專利名稱：制備細(xì)胞模擬物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來自動(dòng)物的血紅細(xì)胞醫(yī)用配制技術(shù)，特別是涉及利用動(dòng)物的血紅細(xì)胞制備細(xì)胞模擬物的技術(shù)。
背景技術(shù)：
人外周白細(xì)胞主要由淋巴、單核、粒細(xì)胞3群細(xì)胞組成，它們?cè)隗w積上是一個(gè)連續(xù)分布的整體，而血小板是體積更小的一個(gè)分布群體，典型的測試分布如圖1、圖2所示。人血液測定主要通過血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行，為了保證測試儀器的準(zhǔn)確，需要制備長期穩(wěn)定的質(zhì)控和校準(zhǔn)物進(jìn)行質(zhì)量控制和校準(zhǔn)維護(hù)。在多參數(shù)的質(zhì)控物中，含有一定大小的細(xì)胞粒子，稱為人細(xì)胞模擬物或類細(xì)胞。這些粒子一般為塑膠粒子或體積固定后的動(dòng)物紅細(xì)胞粒子。美國專利US3541137、US4179398、US4264470、US4704364等描述了3分群血液細(xì)胞分析儀質(zhì)控的白細(xì)胞和血小板研制方法，其中人粒細(xì)胞模擬物可以從爬行類、魚類紅細(xì)胞經(jīng)過固定后進(jìn)行模擬。特別指出了鱷魚和鯊魚可以使用，人單核細(xì)胞使用火雞紅細(xì)胞固定處理；淋巴使用人或其他哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞處理，血小板使用山羊紅細(xì)胞處理等等。
現(xiàn)有細(xì)胞模擬物存在一定的不足，如使用塑膠粒子成本比較高，不適合降低臨床工作的成本，廣泛應(yīng)用限制大；而使用動(dòng)物源的固定紅細(xì)胞粒子一般不容易使其體積處于人細(xì)胞正常分布范圍，特別是粒細(xì)胞容易產(chǎn)生體積變化而導(dǎo)致測量數(shù)據(jù)的變異較大而使質(zhì)控失敗，或產(chǎn)生無意義的報(bào)警信息，如圖3、圖4-1和圖5-1所示。模擬白細(xì)胞的體積變化會(huì)導(dǎo)致整個(gè)白細(xì)胞3個(gè)分群比例發(fā)生變化，產(chǎn)生錯(cuò)誤的質(zhì)控信息，所以很多質(zhì)控物產(chǎn)品無法提供分類信息的質(zhì)量控制能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于避免上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提出一種制備細(xì)胞模擬物的方法，解決固定粒子的體積變化問題，使人細(xì)胞模擬物的體積長期保持穩(wěn)定。
本發(fā)明解決所述技術(shù)問題可以通過采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)提出一種制備細(xì)胞模擬物的方法，選用的所述動(dòng)物紅細(xì)胞經(jīng)過固定處理后繼續(xù)進(jìn)行水浴處理，控制溫度使該紅細(xì)胞性質(zhì)發(fā)生變化至更加穩(wěn)定的階段，同時(shí)所述紅細(xì)胞的體積被調(diào)節(jié)而達(dá)到要制備的細(xì)胞模擬物體積要求，所述水浴的溫度為40℃～60℃。
同現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明的技術(shù)效果在于1、被處理的紅細(xì)胞的體積穩(wěn)定性強(qiáng)，符合正常人細(xì)胞的分布，滿足質(zhì)量控制要求；2、樣本來源豐富而且沒有限制，而現(xiàn)有技術(shù)中提到的樣本來源如鱷魚屬于保護(hù)動(dòng)物，鯊魚加工難度比較高。


