專利名稱：：一種煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及煙草黑脛病抗性的鑒定，特別是涉及一種對煙草黑脛病抗性進(jìn)行病圃鑒定的方法。
背景技術(shù)：
：煙草黑脛病是世界煙草中危害最嚴(yán)重的病害之一，同時(shí)也是我國煙草主要病害，可以危害烤煙、晾煙、曬煙、白肋煙、香料煙等所有的栽培煙草。美國北卡羅萊納州每年因煙草黑脛病損失的煙葉約占總產(chǎn)量的1%2%，1995年和1996年兩年間因黑脛病造成的損失就達(dá)3610萬美元，占病害總損失的35.13%，居各病害之首。該病在我國分布范圍很廣，除黑龍江省尚未發(fā)現(xiàn)之外，其余各植煙省區(qū)(含臺(tái)灣省)均有發(fā)生。平均發(fā)病率為5%12%，嚴(yán)重田塊發(fā)病率高達(dá)75%，甚至造成絕收。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國煙草黑脛病平均每年發(fā)病面積高達(dá)76373hm2，產(chǎn)量損失2869.26萬千克，產(chǎn)值損失超過l.23億元人民幣。生產(chǎn)實(shí)踐表明，防治黑脛病最經(jīng)濟(jì)、有效、環(huán)保的措施就是選育抗病品種，抗性鑒定自然成為抗源挖掘利用、抗病育種、抗性監(jiān)測等工作中重要的一環(huán)。作物抗病育種有別于其他農(nóng)藝性狀的選擇，抗病性的表型是作物與病原物在一定的環(huán)境條件下互作的表現(xiàn)。與農(nóng)藝性狀的表型比較，作物抗病性是兩種生物的互作，因此，抗病性的表現(xiàn)則以病原物存在為前提，同時(shí)環(huán)境條件又必須滿足兩種生物生長發(fā)育。煙草黑脛病育種和抗源的篩選評(píng)價(jià)都必須在黑脛病生態(tài)系的選擇壓中選育或檢驗(yàn)，否則，進(jìn)行抗黑脛病育種是盲目的、低效的?，F(xiàn)有的煙草抗性鑒定方法主要有溫室苗期鑒定接種法和病圃活體菌株人工接種鑒定法。苗期鑒定法通常采用游動(dòng)孢子或菌絲體懸浮液浸根接種，但由于各供試菌株之間產(chǎn)生游動(dòng)孢子或菌絲體的數(shù)量差異較大，這些方法的接菌量不易控制，試驗(yàn)操作復(fù)雜，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不易掌握，且易受游動(dòng)孢子或菌絲體的^^度及游動(dòng)孢子的游動(dòng)時(shí)間、生活力和侵入能力等因素的影響。利用該方法鑒定的結(jié)果與田間抗性差異大，不能準(zhǔn)確反映品種的抗病性。病圃活體菌株人工接種鑒定是目前常用的鑒定方法。目前現(xiàn)有鑒定方法的缺點(diǎn)是接種用菌株的收集、保存與合理選擇是長期、連續(xù)、操作技術(shù)較高、成本較大的工作，并且接種用的小種數(shù)量、種類的多樣性與田間試驗(yàn)方法相比始終是有限的。且以前的病害調(diào)査方法按照抗病性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)自然發(fā)病于病發(fā)初期、盛期和未期各調(diào)査一次，若人工接種則于接種后第20天、40天、60天各調(diào)査一次。每次均應(yīng)調(diào)査各品種全部植株。由于煙草黑脛病發(fā)病部位主要在莖基部，調(diào)査起來有些困難。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法，采用歷年病害高發(fā)區(qū)連作煙田作病圃，通過增加田間濕度為植株發(fā)病提供必要條件，減少了菌株分離保存及培養(yǎng)的復(fù)雜操作，讓需要鑒定的品種在黑脛病生態(tài)系的選擇壓中選育或檢驗(yàn)，采用烤煙采收后一次性挖根調(diào)査的方法，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，并能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時(shí)的實(shí)際情況，成本低、操作簡便易行。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法，包括以下順序步驟一、病圃的選擇(1)、選擇歷史上煙草黑脛病常年流行，發(fā)生嚴(yán)重，發(fā)病率達(dá)80%以上地塊；(2)、當(dāng)?shù)?7月份高溫高濕，年平均降雨量大；(3)、連作，自然灌溉條件好，煙草作物種植和管理水平一致，按常規(guī)操作和管理。二、田間管理其他農(nóng)事操作按常規(guī)管理。煙草作物種植期間，煙苗移栽后補(bǔ)苗、施肥。確保煙苗全部存活15d后，開始田間灌水，確保田間溝內(nèi)明水可見，后期根據(jù)各品種需肥狀況補(bǔ)肥。三、病害調(diào)査與鑒定烤煙采收后挖根調(diào)査，按國家標(biāo)準(zhǔn)對鑒定品種進(jìn)行分級(jí)和抗性評(píng)價(jià)。