肪酸，與2位的碳原子結(jié)合的脂肪酸為含有16個(gè)碳原子的飽和脂肪酸。
水品等的文章(Biochemical Pharmacology，55，537-541，(1998))中記載了從歐洲蕨植物中提取特定的(磺基奎諾糖基)酰基甘油衍生物的混合物雖然具有抑制小牛α型DNA合成酶及小鼠β型DNA合成酶的活性，但對(duì)從HIV得到的逆轉(zhuǎn)錄酶活性無影響。
另一方面，佐原等的文章(British Journal of Cancer，75(3)，324-332，(1997))記載了鱷魚腸道的丙酮抽提物中含有的(磺基奎諾糖基)單?；视徒M份，在體內(nèi)外均有抑制癌的作用。然而，佐原等發(fā)現(xiàn)的具有抑癌作用的(磺基奎諾糖基)單?；视徒M份為含有16個(gè)碳原子的飽和脂肪酸以酯鏈結(jié)合的(磺基奎諾糖基)單酰基甘油為主要成分的物質(zhì)。此(磺基奎諾糖基)單?；视徒M份中，脂肪酸的?；糠譃椴伙柡椭舅岬孽；鶜埢?，其量是及其微量的。而且，佐原等對(duì)其發(fā)現(xiàn)的具有抑癌活性的(磺基奎諾糖基)單?；视突旌衔镏兴械拿糠N成分的抑癌活性沒有進(jìn)行探討。
另外，在特表平5-501105號(hào)中雖然記載著(磺基奎諾糖基)單?；视脱苌锞哂锌共《净钚?，具體地說具有抗人免疫缺陷病毒活性，但沒有記載其具有抑制DNA合成酶活性和抗癌活性。
發(fā)明的揭示因此，本發(fā)明的目的為提供含有有效成分為(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏乃幤?。
本發(fā)明的發(fā)明者們，發(fā)現(xiàn)了在特定的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏杏兴幚砘钚缘奈镔|(zhì)，完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明提供含有選自如下通式(1) (式中，R101表示不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢?，R102表示氫原子和不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢?所表示的化合物及其藥學(xué)上許可的鹽類的至少1種有效成分的藥品。
附圖的簡單說明

圖1為利用細(xì)胞來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖2為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖3為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖4為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖5為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖6為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
圖7為用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法來顯示本發(fā)明藥品抑癌活性的圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳形態(tài)在本說明書中，保護(hù)基團(tuán)的“碳原子數(shù)”即該保護(hù)基未取代時(shí)的碳原子數(shù)。因此，例如以R6來表示的基團(tuán)為取代烷基時(shí)，其碳原子數(shù)不包含該烷基上取代基團(tuán)的碳原子數(shù)，而僅為烷基骨架部分的碳原子數(shù)。保護(hù)基團(tuán)不是烷基時(shí)也同樣。
首先，對(duì)本發(fā)明藥品所含有的作為有效成分的通式(1)所表示的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镒饕辉敿?xì)說明。
在上述通式(1)的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物中，構(gòu)成吡喃糖苷的糖骨架的吡喃糖包括α-D-奎諾糖(6-脫氧-α-D-葡萄糖)、β-D-奎諾糖(6-脫氧-β-D-葡萄糖)、α-D-巖藻糖(6-脫氧-α-D-半乳糖)、β-D-巖藻糖(6-脫氧-β-D-半乳糖)、α-D-鼠李糖(6-脫氧-α-D-甘露糖)和β-D-鼠李糖(6-脫氧-β-D-甘露糖等)。
在甘油的2位碳原子(不對(duì)稱碳原子)的絕對(duì)構(gòu)型，可以是S也可以是R。
這些吡喃糖苷的糖骨架可以是船式或者椅式構(gòu)象。但是，從穩(wěn)定性的角度來看椅式構(gòu)象較好。
在上述的通式(1)的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物中，R101表示氫原子或不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢?。
雖然提供R101所示不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢闹舅岚ㄖ辨溁蛑ф湶伙柡透呒?jí)脂肪酸，但從通式(1)所示化合物用作藥品這一點(diǎn)來看，直鏈不飽和脂肪酸更好。
直鏈不飽和脂肪酸的?；鶜埢?4-26個(gè)碳原子數(shù)(最好是14-26的偶數(shù))有1-6個(gè)不飽和鍵。即直鏈不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢猛ㄊ絉-C(＝O)-[式中，R為13-15個(gè)碳原子(最好是13-25的奇數(shù))的、直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基中含有1-6個(gè)不飽和鍵]來表示。