圖1是正常人外周血液白細(xì)胞體積測試分布示意圖；圖2是正常人血小板體積測試分布示意圖；圖3是粒細(xì)胞模擬物體積變化導(dǎo)致白細(xì)胞的3分群細(xì)胞比例發(fā)生變化的測試分布示意圖；圖4是本發(fā)明實(shí)施例一制備過程中細(xì)胞測試分布情況示意圖；其中圖4-1是細(xì)胞進(jìn)行固定處理后的測試分布情況示意圖，圖4-2是細(xì)胞進(jìn)行水浴處理后的測試分布情況示意圖；圖5是本發(fā)明實(shí)施例二制備過程中細(xì)胞測試分布情況示意圖；其中圖5-1細(xì)胞進(jìn)行固定處理后的測試分布情況示意圖，圖5-2是細(xì)胞進(jìn)行水浴處理后的測試分布情況示意圖；圖6是本發(fā)明實(shí)施例三制備過程中細(xì)胞測試分布情況示意圖；其中圖6-1是細(xì)胞進(jìn)行固定處理后的測試分布情況示意圖，圖6-2是細(xì)胞進(jìn)行水浴處理后的測試分布情況示意圖；圖中，橫坐標(biāo)單位為細(xì)胞體積單位飛升(f1)，縱坐標(biāo)單位為細(xì)胞數(shù)量單位；R2、R3、R4為細(xì)胞異常分布報(bào)警提示信息。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合附圖所示之最佳實(shí)施例作進(jìn)一步詳述。
將動(dòng)物細(xì)胞體積固定后模擬人白細(xì)胞已經(jīng)有多年歷史，但由于動(dòng)物紅細(xì)胞不容易符合人細(xì)胞體積的正常分布，所以對(duì)細(xì)胞模擬物的處理和保存提出了很高要求。即使這樣，目前也缺乏非常穩(wěn)定不變的紅細(xì)胞源性的細(xì)胞模擬物。
通過研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞隨溫度變化體積會(huì)發(fā)生一定的變化，固定細(xì)胞也是如此，所以可以通過溫度的變化來將固定細(xì)胞體積處理到一個(gè)更穩(wěn)定的階段。因而可以通過溫度控制處理的方法處理出希望的細(xì)胞模擬物。比如人淋巴細(xì)胞體積分布比較窄，使用人或其他哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞加工不容易滿足要求。含細(xì)胞核的禽類或鳥類紅細(xì)胞分布就比較窄符合人淋巴細(xì)胞體積分布特性，但其體積往往偏離人淋巴細(xì)胞體積范圍，此時(shí)使用溫度控制調(diào)節(jié)體積范圍，就可以制造比較好的淋巴細(xì)胞模擬物。再以人粒細(xì)胞模擬物為例，美國專利US4704364介紹的爬行類、魚類的紅細(xì)胞固定后雖然可以一定時(shí)間內(nèi)符合人粒細(xì)胞正常分布，但隨著時(shí)間延長，可能會(huì)發(fā)生不穩(wěn)定情況。而本專利則可以解決這一問題使用高溫度條件對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行處理，處理后的紅細(xì)胞會(huì)到達(dá)一個(gè)更穩(wěn)定的體積階段。另外，通過研究進(jìn)一步證明，粒細(xì)胞模擬物體積最好使用更大的擬白細(xì)胞粒子來源，因?yàn)榻?jīng)過高溫處理后細(xì)胞體積一般會(huì)縮減。為了解決這一問題，通過使用兩棲類動(dòng)物的固定紅細(xì)胞進(jìn)行處理模擬，其紅細(xì)胞一般情況下比爬行類、魚類紅細(xì)胞大，經(jīng)過高溫處理后體積縮減，所以可更好地符合人正常粒細(xì)胞的分布特征。對(duì)于其他淋巴細(xì)胞、單核、血小板模擬物也有同樣道理。
本發(fā)明方法是在將所述紅細(xì)胞進(jìn)行固定處理后，繼續(xù)進(jìn)行水浴處理，控制溫度使該紅細(xì)胞性質(zhì)發(fā)生變化至更加穩(wěn)定的階段，同時(shí)所述紅細(xì)胞的體積被調(diào)節(jié)而達(dá)到預(yù)制備的細(xì)胞模擬物體積要求，所述水浴的溫度為40℃～60℃。
所述取得動(dòng)物紅細(xì)胞和將所述紅細(xì)胞進(jìn)行固定處理和溫度控制處理的步驟具體如下1、配制試劑。
抗凝劑0.8％的生理鹽水加入1％的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA2鈉鹽)；基礎(chǔ)試劑1-5g聚乙二醇(PEG)1～5g葡萄糖0.5～5g檸檬酸鈉0.1～2g青霉素0.1～2g鏈霉素0.5～5g硫柳汞1～5g 氯化鈉將上述成份加入蒸餾水配制為1L，使用氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓到300mOsm/kgH2O(人正常滲透壓為300mOsm/kgH2O)，可以使用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)試劑ph范圍。