本發(fā)明率先提出了一種具有實(shí)用價(jià)值的煙草黑脛病圃鑒定方法，實(shí)現(xiàn)了不用人工接種，在自然條件下有效鑒定品種抗性。通過提供有利條件誘發(fā)病害發(fā)生，減少繁雜的菌種保存培養(yǎng)、接種體制定與接種等工作，其菌株來源于大田，接種用的小種數(shù)量、種類理論上說是無限的，多樣性、代表性較好，接種條件也是自然控制，故鑒定結(jié)果較能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時(shí)的實(shí)際情況；采用烤煙采收后一次性挖根調(diào)查的方法，大大減少了工作量，節(jié)省了成本，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，并能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時(shí)的實(shí)際情況，具有成本低、操作簡便易行的特點(diǎn)，是一種較為經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法，具有良好的市場應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式實(shí)施例l:1.1田間自然誘發(fā)病圃的選址與建立有利于發(fā)病、發(fā)病穩(wěn)定的地理生態(tài)環(huán)境是病圃的基礎(chǔ)。病菌以厚垣孢子和休眠菌絲體在病株殘?bào)w、土壤、糞肥中越冬，可以存活3年左右。帶菌的土壤、類肥、灌溉水及病苗是煙草黑脛病的主要初侵染源。病菌借風(fēng)雨、灌溉水、農(nóng)事操作等進(jìn)行重復(fù)再侵染，使病害越來越重，進(jìn)而蔓及全田。煙草黑脛病菌主要集中在距土表下05cm的土層中活動(dòng)，通過傷口或直接侵入，侵染部位主要是莖基部，感病階段主要在現(xiàn)蕾前。高溫高濕有利于病害發(fā)生，而濕度是流行的關(guān)鍵因素。在溫度2432。C，相對濕度80%以上35(1，田間就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)發(fā)病高峰，濕度越大，發(fā)病愈快愈重。l丄l病圃的地理及生態(tài)要求根據(jù)黑脛病發(fā)生的最適生態(tài)條件及其他因素，確立如下病圃目標(biāo)歷史上黑脛病常年流行，發(fā)生嚴(yán)重；57月份高溫高濕，年平均降雨量大；病圃面積在2~3畝左右，連作，自然灌溉條件好，作物種植和管理水平一致；交通方便。l丄2選址過程1丄2.1被選區(qū)黑脛病史及主要?dú)庀筚Y料調(diào)研根據(jù)選址目標(biāo)，確立昆明、玉溪作為被選目的區(qū)。1.1.2.2現(xiàn)場考察2005年5月至7月iH值煙草黑脛病發(fā)病高峰期，先后考察了昆明草甸、昆明施甸、玉溪市紅塔區(qū)、玉溪江川、玉溪澄江、玉溪華寧等地，了解了當(dāng)?shù)貧v年發(fā)病情況，在病害高發(fā)區(qū)采集了黑脛病標(biāo)樣，并記載地名，拍攝了照片。1.1.2.3選址的初步確定根據(jù)選址目標(biāo)，確立玉溪市江川縣雄關(guān)鎮(zhèn)、玉溪市紅塔區(qū)研和鎮(zhèn)煙科所試驗(yàn)基地、昆明市尋甸縣科技推廣站試驗(yàn)基地有3地塊是黑脛病歷年常發(fā)區(qū)，發(fā)病5率達(dá)80%以上，為連作田。被選區(qū)的地理位置及氣象資料如下玉溪市江川縣雄關(guān)鎮(zhèn)地理位置海拔1932米，北緯24。20'，北諱30°，年均氣溫16.7。C，年降雨量749.2毫米；玉溪市紅塔區(qū)研和鎮(zhèn)煙科所試驗(yàn)基地試驗(yàn)田地理位置N:24。14.382'，E:102°30.024，，海拔1635m，年平均氣溫16-17。C，年降雨量880900毫米；昆明市尋甸縣科技推廣站試驗(yàn)基地試驗(yàn)田地理位置N:25°30.759，，E:103°15.910，，海拔1878m，年均氣溫14.7。C，年降雨量1352.2毫米。1.1.3病圃的檢驗(yàn)與建立，試驗(yàn)驗(yàn)證-1材料與方法1.1供試品種玉溪研和與玉溪江川有18個(gè)品種，其分別為L8、NC1071、N.nes叩hila、N.nudicaudis、N.plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、小黃金1025、革新三號(hào)、金星6007、紅大、N.stocktonii、落地黃、Barley37、Barley21、筑波l號(hào)。昆明尋甸點(diǎn)共有13個(gè)品種，其分別為L8、NC1071、N.nesophila、N.nudicaudis、N.Plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、1025、革新三號(hào)、金星6007、紅大。