在上述通式(1)的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物中，R102表示氫原子或不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢?。特別在抑癌活性上來說，R102為氫原子更好。R102為不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢鶗r(shí)，作為提供此?；鶜埢闹舅幔蛇x擇與R101具有同樣意義的物質(zhì)。R101與R102可以是相同或不同的酰基。
下面說明本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏闹圃旆椒?。
本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锇聪铝辛鞒?的反應(yīng)式，可經(jīng)(工序A)-(工序J)而制成。流程1 (工序A)將與吡喃糖的C1碳原子結(jié)合的羥基進(jìn)行2-丙烯基化。(工序B)保護(hù)吡喃糖的C6碳原子的羥基。(工序C)保護(hù)結(jié)合在吡喃糖的C2、C3及C4碳原子上的羥基。(工序D)使先前保護(hù)的C6碳原子的羥基去保護(hù)。(工序E)將與C6碳原子結(jié)合的羥基取代為可變換成碳酰硫基的基團(tuán)(例如烷磺酰氧基或者芳基磺酰氧基)。(工序F)將C6碳原子碳酰硫基化。(工序G)將與C1碳原子結(jié)合的2-丙烯基進(jìn)行二醇化。(工序H)對(duì)所得的二醇的兩個(gè)羥基或者僅僅1位羥基用所期望的不飽和高級(jí)脂肪酸進(jìn)行酯化。(工序I)將C6碳原子的碳酰硫基形成磺酸鹽。(工序J)通過使所得到磺酸鹽的C2、C3及C4碳原子的保護(hù)基脫保護(hù)，可制成鹽形式的本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌?。如此得到的鹽采用鹽酸等酸的滴定，可制成本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌?。
下面對(duì)上述工序A-J進(jìn)行更詳細(xì)的說明。
工序A的2-丙烯基化通?？稍谌谆撬岬葟?qiáng)酸條件下，在室溫-100℃，最好在80-90℃的溫度下，使吡喃糖和烯丙醇反應(yīng)半天-2天來完成。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
在工序B中，保護(hù)與C6碳原子鍵合的羥基，使-OR6結(jié)合到C6碳原子上(在此，R6表示烷基或取代的甲硅烷基。)能保護(hù)羥基的化合物可采用能使以R6表示的基團(tuán)形成烷基或取代甲硅烷基的化合物。
在以R6表示的烷基中，最好含有體積大的取代烷基。取代基包括甲基、苯基等。取代烷基的具體例子可為叔丁基、三苯甲基等。
以R6表示的基團(tuán)為取代甲硅烷基時(shí)，取代的甲硅烷基的取代基包括低級(jí)烷基，較好是碳原子數(shù)為1-4的烷基(例如甲基、乙基、異丙基和叔丁基)，及芳基，較好為碳原子數(shù)為6的芳基(如苯基)。以R6表示的取代甲硅烷基較好是三取代的甲硅烷基，更好的是叔丁基二苯基甲硅烷基。
在工序B的羥基保護(hù)中，得到R6為烷基的化合物3的情況下，可在溶解于干燥吡啶等有機(jī)溶劑中的化合物2的溶液中，加入以R6-X表示的化合物(式中的R6為上述規(guī)定的烷基，X為氯原子等鹵原子)，在對(duì)-二甲基氨基吡啶(DMAP)等催化劑存在的條件下，于室溫下進(jìn)行反應(yīng)。從制造成本、反應(yīng)的容易性來看，化合物R6-X最好采用三苯氯甲基。
得到取代甲硅烷基為R6的化合物3的情況下，化合物R6-X可采用叔丁基二苯基甲硅烷基氯等，在咪唑等催化劑存在的條件下，通常于室溫下反應(yīng)半天-2天。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
在工序C中，保護(hù)與C2、C3及C4碳原子結(jié)合的羥基，使其分別為-OR1、-OR2和-OR3(在此R1-R3互相獨(dú)立地表示烷基或取代甲硅烷基)。這些羥基的保護(hù)可通過用氫氧化鈉使溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等有機(jī)溶劑中的化合物3的與C2、C3及C4碳原子結(jié)合的羥基活化，使能保護(hù)羥基的化合物在室溫進(jìn)行反應(yīng)來完成。
能保護(hù)羥基的化合物可采用芐基溴、對(duì)甲氧基芐基溴、叔丁基二甲基甲硅烷基氯和三乙基甲硅烷基氯等。
用這些能保護(hù)羥基的化合物進(jìn)行的反應(yīng)，可根據(jù)不同保護(hù)基適用的條件來進(jìn)行。
在工序D中，與C6碳原子結(jié)合的保護(hù)基的脫保護(hù)可通過使溶解于甲醇等有機(jī)溶劑中的化合物4的溶液在對(duì)甲苯磺酸等催化劑存在的條件下，通常于室溫反應(yīng)12小時(shí)-1天。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
在工序E中，通過在化合物5的C6碳原子的羥基上，結(jié)合上R4，即烷基磺?；蚍蓟酋；勾肆u基轉(zhuǎn)化為-OR4，得到化合物6。
轉(zhuǎn)化為-OR4基團(tuán)的反應(yīng)，可通過在溶于有機(jī)溶劑的化合物5的溶液中加入具有烷基磺?；蚍蓟酋；幕衔飦磉M(jìn)行。具有烷基磺酰基的化合物的烷基較好為未取代的烷基，更好為低級(jí)烷基，更理想的為含有1-2個(gè)碳原子的烷基(甲基和乙基)。具有烷基磺?；幕衔?，可采用以通式R4’-X(式中R4’表示烷基磺?；?、X表示鹵原子)表示的化合物。例如可用具有甲磺酰氯、乙磺酰氯等基團(tuán)的化合物。
另一方面，具有芳基磺酰基的化合物的芳基為未取代或取代的芳基，較好為含有6個(gè)碳原子的芳基(例如苯基)。在取代的芳香基的情況下，其取代基包括對(duì)-甲基、對(duì)-甲氧基等。具有芳基磺?；幕衔锟捎靡酝ㄊ絉4”-X(式中R4”表示芳基磺?；?、X表示鹵原子)表示的化合物。例如，包括對(duì)-甲基苯磺酰氯、對(duì)-甲氧基苯磺酰氯、苯磺酰氯等。