固定試劑使用基礎(chǔ)試劑配制0.5-5％甲醛溶液，還可以是一定濃度的聚甲醛、戊二醛、烯醛或混合醛。
2、處理過程(1)將取得的動(dòng)物血液使用抗凝劑抗凝；(2)使用基礎(chǔ)試劑對(duì)抗凝后的血液進(jìn)行離心洗滌1～3次，去掉上清中的血漿蛋白成分；可以將多個(gè)樣本進(jìn)行混合以增加處理樣本總量；(3)固定處理加入固定試劑靜置30分鐘～3小時(shí)；(4)使用基礎(chǔ)試劑或者生理鹽水充分離心洗滌去掉甲醛，靜置沉淀紅細(xì)胞，此時(shí)固定紅細(xì)胞體積會(huì)比人粒細(xì)胞正常分布大；(5)溫度控制處理使用高溫水浴處理固定細(xì)胞，處理后固定紅細(xì)胞體積落在人粒細(xì)胞正常分布范圍，所述水浴處理溫度為40℃～60℃；(6)可以繼續(xù)洗滌最后保存，即得要制備的細(xì)胞模擬物。
實(shí)施例一取得牛娃紅細(xì)胞，首先進(jìn)行固定處理，再進(jìn)行溫度控制處理，具體處理過程如上述。所述固定試劑是使用上述基礎(chǔ)試劑配制的濃度為3％的甲醛溶液。進(jìn)行溫度控制處理時(shí)，將水浴溫度控制為45℃，對(duì)經(jīng)過固定處理的牛娃紅細(xì)胞水浴處理2小時(shí)，即得要制備的人粒細(xì)胞模擬物。經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的牛娃紅細(xì)胞測試分布情況如圖4所示。兩兩比較圖4-1、圖4-2和圖1，可以得知，經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的牛蛙紅細(xì)胞體積落在人粒細(xì)胞正常分布范圍，不再出現(xiàn)異常報(bào)警信息R4。
實(shí)施例二取得牛娃紅細(xì)胞，首先進(jìn)行固定處理，再進(jìn)行溫度控制處理，具體處理過程如上述。所述固定試劑是使用上述基礎(chǔ)試劑配制的濃度為3％的甲醛溶液。進(jìn)行溫度控制處理時(shí)，將水浴溫度控制為60℃，對(duì)經(jīng)過固定處理的牛娃紅細(xì)胞水浴處理30分鐘。經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的牛娃紅細(xì)胞測試分布情況如圖5所示。兩兩比較圖5-1、圖5-2和圖1，可以得知，經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的牛蛙紅細(xì)胞也落在人粒細(xì)胞正常分布范圍。
實(shí)施例三取得雞紅細(xì)胞，首先進(jìn)行固定處理，再進(jìn)行溫度控制處理。具體處理過程如上述。所述固定試劑是使用上述基礎(chǔ)試劑配制的濃度為3％的甲醛溶液。進(jìn)行溫度控制處理時(shí)，將水浴溫度控制為40℃，對(duì)經(jīng)過固定處理的雞紅細(xì)胞水浴處理2小時(shí)，經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的雞紅細(xì)胞測試分布情況如圖6所示。兩兩比較圖6-1、圖6-2和圖1，可以得知，經(jīng)過固定處理和溫度控制處理的雞紅細(xì)胞落在人淋巴細(xì)胞正常分布范圍。
本發(fā)明的技術(shù)特色在于將體積固定處理過的細(xì)胞進(jìn)行溫度控制進(jìn)一步對(duì)細(xì)胞體積進(jìn)行處理，使其結(jié)構(gòu)達(dá)到更穩(wěn)定的階段。所以本發(fā)明可以應(yīng)用在其他相似研究領(lǐng)域。比如使用紅細(xì)胞模擬體積差異比較大的淋巴、單核、血小板等等。制備人粒細(xì)胞模擬物的紅細(xì)胞可以從兩棲類動(dòng)物如蛙類取得；制備人淋巴細(xì)胞模擬物的紅細(xì)胞從禽類或鳥類動(dòng)物取得，如家雞，鴿。
使用本發(fā)明方法還可以制備非人血細(xì)胞的其他細(xì)胞模擬物。
權(quán)利要求
1.一種制備細(xì)胞模擬物的方法，取得動(dòng)物紅細(xì)胞后，將所述紅細(xì)胞進(jìn)行固定處理，其特征在于選用的所述動(dòng)物紅細(xì)胞經(jīng)過固定處理后繼續(xù)進(jìn)行水浴處理，控制溫度使該紅細(xì)胞性質(zhì)發(fā)生變化至更加穩(wěn)定的階段，同時(shí)所述紅細(xì)胞的體積被調(diào)節(jié)而達(dá)到要制備的細(xì)胞模擬物體積要求，所述水浴的溫度為40℃～60℃。