以云南品種K326為高抗對照品種，紅大為感病對照品種。1.2試驗(yàn)測定方法玉溪研和在云南省煙草科學(xué)研究所研和試驗(yàn)基地進(jìn)行試驗(yàn)測定。利用有病連作煙田作病圃，誘其自然發(fā)病。小區(qū)隨機(jī)排列，三次重復(fù)，每品種每重復(fù)種植一行，每行35株。田間布置圖南I131761814831691510411112II181014813615114112162179III北121154732981361171410161518昆明尋甸點(diǎn)在昆明尋甸科技推廣站試驗(yàn)基地進(jìn)行試驗(yàn)測定，N:25°30.759'，E:103°15.910，，海拔1878m。利用有病連作煙田作病圃，誘其自然發(fā)病。小區(qū)隨機(jī)排列，三次重復(fù)，每品種每重復(fù)種植一行，每行20株。田間布置圖I7111928436101213II851061134791112in13481059621112133玉溪江川利用有病連作煙田作病圃，誘其自然發(fā)病。小區(qū)隨機(jī)排列，三次重復(fù)，每品種每重復(fù)種植行，每行25株。田間布置圖I417618148169151013U712II1810148136151174112162179m121154732981361171410161518栽培管理常規(guī)漂浮育苗、適齡移栽，煙苗成活后田間多澆水，保證田間濕度，施肥按常規(guī)管理。植株生長期均不施用殺菌劑，蟲害管理與大田管理相同。病害嚴(yán)重度分級(jí)應(yīng)符合YC/T39的規(guī)定。自然發(fā)病于病發(fā)初期、盛期和未期各調(diào)査一次，每次均應(yīng)調(diào)査各品種全部植株，并計(jì)算各品種的病株率、病情指數(shù)，然后以病情指數(shù)為主要依據(jù)評(píng)定各品種的抗病能力。病害嚴(yán)重度分級(jí)按中華人民共和國煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T39的規(guī)定?？剐栽u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)按中華人民共和國煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T41-1996的方法進(jìn)行。病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(以整株為單位)0級(jí)全株無?。?級(jí)莖部病斑不超過莖圍1/2，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；2級(jí)莖部病斑超過莖圍的1/2，或半數(shù)以上葉片調(diào)萎；73級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；4級(jí)病株全部葉片凋萎或枯死。病情指數(shù)計(jì)算病指=E(各級(jí)病株數(shù)x該病級(jí)值y(調(diào)查總株數(shù)X最高級(jí)值)X1001.3統(tǒng)計(jì)分析對病指作方差分析，測定各鑒定材料間病指的差異。2結(jié)果與分析表2-3研和田間病害抗病性顯著分析<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>以上3個(gè)不同地點(diǎn)田間自然鑒定結(jié)果表明，感病品種紅大、小黃金1025與抗病品種K326、G28及革新三號(hào)間差異極顯著。感病對照紅大在玉溪研和點(diǎn)、玉溪江川點(diǎn)、昆明尋甸點(diǎn)的病指分別為60.95、35.67、27.5，抗病對照K326病指分別為0、1.67、1.67，高感種質(zhì)最高病指分別為99.05、94.00、79.17。玉溪研和的發(fā)病程度較高。從表2-3看3個(gè)試驗(yàn)均能較一致地反應(yīng)出各供試品種對煙草黑脛病的抗病性，抗感病差異明顯。這說明在上述地點(diǎn)建立煙草黑脛病自然抗性鑒定圃是可行的，其結(jié)果可基本評(píng)判供試品種的抗病性差異。鑒于玉溪江川點(diǎn)和昆明尋甸點(diǎn)紅大感病對照品種病指偏低，云南煙草黑脛病菌生理小種組成單一，3地塊測定結(jié)果基本一致，僅保留了玉溪研和地塊作病圃，繼續(xù)進(jìn)行抗病種質(zhì)資源的篩選研究。從玉溪研和20062008年的鑒定結(jié)果看，該病圃發(fā)病程度高，2007年紅大病指達(dá)61.43，K326病指為24.52，2008年紅大病指達(dá)76.85，K326病指為7.87,抗感病差異極顯著，年度間發(fā)病差異較小，試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、完整、連續(xù)，作物種植和管理水平一致，遠(yuǎn)離農(nóng)民煙田，說明在此建立自然誘發(fā)病圃，用于鑒定種質(zhì)資源抗病性是可行的。