這些具有烷基磺?；蛘叻蓟酋；幕衔镏?，最好為具有甲苯磺?；幕衔铮捎谄湟子诜磻?yīng)。
在工序E的反應(yīng)中，有機(jī)溶劑可采用吡啶、二氯甲烷等。
上述反應(yīng)，根據(jù)需要可在DMAP等催化劑存在的情況下，通常于室溫下進(jìn)行2小時(shí)-1天的反應(yīng)。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
在工序F中，化合物6的磺酰氧基(-OR4)取代為碳酰硫基[-SC(＝O)R5(在此R5表示氫原子、烷基或芳基)]。
在此反應(yīng)中，通過使在有機(jī)溶劑中的化合物6的烷基磺酰氧基或芳基磺酰氧基可取代為碳酰硫基的化合物(以下也稱作“O-取代基→S-取代基化合物”)反應(yīng)得到化合物7。
在O-取代基→S-取代基化合物中，包括硫代羧酸的堿金屬鹽及堿土金屬鹽。硫代羧酸包括硫代甲酸和低級(jí)硫代羧酸，較佳為由碳原子數(shù)為1-5個(gè)的脂肪烴取代得到的脂肪族硫代羧酸(如硫代乙酸、硫代丙酸)、及最好是由6-10個(gè)碳原子的芳烴取代的芳香族硫代羧酸(如硫代安息香酸)等。
和這些硫代羧酸形成鹽的堿金屬包括鉀、鈉等，堿土金屬包括鎂、鈣等。
在上述的O-取代基→S-取代基化合物中，常使用硫代乙酸的鹽，由于其反應(yīng)的穩(wěn)定性及其在此后的制造過程中硫原子容易被氧化。
反應(yīng)中使用的有機(jī)溶劑包括醇類，較佳為低級(jí)醇(如甲醇、乙醇、丙醇)、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜等。
上述反應(yīng)通?？筛鶕?jù)室溫及所使用的溶劑的沸點(diǎn)，攪拌1小時(shí)-1天來進(jìn)行。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
工序G的二醇化可在叔丁醇和水等溶劑的混合液中溶解的化合物7的溶液中加入四氧化鋨等氧化劑，在N-氧化三甲胺等再氧化劑存在的條件下，在室溫下通常進(jìn)行1小時(shí)-1天的反應(yīng)而得。但是，設(shè)定的反應(yīng)條件不同，反應(yīng)時(shí)間也不同。
通過工序H的酯化反應(yīng)，可得到所期望的不飽和脂肪酸和甘油以酯鍵結(jié)合的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌?。
此反應(yīng)可在溶解于二氯甲烷等合適的有機(jī)溶劑中的化合物8的溶液中，加入對(duì)應(yīng)于最終生成物的不飽和脂肪酸，如有必要，可使其在乙基二甲氨基丙基碳二亞胺(EDCI)-DMAP類等合適的催化劑存在的條件下進(jìn)行。
工序H的反應(yīng)中，應(yīng)加入的脂肪酸可采用由上述通式(1)的R101所表示的含有?；鶜埢牟伙柡透呒?jí)脂肪酸。
通過工序H的反應(yīng)，將化合物9中R101及R102為添加的不飽和高級(jí)脂肪酸酰基殘基的本發(fā)明通式(1)所表示的二?；ヅc僅R101上的不飽和高級(jí)脂肪酸的酰基殘基結(jié)合，可得到單酰基酯的混合物。在工序H的反應(yīng)中，根據(jù)需要，應(yīng)加入的不飽和高級(jí)脂肪酸可有兩種以上。此時(shí)，可得到R101和R102為相同或不同?；鶜埢耐ㄊ?1)所示二?；ズ蚏101為互不相同的酰基的單?；サ幕旌衔?。
這些單酯和二酯的混合物可根據(jù)需要，例如采用色譜法，將各種酯分離以提供給下個(gè)工序。
另外，也可根據(jù)需要，對(duì)上述工序H中得到的單酯，可通過將R101的?；鶜埢c含有其他?；鶜埢闹舅岱磻?yīng)，得到與R102和R101不同?；鶜埢亩?。此酯化反應(yīng)的條件，除脂肪酸是不同的以外，可設(shè)定與工序H同樣的條件。
工序I的磺酸鹽化可通過以乙酸和乙酸鉀緩沖的有機(jī)溶劑中的化合物9的溶液中，加入OXONE(2KHSO5、KHSO4、K2SO4)、鉬類氧化劑(如七鉬酸六銨)等氧化劑，在室溫使其反應(yīng)來進(jìn)行。
工序J的與C2-C4碳原子結(jié)合的保護(hù)基的脫保護(hù)，可采用與使用的保護(hù)劑相應(yīng)、而且能維持不飽和脂肪酸的雙鏈的脫保護(hù)方法進(jìn)行。例如對(duì)甲硅烷基類的保護(hù)基，可用酸催化劑(如三氟乙酸)來進(jìn)行脫保護(hù)。
另外，初始物質(zhì)吡喃糖，由于可在溶液中形成α-差向異構(gòu)體及β-差向異構(gòu)體，各工序的生成物變成了α-差向異構(gòu)體及β-差向異構(gòu)體的混合物。這些混合物可采用色譜法等進(jìn)行分離。另外，可根據(jù)糖的種類不同，通過工序A后的亞芐基化使其結(jié)晶得到分離。
下面，就本發(fā)明的含有選自(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锛捌渌帉W(xué)上許可的鹽類的至少1種有效成分的藥品進(jìn)行說明。
本發(fā)明的藥理有效成分(磺基吡喃糖基)?；视脱苌镏?，吡喃糖為奎諾糖、巖藻糖和鼠李糖，吡喃糖與甘油的結(jié)合為α鍵或β鍵的異構(gòu)體，含有甘油的C2碳原子(不對(duì)稱碳原子)的異構(gòu)體等。本發(fā)明的藥品中，只要對(duì)其活性沒有壞的影響，可單獨(dú)含有這些異構(gòu)體或含有兩種以上異構(gòu)體的混合物。
本發(fā)明作為藥品的用途包括DNA合成酶抑制劑及抗癌劑。
本發(fā)明的藥品能采用的藥學(xué)上許可的鹽中，包括如鈉、鉀的一價(jià)陽離子的鹽，但并不僅限于這些。下面的本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)酰基甘油衍生物及其藥學(xué)上許可的鹽類的化合物也稱作為“本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)”。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)，例如可經(jīng)口用藥、非經(jīng)口用藥。本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可按不同的用藥途徑，通過與合適的藥學(xué)上許可的賦形劑或稀釋劑等組合，使其制成為藥品。