2.如權(quán)利要求1所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述取得動(dòng)物紅細(xì)胞和將所述紅細(xì)胞進(jìn)行固定處理的步驟具體如下下述基礎(chǔ)試劑是指1～5g聚乙二醇、1～5g葡萄糖、0.5～5g檸檬酸鈉、0.1～2g青霉素、0.1～2g鏈霉素、0.5～5g硫柳汞和1～5g氯化鈉，使用蒸餾水配制為1L，使用氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓到人正常滲透壓水平；下述固定試劑是指使用基礎(chǔ)試劑配制0.5～5％的醛類溶液，包括甲醛、聚甲醛、戊二醛、烯醛或混合醛；①將取得的動(dòng)物血液使用抗凝劑抗凝；②使用基礎(chǔ)試劑對(duì)抗凝后的血液進(jìn)行離心洗滌，去掉上清中的血漿蛋白成分；③加入固定試劑靜置30分鐘～3小時(shí)；④使用基礎(chǔ)試劑或者生理鹽水充分離心洗滌去掉固定試劑中的醛，靜置沉淀紅細(xì)胞，獲得的紅細(xì)胞體積比要制備的細(xì)胞模擬物體積大；⑤使用水浴處理固定所述紅細(xì)胞，處理后的固定紅細(xì)胞體積落在人細(xì)胞體積的正常分布范圍。
3.如權(quán)利要求2所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述抗凝劑是指0.8％生理鹽水加入1％的乙二胺四乙酸二鈉。
4.如權(quán)利要求1或2所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述細(xì)胞模擬物是血小板模擬物。
5.如權(quán)利要求1或2所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述細(xì)胞模擬物是白細(xì)胞模擬物。
6.如權(quán)利要求5所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于從兩棲類動(dòng)物取得紅細(xì)胞制備人粒細(xì)胞模擬物，從禽類或鳥類動(dòng)物取得紅細(xì)胞制備人淋巴細(xì)胞模擬物。
7.如權(quán)利要求6所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述禽類動(dòng)物是家雞，所述鳥類動(dòng)物是鴿。
8.如權(quán)利要求6所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于所述兩棲類動(dòng)物是蛙類。
9.如權(quán)利要求2所述的制備細(xì)胞模擬物的方法，其特征在于從牛娃取血，所述經(jīng)過固定處理后的牛娃紅細(xì)胞的水浴處理溫度為45度，水浴時(shí)間為2小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備細(xì)胞模擬物的方法，選用的所述動(dòng)物紅細(xì)胞經(jīng)過固定處理后繼續(xù)進(jìn)行水浴處理，控制溫度使該紅細(xì)胞性質(zhì)發(fā)生變化至更加穩(wěn)定的階段，同時(shí)所述紅細(xì)胞的體積被調(diào)節(jié)而達(dá)到要制備的細(xì)胞模擬物體積要求，所述水浴的溫度為40℃～60℃。同現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明的技術(shù)效果在于1.被處理的紅細(xì)胞的體積穩(wěn)定性強(qiáng)，符合正常人白細(xì)胞的分布，使用過程中不會(huì)產(chǎn)生異常報(bào)警信息，滿足質(zhì)量控制要求；2.樣本來源豐富而且沒有限制。
文檔編號(hào)C12N5/06GK1891815SQ200510035790
公開日2007年1月10日 申請(qǐng)日期2005年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月4日
發(fā)明者張暉, 徐祖越, 劉牧龍 申請(qǐng)人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司