病圃建好后，盡量保全其原生態(tài)環(huán)境，避免小環(huán)境的人為改變。U.3.220062008年度主耍氣象資料(表2-4)表2-420062008年5-9月主要?dú)庀筚Y料<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1丄3.3輔助設(shè)施基于病圃的試驗(yàn)和主要參數(shù)的檢驗(yàn)，選址玉溪市紅塔區(qū)研和鎮(zhèn)煙科所試驗(yàn)基地完全符合病圃的要求。病圃的農(nóng)田園化建設(shè)，包括噴灌系統(tǒng)、田埂水泥硬化及進(jìn)排水圍溝清瘀等有基地統(tǒng)一改建。l丄4病圃的特點(diǎn)和功能U.4.1地理氣候位于玉溪市紅塔區(qū)研和鎮(zhèn)煙科所試驗(yàn)基地，N:2f14.382'，E:102°30.024'，海拔1635m,年平均氣溫16-17°C，年降雨量880900毫米。1丄4.2地理隔離條件優(yōu)越與農(nóng)田隔離。1丄4.3鑒定規(guī)?？捎糜诓∑悦娣e2.3畝，一次性能同時(shí)鑒定60份種質(zhì)材料。1丄4.4交通及灌溉方便。交通便利、灌溉方便，距玉溪約17公里，途徑玉元高速公路。灌溉常年能滿足需要。實(shí)施例2:煙草種質(zhì)資源抗黑脛病鑒定煙草黒脛病是由煙草疫霉[Phytophthoraparasiticavar.nicotianae(BredadeHean)Tucker]引起的一種世界性煙草毀滅性真菌病害。病原菌屬鞭毛菌亞門疫霉屬，是喜高溫高濕的兼性寄生菌，可以危害所有的煙草類型，在煙草生長的任何階段都能侵染根、莖、葉，引起萎蔫、莖損傷和植株死亡。近年來，由于連作煙田面積擴(kuò)大以及連作年限的增長，煙草黑脛病有加重流行的趨勢。為減輕該病造成的損失，人們曾用農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治、抗病育種等多種不同方法控制煙草黑脛病，但由于該病菌的游動(dòng)孢子形成速度快且數(shù)量大，侵染煙株后潛育期短、發(fā)病快，在一個(gè)生長季節(jié)可以發(fā)生多次再侵染，同時(shí)該病有時(shí)還與其它病害混合發(fā)生，一旦病害流行則難以控制。如果防治措施不到位黑脛病引起的損失可達(dá)100%。針對目前煙草黑脛病的嚴(yán)重危害，研究抗病新品種已成為當(dāng)今防治煙草黒脛病的重點(diǎn)。本申請利用有病連作煙田作病圃，誘其自然發(fā)病，建立自然抗性鑒定圃，進(jìn)行種質(zhì)資源的抗病性鑒定，旨在為有效控制煙草黒脛病的發(fā)生、減小經(jīng)濟(jì)損失提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1試驗(yàn)條件本研究田間試驗(yàn)于20062008年在云南省煙草科學(xué)研究所研和試驗(yàn)基地進(jìn)行，屬亞熱帶內(nèi)陸高原型氣候，年平均氣溫15.523.7°C，年平均降雨量700卯Omm。栽培土壤為紅壤土，根作層3545cm。前茬作物為梢子。1.2材料06年共有18個(gè)品種，分別為L8、NC1071、N,nesophila、N.nudicaudis、N.plumbaginifolia、G28、K326、NC95、MD609、小黃金1025、革新三號(hào)、金星6007、紅大、N.stocktonii、落地黃、Barley37、Barley21、筑波1號(hào)。07年供試品種21個(gè)，分別為NC2514、筑波1號(hào)、Islangold、CV78-5、密葉尖、金星6007、大紅星、晉太7615、CV78-4、烏江1號(hào)、CV16-2、大柳葉2014、落地黃、DarisSpecial、Q1236:HicksQ46、長把黃光板、許金7號(hào)、柳葉尖和BlackShankResistant。08年供試品種39個(gè)，分別為CV16-2、Islangold、CV78-5、晉太7615、烏江1號(hào)、筑波1號(hào)、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514、小黃金1025、MD609、革新三號(hào)、N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC1071、L8、N.nudicaulis、CokerTobacco、H80A432、安選79-l、潘圓黃、NC86、、M二>卜、NC陽22-NF、BL-921、日本烤煙l、龍巖C2、津引1號(hào)、COM煙、OX414、RG12、K358、RG17、DlOl、0X2028。以K326為抗病對照品種，紅花大金元為感病對照品種。1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)06年在云南省煙草科學(xué)研究所硏和試驗(yàn)基地進(jìn)行試驗(yàn)測定。利用有病連作煙田作病圃，誘其自然發(fā)病。