適合于經(jīng)口用藥的劑型包括固體、半固體、液體或氣體等狀態(tài)的物質(zhì)，具體可有片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、溶液劑、懸濁液、糖漿、酏劑等，但也并不限于這些。
為了將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)制成片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、溶液劑、懸濁液等，可采用已知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)與粘合劑、片劑崩解劑、潤滑劑等混合，更可根據(jù)需要，與稀釋劑、緩沖劑、濕潤劑、防腐劑、矯味劑等混合制成藥劑。具例來說，上述粘合劑可使用結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、玉米淀粉、明膠等，片劑崩解劑可使用玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、羧甲基纖維素鈉等，而潤滑劑包括滑石、硬脂酸鎂等，更可使用乳糖、甘露醇等以往使用的添加劑。
另外，本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)，其液體、細(xì)微粉末狀物質(zhì)可與氣體或液體的噴霧劑一起，或可根據(jù)需要與濕潤性賦予劑之類已知的助劑一起，填充至如氣溶膠容器、噴霧器那樣的非加壓容器中，以氣溶膠劑或吸入劑的形式用藥。噴霧劑可用二氯氟甲烷、丙烷、氮?dú)獾燃訅簹怏w。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)非經(jīng)口用藥時(shí)，可采用如直腸用藥及注射用藥等方式。
直腸用藥時(shí)，可作為栓劑來用。栓劑通過已知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)與體溫融化、室溫固化的可可脂、碳石蠟、聚乙二醇等賦形劑混合，使之成形而制成制劑。
通過注射用藥的話，可注射至皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)等。這些注射用制劑可采用己知的方法，將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)在植物油、合成脂肪酸甘油酯、高級(jí)脂肪酸的酯、丙二醇類非水性溶劑中溶解、懸濁、或乳化，更可根據(jù)需要，與可溶化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、乳化劑、穩(wěn)定劑及防腐劑之類常用添加劑一起制成制劑。
為使將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)制成溶液、懸濁液、糖漿、酏劑等形態(tài)、可采用注射用滅菌水、生理鹽水之類藥學(xué)上許可的溶劑。本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)也可與藥學(xué)上許可的具有其他活性的化合物一起制成制劑。
本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可根據(jù)用藥方式、用藥途徑、所要治療的疾病的程度和階段等設(shè)定、調(diào)節(jié)合適的用藥量。舉1例說明，經(jīng)口用藥時(shí)，藥理活性物質(zhì)可設(shè)定為1-10mg/kg體重/日，注射用藥時(shí)，藥理活性物質(zhì)為1-5mg/kg體重/日，經(jīng)直腸用藥時(shí)，藥理活性物質(zhì)為1-5mg/kg體重/日，但也并不僅限于此。
將本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)用作抗癌劑時(shí)，本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可奏效的癌中，包括具有惡性腫瘤性質(zhì)的癌，如包括人類的乳腺癌、上皮癌、肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤等類固形癌、以及白血病等類液性癌。
實(shí)施例下面，舉例說明本發(fā)明。但本發(fā)明并不基僅限于這些例子。
<合成例>
本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锏闹圃旃ば蛞?磺基奎諾糖基)單?；视挺裂苌餅槔?，以下面的流程2表示。
流程2 Ts＝甲苯磺?；?，TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷、AnS＝乙酰硫基R1-1表示不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢鵕102表示氫原子或不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢磻?yīng)條件a；烯丙醇、三氟甲磺酸，80℃m；苯甲醛、氯化鋅、室溫n；乙酸，水100℃p；甲苯磺酰氯、二甲基氨基吡啶，吡啶，室溫q；叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸，2，6-二甲基吡啶，二氯甲烷，室溫f；硫代乙酸鉀、乙醇，回流g；四氧化鋨，N-氧化三甲胺水合物，叔丁醇，水h；脂肪酸，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，二氯甲烷，室溫i；OXONE，冰乙酸，乙酸鉀，室溫j；乙酸、四氫呋喃，三氟乙酸，水，室溫上述流程2除了先前所述的流程1的工序B-工序E以外，與流程1相同。即在流程2中，用化合物II和苯甲醛反應(yīng)制得亞芐基衍生物(工序m)代替流程1的工序B。根據(jù)此反應(yīng)，可使α-差向異構(gòu)體結(jié)晶得到分離。
流程2的反應(yīng)中，在工序p中，使C6碳與對(duì)-甲苯磺酰氯反應(yīng)，結(jié)合上甲苯磺酰基后，采用叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)C2、3、4碳(工序q)的途徑。這時(shí)，由于甲苯磺酰基是穩(wěn)定的，因此流程1的反應(yīng)中由烷基和取代甲硅烷基對(duì)C6碳原子的保護(hù)(工序B)、脫保護(hù)(工序D)的工序可省去。
另外，通過工序h得到單酯和二酯的混合物，用色譜法將它們分離，可分別提供給工序i。
<實(shí)施例1>
途徑a；1-0-(2-丙烯基)-D-葡萄糖(II)在250ml烯丙醇中加入D-葡萄糖(I)100g，使其充分溶解，在冰浴條件下緩慢加入0.8ml三氟甲磺酸。此后在80℃的油浴條件下攪拌30小時(shí)使其反應(yīng)。當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行得很充分時(shí)，用1ml三甲胺中和后，減壓濃縮。用薄層色譜法確認(rèn)收率為60-70％。 途徑m；1-O-(2-丙烯基)-4，6-O-亞芐基-α-D-葡萄糖(III)在210ml苯甲醛中加入37.5g化合物(II)，使其充分溶解，在此溶液中加入98g氯化鋅，室溫反應(yīng)4小時(shí)。此后，將反應(yīng)液加入到500ml己烷中，再加入100ml碳酸氫鈉稀溶液，0℃放置30分鐘使其結(jié)晶。將此結(jié)晶抽濾后，溶解于50ml乙醇中，于0℃放置30分鐘，使其重結(jié)晶(產(chǎn)量21g，68.1mmol，收率40.0％)。
1H NMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.51～7.49(2H、m、Ar)、7.38～7.33(3H、m、Ar)、5.98～5.85(1H、m、-CH＝CH2)、5.51(1H、s、Ar-CH)、5.31(1H、dd、J＝1.5&15.9、-CH＝CH2)、5.23(1H、dd、J＝1.2&10.4、-CH＝CH2)、4.90(1H、d、J＝3.9、H-1)、4.28～4.19(2H、m、-CH2-CH＝CH2)、4.06～4.00(1H、m、H-5)、3.93(1H、t、J＝9.3、H-3)、3.87～3.78(1H、m、H-6a)、3.70(1H、t、J＝10.2、H-2)、3.60(1H、dd、J＝3.8&9.2、H-6b)、3.47(1H、t、J＝9.3、H-4) 途徑n；1-0-(2-丙烯基)-α-D-葡萄糖(IV)將10.7g(34.7mmol)化合物(III)加入260ml醋酸∶水＝8∶5的溶液中溶解，于100℃反應(yīng)1小時(shí)后，減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝6∶1)提純(產(chǎn)量6.3mg，28.6mmol，收率82.4％)。
1H NMR(300MHz、CD3OD＋TMS)；5.92～5.79(1H、m、-CH＝CH2)、5.26～5.18(1H、m、-CH＝CH2)、5.07～5.03(1H、m、-CH＝CH2)、4.23～3.23(7H、m) 途徑p；1-0-(2-丙烯基)-6-0-(4-甲苯磺?；?-α-D-葡萄糖(V)將6.3g(28.6mmol)化合物(IV)溶解在200ml干燥吡啶中，加入195g對(duì)-二甲氨基吡啶(DMAP)、7.0g對(duì)-甲苯磺酰氯，邊攪拌邊于室溫下反應(yīng)16小時(shí)。此后，加入20ml冷的蒸餾水終止反應(yīng)。用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機(jī)層用1.0M及0.1M的鹽酸中和至pH為4，再用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)純化(產(chǎn)量8.6mg，23.0mmol，收率83.8％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.77(2H、d、J＝8.3、TsCH3側(cè)的Ar)、7.30(2H、d、J＝8.1、TsSO2側(cè)的Ar)、5.90-5.77(1H、m、-CH＝CH2)、5.24(1H、dd、J＝1.4和17.2、-CH＝CH2)、5.11(1H、d、J-1.2和12.4、-CH＝CH2)、4.79(1H、d、J＝3.3、H-1)、4.38-3.38(8H、m)、2.40(3H、s、TSCH3) 途徑q；2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1-0-(2-丙烯基)-6-0-(4-甲苯磺?；?-α-D-葡萄糖(VI)將11.2g(29.9mmol)化合物(V)溶解在25ml干燥的二氯甲烷中，加入23.8g三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷酯、14.4g 2，6-二甲基吡啶，在氮?dú)饬飨逻厰嚢柽叿磻?yīng)16小時(shí)。