小區(qū)隨機(jī)排列，三次重復(fù)，每個(gè)品種種植一行，行株距為1.2mX0.5m，每行35株。07年采用單因素完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每一品種(系)為1處理，3次重復(fù)，每個(gè)品種種植l行，每行35株。行株距為1.2mX0.5m，啤酒瓶定位理墑。08年采用單因素完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每一品種(系)為一處理，三次重復(fù)，每品種種植3墑，每墑18株，行株距為120cmX50cm，試驗(yàn)田面積為2.3畝。11試驗(yàn)采用育苗盤直播，漂浮育苗，每種質(zhì)播種二盤，并于移栽前一星期進(jìn)行煉苗，三次剪葉，苗齡67天，5月6日移栽，移栽時(shí)已達(dá)到壯苗標(biāo)準(zhǔn)。移栽的當(dāng)天噴施農(nóng)藥(功夫200mni/畝次)防治蟲害。各品種施肥種類和總量一致，N:P205:K20=1:1:2.5，氮肥、鉀肥和磷肥的基肥與追肥比例為3:1。白肋煙L8適當(dāng)增加肥料。田間每次使用的肥料都為云南省煙葉公司生產(chǎn)的煙草專用復(fù)合肥。移栽后團(tuán)棵期進(jìn)行高培土，整個(gè)大田期共噴施防蟲農(nóng)藥4次，并未噴施抗菌類農(nóng)藥。其他栽培管理措施均按照云南省煙草科學(xué)研究所的生產(chǎn)技術(shù)方案要求進(jìn)行o1.1.4抗病性測定利用有病連作煙田作病圃，進(jìn)行田間灌水，保持濕度，誘其自然發(fā)病。病害嚴(yán)重度分級(jí)應(yīng)符合YC/T39的規(guī)定。自然發(fā)病后，進(jìn)行多次病害分級(jí)調(diào)查，每次均應(yīng)調(diào)査各品種的全部植株，并計(jì)算各品種發(fā)病率和病情指數(shù)，以病情指數(shù)作為抗性指標(biāo)，根據(jù)抗性劃分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)各測定品種的抗病能力。并對平均病指作方差分析，測定各鑒定材料間抗感程度的差異。種質(zhì)資源的抗病性評(píng)價(jià)，根據(jù)最后煙葉采收完畢，挖根調(diào)査，計(jì)算病情指數(shù)來判斷。l丄5田間發(fā)病規(guī)律研究利用有病連作煙田作病圃，采用田間灌水，誘其自然發(fā)病。病害嚴(yán)重度分級(jí)應(yīng)符合YC/T39的規(guī)定。自然發(fā)病后每隔10d進(jìn)行一次病害分級(jí)調(diào)查，每次均應(yīng)調(diào)查各品種的全部植株，并計(jì)算各品種的發(fā)病率和病情指數(shù)，繪出田間消長曲線，判斷出病害的盛發(fā)期。根據(jù)抗性劃分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)各測定品種的抗病能力。并對平均病指作方差分析，測定各鑒定材料間抗病的差異。病害調(diào)査分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)全株無病；l級(jí)莖部病斑不超過莖圍的二分之一，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑。2級(jí)莖部病斑超過莖圍的二分之一，或半數(shù)以下葉片凋萎。3級(jí)莖部病斑環(huán)繞莖圍，或三分之二以上葉片凋萎。4級(jí)病株全部葉片凋萎或枯死。12根據(jù)病株調(diào)査數(shù)據(jù)，按如下公式計(jì)算病株率(普遍率)和病情指數(shù)(嚴(yán)重度)。病株率(％)=發(fā)病株數(shù)/調(diào)査總株數(shù)*100;病情指數(shù)=2(各級(jí)病株數(shù)*該病級(jí))/(調(diào)査總株數(shù)*最高病級(jí))*100。(2)抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)高抗病情指數(shù)05，用HR表示；抗病病情指數(shù)為5.0125，用R表示；中抗病情指數(shù)25.0150，用MR表示；中感50.0175，用MS表示；感病病情指數(shù)75以上，用S表示。l丄6數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)用浙江大學(xué)唐啟義、馮明光編的實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析。2結(jié)果與分析2.1鑒定材料間的抗性差異根據(jù)田間最后一次調(diào)査結(jié)果，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)種質(zhì)資源抗病性。