此后，加入150ml二氯甲烷終止反應(yīng)，再用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝30∶1)純化)(產(chǎn)量19.6g，27.4mmol，收率91.6％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；7.83(2H、d、J＝8.3、TsCH3側(cè)的Ar)、7.29(2H、d、J＝8.0、TsSO2側(cè)的Ar)、5.92-5.79(1H、m、-CH＝CH2)、5.21(1H、dd、J＝1.5和17.2、-CH＝CH2)、5.11(1H、d、J＝10.4、-CH＝CH2)、4.67(1H、d、J＝2.8、H-1)、4.30-3.44(8H、m)、2.41(3H、s、TSCH3)、0.91-0.78(27H、m、t-Bu的CH3)、0.13-0.02(18H、m、Si-CH3)， 途徑f；2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1-0-(2-丙烯基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-葡萄糖(VII)將7.9g(11.0mmol)化合物(VI)溶解在20ml干燥的乙醇中，加入1.8g硫代乙酸鉀、在回流條件下邊攪拌邊反應(yīng)3小時(shí)。此后，加入100ml冷蒸餾水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌(200ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝50∶1)純化(產(chǎn)量5.6g，9.02mmol，收率82.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.97-5.81(1H、m、-CH＝CH2)、5.26(1H、dd、J＝1.6和17.2、-CH＝CH2)、5.13(1H、dd、J＝1.6和10.4、-CH＝CH2)、4.73(1H、d、J＝3.2、H-1)、4.32-3.42(7H、m)、2.83(1H、dd、J＝9.8和13.3、H-6b)、2.30(3H、s、SCOCH3)、0.91-0.82(27H、m、t-Bu的CH3)、0.12—-0.03(18H、m、Si-CH3) 途徑g；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-甘油(VIII)將5.6g(9.02mmol)化合物(VII)溶解在t-丁醇∶水＝4∶1的溶液中，加入1.5gN-氧化三甲胺二水合物、15ml四氧化鋨-t-丁醇溶液(0.04M)，在室溫?cái)嚢柘路磻?yīng)22小時(shí)。此后，加入15g活性碳，在攪拌下室溫放置1.5小時(shí)，使其吸附了四氧化鋨后，減壓過濾。隨后，加入200ml冷的蒸餾水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯抽提(200ml×3次)，合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌(300ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1→2∶1)純化(產(chǎn)量5.2g，7.94mmol，收率88.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；4.73(1H、m、H-1(R及S))、4.12-3.4(10H、m)、2.86(1H、dd、J＝9.2和13.6、H-6b)、2.32(3H、s、SCOCH3)、0.86-0.79(27H、m、t-Bu的CH3)、0.08—-0.03(18H、m、Si-CH3) 途經(jīng)h；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油(IX)及3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-乙酰硫代-α-D-吡喃葡萄糖基]-1，2-二-0-油酰-甘油(IX’)將1.37g(2.09mmol)化合物(VIII)溶解在20ml干燥的二氯甲烷中，加入600mgEDCI、26mgDMAP、660mg油酸，于室溫?cái)嚢柘路磻?yīng)16小時(shí)。此后，加入200ml二氯甲烷終止反應(yīng)，再用飽和食鹽水洗滌(100ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1→10∶1→7∶1)純化(二酯的產(chǎn)量772mg(652μmol)；單酯的產(chǎn)量895mg(974μmol)，收率(兩者總和)78.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.32-5.28(2H、m、-CH＝CH-)、4.68(1H、m、H-1(R及S))、3.98-3.36(10H、m)、2.81(1H、dd、J＝9.5和13.4、H-6b)、2.32-2.27(5H、m、OCOCH2和SCOCH3)、1.98-1.93(4H、m、CH2-CH＝CH-CH2)、1.61-1.56(2H、m、OCOCH2CH2)、1.28-1.23(20H、br、-CH2-)、0.88-0.79(30H、m、t-Bu的CH3和Acyl的CH3)、0.09—-0.04(18H、m、Si-CH3)(單酯的NMR) (單酯(IX)；R101＝油?；102＝H二酯(IX’)；R101＝R102＝油酰基)途經(jīng)i；3-0-[2，3，4-三-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油鈉鹽(X)將21.4g(23.2mol)化合物(IX；單酯)溶解在3.5ml冰乙酸中，加入500mg乙酸鉀、35.4mgOXONE，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)6小時(shí)。此后，加入15ml冷的蒸餾水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯抽提(20ml×5次)，合并有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液中和(70ml×5次)后，再用飽和食鹽水洗滌(60ml×2次)，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1→20∶1)純化后，再用高速液相色譜(ODS柱，甲醇∶水＝80∶20)純化(產(chǎn)量3.3mg，3.49μmol，收率15.0％)。
1HNMR(300MHz、CDCl3＋TMS)；5.16-5.14(2H、br、-CH＝CH-)、4.60(1H、br、H-1(R及S))、4.32-2.88(11H、m)、2.17-2.13(2H、br、OCOCH2)、1.82-1.80(4H、br、CH2-CH＝CH-CH2)、1.42(2H、br、OCOCH2CH2)、1.11(20H、br、-CH2-)、0.72(30H、m、t-Bu的CH3和Acyl的CH3)、-0.08(18H、br、Si-CH3) 途經(jīng)j；3-0-[6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基]-1-0-油酰-甘油鈉鹽(XI)將358.4g(378mol)化合物(X)溶解在7ml乙酸∶四氫呋喃∶三氟乙酸∶水＝3∶1∶0.4∶1的溶液中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)16小時(shí)。此后，用乙酸乙酯抽提(10ml×3次)，合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌(20ml×2次)，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1→二氯甲烷∶甲醇∶水＝65∶25∶4)純化(產(chǎn)量138.1mg，229mol，收率62.7％)。
1HNMR(300MHz、CD3OD＋TMS)；5.24-5.17(2H、m、-CH＝CH-)、4.69(1H、m、H-1(R及S))、4.18-2.75(11H、m)、2.29-2.21(2H、m、OCOCH2)、1.94-1.90(4H、m、CH2-CH＝CH-CH2)、1.49(2H、br、OCOCH2CH2)、1.20(20H、br、-CH2-)、0.78(3H、t、J＝6.3、CH3) <實(shí)施例2>
除以9-十四烯酸代替上述實(shí)施例1的工序H中的油酸以外，其余的與實(shí)施例1相同，進(jìn)行工序h-j的反應(yīng)，合成3-0-(6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-0-肉豆蔻腦酰甘油鈉鹽(產(chǎn)量118.7mg，217μmol，收率59.8％)。
<實(shí)施例3>
以棕櫚烯酸代替油酸，與上述例2同樣地，合成3-0-(6-脫氧-6-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-1-0-棕櫚酰-甘油鈉鹽(產(chǎn)量142mg，247μmol，收率67.7％)。
<實(shí)施例4>
上述實(shí)施例1的從化合物(IX)制造化合物(X)的途徑i中，以化合物(IX’∶二酯)取代化合物(IX單酯)及用鉬類氧化劑取代OXONE的例子如下。
取13.1mg(11.0mol)化合物(IX’二酯)溶解在0.5ml二氯甲烷和0.5ml甲醇中，加入50μL溶解在30％過氧化氫溶液中的0.06M七鉬酸六銨四水合物(NH4)6MO7O244H2O的溶液，于室溫?cái)嚢?0小時(shí)。此后在反應(yīng)液中加入10ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉溶液(5ml×2次)及飽和食鹽水洗滌(5ml×2次)后，用無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓濃縮，最后用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1→10∶1)純化，得到無色的油狀物質(zhì)(產(chǎn)量7.8mg，6.4μmol，收率58.2％)。 進(jìn)行了有關(guān)本發(fā)明的通式(1)所表示的化合物的生理學(xué)試驗(yàn)。
<試驗(yàn)1>
按下面的方法進(jìn)行了對(duì)α型DNA合成酶抑制效果的檢定。
用抗體層析柱從牛胸腺純化的α型DNA合成酶0.05U和被檢化合物(溶解于DMSO，下面的表1中所表示的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌?(以下，略稱為“SQAG”)SQAG1、SQAG2、SQAG3分別混合，再加入酶反應(yīng)所必需的無機(jī)鹽緩沖液、[3H]標(biāo)記的dTTP、含有嵌合DNA鏈的反應(yīng)用化合物，于37℃培養(yǎng)60分鐘。
酶反應(yīng)終止后，將反應(yīng)生成物固定在專用的濾膜上，用液體閃爍計(jì)數(shù)儀測定。將酶合成的dTTP量以[3H]放射線量(cpm)計(jì)，算出結(jié)果。所使用的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锞鶠楦视?位碳原子絕對(duì)構(gòu)型為S的物質(zhì)與為R的物質(zhì)的混合物。
所得到的的結(jié)果以IC50表示，在下表中一并列出。
表1對(duì)α型DNA合成酶的抑制效果 表1表明，所試驗(yàn)的化合物均有顯著的對(duì)α型DNA合成酶的抑制活性。
下面2個(gè)試驗(yàn)中所使用的大腸癌及胃癌細(xì)胞為本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)能顯效的癌細(xì)胞之一。即這些試驗(yàn)的意圖并不是為了限定本發(fā)明的藥理活性物質(zhì)可顯效的癌細(xì)胞。
<試驗(yàn)2>
對(duì)大腸癌培養(yǎng)細(xì)胞的抑癌試驗(yàn)按下面的方法進(jìn)行。
將大腸癌細(xì)胞DLD-1用RPMI1640培養(yǎng)基(含有10％小牛血清)培養(yǎng)、傳代。被檢化合物(上表1中所示的SQAG2及SQAG3)分別在培養(yǎng)基中懸濁、稀釋，與每孔3×103個(gè)細(xì)胞一起在96孔培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后，進(jìn)行MTT試驗(yàn)(Mosmann，TJournal of immunological method，65，55-63(1983))，比較生存率。