從表2-5可知2006年供試的18個(gè)品種有5個(gè)高抗品種，分別為NC歴、NC95、落地黃、G28、K326，有5個(gè)抗病品種，分別為N.nesophila、N.plumbaginifolia、MD609、革新三號(hào)、筑波1號(hào)，有2個(gè)中抗品種金星6007和N.stocktoii，有2個(gè)中感品種紅大與小黃金1025，有4個(gè)感病品種Barley21、Barley37、L8與N.nudicauUs。Barley21、Barley37、L8與N.nudicaulis表現(xiàn)感病，其感病程度重于對照品種紅大與小黃金1025，差異極顯著。NC1071、NC95、落地黃高抗，與對照抗病品種G28、K326、革新三號(hào)差異不顯著?？共∑贩NN.plumbaginifolia、MD609表現(xiàn)抗病，與對照抗病品種G28、K326、革新三號(hào)差異不顯著。其余品種抗性居中。表2-52006煙草種質(zhì)資源的抗性評(píng)價(jià)品種名稱2006似j指抗性品種名稱2006病指抗性Barley2199.05士8.24aAS筑波1號(hào)15.24士7.19eERBarle》'3798.10土0.00aABSMD6099.52土1.65efER92.38土17.14abABs革新三號(hào)7.62土6.60effiR80.95士20.00bBs6.66士1.65effiR紅人60.95±7.19cCMS落地黃4.76±15.12efBHR小黃金102550.48士1.65cdCDMSG280.95土3.30ffiHR13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注f為中后期欄多重比較(SSR)結(jié)果。"土"前面數(shù)字代表病情指數(shù)平均值；后面數(shù)字表示標(biāo)準(zhǔn)差。大寫字母示P〈0.01水平1:差異顯著性，小寫字母示P0.05水平上差異顯著性。下同。2007年煙葉采收完畢后，挖根調(diào)査，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)種質(zhì)資源的抗病性。07年各品種平均病指間的差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果表明不同煙草種質(zhì)對黑脛病的抗性有明顯差異，煙草品種柳葉尖的病情指數(shù)最高，為95.00，K326的最低，為24.52。感病品種柳葉尖、BlackShankResistant和許金7號(hào)的病指極顯著的高于對照品種紅花大金元；品種Q1236:HicksQ46、K把黃光板與感病對照無顯著差異，但品種長把黃光板的病指低于感病對照。各抗病品種與對照品種K326的差異性結(jié)果表明品種密葉尖、大柳葉2014的病指極顯著的高于對照；品種大紅星、金星6007、CV16-2、Islangold、CV78-5、病指顯著高于對照；品種晉太7615、烏江1號(hào)、筑波1號(hào)、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514與對照無顯著差異，但病指均高于對照。NC2514與K326病情指數(shù)最低，可推薦抗病育種選用。表2-62007各鑒定材料病指間的差異顯著性<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表2-72008各鑒定材料病指間的差異顯著性處理08年病指抗性處理08年病指抗性BL-92199.07±1.61aASNC-22-NF8.33±481ijklIJR紅大(CK)76.85±18.85bABSDarisSpecial7.87±5.26ijklIJR潘圓黃76.85±11.97bABsNC10717.87±4.01ijklIJR晉太761573.15土13.49bBCMSK326(CK)7.87±6.85ijklIJRCV78隱554.63±25.20cBCDMSCokerTobacco7.87土7.13ijklI.IRIslangold51.39±33.36cdBCDEMSD1017.41±6.99jklIJRMD60942.59±3.20cdeDEFMR落地黃6.02土7.13jklIJR烏江1號(hào)38.42±11.65cdefDEFGMRRG126.02±0.80jklIJR筑波iy.36.58±7.90cdefgDEFGHMR津引1號(hào)6.02±2.89jkllJR小黃金102532.87±4.88defghDEFGHIMR"二A卜5.09±2.l2jkllJR革新二號(hào)29.17±)7.07efghiDEFGHIJMRN.plumbaginifolia4.17±7.22jklJHRCV16-225.00±12.50efghijEFGHIJRNC863.70±5.26jklJHR24.07士0.80e鵬kFGHIJRK3583.70±2.89jklJHRN.nudicaulis22.22士0.00e妙ijklFGHIJROX4143.24±4.46jklJHR安選79-119.91士11.14鵬klFGHIJRCOM煙2.31±4.01klJHRH80A43216.67±l1.87ghijklFGHIJRG281.85±3.211JHRNC251415.28±13.25hijklFGHIJRNC951.39±1.391JHR龍巖C214.35±17.69hijklGHIJR曰本烤煙11.39±1.39UHROX202813.43±14.72hijklGHURRG170.93±1.611JHRCV78-49.26±13.63ijklHIJR煙葉采收完畢后，挖根調(diào)查，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)種質(zhì)資源的抗病性。