得到的結(jié)果在圖1中顯示。
在圖1中，用實(shí)線連接的空白四方形表示SQAG2。用實(shí)線連接的空白圓形表示SQAG3。
從圖1可以看到，本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌飳?duì)所用的大腸癌細(xì)胞具有抑制活性。
<試驗(yàn)3>
對(duì)胃癌培養(yǎng)細(xì)胞的抑癌試驗(yàn)除使用胃癌細(xì)胞NUGC-3代替大腸癌細(xì)胞DLD-1以外，均采用與試驗(yàn)2相同的方法進(jìn)行。
得到的結(jié)果一并在圖1中顯示。
在圖1中，用實(shí)線連接的黑色四方形表示SQAG2。用實(shí)線連接的黑色圓形表示SQAG3。
從圖1中可以看到，本發(fā)明的(磺基吡喃糖基)?；视脱苌飳?duì)所用的胃癌細(xì)胞具有抑制活性。
<試驗(yàn)4>
對(duì)人癌細(xì)胞移植小鼠的試驗(yàn)按下面的方法進(jìn)行。
在裸小鼠BALB/cAc1-nu上，每只裸鼠分別植入5×105個(gè)用含有5％胎牛血清的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的人肺癌細(xì)胞A-549。定期測定腫瘤形成部位的大小，至其達(dá)到30×50mm3時(shí)(移植后第42天)，供試驗(yàn)用。
試驗(yàn)組、對(duì)照組分別隨機(jī)分配5只小鼠，試驗(yàn)組給予配成濃度為100μg/μl的懸浮于PBS中的被檢化合物(上表1中所示的化合物SQAGl、SQAG2及SQAG3)，對(duì)照組給予PBS。每次藥量100μl，每三天1次，共8次。每次測定腫瘤形成部位的大小。腫瘤的體積根據(jù)下式算出。
腫瘤的體積＝腫瘤部位的長度×(腫瘤部位的寬度)2×0.5各被檢化合物得到的結(jié)果分別在圖2(SQAG1)、圖3(SQAG2)、圖4(SQAG3)中顯示。
各圖中橫軸表示移植癌細(xì)胞后飼養(yǎng)的天數(shù)，縱軸表示腫瘤的體積。
結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各個(gè)被檢化合物均顯著地抑制了腫瘤的形成。
采用上述給藥量的試驗(yàn)組小鼠的狀態(tài)與對(duì)照組相比，并沒有特別的變化，與對(duì)照組的小鼠以同樣的狀態(tài)生存著。
<試驗(yàn)5>
在體重20-22g、7周齡的雌性小鼠BALB/cAc1-nu上，各皮下注射入5×105個(gè)培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞A-549，移植后第37天開始每三天測定腫瘤的大小。移植43天后，移植癌細(xì)胞的所有小鼠的腫瘤的大小均達(dá)到25-35mm3時(shí)，將小鼠隨機(jī)分成7組，每組4只，其中的1組作為對(duì)照組，皮下注射100μl PBS。剩余的6組分別注射總藥量達(dá)到每kg體重4mg及20mg的溶解于100μl PBS中的SQAG1(141)、SQAG2(161)、SQAG3(181)。注射從移植癌細(xì)胞的第43后開始到第64天結(jié)束，每三天注射1次，共注射8次。每三天測定1次腫瘤的大小直到移植后第70天。腫瘤的體積按與試驗(yàn)4相同的方法算出。
各種被檢化合物得到的結(jié)果分別在圖5(SQAG1)、圖6(SQAG2)、圖7(SQAG3)中表示。
結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組的腫瘤形成均被顯著地抑制。
試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)每個(gè)用藥組的小鼠的肺、心臟、胃、肝臟、胰臟、腎臟、小腸、腦等主要臟器進(jìn)行病理組織學(xué)的評(píng)價(jià)，未見任何異常。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性如上所述，本發(fā)明提供含有選自通式(1)所示(磺基吡喃糖基)?；视脱苌锛捌渌帉W(xué)上許可的鹽類的至少1種作為有效成分的藥品。
權(quán)利要求
1.含選自如下通式(1)所示化合物及其藥學(xué)上許可的鹽中至少一種作為有效成分的藥品 式中R101表示不飽和高級(jí)脂肪酸的?；鶜埢?，R102表示氫原子或不飽和高級(jí)脂肪酸的酰基殘基。
2.如權(quán)利要求1所述的藥品，其中通式(1)的R101為式R-C(＝O)-基，式中，R為有13-25個(gè)碳原子的直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基有1-6個(gè)不飽和鍵；R102為氫原子或式R’-C(＝O)-基，式中，R’為有13-25個(gè)碳原子的直鏈脂肪族不飽和烴基，此烴基有1-6個(gè)不飽和鍵。
3.如權(quán)利要求2所述的藥品，其中通式(1)的R102為氫原子。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的藥品，其中通式(1)表示的化合物的吡喃糖為奎諾糖。
5.如權(quán)利要求4所述的藥品，其中奎諾糖為α-奎諾糖。
6.如權(quán)利要求4所述的藥品，所述藥品為DNA合成酶抑制劑。
7.如權(quán)利要求4所述的藥品，所述藥品為癌抑制劑。
全文摘要
含有選自下列通式(1):(式中R
文檔編號(hào)C07H15/06GK1341025SQ00804302
公開日2002年3月20日 申請(qǐng)日期2000年2月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月26日
發(fā)明者山崎隆之, 菅原二三男, 太田慶裕, 正木和好, 中山小太郎, 坂口謙吾, 佐藤升志, 佐原弘益, 藤田龍?jiān)?申請(qǐng)人:東洋水產(chǎn)株式會(huì)社