通過對39份煙草種質(zhì)資源抗黑脛病鑒定(表2-7)，抗病對照K326的平均病指7.87，抗性評(píng)價(jià)在抗病范圍內(nèi)，感病對照紅大的平均病指為76.85，抗性評(píng)價(jià)在感病范圍內(nèi)。煙草品種BL-921發(fā)病最重，病情指數(shù)最高，達(dá)99.07，高于紅大病指，與感病對照紅大間差異顯著，其余品種發(fā)病輕于紅大，其中潘圓黃、晉太7615與紅大間差異不顯著，其余品種與紅大差異顯著。RG17的病情指數(shù)最低，為0.93。高抗品禾中N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC86、日本烤煙l、COM煙、OX414、K358、RG17與抗病對照品種K326差異不顯著，所有抗病品種CV16-2、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514、NC1071、L8、N.nudicaulis、CokerTobacco、H80A432、安選79-l、、、<二A卜、NC-22-NF、龍巖C2、津引1號(hào)、RG12、DlOl、OX2028與K326差異亦不顯著。感病品種15有BL-921、紅大、潘圓黃、晉太7615、CV78-5、Islangold、MD609、烏江1號(hào)、筑波1號(hào)、小黃金1025與K326差異極顯著。2.2煙草種質(zhì)資源抗性鑒定結(jié)果2006年供試的18個(gè)品種(表2-8)有5個(gè)高抗品種，分別為NC1071、NC95、落地黃、G28、K326，有5個(gè)抗病品種，分別為W.恥sop/zz7a、iV.p/wwk/g/m/o/z'a、MD609、革新三號(hào)、筑波1號(hào)，有2個(gè)中抗品種金星6007和N.stocktoii，有2個(gè)中感品種紅大與小黃金1025，有4個(gè)感病品種Barley21、Barley37、L8與7V.2007年從對21個(gè)鑒定材料的抗病性鑒定結(jié)果(表2-8)，根據(jù)對煙草黑脛病菌的抗性大體可分為4類抗病品種、中抗品種、中感品種和感病品種。其中抗病品種有K326和NC2514，占總鑒定材料的9.52%;中抗品種有筑波l號(hào)、Islangold、CV78-5、密葉尖、金星6007、大紅星、晉太7615、CV78-4、烏江1號(hào)、CV16-2、大柳葉2014、落地黃和DarisSpecial,共13個(gè)，占61.卯％。中感品種有Q1236:HicksQ46、長把黃光板和紅大，共3個(gè)，占14.29%;感病品種有許金7號(hào)、柳葉尖和BlackShankResistant,占14.29%。2008年對39個(gè)鑒定材料抗病性鑒定初步看出，對煙草黑脛病菌的抗性程度大體可分為5類高抗品種、抗病品種、中抗品種、中感品種和感病品種。其中高抗品種有N.plumbaginifolia、G28、NC95、NC86、日本烤煙1、COM煙、0X414、K358、RG17，共9個(gè)，占鑒定材料總數(shù)的23.08%;;抗病品種有CV16-2、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514、K326、NC1071、L8、N.nudicaulis、CokerTobacco、H80A432、安選79-l、s、<二A卜、NC-22-NF、龍巖C2、津引1號(hào)、RG12、DlOl、OX2028共19個(gè)，占鑒定材料總數(shù)的48.72%;;中抗品種有烏江1號(hào)、筑波1號(hào)、MD609、革新三號(hào)，共4個(gè)，占鑒定材料總數(shù)的10.26%;中感品種有Islangold、CV78-5、晉太7615、小黃金1025，共4個(gè)，占鑒定材料總數(shù)的10.26%;感病品種有紅大、潘圓黃、BL-921，占鑒定材料總數(shù)的7.69%。其中抗病品種所占比例最高，而感病品種所占比例最低。鑒定結(jié)果見表2-8。表2-8煙草種質(zhì)資源抗黑脛病結(jié)果統(tǒng)計(jì)16<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>NC86、日本烤煙l、COM煙、OX414、K358、RG17、NC1071,NC95CV16-2、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514、L8、朋<*//,》、CokerTobacco、H80A432、安選79-l、、、<二凡卜、NC-22-NF、龍巖C2、律弓l1號(hào)、RG12,DlOl、0X2028、NC2514、W.鵬—/"、MD609、筑波1號(hào)、jV.p/w附6ag,'"^/Za烏江1號(hào)、筑波1號(hào)、MD609、筑波1號(hào)、Islangold、CV78-5、密葉尖、金星6007、大紅星、晉太7615、CV78-4、烏江1號(hào)、CV16-2、大柳葉2014、DarisSpecial、金星.6007、N.stocktoiiIslangold、晉太7615、Q1236:HicksQ46、長把黃光板潘圓黃、BL-921、許金7號(hào)、柳葉尖、BlackShankResistant、Barley21、Barley37(年度間不一致的幾個(gè)品種差異不大，采用平均值判斷抗病性水平)23煙草種質(zhì)鑒定材料病情消長動(dòng)態(tài)2007年通過對各鑒定品種連續(xù)7次發(fā)病率調(diào)査，分析各品種資源田間發(fā)病消長動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明隨田間生長期的增長，病害呈現(xiàn)總體上升趨勢，各種質(zhì)發(fā)病盛期多集中在5月下旬至6月下旬。21份供試種質(zhì)因發(fā)病高峰所在時(shí)間不同可分3種類型第l種類型為感病品種BlackShankResistant、許金7號(hào)、柳葉尖發(fā)病高峰集中在5月25日至6月5日時(shí)間段，6月5日至6月16日發(fā)病稍有減緩，6月中旬以后病情穩(wěn)定，這一類品種發(fā)病時(shí)間集中在5月下旬至6月中旬。第2種類型為長把黃光板、大柳葉2014、密葉尖、大紅星、金星6007、CV16-2、Q1236:HicksQ46、紅大、晉太7615、筑波1號(hào)發(fā)病高峰在6月5日至6月16日時(shí)間段，這一類品種發(fā)病時(shí)間集中在5月下旬至6月下旬；第3種類型為大柳葉2014、CV78-5、烏江1號(hào)、CV78-4、DarisSpecial、落地黃、NC2514、K326發(fā)病盛期在6月16至6月27日，為6月中下旬，這些品種發(fā)病時(shí)間集中在6月上旬至7月上旬。第三類品種皆為中抗或抗病品種，除大柳葉2014發(fā)病較早外，其余種質(zhì)皆發(fā)病晚抗性高。第一類品種皆為感病品種，發(fā)病早而抗性低。由此看出種質(zhì)資源的抗病性與發(fā)病早晚有關(guān)，這可能與后期植株粗大、角質(zhì)層增厚、木質(zhì)部形成使病菌不易侵入有關(guān)。18權(quán)利要求1、一種煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法，包括以下順序步驟一、病圃的選擇(1)選擇歷史上煙草黑脛病常年流行，發(fā)生嚴(yán)重，發(fā)病率達(dá)80％以上地塊；(2)當(dāng)?shù)?～7月份高溫高濕，年平均降雨量大；(3)連作，自然灌溉條件好，煙草作物種植和田間管理按常規(guī)操作和管理；二、煙草作物采收后挖根調(diào)查，按國家標(biāo)準(zhǔn)對鑒定品種進(jìn)行分級(jí)和抗性評(píng)價(jià)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法，其特征在于煙草作物種植期間，煙苗移栽后補(bǔ)苗和施肥，確保煙苗全部存活15d后，開始田間灌水，確保田間溝內(nèi)明水可見，后期根據(jù)各品種需肥狀況補(bǔ)肥。全文摘要一種煙草黑脛病抗性的病圃鑒定方法，采用歷史上煙草黑脛病病害高發(fā)區(qū)連作煙田作病圃，通過增加田間濕度誘導(dǎo)植株發(fā)病，減少了菌株分離保存及培養(yǎng)的復(fù)雜操作，其菌株來源于大田，接種用的小種數(shù)量、種類理論上說是無限的，多樣性、代表性較好，接種條件也是自然控制，故鑒定結(jié)果較能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時(shí)的實(shí)際情況；采用烤煙采收后一次性挖根調(diào)查的方法，大大減少了工作量，節(jié)省了成本，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，具有成本低、操作簡便易行的特點(diǎn)，是一種較為經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法，具有良好的市場應(yīng)用前景。文檔編號(hào)A01G7/00GK101491199SQ20091009417公開日2009年7月29日申請日期2009年3月9日優(yōu)先權(quán)日2009年3月9日發(fā)明者勇劉,盧秀萍,李梅云,李永平,高家合申請人:云南省煙草科學(xué)研究所